שיטת דיסקציה לקצירת בלוטות לימפה מנקזות מורין פופליטל להדמיית Ex Vivo

תקציר

מקור: Rezende, R. M., et al. הדמיה של מבנה בלוטות הלימפה ולוקליזציה תאית באמצעות מיקרוסקופ קונפוקלי Ex-Vivo. J. Vis. Exp. (2019)

סרטון זה מדגים טכניקת דיסקציה לקצירת בלוטות לימפה מנקזות פופליטליות מהרגליים האחוריות של העכבר. בלוטות הלימפה ממלאות תפקיד קריטי בגישור בין מערכת החיסון המולדת והנרכשת, וקצירת בלוטות לימפה שלמות – עם מבנה רקמה שמור ויכולת קיום תאית – יכולה לסייע בחקר תגובות חיסוניות מקומיות וסיסטמיות.

פרוטוקול

כל הנהלים הנוגעים למודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הבדיקה הווטרינרית JoVE.

1. הליך ניתוח להסרת בלוטת הלימפה המתנקזת הפופליטלית

1. המתת חסד של עכברים באמצעות חנק_CO2 ואחריו פריקת צוואר הרחם.
2. יש לשתק עכברים במצב נוטה על הבמה האקרילית בעזרת סרט הדבקה ולמרוח שמן מינרלי עם צמר גפן בשוק ובברך (איור 1A-D).
3. בצעו חתך בקו האמצע בשוק מהעקב ועד הברך (איור 1E, F).
4. נתקו את שרירי השוק מהעור (איור 1F, G).
5. חשפו את הפוסה הפופליטלית (איור 1G). בלוטת הלימפה הפופליטלית תופיע ככדור שקוף בפוסה הפופליטלית.
6. הסירו את בלוטת הלימפה הפופליטלית באמצעות מלקחיים מעוקלים של מיקרו-כירורגיה (איור 1G).
7. לחילופין, הופכים את העכבר על תנוחת שכיבה, ומתקרבים לפוסה הפופליטלית בין שריר הירך הזרועי לסמיטנדינוסוס להסרת LN פופליטלית על ידי ביצוע חתך קו אמצע בשוק מהעקב לברך ואחריו ניתוק של שרירי השוק מהעור.
   הערה: פוסה פופליטלית היא שקע רדוד הממוקם בחלק האחורי של מפרק הברך. פתח בזהירות כדי לראות את בלוטת הלימפה הפופליטלית.

תוצאות

איור 1: הכנת בלוטות לימפה פופליטליות. (א, ב) הזרקה תת עורית של תערובת מאסטר נוגדנים FACS לתוך כרית הכפה. (C, D) 3 שעות לאחר ההזרקה, להרדים את העכבר, לשתק את העכבר על צלחת אקרילית עם סרט הדבקה (C), ולמרוח שמן מינרלי על עור הבטן כדי למנוע שקיעת פרווה סביב החתך (D). (E) לבצע חתך בקו האמצע בשוק מהעקב ועד הברך. (F) לחשוף את הפוזה הפופליט...

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
תבשיל תרבית Cellview	גריינר-ביו	627861	35x10 מ"מ עם תחתית זכוכית
מגבונים	מותג המדע Kimtech	7557	גודל 21 x 20 ס"מ / 100 גיליונות לארגז
מיקרוכירורגיה מלקחיים מעוקלים	WEP כלי ניתוח	בהתאמה אישית	12.5 ס"מ
מספריים מעוקלות מיקרוכירורגיה	WEP כלי ניתוח	בהתאמה אישית	11.5 ס"מ