חלבוני קרח מחייבים (IBPs), הידוע גם כחלבוני רדיאטור, לעכב צמיחה וקרח הם תוסף מבטיח לשימוש בהקפאה קריוגנית של רקמות. הכלי העיקרי המשמש לבדיקת IBPs הוא osmometer nanoliter. פתחנו שלב בית מעוצב קירור רכוב על מיקרוסקופ אופטי ונשלטתי באמצעות שגרת LabVIEW שהותקן. Osmometer nanoliter מתואר כאן מניפולצית טמפרטורת המדגם באופן אולטרה רגיש.
מאמר שיטה
Osmometer Nanoliter הרומן LabVIEW המופעל לחקירות חלבון מחייב קרח
במאמר זה
סיכום
תקציר
חלבונים קושרי קרח (IBPs), הכוללים חלבוני אנטי-פריז (antifreeze proteins), חלבוני מבנה קרח (ice structuring proteins), חלבוני היסטרזיס תרמי (thermal hysteresis proteins) וחלבוני עיכוב גבישיות קרח חוזרות (ice recrystallization inhibition proteins), נמצאים באורגניזמים המותאמים לקור ומגנים עליהם מפני פגיעות קיפאון באמצעות אינטראקציה עם גבישי קרח. IBPs נמצאים במגוון אורגניזמים, כולל דגים1, צמחים2, 3, פרוקי רגליים4, 5, פטריות6 וחיידקים7. ה-IBPs נסמכים על פני השטח של גבישי קרח ומונעים ממולקולות מים להצטרף לסריג הקרח במיקום הסמיכה של ה-IBP. קרח הגדל על פני השטח של הגביש בין ה-IBPs הסמוכים מפתח קימור גבוה המוריד את הטמפרטורה שבה גדלים גבישי הקרח, תופעה המכונה אפקט גיבס-תומסון (Gibbs-Thomson effect). ירידה זו יוצרת פער (היסטרזיס תרמי, TH) בין נקודת ההמסה לבין נקודת הקיפאון שאינה בשיווי משקל, שבו צמיחת הקרח נעצרת8-10, ראו איור 1. אחד הכלים המרכזיים המשמשים במחקר IBPs הוא האוזמומטר הננו-ליטרי, המקל על מדידות של פעילויות TH של תמיסות IBPs. אוזמומטרים ננו-ליטריים, כגון מכשיר Clifton (Clifton Technical Physics, Hartford, NY,) ומכשיר Otago (Otago Osmometers, Dunedin, New Zealand), תוכננו למדוד את האוזמולריות של תמיסה על ידי מדידת ירידת נקודת ההמסה של טיפות בנפחים של ננו-ליטרים. מכשירים אלה שימשו למדידת האוזמולריות של דגימות ביולוגיות, כגון דמעות11, ונמצאו כשימושיים במחקר IBPs. שליטה ידנית באוזמומטרים ננו-ליטריים אלה הגבילה את האפשרויות הניסיוניות. לא ניתן היה לשלוט באופן מהימן בשינויי קצב הטמפרטורה, טווח הטמפרטורות של מכשיר ה-Clifton היה מוגבל ל-4,000 mOsmol (בערך -7.5 °C), והקלטות טמפרטורה כפונקציה של זמן לא היו אפשרות זמינה במכשירים אלו.
תכננו מערכת ננוליטר-אוזמומטר מותאמת אישית המבוקרת במחשב באמצעות פלטפורמת LabVIEW (National Instruments). הבמה הקרה, שתוארה בעבר9, 10, מכילה בלוק מתכת שדרכו זורם מים, ובכך היא משמשת כפיזור חום, ראו איור 2. לבלוק זה מחוברים מקררים תרמואלקטריים שניתן להפעילם באמצעות בקר טמפרטורה מסחרי הניתן לשליטה דרך מודולי LabVIEW, ראו איור 3. פרטים נוספים מופיעים להלן. היתרון המרכזי של מערכת זו הוא הבקרת הטמפרטורה הרגישה שלה, ראו איור 4. בקרת טמפרטורה אוטומטית מאפשרת תיאום של שינוי טמפרטורה (ramp) קבוע עם פלט של מיקרוסקופיה בווידאו המכיל פרטים ניסיוניים נוספים.
