תסיסנית melanogaster היא מערכת גנטית התנהגותית מודל צייתן, שבו נעשה שימוש כדי להבין את הבסיס המולקולרי התאי של תהליכים ביולוגיים רבים חשובים יותר ממאה שנים 1. תסיסנית נוצלה היטב כדי לקבל תובנות לתוך הבסיס הגנטי של ההתנהגות במהירות הבזק.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
במאמר זה
סיכום
תקציר
תסיסנית melanogaster, זבוב פירות, נעשה שימוש כדי לחקור מנגנונים מולקולריים של מגוון רחב של מחלות כגון סרטן, מחלות לב וכלי דם ומחלות נוירולוגיות שונות 1. יש לנו אופטימיזציה מבחני התנהגות פשוטים ויציב לקביעת תנועה הזחל, יכולת טיפוס מבוגר (assay RING), והתנהגויות החיזור של דרוזופילה. אלה מבחני התנהגות חלים נרחב בחקר התפקיד של גורמים גנטיים וסביבתיים על התנהגות זבוב. יכולת זחילה הזחל ניתן להשתמש באופן אמין לקביעת שינויים בשלבים מוקדמים של יכולות סריקה של הזחלים תסיסנית וגם לבחינת השפעת סמים או גנים מחלות אנושיות (ב זבובים מהונדס) על תנועה שלהם. Assay זחילה הזחל הופך רלוונטי יותר אם ביטוי או ביטול של הגן גורמת הקטלניות בשלבים גלמי או מבוגר, כמו זבובים אלו אינם שורדים לבגרות שם אחרת ניתן היה להעריך. זה בסיסיssay יכול לשמש גם בשילוב עם אור בהיר מתח או לבדוק תגובות התנהגותיות נוספות הזחלים תסיסנית. התנהגות החיזור נעשה שימוש נרחב לחקור הבסיס הגנטי של ההתנהגות המינית, והוא יכול לשמש גם כדי לבחון את פעילות ותיאום, כמו גם למידה וזיכרון. התנהגות תסיסנית החיזור כרוך בהחלפה של גירויים חושיים שונים, כולל חזותית, שמיעתית, אותות chemosensory בין זכרים ונקבות להוביל סדרה מורכבת של התנהגויות מוטוריות מאופיין היטב ושיאה הזדווגות מוצלחת. מבחני הבוגרים המסורתית טיפוס (geotaxis שליליים) הם עבודה מייגעת, אינטנסיבית, זמן רב, עם וריאציה משמעותי בין ניסויים שונים 2-4. מהיר איטרטיבי geotaxis שליליות (טבעת) assay 5 יש יתרונות רבים על פני פרוטוקולים בשימוש זמן רב יותר, מתן גישה התפוקה לשחזור, רגיש, גבוה לכמת של תנועה מבוגרים שלילית geotaxis בehaviors. ב assay הטבעת, גנוטיפים שונים או טיפולים תרופתיים, ניתן לבדוק בו זמנית באמצעות מספר רב של בעלי חיים, עם גישה תפוקה גבוהה מה שהופך אותו נוח יותר עבור ניסויים ההקרנה.
פרוטוקול
א הזחל Assay זחילה
1. הזחלים אוסף
- הגדר את הבקבוק 8 גרם של זבובים (10-15 + 10-15 זכרים ונקבות).
- בואו הזבובים להטיל את הביצים למשך 24 שעות, אז ברור בקבוק של זבובים. (העברת המבוגרים לתוך בקבוק חדש וחזור לפי הצורך).
- דגירה בקבוק 3-4 ימים, או עד 3 זחלים instar גלויים.
- הוסף 50-100 מ"ל של סוכרוז 20% על בקבוק עם הזחלים ולתת לשבת במשך....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
התנהגות תסיסנית מוסדר היטב על ידי גורמים גנטיים וסביבתיים. אנחנו, ואחרים, השתמשו בעבר את מבחני המתוארים כאן כדי לאסוף נתונים כדי לבחון גנים הקשורים לטוס התנהגויות למחלות ניווניות אנושיות המודל ב תסיסנית 5-19. עבור assay זחילה, בחירה זהירה של הזחלים 3 instar השלישי הוא שלב קריטי. אם בטיפול בתרופה, זה ייקח 10-15 דקות (או יותר בהתאם לסוג ואופי התרופה) כדי להשיג אפקט מקסימלי אם יש לו מסיסות טובה. לכן, אנו שגרתי להאכיל טס את התרופה במשך 15 דקות ו.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
אין לנו מה למסור.
תודות
אנו רוצים להודות Astha Maltare להפקת הנתונים זוחלים הזחל. ברצוננו להודות לד"ר ניקולס Lanson הבן למתן את דבריו על כתב היד. עבודה זו נתמכה על ידי רוברט פקארד מרכז ALS באוניברסיטת ג'ונס הופקינס (כדי UBP) ו amyotrophic לרוחב טרשת האגודה (UBP) ו R01MH083689 מן המכון הלאומי לבריאות הנפש (CDN).
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| שם מגיב | חברה | מספר קטלוגי | |
| סוכרוז | פישר סיינטיפיק | S5-500 | |
| Agarose | Invitrogen | 16500-500 | |
| 6 גר 'בקבוק תסיסנית | Genesee מדעי | 32-130 | |
| מברשת צבע (# 1) | טד פלה, Inc | 11859 | |
| טוס מרכיבי מזון | |||
| קמח תירס | פישר סיינטיפיק | NC9109741 | |
| אגר | Genesee מדעי | 66-104 | |
| דבשה | פישר סיינטיפיק | NC9349176 | |
| Propionic חומצה | Acros | 14930-0010 | |
| Tegosept | שיא | 20-258 | |
| אתנול | דיגמדעי | BP2818-4 | |
| שמרים | Genesee מדעי | 62-107 |
מקורות
- Pandey, U. B., Nichols, C. D. Human disease models in Drosophila melanogaster and the role of the fly in therapeutic drug discovery. Pharmacol. Rev. 63 (2), 411-436 (2011).
- Feany, M. B., Bender, W. W. A Drosophila model of Parkinson's disease. Nature Mar.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
