מאמר שיטה

העשרה מבוססת ננו-חלקיקים והרחבה של תאי T CD8+ ספציפיים לאנטיגן

8 ביולי 2025

במאמר זה

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מקור: Hickey, J. W., et al. להעשיר ולהרחיב תאי T נדירים ספציפיים לאנטיגן באמצעות ננו-חלקיקים מגנטיים. J. Vis. Exp. (2018).

סרטון זה מתאר פרוטוקול לבידוד תאי CD8+ T ספציפיים לאנטיגן נדיר באמצעות תאים מציגי אנטיגן מלאכותיים מבוססי ננו-חלקיקים מגנטיים (aAPCs) המתפקדים עם MHC-Igs אנטיגני ונוגדנים נגד CD28. אינטראקציה של aAPCs עם תאי CD8+ T המבטאים באופן ספציפי את קולטני תאי T הממוקדים בפפטידים, ולאחר מכן התרחבותם במבחנה, מביאה להעשרה והרחבה של אוכלוסיית תאי CD8+ T זו.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כל הנהלים הנוגעים למודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הבדיקה הווטרינרית JoVE.

1. העשירו תאי CD8+ T ספציפיים לאנטיגן בתאים מציגי אנטיגן מלאכותיים ננו-חלקיקיים מוכנים.

  1. בודד תאי T CD8+.
    1. הרדימו את בעלי החיים על ידי חשיפה לאיזופלורן ואחריה פריקת צוואר הרחם.
    2. הסר את הטחול ובלוטות הלימפה מעכברי בר מסוג C57BL/6j ומקם אותם בתמיסה של PBS. מייסרים את האיברים ומפזירים את התאים דרך מסננת תאים סטרילית של 70 מיקרומטר עם שטיפות תכופות של PBS.
    3. כדי לחסל תאי T שאינם CD8+, השתמש בערכת בידוד תאי T CD8+ ללא מגע ופעל לפי הוראות היצרן.....

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
לא הוכרז על ניגוד עניינים.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
DimerX I: חלבון היתוך אנושי HLA-A2:Ig מסיס רקומביננטיBD Biosciences551263
DimerX I: עכבר דימרי מסיס רקומביננטי H-2D[b]:IgBD Biosciences551323
DimerX I: עכבר דימרי מסיס רקומביננטי H-2K [b]:חלבון Ig FusionBD Biosciences550750
nanomag-D-spio, NH2, ננו-חלקיקים של 100 ננומטרמיקרומוד 79-01-102
96-באר חצי שטח Microplate, פוליסטירן שחורקורנינג3875
Super Mag NHS-Activated Beads, 0.2 מיקרומטראוקיינוס ננוטקSN0200
MicroBeads נגד ביוטין UltraPureמילטני130-105-637
EZ-Link NHS-ביוטיןתרמופישר20217
עכברי C57BL/6J (B6 wildtype)מעבדת ג'קסון664
ערכת בידוד תאי CD8a + T, עכברמילטני130-104-075
עמודות MSמילטני130-042-201
עמודות LSמילטני130-042-401
Streptavidin-Phycoerythrin, SAvPEביואגדה405203
מגנטים דיסק N52 של 0.75 אינץ 'K&J מגנטיקהDX8C-N52
נוגדן CD8a נגד עכבר APC, שיבוט 53-6.7ביואגדה100711
ערכת כתמים של תאים מתים ירוקים הניתנים לתיקון LIVE/DEAD, לעירור של 488 ננומטרתרמופישרL-34969

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

MHC IgT CD8TMHC IgAnti CD28

מאמרים קשורים