כדי לחקור את התלות בזמן של פעילות ה-TH, בדקנו IBP היפר-אקטיבי בעל מסה של 58 kDa מהחיידק האנטארקטי Marinomonas primoryensis (MpIBP)12. חלבון זה סומן עם חלבוני פלואורסצנציה ירוקים משופרים (eGFP) בקונסטרוקט שפותח על ידי קבוצתו של פיטר דייוויס (Queens University)10. הראינו כי פרופיל שינוי הטמפרטורה השפיע על פעילות ה-TH. שליטה מצוינת בפרופיל הטמפרטורה בניסויים אלה שיפרה באופן משמעותי את מדידות ה-TH. האוזמומטר הננו-ליטרי אפשר לנו בנוסף לבחון את עיכוב הגביש מחדש של IBPs5, 13. באופן כללי, גביש מחדש הוא תופעה שבה גבישים גדולים גדלים על חשבון גבישים קטנים. IBPs מעכבים ביעילות גביש מחדש, אפילו בריכוזים נמוכים14, 15. השתמשנו באוזמומטר המבוקר על ידי LabVIEW כדי לעקוב באופן כמותי אחר הגביש מחדש של קרח וכדי לאכוף שבר קרח קבוע באמצעות ניתוח וידאו בו-זמני בזמן אמת של התמונות ומשוב טמפרטורה מתא הדגימה13. החישובים בזמן אמת מציעים אפשרויות בקרה נוספות במהלך הליך ניסויי. פותחה במה עבור מיקרוסקופ הפוך כדי להתאימה למכשירים מיקרו-פלואידיים מבוקרי טמפרטורה, אשר יתוארו במקום אחר16.
מערכת הבמה הקרה
מכלול הבמה הקרה (איור 2) מורכב מקבוצה של מקררים תרמו-אלקטריים המקררים לוח נחושת. חום מוסר מהבמה על ידי זרימת מים קרים דרך תא סגור מתחת למקררים התרמו-אלקטריים. חור בקוטר 4 mm במרכז לוח הנחושת משמש כחלון תצפית. חור במישור בעל קוטר 1 mm נקדח כדי להתאימו לתרמיסטור. דיסקית נחושת בהתאמה אישית (בקוטר 7 mm) עם מספר חורים (בקוטר 500 μm) הונחה על לוח הנחושת והוצמדה לחלון התצפית. אוויר הועבר בקצב זרימה של 35 ml/sec והיובש באמצעות Drierite (W.A. Hammond). האוויר היבש שימש להבטחת סביבה יבשה בבמת הקירור. הבמה חוברה באמצעות יציאת חיבור בעלת 9 פינים לבקר טמפרטורה (דגם 3040 או 3150, Newport Corporation, Irvine, California, US). בקר הטמפרטורה חובר באמצעות כבל לכרטיס GPIB-PCI במחשב (National instruments, Austin, Texas, USA).
פרוטוקול
0. הליכים המקדמיים
- זכוכית נימים להזרקת תמיסה. שימוש חולץ נימים (Narishige, טוקיו, יפן), להכין פיפטה חדה עם פתיחה מצוינת משפופרת מייקר נימי זכוכית (המותג GMBH, ורטהיים, גרמניה). גודל הפתח צריך להיות מאומת על ידי העברת אוויר דרך הנימים להשיג מבעבע עדינה במים נקיים. אם הנימים סגורות, ניתן לפתוח אותו על ידי שבירת הקצה שלה. ניתן לעשות זאת על ידי לחיצה או מגרדים אותו בעדינות על צינור המים המכילים קירות. הכן כגון נימים שהפתח חסום כמעט אך מספיק פתוח על מנת לאפשר ההיווצרות של בועות תת מילימטר.
- ניקוי דיסק נחושת. Sonicate את דיסקי הנחושת למשך 10 דקות במייקרו 0.1%-90 סבון (קול-לבן זוג, ורנון הילס, אילינוי, ארה"ב), ואז לשטוף עם מים מזוקקים כפולים. להציג את הדיסקים לפתרון isopropanol (טכני) וsonicate שוב למשך 10 דקות. סנפירברית, לייבש את הדיסקים באמצעות אוויר מסונן. שלב ניקוי זו הוא קריטי כדי למנוע זיהום IBP בין ניסויים.
- הרכבת coverglass כפולת שכבה. הרכבת coverglass הייתה מוכנה לאפשר לתצפית מדגם ללא עיבוי לחות על פני שטח כיסוי הזכוכית. זו הושגה על ידי צבת Drierite חלקיקים (WA המונד Drierite, קסניה, אוהיו, ארה"ב) (2 מ"מ קוטר) בין שתי coverslips, שלאחר מכן הדביק עם אקדח דבק חם. תצורה זו מונעת עיבוי שעלולה לחסום את הנוף כאשר הדגימה קוררה לטמפרטורות נמוכות ובטלה את הצורך לפוצץ באוויר יבש לחלון התצפית.
