Method Article

בידוד תאי T מבוסס ציפה באמצעות מיון תאים המופעל על ידי ציפה

July 8th, 2025

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מקור: Snow, T., et al. בידוד תאי T מבוססי ציפה, הפעלה והתרחבות מדגימות תאים חד-גרעיניים בדם היקפי אנושי באמצעות מיקרו-בועות. J. Vis. Exp. (2022)

סרטון זה מדגים בידוד תאי T מתאי דם חד-גרעיניים היקפיים (PBMCs) באמצעות טכנולוגיית מיון תאים המופעלים על ידי ציפה פונקציונלית (BACS). טכניקת הבידוד כוללת בחירה חיובית של תאי CD3+ T על ידי תיוג התאים עם נוגדנים אנטי CD3 biotinylated והפרדת התאים הקשורים נוגדנים באמצעות microbubbles הקשורים streptavidin.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. בידוד תאי T עם מיקרו-בועות באמצעות ברירה חיובית

הערה: פרוטוקול זה מפרט גישת בחירה חיובית בקנה מידה קטן CD3+ באמצעות SAMBs.

  1. לדגור 3 x 108 PBMCs שהושגו מסחרית ב 2.5 מ"ל של חיץ הפרדה עם נוגדן אנטי CD3 biotinylated (OKT3) בריכוז של 25 ng של נוגדנים לכל 1 מיליון תאים (25 ng / M). מערבבים בעדינות על ידי פיטום למעלה ולמטה, ודגרים בטמפרטורת החדר במשך 10 דקות.
  2. הוסף מיקרו-בועות סטרפטאבידין (SAMBs) ביחס של 0.5 (כמות SAMB):1 (כמות תאים) בהתאם לריכוז SAMB המדווח של היצרן.
  3. ערבבו באמצעות מסובב מסחרי מקצה לקצה (EOE) ב-20 סל"ד למשך 10-15 דקות בטמפרטורת החדר. צנטריפוגה....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
לא הוכרז על ניגוד עניינים.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
נוגדן ביוטין CD3 אנטי אנושי (OKT3)ביואגדה317320
לוקופאקBioIVTHUMANLMX100-0001129
מרכזיות אנושיות רגילותBioIVTHUMANHLPB-0002562
ערכת מיקרו-בועות סטרפטאבידין (כוללת את מאגר ההפרדה של Akadeum)אקדאום11110-000

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Buoyancy Activated Cell SortingT Cell IsolationMicrobubble SeparationCD3 Antibody LabelingStreptavidin MicrobubblesPeripheral Blood Mononuclear CellsPositive Cell SelectionCentrifugation SeparationCell Surface MarkersImmune Cell Isolation

Related Articles