הקמת מודל orthotopic גידול בשלפוחית השתן להעריך את ההשפעות נוגדות הגידולים של סרנה נמסר intravesically וצמיחה ניטור הגידול והדמיה על ידי אולטרסאונד bioluminescent.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
שלפוחית השתן Orthotopic גידול דגם ואת הערכת טיפול סרנה השלפוחית
* These authors contributed equally
במאמר זה
סיכום
תקציר
אנו מציגים שיטה חדשה לטיפול בסרטן שלפוחית השתן עם מסירת intravesically הפעלת RNA קטן (סרנה) בשנת המודל orthotopic העכבר xenograft שלפוחית השתן הגידול. מודל העכבר הוא הוקם על ידי צנתור השופכה בשאיפה תחת הרדמה מלאה. כוויה כימית הוא הציג אז את רירית שלפוחית השתן באמצעות פתרון השלפוחית כסף חנקתי לשבש את שכבת glycosaminoglycan שלפוחית השתן מאפשר לתאים לצרף. אחרי כמה שטיפות עם מים סטריליים, סרטן שלפוחית השתן האנושית KU-7-luc2-GFP תאים החדירו דרך קטטר לתוך שלפוחית השתן להתעכב במשך 2 שעות. לאחר צמיחה של גידולים בשלפוחית השתן הוא אישר ומפוקחים על ידי אולטרסאונד שלפוחית השתן vivo והדמיה bioluminescent. הגידולים מטופלים אז intravesically עם סרנה נוסח חלקיקים שומנים בדם (LNPs). הגידול מנוטר עם אולטרסאונד ביולומינציה. כל השלבים של התהליך הזה הם הפגינו בסרטון המצורף.
פרוטוקול
הנהלים הקשורים בנושאים בעלי חיים אושרו על ידי טיפול בבעלי חיים מוסדי ועדת שימוש (IACUC) באוניברסיטת קליפורניה בסן פרנסיסקו.
1. תא הכנה
- שלפוחית השתן האנושית סרטן תאים קו KU-7-luc2-GFP (Caliper מדעי החיים, Hopkinton, MA) הוא גדל RPMI-1640 Media השלימו עם סרום 10% שור עוברית 50 מיקרוגרם / מ"ל גנטמיצין.
- תרבויות נשמרים על 37 מעלות צלזיוס, 5% CO 2 עם התקשורת משתנה כל יומיים שלושה.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
אנו מציגים פרוטוקול להקמת מודל orthotopic העכבר xenograft גידול בשלפוחית השתן בעקבות הטיפול השלפוחית של גידולים עם סרנה LNP ניסח שמכוונת את האמרגן של p21 CIP1/WAF1 (p21) להפעלה תעתיק. 2, 3 גידולים כתוצאה יכול להיות אישר פיקוח עם הדמיה bioluminescent ו אולטרסאונד שלפוחית השתן. מודלים Orthotopic עשוי להיות עדיף על intraperitoneal, תת עורית, או על ידי מתן תוך ורידי מודלים בסביבה של שתן urothelium כי נוסף קרוב יותר לסרטן שלפוחית השתן אנדוגני. מגוון רחב של.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
LCL הוא ממציא בשם ממתינים על בקשות לפטנטים הקשורים סרנה אשר הוגשו על ידי אוניברסיטת קליפורניה בסן פרנסיסקו ו ברשיון Alnylam Pharmaceuticals.
תודות
מחקר זה מומן על ידי הנרי AACR סרטן שלפוחית השתן שפרד מענק מחקר (09-60-30-LI).
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| שם מגיב | חברה | מספר קטלוגי | הערות (לא חובה) |
| KU-7-לוק-GFP בתאים | Caliper | 128091 | |
| עכברים בעירום הרתי (נו / נו) | סימונסן מעבדות | 6-7 שבועות | סים: (NCR) נו / נו fisol |
| יחידת אולטראסאונד | Visualsonics | Vevo 770 | RMV-704 בדיקה |
| ביולומינציה היחידה | Caliper | IVIS ספקטרום | |
| אקסל קטטר safelet | דיג | 14-841-21 | 24G X ¾ " |
| כסף חנקתי | סיגמא | S8157 | |
| המילטון המזרק | המילטון שיתוףmpany | 80301 | |
| LNP-סרנה | Alnylam Pharmaceuticals |
טבלה 1. ריאגנטים ספציפיים וציוד.
מקורות
- Semple, S. C. Rational design of cationic lipids for siRNA delivery. Nature. 28, 172-176 (2010).
- Li, L. C. Small dsRNAs induce transcriptional activation in human cells. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United St....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
