הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

בדיקת מאמץ לב הנגרמת על ידי Dobutamine ופיקוח על ידי צנתור בעכברים

17.7K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/50050

⸱

10 בפברואר 2013

 ,  , 
1Instituto de Ciencias, Facultad de Medicina, Clínica Alemana Universidad del Desarrollo

במאמר זה

סיכום

אנו מתארים את הפרוטוקול לביצוע מבחן מאמץ לב הנגרם על ידי dobutamine ופיקוח על ידי צנתור בעכברים נורמלים. כמו כן אנו מציגים יישומה לחשוף מחלת לב תת קלינית בעכברים שמנים גבוהים דיאטה מושרה שמנים.

תקציר

Dobutamine הוא אגוניסט β-adrenergic עם זיקה גבוהה יותר לרצפטור בטא בלב (β 1) מאשר לקולטניים בטא בעורקים (β 2). כאשר באופן מערכתי, זה מגדיל את הביקוש של לב. לפיכך, dobutamine חושף קצב נורמלי או אזורים איסכמיים בסיכון פוטנציאלי לאוטם.

ניטור של תפקוד לב במהלך בדיקת מאמץ לב יכול להתבצע על ידי שתי ecocardiography או צנתור. האחרון הוא טכניקה פולשנית אבל יותר מדויקת ואינפורמטיבי שלשעבר.

בדיקת מאמץ לב הנגרם על ידי dobutamine ופיקוח על ידי הצנתור נעשה כמתואר כאן מאפשרת, בניסוי אחד, המדידה של פרמטרי hemodynamic הבאים: קצב לב (HR), לחץ הסיסטולי, לחץ הדיאסטולי, לחץ סוף דיאסטולי, לחץ חיובי מקסימאלי הפיתוח (DP / dtmax) ולחץ שלילי מקסימאלייור פיתוח (DP / DT דקות), בתנאים בסיסיים ותחת הגדלת מינון של dobutamine.

כצפוי, בעכברים נורמלים שנצפינו עלייה קשור למינון dobutamine במשאבי אנוש, DP / DT ומקסימום DP / DT דקות. יתר על כן, במינון הגבוה ביותר נבדק (12 ng / g / דקות) decompensation הלב של עכברים שמנים גבוהים דיאטה מושרה שמנים נחשף.

פרוטוקול

פרוטוקול אושר על ידי ועדת האתיקה של Facultad דה Medicina Clinica Alemana-Universidad del Desarrollo.

I. הכנת עירוי Dobutamine

  1. להמס 10 מ"ג של dobutamine ב20 מ"ל של מי distillated סטרילי, על מנת לקבל פתרון מניות של 500 מיקרוגרם / המ"ל dobutamine. Aliquot ולאחסן ב -20 ° C. פתרון זה יכול לשמש לפחות במשך 3 חודשים.
  2. הפשר aliquot של פתרון המניות dobutamine בטמפרטורת חדר.
  3. לדלל פתרון המנייה dobutamine בסטרילי 0.9% NaCl, על מנת לקבל פתרון dobutamine עבודה, שהריכוז מחושב באמצעות נוסחה: dobutamine (מיקרוגרם / מ"ל) = משקל הגוף x 0.2.
  4. מלא מזרק 1 מ"ל 29Gx1 / 2 "עם פתרון עובד dobutamine.
  5. הכנס את המחט של המזרק לתוך 20 סנטימטרי צינור PE-10.
  6. התאם את המזרק במשאבת העירוי בעקבות הוראות יצרן.
  7. הגדר את עירוי הרמפה בצעדלצעד פורמט עם גידול של 10 μl / דקה לכל שלב, ל6 שלבים.

השני. הכנת חיישן לחץ

  1. כדי למזער את סחיפת אות, חיישן לחץ להציף במים סטריליים על 37 מעלות צלזיוס במשך לפחות 15 דקות. אל תשרה את הקטטר יותר מ 0.5 סנטימטר העמוק, כדי למנוע שלחץ ההידרוסטטי משפיע חיישן לחץ.
  2. אופן אלקטרוני לכייל את חיישן לחץ בגיל 25 ו 100 מ"מ כספי. חשמל קלט (וולט) מומר לאות לחץ (מ"מ כספי).
  3. הגדר את קצב הדגימה של 2 k / s ולהשתמש במסנן הנמוך לעבור עם נחתך ב 100 הרץ. הגדרת אות לחץ לאפס מ"מ כספי.
  4. סמן 15 מ"מ מקצה הצנתר. רחוק כדי להגיע ללב מנקודת המבוא הוערך על ידי אקו, זיהוי הנוכחות של קטטר לתוך ventricule השמאל.

