יצירת חסימה של עורק המוח האמצעי בגור חולדות כדי לגרום לאיסכמיה מוחית מקומית

תקציר

מקור: Larpthaveesarp, A., et. al. מודל חסימת עורק מוח אמצעי חולף של שבץ מוחי בילודים בחולדות P10. J. Vis. exp. (2017)

סרטון זה מדגים את הקמת מודל חסימת עורק המוח התיכון בגור חולדות. עורק הצוואר הפנימי (ICA) חשוף, וקשירה מאובטחת כדי להגביל את הצפת הדם. חסימה מוחדרת דרך ה-ICA כדי להגיע לעורק המוח האמצעי. לאחר מכן נותנים לגור להתאושש לפני ניתוח נוסף.

פרוטוקול

כל ההליכים הכוללים מודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ומועצת הביקורת הווטרינרית של JoVE.

1. חסימת עורק המוח האמצעי

1. שקלו את הגור וודאו שהוא במשקל המתאים (19-21 גרם). להרדים את הגור ב-3% איזופלורן ב-100% חמצן (O₂) ולוודא שאין תגובה לצביטה בכף הרגל. שמור על טמפרטורת פני הגוף בין 35.5 מעלות צלזיוס ל-37 מעלות צלזיוס באמצעות כרית חימום מתחת לשלב הניתוח.
2. אבטח את החיה במצב שכיבה עם סרט על אזורי הכתפיים. בעזרת צמר גפן סטרילי, ספוג את אזור צוואר הרחם הקדמי בתמיסת פובידון-יוד ואחריו ספוגית של 70% אתנול במים מזוקקים כפולים, לסירוגין בין כל תמיסה לארבע ספוגיות בסך הכל.
3. החדרה מקומית של 0.25% בופיבקאין לאתר החתך המתוכנן. בעזרת סטריאוסקופ, בצע חתך צוואר הרחם הקדמי בקו האמצע של 5 עד 7 מ"מ כדי לחשוף את עורק הצוואר המשותף (CCA). הנח 2-4 מחזירים כדי לשמור על החלל פתוח ועל העורק חשוף.
4. אתר את עורק הצוואר הפנימי (ICA), העורק העורפי (OA) ועורק הצוואר החיצוני (ECA). טפחו את העורקים כדי לקבל תצוגה ברורה. היזהר לא להפריע לעצב התועה.
   הערה: עבור גורים שעברו ניתוח דמה, החתך נותר פתוח, והעורקים חשופים, ולאחר מכן החתך נתפר סגור. זמן ההרדמה הכולל שווה ערך לזה של ניתוח הסתימה.
5. חותכים 1.5 ס"מ של חוט תפר קלוע משי 6-0. שחרר את התפר, משוך גדילים בודדים. וודאו שהגדילים הבודדים מסודרים ולא מרוטים.
   הערה: במידת הצורך, החליקו את הקצוות המרופטים על ידי טבילת הגדיל הבודד במים סטריליים וטיפוח הגדיל עם קצות מלקחיים.
6. תוך כדי החזקת גדיל התפר עם מלקחיים של 45 מעלות, הזז את המלקחיים בתנועת קשת גורפת כדי לעבור מתחת ל-ICA כך שקצות המלקחיים יוצאים בין ה-ICA ל-OA.
   הערה: אם הניתוח נעשה היטב, שלב זה יהיה קל יחסית. אם ה-ICA וה-OA נוגעים, היזהר לא לקרוע את העורקים בעת שימוש במלקחיים כדי לבודד את ה-ICA. אם מתרחש דימום, הפעל לחץ על העורק עם המלקחיים עד להפסקת הדימום. לספוג את הדם בעזרת ספוגית סטרילית.
7. תפוס את קצה גדיל התפר המוחזק על ידי המלקחיים ומשוך אותו כך שהקצה יהיה קל לגישה. שחררו את הגדיל מהמלקחיים והחזירו את המלקחיים החוצה מתחת ל-ICA, והפכו את התנועה בשלב 1.5 (איור 1A).
8. קשרו קשירה זמנית סביב ה-ICA בבסיס, הקרוב ביותר למקום שבו הוא נפרד מה-CCA.
   הערה: חשוב לקשור את הקשר כך שקצה הגדיל שיימשך כדי להסיר את הקשר יהיה ארוך מספיק (גדול מ-1 מ"מ, פחות מ-3 מ"מ) כדי לתפוס בקלות עם מלקחיים תוך הקפדה על כמות מתאימה של גדיל תפר בצד השני של הקשר לנסיגה.
9. יש למשוך בזהירות את ה-ICA לרוחב ולהשתמש בקליפס כדי להדק את קווצת השיער לעודפי עור ליד אזור בית השחי בצד שממול לחתך. ודא שהגדיל הנסוג הזה מתוח מספיק כדי לעצור את זרימת הדם לפני שתמשיך לשלב הבא כדי למזער את הסיכון לדימום בלתי נשלט. שימו לב שהעורק שטוח וחיוור.
   הערה: אין לחזור בה יתר על המידה, מכיוון שזה יכול לגרום לקרע חלקי או מלא של ה-ICA. ניתן לכוונן את הנסיגה ממש לפני ביצוע כריתת העורקים על ידי משיכת הגדיל בצד הנגדי לקליפ.
10. השתמש במלקחיים של 45 מעלות כדי לתפוס גדיל תפר לא קלוע אחר ולולאה אותו מתחת ל-ICA וסביבו, כמו בשלב 1.5. מקם גדיל זה לרוחב גדיל הנסיגה (איור 1B).
    הערה: ניתן לבצע שלב זה גם לפני הביטול. אם אינך בטוח לגבי איכות הנסיגה, ניתן לקשור את הקשר הזה בצורה רופפת מאוד לפני השלב הבא.
11. חותכים כריתת עורקים של 0.2 מ"מ באמצע הדרך בין הקשירה הקשורה לבלתי קשורה, וטועים קרוב יותר לקשירה הקשורה
    הערה: דם שנותר בעורק הקשור יכול להתרוקן דרך העורק אך לא יעלה על 5 מיקרוליטר. אם הדימום נמשך, משוך בזהירות את גדיל הנסיגה כדי להגביר את הנסיגה, תוך זהירות כדי למנוע נזק לעורק ממתח יתר.
12. בעזרת סרגל מטרי מודדים את התפר החוסם וחותכים את התפר בקצבה נוספת של 2-3 מ"מ כדי להסיר את הסתימה במהלך הזלוף. החזק את הסוגר עם מלקחיים של 45 מעלות והשתמש במלקחיים ישרים כדי ליצור עיקול באורך המתאים כדי להגיע ל-MCA, ולסמן נקודת עצירה להתקדמות.
    הערה: אורך חסימה של 10 מ"מ מקצה קצה הסיליקון ועד העיקול משמש לגורי חולדות לאחר לידה או P-10 Sprague Dawley או Long Evans בטווח משקל זה.
13. בעזרת מלקחיים של 45 מעלות, הזינו את תפר חסימת הניילון המצופה סיליקון לתוך כריתת העורקים וקדמו את התפר לעיקול המסמן את המרחק שנקבע מראש ל-MCA (איור 1C). ודא שההתקדמות מרגישה חלקה; עצור מיד את ההתקדמות אם מורגשת התנגדות. במהלך ההתקדמות, כוון את התפר לכיוון המקביל ל-CC/ECA, לכיוון הראש.
    הערה: אם התפר מתקדם בגב לכיוון עמוד השדרה של החיה, הוא עלול להיתקל בעורק הפטריגופלטין (PTA). אם מורגשת התנגדות לאחר התקדמות של 3-5 מ"מ, התפר פגע בצומת PTA. החזר את האוטם החוצה מהעורק עד שראש הסיליקון קרוב לעורקים לפני התאמת כיוון ההתקדמות. אין צורך להסיר לחלוטין את הסתימה מכריתת העורקים.
14. אבטח את הסוגר על ידי קשירת ליגטורה זמנית באמצעות הגדיל משלב 1.10 (איור 1D).
15. הסר את תפס הנסיגה. חתוך את הגדילים של שתי הקשרים הזמניים כך שגדיל הקשר שנמשך כדי להסיר את הקשר יהיה קל לאחיזה בעזרת מלקחיים ישרים והוא ארוך יותר מהגדיל שנמשך כדי להדק את הקשר.
    הערה: הגדילים חייבים להיות קצרים מספיק כדי שלא יסתבכו בחלל לאחר הסגירה.
16. הסר את המחזירים וסגור את החלל באמצעות משי קלוע 6-0 ליצירת שלושה עד ארבעה תפרים קטועים.
17. הוציאו את הגור מההרדמה והניחו אותו על כרית חימום באוויר החדר. עקוב אחר הגור עד שהוא חזר להכרה מספקת כדי לשמור על שכיבה חזה וודא שהוא התאושש לחלוטין לפני החזרתו לסכר. ודא שהגור שומר על טמפרטורת פני הגוף בין 35.5 מעלות צלזיוס ל-37 מעלות צלזיוס.

