יצירת מודל חולדה גליובלסטומה

תקציר

מקור: Bolcaen, J., et. al., הקרנה מונחית PET ו-MRI של מודל חולדת גליובלסטומה באמצעות מיקרו-רדיאטור. J. Vis. Exp. (2017)

סרטון זה מדגים את ההליך להקמת מודל חולדות גליובלסטומה על ידי הזרקה סטריאוטקטית של תאי גליובלסטומה הגורמים לגידול במוח לקליפת המוח הקדם-מצחית.

פרוטוקול

כל ההליכים הכוללים מודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ומועצת הביקורת הווטרינרית של JoVE.

1. F98 GB Rat Cell Model

1. לגדל את תאי F98 GB, המתקבלים מ-ATCC, בחד-שכבות באמצעות מדיום הנשר המותאם של Dulbecco, 10% סרום עגל, 1% פניצילין, 1% סטרפטומיצין, 1% L-גלוטמין ו-0.1% אמפוטריצין b, ולהניח בחממת CO₂ (5% CO₂ ו-37 מעלות צלזיוס).
2. לחסן את תאי הגליומה במוח של נקבות חולדות פישר F344 (משקל גוף 170 גרם).
   1. השתמש במכשירים סטריליים ולבש כפפות סטריליות בכל עת.
   2. להרדים את החולדות על ידי הזרקת תערובת של 74 מ"ג/ק"ג קטמין ו-11 מ"ג/ק"ג קסילזין תוך צפקי (IP) עם מזרק אינסולין (1 מ"ל, 29 גרם). אשר את ההרדמה על ידי היעדר תגובה לרפלקס הנסיגה של הגפה. לשתק את החולדות במכשיר סטריאוטקטי באמצעות נקודות קיבוע לאף ולאוזניים. יש למרוח ג'ל עיניים קרבומר למניעת יובש בעיניים בזמן ההרדמה.
   3. לגלח את החולדה מגובה העיניים לחלק האחורי של הגולגולת ולחטא את העור בפובידון יוד.
   4. חשוף את הגולגולת דרך חתך בקרקפת בקו האמצע של 2 ס"מ, וצור חור של 1 מ"מ (מקדחת יהלום) 2 מ"מ אחורי ו-2.5 מ"מ לרוחב הברגמה בהמיספרה הקדמית הימנית.
   5. הכנס מחט אינסולין מונחית סטריאוטקטית (29 גרם) והזריק תרחיף תאים של 5 מיקרוליטר (20,000 תאי F98 GB) בעומק 3 מ"מ באמצעות בקר משאבת מיקרו-מזרק (הגדרות: הזרקה (I50), קצב 1 nL/s (001 SDN)).
   6. משוך את המזרק לאט וסגור את החתך בשעוות עצם. לתפור את העור ולחטא אותו בפובידון יוד.
   7. ייצב את טמפרטורת הגוף של בעל החיים לאחר הניתוח באמצעות מנורה אדומה. עקוב אחר התעוררות החולדה עד שהיא חזרה להכרה מספקת כדי לשמור על שכיבה חזה אין להחזיר את החיה לחברת בעלי חיים אחרים עד להחלמה מלאה. החזיקו את כל בעלי החיים בתנאים מבוקרים מבחינה סביבתית (12 שעות מחזורי אור/חושך רגילים, 20-24 מעלות צלזיוס ו-40-70% לחות יחסית) עם מזון ומים ad libitum. הקפידו לעקוב מקרוב אחר בעלי החיים על ידי מעקב אחר משקל גופם, מזונם, צריכת המים ופעילותם והתנהגותם התקינה. השתמש במינון קטלני של נתרן פנטוברביטל כדי להמית את בעלי החיים (160 מ"ג/ק"ג) אם נצפתה ירידה של 20% במשקל הגוף או כאשר ההתנהגות הנורמלית מתדרדרת מאוד ( למשל , חוסר טיפוח).

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
GB RAT model
F98 גליובלסטומה	ATCC	CRL-2397
Fischer F344/Ico crl Rats	Charles River	N/A	http://www.criver.com/products-services/basic-research/find-a-model/fischer-344-rat
Micropump system	World Precision Instruments	UMP3	Micro 4: https://www.wpiinc.com/products/top-products/make-selection-ump3-ultramicropump/#tabs-1
מסגרת סטריאוטקטית	Kopf	902	Model 902 Dual Small Animal Stereotaxic frame
Diamond drill	Velleman	VTHD02	https://www.velleman.eu/products/view/?id=370450
Bone wax	Aesculap	1029754	https://www.aesculapusa.com/products/wound-closure/hemostatic-bone-wax
מזרק אינסולין Microfine	Beckton-Dickinson	320924	1 mL, 29G
InfraPhil IR lamp	Philips	HP3616/01
Ethilon	Ethicon	662G/662H	FS-2, 4-0, 3/8, 19 מ"מ