ג. הכנת עכבר לצנתור

  1. המשקל C57BL / 6 עכברי זכרים, 30-32 שבוע ישן.
  2. מזריק קטמין intraperitoneally 60 מיקרוגרם / ק"ג ו 4 ק"ג / 1 ק"ג xylazine. הערה: הרדמה אחרת עשויה לשמש, למשל: 350-450 מיקרוגרם / קילו Avertin, 50 מיקרוגרם / קילו פנטוברביטל או 1.5 - 2% 2-3 isoflurane.
  3. שבי הצוואר עם מכונת גילוח.
  4. הנח את העכבר מורדם במצב שכיבה על צלחת חימום איזוטרמי מחוממת. לאבטח את גפיו בנייר דבק.
  5. בצע קמצוץ בוהן כדי לאשר הרגעה מוחלטת.
  6. הכנס בעדינות בפי טבעת כדי לפקח על טמפרטורת גוף. באמצעות בדיקת vaselinized מומלץ.
  7. אם טמפרטורת גוף שונה מ37 ° C ± 0.5 ° C, להתאים אותו באמצעות צלחת החימום.
  8. שים את חוטם עכבר ליד אספקת החמצן.
  9. הנח את העכבר באזור הצוואר מתחת stereomicroscope.

IV. רכישת נתונים

  1. ב7 תוכנת LabChartPro, בחר ערוץ אחד לרישום לחץ וערוץ אחד לקצב לב (HR)רישום. באפשרות השנייה, בחר באפשרות "מדידות מחזוריות" ומדידת הגדרה כשיעור.
  2. לערוץ הלחץ להגדיר את הטווח בהיקף: 0-150 מ"מ הכספי.
  3. לHR ערוץ מוגדר טווח בהיקף: 200-600 פעימות לדקה.
  4. לחץ על מקש כדי להתחיל בהרשמה.
  5. הכנס הערות המצביעות על הליכים שבוצעו, לדוגמה: ממשל הרדמה, להתחיל בעירוי dobutamine, ריכוז dobutamine, נושם שינויים.

צנתור לב 4,5 V.

  1. מבצע חתך קטן בצד הימין ליד הלסת. עם מספריים להפריד את רקמת חיבור של עור שהרירי.
  2. לבצע נתיחת אורכית (1.5-2 סנטימטר) בצד ימין של קנה הנשימה. הפרד את הרקמה, שומן ושריר חיבור עם מלקחיים מעוקלים, במטרה לחשוף את העורק הראשי ממש ליד קנה הנשימה.
  3. הנח הרחבה בצד ימין החיה לחשוף את העורק הראשי. Pulsatileלחץ שנוצר על ידי הלב מאפשר זיהוי של העורק. וריד הצוואר, שהוא אדום כהה, הוא בצד ימין.
  4. הפרד את העורק מרקמות סמוכות עם מלקחיים מעוקלים. העצב התועה, אשר דומה בחוט לבן, שוכן לאורך העורק.
  5. לחתוך חתיכת 20 סנטימטר של חוט 6/0 משי ו" כפול "אותו.
  6. מעביר את החוט "הכפול" מתחת לעורק משמאל לימין. חותך את החוט, כדי להשיג מטרות נפרדות.
  7. עובר חוט שלישי (10 סנטימטרים) מתחת לעורק.
  8. לקשור קשר הדוק בנושא מיקומו קרוב לראש, ואחד רופף בחוט הדיסטלי יותר.
  9. לקשור קשר רופף בחוט באמצע, ולתקן את הקצה הימני של החוט האמצעי לכרית החימום עם נייר דבק.
  10. שמור על העורק ראשי לח על ידי הטלת סטרילי 0.9% NaCl. להתנגב עודף של נוזל עם ניצני כותנה.
  11. למתוח את החוט התחתון עם מהדק מלקחיים.
  12. לתקן את המיקום של מספרי מלקחיים על ידי pהתקדם לעור של הבטן, מתיחת החוט העליון, על מנת לחסום את זרימת דם. ודא שרקמת חיבור סביב העורק הוסרה. העורק צריך להיות מלא בדם ונטול דופק. למנוע אשכולות מלייצר כוח מומנט בעורק.
  13. הפוך סעיף ניק צלב קרוב לתחתית של העורק עם מייקרו מספרי Vannas. טיפי דם תישפכנה.
  14. הכנס את הצנתר לתוך העורק הראשי. הקפד להכניס את חיישן לחץ כולו. ודא שאין איבוד דם.
  15. עדינות להתאים את קשר החוט באמצע, כדי להחזיק את הצנתר במקום. לא לדחוס יותר מדי, חיישן הלחץ הוא מאוד שביר.
  16. שחרר את מספרי מלקחיים מבטן בעל החיים.
  17. החזק את הקטטר עם היד ולדחוף את החוט באמצע, על מנת להימנע מאיבוד דם. הערה: עורק צריך להיות מלא בדם.
  18. התחל אותות לחץ הקלטה.
  19. כאשר הצנתר הוא בפנים,אות לחץ דם משתנית 60-70 ל100-120 מ"מ כספי. הצורה של אות הלחץ מוצגת בביאור 1.A. איור: אם אתם מעוניינים ב, בנקודת זמן זו אתה יכול להקליט את לחץ דם אם האות היא יציבה במשך לפחות 5 דקות. ערכי HR התקבלו מגל הלחץ שוקל הפסקה של 30 שניות של אות שיא. ניתן להשתמש בשיטת א.ק.ג. גם למדידה ישירה של קצב לב, בהתאם למטרות החקירה.
  20. דחף בעדינות את הצנתר להבחין בשינוי בצורה של אות לחץ (איור 1.B). ברגע שהצנתר נמצא בחדר השמאלי, אות הלחץ נעה בין 0 ל 100-120 מ"מ כספי. אם קשה לחלק את הצנתר, לצבוט חזה חיה בשתי אצבעות.
  21. רציפות לשלוט בקצב נשימה, טמפרטורת גוף, רמת הרדמה ואות לחץ. כל אחד מהם צריך להישאר יציב.

