בפרוטוקול זה, w הדואר זיהה אוכלוסיית רומן של תאים כמו melanocyte-(הידוע גם במלנוציטים לב) בלבם של עכברים ובני אדם שתורם להפרעות קצב פרוזדורים גורמת בעכברים.
בפרוטוקול זה, w הדואר זיהה אוכלוסיית רומן של תאים כמו melanocyte-(הידוע גם במלנוציטים לב) בלבם של עכברים ובני אדם שתורם להפרעות קצב פרוזדורים גורמת בעכברים.
זיהינו אוכלוסיית רומן של תאים כמו melanocyte-(הידוע גם במלנוציטים לב) בלבם של עכברים ובני אדם שתורמים לגורמי הפרעת קצב פרוזדורים בעכברים. כדי לחקור את התכונות חשמליות וביולוגיות של מלנוציטים לב פיתחנו הליך לבודד אותם מלב העכבר שנגזרים מאלה שנועדו לבודד את שריר לב עכברי בילוד. על מנת לקבל מלנוציטים לב בריאים מתאימים למהדק תיקון נרחב יותר או מחקרים ביוכימיים, שפיתחנו הליך מעודן לבידוד וציפוי מלנוציטים לב המבוססים על אלה שתוכננו במקור לבודד מלנוציטים עורית. ההליך המעודן בא לידי הביטוי בסקירה זו ומייצר מספרים גדולים יותר של תאים כמו melanocyte הבריאים שיכול להיות מצופה כאוכלוסייה טהורה או עם שריר לב.
לאחרונה זיהו אוכלוסיית תא רומן בלב של עכברים ובני האדם שמבטאים את אנזימי מלנין-סינתזה ומורפולוגית דומה מלנוציטים עורית. אנו נקראים 'מלנוציטים הלב' התאים אלה ומצאנו שהם נמצאים במקומות אנטומיים שממנו הפרעת קצב פרוזדורים מתעורר בי לעתים קרובות מקורן בבני אדם. מצאנו גם מלנוציטים לב לתרום להפרעות קצב פרוזדורים בעכברים עם מחיקה בתאי מין של DCT. מלנוציטים לב מופצים בדלילות לאורך אטריום העכבר שבו הם מהווים פחות מ -0.1% מכל תאי פרוזדורים. כדי לחקור את התכונות חשמליות וביולוגיות של מלנוציטים לב פיתחנו הליך לבודד אותם מלב העכבר באמצעות סמנים ספציפיים melanocyte Cre-מושרה. ההליך הראשוני שלנו פותח מאלו המשמשים לבודד את שריר לב עכברי....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
.1 הכנת הפתרונות וציוד הדרושים
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הפרוטוקול המתואר במאמר זה הוא טכניקה משופרת בהשוואה לזו שפורסמנו בעבר לבידוד מלנוציטים לב מהלב העכברי. הליך זה מעסיק את השימוש של סמני ניאון מונעים על ידי Cre-recombinase אנזים ספציפי סינתזת מלנין לתייג תאים כמו melanocyte-לב. חשוב להשתמש בסמן כדי לתייג מלנוציטים לב כאשר עובדים עם תאים עובריים או בילוד טרי מבודדים, מאז ההבדלים מורפולוגיים המבדילים מלנוציטים לב מmyocytes פרוזדורים עדיין לא פיתחו (איור 1 א). כפי שניתן לראות באיור 1 א כאשר צעד הבידוד.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
מלנוציטים לב נמצאים במקומות אנטומיים בתוך הלב, כי בדרך כלל לגרום לטריגרים הפרעות קצב פרוזדורים. אזורים אלה כוללים את ורידי ריאה, annulus בין העליות והחדרים, המבואה האחורית עזב וovale הנקב (איור 4). כדי להבין את תפקיד תאים אלה לשחק בarrhythmogenesis, אנו מפתחים טכניקות לבודד אותם וללמוד הפיסיולוגיה שלהם. עם זאת, אנחנו מוכרים את זה השיפור בטכניקה זו כדי להניב כמויות בריאים וגדולות יותר של מלנוציטים לב תאפשר מחקרים נוספים כדי לחקור את התגובה של מלנוציטים לב לגירויים .......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
יש לנו מה למסור.
עבודה זו נתמכה על ידי המכונים הלאומיים לבריאות בפרס R01 HL105734 לVVPMDL נתמך, בין שאר, על ידי המכון הלאומי לבריאות בקריירה מחקר פרס K08 HL094748. VVP הוא חוקר חדשני של איגוד הלב האמריקאי נתמך על ידי מענק 11IRG900384.
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| MCDB 153 | Sigma-Aldrich | M7403 | להמיס במים |
| DPBS, ללא סידן וללא מגנזיום | Invitrogen | 14190136 | ריכוז מלאי: 1x ריכוז עבודה: 1x |
| פניצילין-סטרפטומייצין | Invitrogen | 15140163 | ריכוז מלאי: 100x ריכוז עבודה: 1x |
| סרום בקר עוברי (Fetal Bovine Serum) | Life Technology | Certified | ריכוז עבודה: 4% |
| TPA | Sigma-Aldrich | P1585 | להמיס ב-DMSO ריכוז מלאי: 3.2 μM ריכוז עבודה: 32 nM |
| טרנספרין (Transferrin) | Sigma-Aldrich | T8158 | להמיס ב-DPBS ריכוז מלאי: 0.1 mg/ml ריכוז עבודה: 1 μg/ml |
| Dibutyryl cyclic AMP | Sigma-Aldrich | D0627 | להמיס ב-DPBS ריכוז מלאי: 0.5 mM ריכוז עבודה: 5 μM |
| אינסולין | Sigma-Aldrich | I6634 | להמיס בחומצה אצטית 10 mM ריכוז מלאי: 1 mg/ml ריכוז עבודה: 5 μg/ml |
| Basic FGF | BD Biosciences | 354060 | להמיס במים ריכוז מלאי: 4 ng/μl ריכוז עבודה: 4 ng/ml |
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה
בקש הרשאה