בידוד תאי סרטולי בקרה חיסונית מצינוריות זרע עכבר

תקציר

מקור: Bhushan, S. et al., בידוד תאי סרטולי ותאים פריטובולריים מאשכי חולדה.J. Vis. Exp. (2016).

סרטון זה מדגים את הליך הבידוד של תאי סרטולי מצינוריות זרע של עכברים, מרכיב באשכים. עיכול אנזימטי ושטיפות חוזרות ונשנות מקדמים את שחרורם של תאי סרטולי לתמיסה, אשר ניתן לגדל בתרבית נוספת לצורך התרבות וצמיחה.

פרוטוקול

כל הנהלים הנוגעים למודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הבדיקה הווטרינרית JoVE.

1. הכנת חומרי מדיה, תמיסות אנזימים ובעלי חיים

1. הכינו 1% יוד אלכוהול על ידי המסת 1 גרם יוד באתנול 100 מ"ל.
2. הכינו 2x 500 מ"ל של Dulbecco פוספט buffered מלוחים (PBS) ללא Ca²⁺ ו Mg²⁺ בתוספת כל אחד עם 7.5 מ"ל D-גלוקוז (100 גרם / ליטר) ו 5 מ"ל 100x פניצילין/סטרפטומיצין תמיסת מלאי (15 מ"ג / מ"ל D-גלוקוז, 50 U/ml פניצילין ו 50 מיקרוגרם / מ"ל סטרפטומיצין סופי).
3. תוסף 1x 500 מ"ל Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 בינוני עם 5 מ"ל 100x פניצילין/תמי....

תוצאות

איור 1. אשכים מחולדות וויסטאר נכרתו ונערפו.(A) חלל הצפק נפתח דרך חתך אורכי כמתואר בטקסט. כוכבית (*) מציינת את כרית השומן האפידימלי. (B) האשכים מוסרים על ידי חיתוך חוט הזרע ו-(C) נאספים בצינור חרוטי של 50 מ"ל המכיל PBS של 20 מ"ל. כאשר כל האשכים נאספו הם מחוטאים ב 20 מ"ל של 1% (w / v) יוד אתנול. להסרת היוד, הם נשטפים במהירות פעמיים עם 25 מ"ל PBS כל אחד. (D) אשכים לאחר.......

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
מסננות תאי קורנינג™ 70 מיקרומטר	קורנינג	431751	צבע לבן
DAPI mountant ProLong® זהב Antifade	לייף טכנולוגיות	P-36931
D-גלוקוז	סיגמא	G8644	100 גרם/ליטר
PBS של Dulbecco ללא Ca2+/Mg2+	גיבקו	14190-094
DNase I	רוש	10104159001
היאלורונידאז מאשך בקר	סיגמא	H3506
פניצילין (5,000 U/ml) סטרפטומיצין (5,000 מיקרוגרם/מ"ל)	גיבקו	15070-063	פתרון 100x
RPMI-1640	גיבקו	21875-034	מכיל 300 מ"ג/ליטר L-גלוטמין
טריפסין מלבלב חזירי	סיגמא	T5266
טריפאן כתם כחול (0.4%)	גיבקו	15250-061
מעכב טריפסין מפולי סויה	סיגמא	T6522	המוצר Sigma זול משמעותית מאשר BPTI בשימוש בעבר (Aprotinin) של Roche.
חולדות וויסטאר WU	Charles נהר	לא ישים	צריך להיות בן 19 יום ביום הניסוי.