1. שלב הקירור Set-up
- חבור את כניסת מי זרימה והיציאה של שלב הקירור עד 4 מ"מ קוטר פנימיים Tygon צינורות (Saint-Gobain, פריז, צרפת), ולחבר את צינור יניקת זרימת מים למשאבת מים.
- חבר צינור 4 Tygon קוטר פנימי מ"מ ליניקה של t שלב הקירורo לספק אוויר יבש. האוויר היה יבש באמצעות עמודת Drierite באונליין.
- להפעיל את משאבות אוויר ומים. שים לב כי יסודות הקירור לא צריכים לרוץ בלי גוף קירור.
- הפעל את בקר הטמפרטורה, מצלמה, ושגרת LabVIEW.
2. לדוגמא הכנה
- הנח טיפת μl 3-4 טבילת השמן B (Cargille מעבדות, סדר גרוב, ניו ג'רזי, ארה"ב) בצד האחורי של דיסק נחושת קוטר 7 מ"מ היו 500 מיקרומטר חורים שנקדחו באמצעות הדיסק.
- מקם את דיסק הנחושת על הבמה עם קירור צד שמן הטבילה פונה כלפי מטה.
- לחבר את צינור הנימים (בקצה הקהה) לצינור בקוטר 0.7 מ"מ פנימי Tygon מחובר בקצה השני למזרק 2 מיליליטר זכוכית (Poulten-גרף, ורטהיים, גרמניה).
- לפני שימוש בצינור הנימים, בדוק את הפתח הקטן של הנימים כדי להבטיח שהפתיחה היא גודל מתאים (ראה הליכים המקדמיים).
- לאט לאט להכניס את GLAss נימים לתוך הצינור המוכן IBP חלבון המדגם (2.4 מיקרומטר Mp IBP-GFP ב20 מ"מ CaCl 2 ו 25 מ"מ טריס-HCl ב-pH 8, ראה התייחסות 10 לפרטי ההכנה) ומושך את מזרק הזכוכית עד נימי הזכוכית מכילה 0.1 μl של חלבון הפתרון.
- להתחיל בהקלטת וידאו באמצעות תוכנת LabVIEW.
- הכנס את הקצה החד של זכוכית הנימים (המכיל חלבון הפתרון) לאחד החורים בדיסק הנחושת בשלב הקירור.
- תוך כדי התבוננות מבעד למיקרוסקופ (אולימפוס, טוקיו, יפן, אובייקטיבי 10x), לחדור בזהירות את שכבת שמן הטבילה עם קצה נימי הזכוכית, ולחץ על מזרק הזכוכית (מאוד בעדינות) כדי לספק כמות קטנה (~ 10 NL) של החלבון פתרון כדי ליצור טיפת מיקרומטר 200.
- כסה את החור בשלב הקירור עם מכלול coverglass שכבה הכפולה (ראה הליכים המקדמיים).
3. מדידת פעילות TH
- קדםss כפתור הקירור ולקבוע את הטמפרטורה ל -40 ° C.
- בתחילה, אגל הפתרון יהיה ברור. בטמפרטורות נמוכות, בדרך כלל בטווח -30 ° C עד -35 ° C, צבע שינויי האגל, מצביע על כך שהפתרון הוקפא. מייד לאחר המדגם הקפיא, להגדיל את הטמפרטורה לאט לאט עד שהקרח בתפזורת מתחיל להתמוסס. עלייה הדרגתית של הטמפרטורה נחוצה כדי למנוע להחטיא מהטמפרטורה שעלולה לגרום להמסה המלאה של המדגם.
- מעבר למטרת 50x ומתחיל להמס את הקרח על ידי התאמת הטמפרטורה. התאמה זו היא אינטראקטיבית, והשלבים הסופיים בדרך כלל מבוצעים באמצעות צעדי טמפרטורה קטנות של 0.002 מעלות צלזיוס תמשיך לינמס עד גביש יחיד נשאר. הגודל הסופי של הגביש צריך להיות בסביבות 10 מיקרומטר. הטמפרטורה הגבוהה ביותר שבי ההיתוך חדל תיקבע כנקודת התכה ונקבעה במדויק בשלב ניתוח וידאו מאוחר יותר.