VI. עירוי של Dobutamine

  1. לcannulation וריד צוואר להיות בטוח לקלף רקמת השומן מסביב לווריד, כדי למנוע הניקוב שלו. ההליך כירורגי לחסימת וריד דומה להליך שמוצג לעורק ראשי.
  2. להציג PE-10 צינור לווריד. אשר שזרימת הדם אינו חסום נע בוכנת המזרק אחורה.
  3. עירוי Dobutamine מתחיל עם 10 μl / דקות וסיים עם 60 μl / דקה. בכל צעד, קצב העירוי נשמר במשך 2 דקות 6.
  4. לאחר המנה האחרונה dobutamine, להרדימו עם מנת יתר של חומרי הרדמה.

VII. ניתוח נתונים

  1. לניתוח נתונים, בחר את הקטע של המידע המוקלט של העניין שלך. הקפד לשקול מרווח זמן שבו אות לחץ היא יציבה.
  2. בחר בסמל ההגדרה במודול לחץ הדם. לציין את הסוג הנבחר של אות לחץ.
  3. באופן אוטומטי את תוכנת 7 מציג LabChartPro כלומר, לכל היותרוערכי מינימום למשאבי אנוש, לחץ הסיסטולי (P מקסימום), יתר לחץ דם הדיאסטולי (p דקות), לחץ סוף דיאסטולי (אמ"ר), פיתוח לחץ חיובי מקסימאלי (DP / dtmax) והתפתחות לחץ שלילית מקסימלי (DP / DT דקות). בנוסף, פרמטרים לבביים יכולים להיות מתוארים על עקבות לחץ.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

אות לחץ הדם מוגדרת על ידי הסיסטולי ולחץ הדיאסטולי. כאשר חיישן הלחץ נמצא בחדר השמאלי, הלחץ שלה (LVP) גל מאופיין בירידה לאפס של לחץ הדיאסטולי ואת המראה של התכווצות הפרוזדורים השמאלית לפני התכווצות חדר לב (איור 1). במצב בסיסי, עכברים נורמלים מורדמים קטמין-xylazine היה HR של 280 ± 24, P מקסימום של 107 ± 8, P דקות של 5 ± 1, בושם של 14 ± 2, DP / DT המקסימאלי של 6081 ± 365 ו DP / DT דקות של 5230 ± 526.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

בדיקת מאמץ לב הנגרמת על ידי dobutamine ופיקוח על ידי צנתור היא מייגעת. עם זאת, בעקבות הפרוטוקול כאן לתאר ועם זמן קצר של אימונים, אפשר להעריך שישה פרמטרי hemodynamic בניסוי אחד שעבר כשעה.

השלבים הקריטיים של הפרוטוקול כאן מוצג הם cannulations של כלי דם. לגבי cannulation של עורק תרדמה, החתך מבוצע צריך להיות עמוק מספיק כדי לשבור את השלוש שכבות רקמה של העורק, וגדולות מספיק כדי לאפשר המעבר של קטטר. לגבי cannulation של ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

אין ניגודי האינטרסים הכריזו.

