מאמר שיטה

בידוד של תאים מסוג CD4 + T מ בלוטות לימפה עכבר באמצעות טיהור Miltenyi MACS

DOI:

10.3791/409

⸱

1 בנובמבר 2007

 , 
1Department of Physiology and Biophysics, University of California, Irvine (UCI)

במאמר זה

סיכום

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

בידוד של לימפוציטים באמצעות MACS Miltenyi ערכת מהווה דרך אמינה לטהר תאים שלמים homogenates רקמת הלימפה. תאים מטוהרים באמצעות מערכת Miltenyi הם בדרך כלל ≥ 96% טהור. הנה, אנחנו מדגימים את הצעדים שננקטו כדי לבודד תאים מסוג CD4 + T, אחת ערכות רבים המוצעים על ידי Miltenyi.

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

בידוד של תאים ממקור העיקרית היא צעד הכרחי פרוטוקולים מורכבים הרבה יותר. Miltenyi מציעה ערכות לבודד תאים ואורגניזמים מספר כולל בני אדם, שאינם בני אדם וקופים, חולדות, כפי המתואר כאן, בעכברים. הפרדה מגנטית חרוז מבוססי תאים מאפשר בחירה או חיובי (או דלדול התא), כמו גם סלקציה שלילית. הנה, אנחנו מדגימים סלקציה שלילית של CD4 יש נגעה או Na + עוזר ותאי T. שימוש זה הפרוטוקול הסטנדרטי שאנחנו בדרך כלל לטהר את התאים CD4 ≥ טהור 96% + / CD3 +. פרוטוקול זה נמצא בשימוש בשילוב עם Dissection הפרוטוקול 2-Photon הדמיה של בלוטות לימפה הפריפריה עכברים שפורסם בגיליון 7 של יופיטר, לטיהור בתאי T סוגי תאים אחרים adoptively להעביר למטרות הדמיה. למרות שאנו לא להפגין ניתוח FACS וידאו בפרוטוקול זה, מומלץ מאוד לבדוק את טוהר הכולל של תאים בודדים באמצעות נוגדנים מתאימים באמצעות FACS. בנוסף, אנחנו מדגימים את השיטה הלא סטרילית של בידוד תא T. אם התאים סטרילי נחוצות עבור יישום מסוים של משתמש הקצה שלך, הקפד לעשות את כל ההליכים הפגינו למכסה המנוע בתרבית רקמה בתנאים סטריליים סטנדרטי. אנו מודים לך על צפייה ובהצלחה עם הניסויים שלך!

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

אנא קרא ופעל על פי פרוטוקול כלול בערכה Miltenyi או באופן מקוון http://www.miltenyibiotec.com/ .

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

בידוד של תאים ממקור העיקרית היא צעד הכרחי פרוטוקולים מורכבים הרבה יותר. Miltenyi מציעה ערכות לבודד תאים ואורגניזמים מספר כולל בני אדם, שאינם בני אדם וקופים, חולדות, כפי המתואר כאן, בעכברים. הפרדה מגנטית חרוז מבוססי תאים מאפשר בחירה או חיובי (או דלדול התא), כמו גם סלקציה שלילית. הנה, אנחנו מדגימים סלקציה שלילית של CD4 יש נגעה או Na + עוזר ותאי T. שימוש זה הפרוטוקול הסטנדרטי שאנחנו בדרך כלל לטהר את התאים CD4 ≥ טהור 96% + / CD3 +. למרות שאנו לא להפגין ניתוח FACS וידאו בפרוטוקול זה, מומלץ מאוד לבדוק את טו...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

למחברים אין ניגודי אינטרסים להצהיר עליהם.

תודות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

אנו מבקשים להודות רבקה Paquett להכנת חיץ MACS.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
MACS Bufferריאגנטאף אחדאף אחדהכן לפי הנחיות Miltenyi.
CD4+ T cell Isolation Kit: Untouched IsolationריאגנטMiltenyi Biotec130-090-860לשימוש עם מערכת Miltenyi.
מלח פוספט רב-ערכי סטרילי (PBS)ריאגנטלשימוש בהכנת MACS buffer.
צלחת תרבית 35mm ללא טיפול TC של CorningאחרCorning430588משמשת להכנת תרחיף תאים בודדים.
מסנן תאים 70 מיקרוןכליBD Biosciences352350משמש להכנת תרחיף תאים בודדים.
מזרק 6 mLכליTyco Healthcare, Covidien8881516051משמש להכנת תרחיף תאים בודדים.
10x Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline (DPBS)ריאגנטInvitrogen14200-075לשימוש בליזיס של RBC.
מים סטרילייםריאגנטSigma-AldrichW4502לשימוש בליזיס של RBC.

מקורות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Miller, M. J., Hejazi, A. S., Wei, S. H., Cahalan, M. D., Parker, I. T cell repertoire scanning is promoted by dynamic dendritic cell behavior and random T cell motility in the lymph node. Proc Natl Acad Sci U S A. 101, 998-1003 (2004).
  2. Matheu, M. P., Deane, J. A., Parker, I., Fruman, D. A., Cahalan, M. D. Class IA phosphoinositide 3-kinase modulates basal lymphocyte motility in the lymph node. J Immunol. 179, 2261-2269 (2007).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

LS

מאמרים קשורים