- הגדר את הטמפרטורה לכמה מאיות צלזיוס תואר מתחת לנקודת ההתכה של הגביש ולהתחיל רמפת טמפרטורה באיחור 10 דקות. להתאים את קצב ramping כרצונך. במהלך תקופה זו, הגביש יהיה חשוף לIBPs.
- עם סיום זמן החשיפה 10 דקות, הטמפרטורה פחתה באופן אוטומטי תחת השליטה של שגרת LabVIEW.
- שים לב לצורת גביש כירידות בטמפרטורה. בשלב מסוים, הפרץ הפתאומי של גביש הקרח יכול להיות שנצפה. הטמפרטורה שבה זה מתרחש תצוין כטמפרטורת פרץ הגביש.
- השתמש בניתוח וידאו על מנת לקבוע את נקודת ההתכה המדויקת וטמפרטורת הפרץ. ראשית, על ידי שימוש בניתוח וידאו, למצוא את נקודת ההתכה המדויקת. תזכיר כי הטמפרטורה הגבוהה ביותר שבי ההיתוך חדל תיקבע כנקודת התכה. לתעד את נקודת התכה זה בתוכנת גיליונות אלקטרוניים. לאחר מכן, לקבוע את טמפרטורת פרץ הגביש המדויקת, ולתעד את הערך הזהגם כן. ההבדל בין נקודת ההיתוך ונקודת קיפאון, או בטמפרטורת פרץ גביש, הוא פעילות hysteresis התרמית של פתרון IBP.
4. מדידה של פעילות TH תלוית זמן
- עקוב הפרוטוקול המתואר בסעיפים 3.1-3.3 להכין גביש יחיד של קרח.
- לאחר ההיווצרות של הגביש, להגדיר את זמן ההשהיה של הרמפה כרצון, ולהפעיל את הרמפה.
- הטמפרטורה תקטן בשיעור קבוע (בהתאם לדרישות של המפעילים) באופן אוטומטי לאחר זמן השהית הרמפה עבר.
- לתעד את הטמפרטורה שבה פרץ הגביש מתרחש. לחשב את זמן החשיפה (הזמן בין היווצרות גבישים ופרץ הגביש).
- חזור על הניסוי לזמני השהיה שונים ולהתוות את פעילות TH כפונקציה של זמן החשיפה על מנת להעריך את זמן התלות של פעילות TH.
תוצאות
מדידה של תלות זמן TH
Osmometer nanoliter LabVIEW המופעל מאפשר ביצוע מדידות פעילות TH מדויקות. שיעור הפחתת הטמפרטורה הקבועה מותר המדידה של תלות זמן TH. בקרת הטמפרטורה המדויקת מופעלת על ידי osmometer nanoliter הייתה חיונית לניסויים אלה. זמן החשיפה של גביש קרח לIBPs בפתרון מוגדר כפרק זמן מהיווצרות הגבישים (סופו של תהליך ההיתוך) עד הצמיחה הפתאומית של קרח סביב הגביש (פרץ גביש). מצאנו כי זמן החשיפה של גבישי הקרח לIBPs מושפע פעילות TH מכריע. תקופות קצרות של חשיפת IBP (כמה שניות) המיוצרות על פעילות TH נמוכה בפתרון Mp IBP-GFP (2.4 מיקרומטר) (איור 5). פעילות TH גדלה עם זמן החשיפה IBP עד שהגיע לרמה של 4 חשיפת IBP דקות. בריכוזים גבוהים יותר IBP, הצלחתau, הושג בזמנים קצרים יותר.
האיור 1. IBPs ממחיש תרשים סכמטי adsorbed לקרח. אמץ באישור 10.
איור 2. שלב הקירור. ) מחובר לצינורות במיקרוסקופ. ב) בלי להוביל העליון. ג) תרשים סכמטי.
איור 3. תמונת מסך של ממשק LabVIEW. Clאיכס כאן לצפייה בדמות גדולה.
איור 4. גרף יציבות טמפרטורה. בקר הטמפרטורה נקבע שתוריד את טמפרטורת 0.01 ° C בכל 15 שניות.
איור 5. פעילות TH Mp IBP כפונקציה של זמן חשיפת גביש קרח לIBPs. כל נקודת זמן היא ממוצעת של 3-6 ניסויים.