תודות

אנו מודים לד"ר הליו סלגאדו, הרנטה Lataro ומאורו דה אוליביירה, בית הספר לרפואה של Ribeirao Preto, אוניברסיטת סאו פאולו ובן ד"ר ג'נסן, לב וכלי דם מכון המחקר מאסטריכט, מאסטריכט האוניברסיטה, לסיוע נדיב במהלך תהליך ההתקנה.

עבודה זו נתמכה על ידי מענק FONDECYT N ° 11090114 לSDC

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
ריאגנטים
PE-50/10 וורנר מכשירים 64-0752
חוט משי 6/0 HR17 Tagum SN0713K
Xylacin 20 מ"ג / מ"ל Centrovet Laboratorio
קטמין 100 מ"ג / מ"ל גרירת פארמה
נתרן כלורי 0.9% מעבדת סנדרסון SA
hydrochloride Dobutamine סיגמה אולדריץ D0676
מזרק אינסולין U-100 29G x ½ " Terumo רפואי ושות
מלקחיים לנתח סגנון סנטימטרי מייקר 11.5 7 לוטוןMedizintechnik 09-0959
גרף מלקחי CVD 0.7mm 7 סנטימטר הווטו Medizintechnik 62-0263
מלחציים Str Dieffenbach בולדוג Cl 38 מ"מ הווטו Medizintechnik 60-010
מספרי Vannas 8 סנטימטרים Str FH הווטו Medizintechnik 63-1400
ציוד
SPR-671 קטטר לחץ Mikro-עצה מילר מכשירים 840-6719
PCU-2000 יחידת בקרת לחץ מילר מכשירים 880-0129
PowerLab 4/30 ADinstruments Pty בע"מ ML866
7 LabChartPro ADinstruments Pty בע"מ MLU260 / 7
משאבת העירוי Legato200 KdScientific KD-KDS210P
בקר טמפרטורת TCAT-2LV וצלחת החימום איזוטרמי PhysiTemp המכשירים בע"מ
אספקת חמצן רפואית Indura
בדיקה רקטלית ADinstruments Pty בע"מ MLT1404
מיקרוסקופ Trinocular, תאורה צירית LW מדעי Z2B-TRI-ETNE, ILP-1502-LTS1, ILP-1502-DGGF

מקורות

  1. Hart, C. Y., Burnett, J. C., Redfield, M. M. Effects of avertin versus xylazine-ketamine anesthesia on cardiac function in normal mice. Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 281, H1938-H1945 (2001).
  2. Janssen, B. J., et al. Effects of anesthetics on systemic hemodynamics in mice. Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 287, H1618-H1624 (2004).
  3. Lorenz, J. N. A practical guide to evaluating cardiovascular, renal, and pulmonary function in mice. Am. J. Physiol. Regul. Integr. Comp. Physiol. 282, R1565-R1582 (2002).
  4. Lorenz, J. N., Robbins, J. Measurement of intraventricular pressure and cardiac performance in the intact closed-chest anesthetized mouse. Am. J. Physiol. 272, H1137-H1146 (1997).
  5. Nemoto, S., DeFreitas, G., Carabello, B. A. Cardiac catheterization technique in a closed-chest murine model. Contemp. Top. Lab Anim. Sci. 42, 34-38 (2003).
  6. Daniels, A., et al. Impaired cardiac functional reserve in type 2 diabetic db/db mice is associated with metabolic, but not structural, remodelling. Acta Physiol. (Oxf). 200, 11-22 (2010).
  7. De Celle, T., et al. Long-term structural and functional consequences of cardiac ischaemia-reperfusion injury in vivo in mice. Exp. Physiol. 89, 605-615 (2004).
  8. Huntgeburth, M., et al. Transforming growth factor beta oppositely regulates the hypertrophic and contractile response to beta-adrenergic stimulation in the heart. PLoS One. 6, e26628(2011).
  9. Reddy, A. K., et al. Cardiac function in young and old Little mice. J. Gerontol. A. Biol. Sci. Med. Sci. 62, 1319-1325 (2007).
  10. Christoffersen, C., et al. Cardiac lipid accumulation associated with diastolic dysfunction in obese mice. Endocrinology. 144, 3483-3490 (2003).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

עירוי דוּבּוּטַמיןפרמטרים המודינמייםלחץ חדר שמאליאות לחץ עורקיתזונה עשירה בשומןעכברים obeseכיול חיישן לחץקניולציה של הוורידH jugularis
בדיקת מאמץ לב הנגרמת על ידי Dobutamine ופיקוח על ידי צנתור בעכברים
צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.