בידוד תאי T מבוסס ציפה באמצעות מיון תאים המופעל על ידי ציפה

תקציר

מקור: Snow, T., et al. בידוד תאי T מבוססי ציפה, הפעלה והתרחבות מדגימות תאים חד-גרעיניים בדם היקפי אנושי באמצעות מיקרו-בועות. J. Vis. Exp. (2022)

סרטון זה מדגים בידוד תאי T מתאי דם חד-גרעיניים היקפיים (PBMCs) באמצעות טכנולוגיית מיון תאים המופעלים על ידי ציפה פונקציונלית (BACS). טכניקת הבידוד כוללת בחירה חיובית של תאי CD3+ T על ידי תיוג התאים עם נוגדנים אנטי CD3 biotinylated והפרדת התאים הקשורים נוגדנים באמצעות microbubbles הקשורים streptavidin.

פרוטוקול

1. בידוד תאי T עם מיקרו-בועות באמצעות ברירה חיובית

הערה: פרוטוקול זה מפרט גישת בחירה חיובית בקנה מידה קטן CD3⁺ באמצעות SAMBs.

1. לדגור 3 x 10⁸ PBMCs שהושגו מסחרית ב 2.5 מ"ל של חיץ הפרדה עם נוגדן אנטי CD3 biotinylated (OKT3) בריכוז של 25 ng של נוגדנים לכל 1 מיליון תאים (25 ng / M). מערבבים בעדינות על ידי פיטום למעלה ולמטה, ודגרים בטמפרטורת החדר במשך 10 דקות.
2. הוסף מיקרו-בועות סטרפטאבידין (SAMBs) ביחס של 0.5 (כמות SAMB):1 (כמות תאים) בהתאם לריכוז SAMB המדווח של היצרן.
3. ערבבו באמצעות מסובב מסחרי מקצה לקצה (EOE) ב-20 סל"ד למשך 10-15 דקות בטמפרטורת החדר. צנטריפוגה למשך 5 דקות ב 400 x גרם בטמפרטורת החדר.
4. לאחר הצנטריפוגה, התאים שנבחרו באופן חיובי יהיו בחלק העליון של המתלה עם SAMBs. התאים הנותרים שלא נבחרו יהיו בכדורית התא בתחתית הצינור. בעזרת פיפטה מזכוכית 9 אינץ', מחדירים את הקצה מתחת לשכבת תא הבועה לתחתית הצינור, שואפים את גלולת התא והסובנטנט עם פיפטה אלקטרונית, ומעבירים אותם לצינור חדש.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
נוגדן ביוטין CD3 אנטי אנושי (OKT3)	ביואגדה	317320
לוקופאק	BioIVT	HUMANLMX100-0001129
מרכזיות אנושיות רגילות	BioIVT	HUMANHLPB-0002562
ערכת מיקרו-בועות סטרפטאבידין (כוללת את מאגר ההפרדה של Akadeum)	אקדאום	11110-000