דיון
עבודה זו ממחישה את הפעולה של osmometer nanoliter מבוקר מחשב המאפשר מדידות מדויקות של פעילות TH עם בקרת טמפרטורה יוצאת דופן. בכל מערכת רגישה לטמפרטורה, גרדיאנטים בטמפרטורה רצוי יש להימנע. כדי להימנע משיפועי טמפרטורה במנגנון שהוצג כאן, אגל פתרון המבחן חייב להיות ממוקם במרכז חור בשלב קירור דיסק הנחושת (שלב 2.7). בנוסף, הגביש היחיד צריך להיות במרכז של רביב ולא ליד הקצוות (ברוב המקרים, זה לא יקרה באופן ספונטני). תלות הזמן המתואר מצביעה על כך שקצב הקירור עשוי להשפיע על קריאות ה. לפיכך, אנו ממליצים לרבות דוח של הזמן שבו הגביש נחשף לפתרון לפני הקירור, כמו גם את קצב הקירור. אנחנו בדרך כלל חיכינו 10 דקות לפני ramping את הטמפרטורה ב0.01 ° C שלבים כל 4 שניות.
את שיתוף LabVIEW המבוקרשלב oling הותאם לשימוש עם מיקרוסקופ ההפוך שבו יכולים להיות שהופעלו התקני microfluidic תרמית. מערכת זו מאפשרת ביצוע הניסויים בexchange פתרון של גבישי קרח וIBPs מתויגים עם 9 eGFP, 10, 16. מערכת LabVIEW המבוקרת עשויה להיות מותאמת לשלב קליפטון על ידי חיבור בקר 3040 טמפרטורה באמצעות מעגל חשמלי ייעודי הסתגלות. מערכת כזו פעלה בדייויס 17 המעבדה. תוכנת LabVIEW והעיצוב הייעודי התאמת המעגל החשמלי לבמת קליפטון זמין לפי בקשה.
לסיכום, אנו מתארים osmometer nanoliter המאפשר שליטה הרגישה ומניפולציה של טמפרטורה וקצב עליית הטמפרטורה והירידה (עם רגישות 0.002 ° C), בתיאום עם ממשק וידאו דרך שגרת LabVIEW לניתוח בזמן אמת. מערכת זו יכולה לבצע ניסויים לשעתק שיעור בשליטה כי הם importanלא לחקירת קינטיקה של אינטראקציות IBP עם קרח. ניסויים כאלה יכולים לטפל בכמה בעיות ארוכות התווכחו מקיפות את מנגנון פעולה של IBPs.
גילויים
אין ניגודי האינטרסים הכריזו.
תודות
מחקר זה נתמך על ידי הקרן הלאומי למדע, NSF, וERC. ברצוננו להודות לעזרה טכנית שלב הטמפרטורה מרנדי מילפורד, מייקל קורן, דאג שייפר, וג'רמי דניסון. סיוע בפיתוח תוכנה סופק על ידי אור חן, די שו, Rajesh Sannareddy, וSumit Bhattachary. ברצוננו להודות לעמיתי פרופ 'פיטר ל' דייויס וד"ר לורי א גרהם לחלבון Mp IBP ודיונים מועילים. אנו מודים גם לחברי מעבדת ד"ר מאיה הבר דולב, Yangzhong צ'ין, ד"ר Yeliz סליק, ד"ר נטליה Pertaya, אורטל Mizrahy, וגיא שלומית למשוב מהמשתמשים שלהם.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| שם | חברה | מספר קטלוגים / דגם | תגובות |
| טבילת שמן מהסוג B | מעבדות Cargille | 16484 | |
| Drierite | WA המונד Drierite | 043063 2270g | |
| תמיסת ניקוי מייקרו 90 | קולמן לבן זוג | EW-18100-11 | |
| נימי חולץ | Narishige | PB-7 | |
| צינורות זכוכית נימים | המותג GNBH | 7493 21 | 75 מ"מ אורך, 1.15 קוטר |
| טמפרטורהבקר | ניופורט, אירווין, קליפורניה, ארצות הברית | דגם 3040 | דגם 3040 |
| מיקרוסקופ אור | אולימפוס | דגם BH2 | |
| מטרת 10x | אולימפוס | S תכנית 10, 0.3, 160/0.17 | |
| מטרת 50x | ניקון | CF תכנית, 50X/0.55 EPI ELWD | |
| CCD מצלמה | Provideo | CVC-140 | |
| צינורות Tygon | Saint-Gobain, פריז, צרפת | Tygon הגיבוש Tubing S-50-HL | |
| זכוכית המזרק (2 מ"ל) | Poulten-גרף, ורטהיים, גרמניה | 7 10227 | |
| כרטיס PCI-GPIB | המכשירים לאומיים, אוסטין, טקסס, ארה"ב | 778032-01 | |
| וידאו המסגרת grabber IMAQ-PCI-1407 | המכשירים לאומיים, אוסטין, טקסס, ארה"ב | 322156B-01 | |
| תוכנת עיצוב מערכת LabVIEW | המכשירים לאומיים, אוסטין, טקסס, ארה"ב | גרסה 8 | |
| תוכנת מחבר DIVX | DivX LLC, סן דייגו, קליפורניה, ארה"ב |
מקורות
- DeVries, A. L. Glycoproteins as biological antifreeze agents in antarctic fishes. Science. 172, 1152-1155 (1971).
