מדידות נכונות חדרית סיסטולי לחץ בשילוב עם קציר של ריאה ודגימות רקמה חיסוניות בעכברים

סיכום

פרוטוקול ספציפי ומהיר במקביל לחקירת פונקציה נכונה לב, דלקת ריאות, והתגובה החיסונית מתואר ככלי למידה. וידאו ודמויות מתארים פיזיולוגיה וטכניקות microdissection בצוות גישה מאורגנת שניתנת להתאמה לשימוש לקטן למחקרים בגודל גדולים.

תקציר

תפקוד הלב הנכון הוא להזרים דם דרך הריאות, ובכך מקשר פיזיולוגית לב ימנית ופיזיולוגיה של כלי דם ריאתי. דלקת היא צירוף שכיח של תפקוד לב וריאות, על ידי חדירה לפרט סלולרית, ייצור ציטוקינים וגורמי גדילה, ועל ידי ייזום תהליכי שיפוץ ^1.

בהשוואה לחדר השמאלי, חדר ימין הוא משאבה בלחץ נמוך הפועלת באזור צר יחסי של שינויים בלחץ. לחצי עורק ריאה מוגברת קשורים ללחץ מוגבר במיטת כלי דם הריאה ויתר לחץ דם ריאתי ^2. יתר לחץ דם ריאה קשור לעתים קרובות עם מחלות דלקתיות ריאה, למשל מחלת ריאות חסימתית כרונית, או מחלות אוטואימוניות ^3. בגלל יתר לחץ דם ריאה מעניק פרוגנוזה גרועה לאיכות חיים ותוחלת חיים, הרבה מחקר מכוון להבנת המנגנונים שהמיגHT להיות מטרות להתערבות ⁴ תרופות. האתגר העיקרי לפיתוח של כלים לניהול יעילים עבור יתר לחץ דם ריאתי נשאר את המורכבות של ההבנה סימולטנית של שינויים מולקולריים ותאיים בלב הימני, ריאות ולמערכת החיסונית.

כאן, אנו מציגים את זרימת פרוצדורליים למדידה המהירה ומדויקת של שינויים בלחץ בלב הימני של עכברים וקציר סימולטני של דגימות מלב, ריאות ורקמות חיסוניות. השיטה מבוססת על הצנתור הישיר של חדר ממני דרך וריד הצוואר בעכברים קרובים חזה, פותח לראשונה בסוף 1990 כמדד חלופי של לחצים בעורק הריאה ^5-13. צוות הגישה המאורגנת מאפשרת טכניקת צנתור מהירה מאוד נכונה לב. זה מאפשר לבצע את המדידות בעכברים כי באופן ספונטני לנשום אוויר חדר. הארגון של זרימת העבודה באזורי עבודה שונים-מפחית את השהיית זמן ופותח את האפשרות במקביל לביצוע ניסויי פיזיולוגיה וקציר רקמות חיסוניים, לב וריאות.

זרימת פרוצדורליים המתוארים כאן ניתן להתאים למגוון רחב של הגדרות במעבדה ועיצובי לימוד, מניסויים קטנים וממוקדים, למבחני מיון תרופות גדולים. הרכישה סימולטני של נתוני פיזיולוגית לב כי ניתן להרחיב לכלול אקו ^5,14-17 וקציר של רקמות לב, ריאה וחיסון מפחיתה את מספר בעלי החיים הדרושים כדי להשיג נתונים שנעים בבסיס הידע המדעי קדימה. זרימת פרוצדורליים מוצגת כאן גם מספקת בסיס אידיאלי לרכישת ידע מהרשתות שהקישור, ריאות חיסוניות ותפקוד לב. את אותם עקרונות שהתוו כאן ניתן להתאים ללמוד איברים אחרים או נוספים במידת צורך.

פרוטוקול

1. הכנה

1. הכן את הפתרונים הבאים ואבובים (לוח 1), כדלקמן:
   1. הנקס פתרון, לא סידן, מגנזיום או חיווי עם פניצילין (100 U / ml) / סטרפטומיצין (100 מ"ג / מ"ל).
   2. נאגר מלוח פוספט (PBS), 1x, לא סידן, לא מגנזיום.
   3. אתנול, 70%, להפוך את 500 מ"ל.
   4. Buffered פורמלדהיד, 7-10% עם PBS, להפוך את 500 מ"ל.

