טכניקה ליצירת מודל מורין של קוליטיס הנגרמת על ידי דקסטרן סולפט נתרן

תקציר

מקור: Du, Y., et al. השפעות ביטול חלבון איתות טעם על דלקת מעיים במודל עכבר למחלות מעי דלקתיות. J. Vis. Exp. (2018)

סרטון זה מדגים טכניקה ליצירת מודל מורין המושרה על ידי כימיקלים של קוליטיס - מחלת מעי דלקתית. העכבר רשאי לצרוך תמיסת דקסטרן נתרן סולפט (DSS) למשך זמן הולם. עם הצריכה, DSS פוגע במחסום הריר ושכבת האפיתל במעי הגס, ומאפשר לחיידקי המעי להיכנס לרקמה הבסיסית - שם הם חשים על ידי תאי החיסון המקומיים כדי לתווך תגובה חיסונית מוגזמת, וכתוצאה מכך דלקת.

פרוטוקול

כל הנהלים הנוגעים למודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הבדיקה הווטרינרית JoVE.

1. הכנת עכברים ו- DSS

1. יש לשמור את עכברי הנוקאאוט (α-gustducin^-/-) ואת עכברי C57BL/6 תואמי גיל, מין וגוף (α-gustducin^+/+) C57BL/6 בכלובים נקיים.
   הערה: עכברי הנוקאאוט הוצלבו עם עכברי C57BL/6 במשך למעלה מ-20 דורות ויש להם כמעט 100% C57BL/6 רקע גנטי.
2. יש להמיס 30 גרם של אבקת נתרן דקסטרן סולפט (DSS) בליטר אחד של מים אוטוקלאביים. מערבבים עד שהתמיסה מתבהרת כדי להבטיח שריכוז העבודה הסופי הוא 3% (w/v).
   הערה: ניתן לאחסן את פתרון DSS בטמפרטורת החדר עד שבוע או בטמפרטורה של 4°C עד לשימוש.

2. אינדוקציה והערכה של קוליטיס DSS בעכברים

1. שקול ורשום את משקל הגוף ההתחלתי של כל עכבר. הכניסו את העכברים בנפרד לכלובי פלסטיק סטנדרטיים ותייגו את הכלובים.
2. החליפו את מי השתייה הרגילים בתמיסת DSS של 3% למשך 7 ימים בסך הכל, שאליהם יש לשתי קבוצות העכברים גישה ל-ad libitum.
3. מדוד את משקל הגוף של העכבר, רשום את צריכת פתרון DSS ואסוף ובדוק את הצואה של כל עכבר מדי יום במהלך מתן DSS. שימו לב לחומרת השלשולים והדימום הרקטלי והמירו זאת למדד המחלה הנגרמת על ידי DSS.
4. במהלך הניסוי, אחוז הירידה במשקל בהשוואה למשקל ההתחלתי ומדד המחלה מחושבים כדי להעריך את הסימפטומים של קוליטיס.
   הערה: מדד המחלה מדורג על ידי שילוב תצפיות של שלשולים ודימום רקטלי ומוגדר כדלקמן: 0 (צואה רגילה, ללא דם), 1 (צואה רכה, ללא דם), 2 (צואה רכה, מעט דם), 3 (צואה רכה מאוד, דימום מתון) ו -4 (צואה מימית, דימום משמעותי). מדד המחלה מנותח מדי יום עבור כל עכבר.
5. בסוף הטיפול בן 7 הימים ב- DSS, הקריבו את העכברים על ידי נקע צוואר הרחם והמשיכו בניסויים הנותרים.

3. הכנת דגימות רקמה

1. מניחים את העכבר במצב שכיבה ולנקות את העור של הבטן עם 70% אתנול. בצע חתך קו אמצע באורך 3 ס"מ בבטן עם זוג מספריים קטנים כדי לחשוף את חלל הבטן.
2. השתמש בזוג מלקחיים כדי להפריד בזהירות את הטחול מרקמות אחרות, ולאחר מכן להסיר את הטחול ולמדוד את גודלו.
3. לזהות ולהרים את המעי הגס עם מלקחיים ולהפריד אותו מן mesentery שמסביב. משוך את המעי הגס כולו עד שהצקום ופי הטבעת גלויים.
4. בודד את המעי הגס על ידי טרנסקטציה שלו בשולי המעי הגס ובעומק האגן כדי לשחרר את המעי הגס הפרוקסימלי והדיסטלי, בהתאמה. לאחר מכן, מדדו ותיעדו את אורך המעי הגס המבודד. היזהר שלא לפגוע ברקמת המעי הגס במהלך הליך הניתוח.
5. שטפו את המעי הגס עם 10 מ"ל של מלח חוצץ פוספט קר כקרח (PBS) עם מזרק 10 מ"ל מצויד במחט gavage כדי להסיר את הצואה והדם עד שהפולט ברור לחלוטין.
6. לזיהוי היסטולוגי, חלקו את דגימות הרקמה באופן שווה לשלושה חלקים: פרוקסימלי, אמצעי ודיסטלי. לאחר מכן, תקן את הרקמה עם 4% paraformaldehyde (PFA) לילה ב 4 ° C.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
מגיב
דקסטרן סולפט מלח נתרן (DSS)	MP Biomedicals	2160110
מלח חוצץ פוספט (PBS)	סנגון ביוטק	B548117
BD 10 מ"ל מזרק	BD Biosciences	309604
מכשירים וציוד
מאזניים
מספריים
מלקחיים