בידוד של לויקוציטים בכבד שוליים מכבד עכבר

תקציר

מקור: Sorski, L., et al. קציר סלקטיבי של לויקוציטים שוליים-כבדיים. J. Vis. Exp. (2016)

בסרטון זה, אנו מדגימים את הבידוד של לויקוציטים בכבד מכבד עכבר על ידי זילוח מאולץ.

פרוטוקול

כל הנהלים הנוגעים למודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הבדיקה הווטרינרית JoVE.

1. פרוטוקול עכבר

1. זילוח של הכבד ואיסוף של MH-לויקוציטים
   1. להרדים את החיה עם מנת יתר של 8% isoflurane. כאמצעי זהירות, הניחו צינור של 15 מ"ל המכיל פד ספוג איזופלורן סביב ראשו של העכבר עד לפתיחת חלל החזה שלו.
   2. תקן את איברי העכבר למיטה.
   3. פתח את חללי הצפק והחזה כדי לחשוף את הכבד ואת קומפלקס הלב ריאה מיד עם הפסקת הנשימה, תוך שמירה על האספקט התחתון של הסרעפת שלם (ליצירת בריכת ניקוז חלל החזה). הימנע דימום באמצעות תהליך זה.
      1. באופן ספציפי, להתחיל את החתך בנקודת האמצע התחתונה של הבטן, מבלי לפגוע באיברים פנימיים, ולהתקדם לשני הצדדים באלכסון לכיוון הצלעות, לחתוך דרכן לרמות חלל החזה העליון.
   4. הוציאו את המעיים והניחו אותם מחוץ לחיה מימין לנסיין, כדי לחשוף את וריד השער.
   5. הכנס מחט 30 גרם, המחוברת למשאבה פריסטלטית לתוך רוסטרל וריד הפורטל לווריד הטחול.
   6. חותכים את הווריד הנבוב התחתון מעל הסרעפת כדי לאפשר ניקוז ואיסוף של הפרפוזט מחלל החזה.
   7. הפעל את המשאבה הפריסטלטית במהירות של כ -3 מ"ל / דקה ואסוף בעדינות את 3 מ"ל הראשונים של פרפוזט המזוהם בדם מבריכת חלל החזה.
   8. השליכו את המבלבל הזה. חזור על שטיפה כזו שוב במידת הצורך, באמצעות מלוחים, ורק אז להתחיל לאסוף perfusate הכבד.
   יש
   9. להתחיל מחדש את הזלוף במהירות של עד 4 מ"ל/דקה, ולאסוף 10 מ"ל פרפוזט מחלל החזה באמצעות פרפר המחובר למזרק.
   10. יש להפסיק את הזילוח כאשר צבע הכבד הופך לחום בהיר.

2. מיצוי לויקוציטים

1. צנטריפוגה את perfusate במשך 10 דקות ב 400 x גרם.
2. שאפו את הסופר-נאנט.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
משאבה פריסטלטית Autoclud
מחט פרפר	OMG		26 גרם
מחט פרפר	OMG		21G * 3/4"
מזרק	פתרון תמונה		1 מ"ל
מזרק	פתרון תמונה		2.5 מ"ל
מזרק	פתרון תמונה		5 מ"ל
מזרק	פתרון תמונה		10 מ"ל
מזרק	פתרון תמונה		25 מ"ל
מלקחיים קהים
מספריים
המוסטאט
מלקחיים רקמה