תוצאות

התוצאה העיקרית להשגת עקומות לחץ לב ימניות מושגת על ידי המיקום הנכון של צנתר הלב הימני. הצורה של העקומות בזמן לחץ היא קריטית, כי המיקום הנכון של הצנתר בתוך של חדר ממני יגרום מישורי לחץ (איור 4). קימורים מחודדים, במקום, מצביעים קטטר שמועבר על ידי הנשימה או תנועת פעימות לב לקיר של חדר ממני. כדי לזהות בעיות פוטנציאליות עם שלב ההישרדות של בעלי החיים, סטיית ההתקן של ΔP, וקצב הלב צריכה להיות מחושבות. שני הערכים צפויים להיות לא שונה משמעותי בין קבוצות טיפול. יתר על כן, הצ.......

דיון

הזרימה הניסויית המתוארת כאן מאפשרת מדידה מהירה וסימולטני של לחץ הנכון חדרית סיסטולי וקציר של דגימות לניתוח התשובות בריאות, לב והמערכת החיסונית בעכברים. ההליך משלב מדידות לב פיזיולוגיה, מייקרו נתיחה וקציר רקמה הבאה ללימודים חיים תא, ניתוח היסטולוגית או omics-ניתוח של הרקמות. ההליך המלא לוקח פחות מ 20 דקות לכל עכבר. בגלל זרימת עבודת שטח המאורגן, 2-3 חיות ניתן ללמוד בו זמנית. לפיכך, ההליך מתאים לניסויים קטנים וממוקדים ¹² ומסכים בקנה מידה גדולים שבוצעו במגוון רחב של הגדרות,.......

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
שם	חברה	מספר קטלוגים	תגובות (אופציונלי)
			ריאגנטים
2-מהתיל-2-butanol	סיגמה אולדריץ	152463
2,2,2-Tribromoethanol	סיגמה אולדריץ	T48402
סבון חיטוי (כיסוי תרסיס חפת בתוספת Steris)	הפישר סיינטיפיק	1629-08
אתיל אלכוהול, 200 גהה, מוחלטת, נטולת מים ACS כיתה / USP	PHARMCO-AAPER	111000200	לדלל עד 70% במים מזוקקים
פתרון פורמלדהיד	סיגמה אולדריץ	F1635-500 מ"ל	מדולל ל7-10% פורםריכוז ldehyde בריכוז של PBS 1x באמצעות פתרון PBS מניות ומים
הנקס פתרון, לא סידן, מגנזיום	הפישר סיינטיפיק	21-022-CV
אוקטובר	רקמה-Tek	4583
פניצילין (10000 U / ml) / סטרפטומיצין (10,000 מ"ג / מ"ל) פתרון	Thermo Scientific	SV30010
נאגר מלוח פוספט (PBS), לא סידן, לא מגנזיום, פתרונות ו10x 1x	הפישר סיינטיפיק
26% נתרן פנטוברביטל	לבריאות בעלי חי דודג' פורט	NDC 0856-0471-01
			Labware
צלחות 12, 24, 96 גם	בז
Pipet העברה	הפישר סיינטיפיק	13-711-9BM
צינור, מצופה EDTA	Sarstedt	2013-08
0.65 מיליליטר צינורות צנטריפוגה ומייקרו 1.7 מ"ל	VWR
12 פוליפרופילן המ"מ x 75 צינורות	הפישר סיינטיפיק	14-956-1D
צינורות, גדלים שונים, פוליפרופילן	הפישר סיינטיפיק
			מכשירים
מלקחיים, Dumon # 5 פיין	כלי מדע פיין	11254-20
מלקחיים, טיפים גרפו-0.5mm קנס נוספים מעוקלים	כלי מדע פיין	11152-10
המלקחיים, נוסף Fine-גרף 0.5mm טיפים ישרים	כלי מדע פיין	11150-10
צינורית 18ga, 19 ga	BD	מחטי Precision Glide	לחתוך לאורך אופטימלי, קהה ומחוץ צרם כדי ליצור משטח מחוספס מבחוץ
מספריים, להבי מספריים מבתרים-Slim 9cm	כלי מדע פיין	14081-09
תפר לBAL, תפר משי קלוע, 4-0	כלי מדע פיין	SP116
תפר לצנתור לב ימני, תפר משי קלוע, 6-0	Teleflex רפואי	18020-60
מזרק, 1 מ"ל	BD	309659
			ציוד
מגבר, PowerLab 4/30	ADInstrument	דגם ML866
קטטר, לחץ F1.4	מילר מכשירים, Inc	840-6719
ביתור מיקרוסקופ	Variscope
מלקחיים, להבי מספרי Vannas האביב-2 מ"מ	כלי מדע פיין	15000-00
הלוגן מואר מגדלת קבלה	הפישר סיינטיפיק	11-990-56
מחשב נייד	Asus	מספר דגם מעבד i5 A52F; 15 אינץ
מקור אור	Amscope	HL-250
יחידת בקרת לחץ	מילר מכשירים, Inc	PCU-2000
תוכנה, Labchart-Pro V.7	ספירה בstruments