תוצאות

איור 1: תמונות כירורגיות חיות של הליך tMCAO. (A) גדיל התפר הראשון נכרך סביב ה-ICA, כמפורט בשלב 1.6. (B) הקשירה הזמנית הראשונה קשורה, וה-ICA נסוג. גדיל התפר השני נכרך סביב ה-ICA, לרוחב גדיל התפר הראשון, כמפורט בשלב 1.9. (C) תפר החסימה המצופה סיליקון מוזן לאתר כריתת העורקים, כמפורט בשלב 1.12. (D) הקשירה הזמנית השנייה קשורה כדי לאבטח את...

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
Isoflourane	Henry Schein	50033	חומר הרדמה, ב-3%
Trinocular Surgioscope	World Precision Instruments	PSMT5N
Heating pad	Sunbeam	000731-500-000	הגדרה נמוכה עד בינונית
IR Thermometer	Extech Instruments	72-5270
ערכת נסיגה לבעלי חיים קטנים	Fine Science Tools	18200-20
CermaCut Scissors	Fine Science Tools	14958-09
Dumont #5SF Forceps	Fine Science Tools	112522-00	2x
Dumont #5/45 Forceps	Fine Science Tools	11251-35	2x
B-2 Micro Clamp	Fine Science Tools	00398-02
Forcepts for Clamp Application	Fine Science Tools	00072-14<
Micro Vannas Scissors	Fine Science Tools	15000-03	2mm cutting edge
Occlusion Sutures	Doccol	602123PK10	701712PK5Re
Ruler	Fine Science Tools
6-0 חיתוך הפוך משי יד פרמהSuture	Ethicon	769G
Euthasol	Virbac	710101	0.22 ml/kg
Cotton Tip Application	Henry Schein	100-9249
קלטת מעבדה	VWR	89097-990

td style='width:190pt;'>