- Worrall, D., Elias, L., Ashford, D., Smallwood, M., Sidebottom, C., Lillford, P., Telford, J., Holt, C., Bowles, D. A carrot leucine-rich-repeat protein that inhibits ice recrystallization. Science. 282, 115-117 (1998).
- Raymond, J. A., Knight, C. A. Ice binding, recrystallization inhibition, and cryoprotective properties of ice-active substances associated with Antarctic sea ice diatoms. Cryobiology. 46, 174-181 (2003).
- Tomchaney, A. P., Morris, J. P., Kang, S. H., Duman, J. G. Purification, composition, and physical properties of a thermal hysteresis "antifreeze" protein from larvae of the beetle, Tenebrio molitor. Biochemistry. 21, 716-721 (1982).
- Kiko, R. Acquisition of freeze protection in a sea-ice crustacean through horizontal gene transfer. Polar Biology. 33, 543-556 (2010).
- Robinson, C. H. Cold adaptation in Arctic and Antarctic fungi. New Phytol. 151, 341-353 (2001).
- Gilbert, J. A., Hill, P. J., Dodd, C. E., Laybourn-Parry, J. Demonstration of antifreeze protein activity in Antarctic lake bacteria. Microbiology. 150, 171-180 (2004).
- Raymond, J. A., DeVries, A. L. Adsorption inhibition as a mechanism of freezing resistance in polar fishes. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 74, 2589-2593 (1977).
- Pertaya, N., Marshall, C. B., DiPrinzio, C. L., Wilen, L., Thomson, E. S., Wettlaufer, J. S., Davies, P. L., Braslavsky, I. Fluorescence microscopy evidence for quasi-permanent attachment of antifreeze proteins to ice surfaces. Biophys. J. 92, 3663-3673 (2007).
- Celik, Y., Graham, L. A., Mok, Y. F., Bar, M., Davies, P. L., Braslavsky, I. Superheating of ice crystals in antifreeze protein solutions. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 107, 5423-5428 (2010).
- Gilbard, J. P., Farris, R. L., Santamaria, J. Osmolarity of tear microvolumes in keratoconjunctivitis sicca. Arch. Ophthalmol. 96, 677-681 (1978).
- Gilbert, J. A., Davies, P. L., Laybourn-Parry, J. A hyperactive, Ca2+-dependent antifreeze protein in an Antarctic bacterium. FEMS Microbiol. Lett. 245, 67-72 (2005).
- Soriano, J., Braslavsky, I., Xu, D., Krichevsky, O., Stavans, J. Universality of persistence exponents in two-dimensional ostwald ripening. Phys. Rev. Lett. 103, (2009).
- Tomczak, M. M., Marshall, C. B., Gilbert, J. A., Davies, P. L. A facile method for determining ice recrystallization inhibition by antifreeze proteins. Biochem. Bioph. Res. Co. 311, 1041-1046 (2003).
- Knight, C. A., Hallett, J., Devries, A. L. Solute Effects on Ice Recrystallization - an Assessment Technique. Cryobiology. 25, 55-60 (1988).
- Celik, Y., Drori, R., Pertaya-Braun, N., Altan, A., Barton, T., Bar-Dolev, M., Groisman, A., Davies, P. L., Braslavsky, I. Microfluidic experiments reveal that antifreeze proteins bound to ice crystals suffice to prevent their growth. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 110, 1309-1314 (2013).
- Middleton, A. J., Marshall, C. B., Faucher, F., Bar-Dolev, M., Braslavsky, I., Campbell, R. L., Walker, V. K., Davies, P. L. Antifreeze protein from freeze-tolerant grass has a beta-roll fold with an irregularly structured ice-binding site. J. Mol. Biol. 416, 713-724 (2012).
הדפסות חוזרות והרשאות
תגיות
