מאמר שיטה

וגם בידוד Immunostaining ימפוציטים ותאי דנדריטים מהתיקונים של Peyer Murine

DOI:

10.3791/50167

⸱

17 במרץ 2013

 ,  , 
1Division of Infectious Diseases, New York State Department of Health

במאמר זה

סיכום

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

יש התעניינות הולכת וגובר בהבנת הפונקציות החיסוניות של אוכלוסיות מסוימות של תאים בתיקונים של Peyer (PPS), אתרים אינדוקטיביים העיקריים של רקמות הלימפה מעיים כרוכות בכך. כאן אנו מתארים פרוטוקולים מקבילים להכנת PP הכנות תא בודדות לניתוח cytometric זרימה וcryosections PP לimmunostaining.

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

הטלאים של Peyer (PPS) הם רכיבים בלתי נפרדים מרקמות הלימפה מעיים הקשורים (גאלט) ולשחק תפקיד מרכזי בimmunosurveillance והומאוסטזיס מעיים. אנטיגנים חלקיקים וחיידקים בחלל המעי נדגמים ברציפות על ידי תאי PP ז אפיתל זקיק המשויך (Fae) והועברו לרשת בסיסית של תאים דנדריטים (DCS), מקרופאגים ולימפוציטים. במאמר זה, אנו מתארים פרוטוקולים בי PPS Murine הם (אני) ניתק להשעיות תא בודדות ונתון לcytometry הזרימה (ii) שהוכן עבור cryosectioning וimmunostaining. עבור cytometry זרימה, PPS הם מכאני ניתק ולאחר מכן מסונן דרך 70 מיקרומטר ממברנות ליצור השעיות תא בודדות ללא תאי אפיתל ופסולת גדולים. החל עם 20-25 PPS (מארבעה עכברים), שיטה מהירה ולשעתק זו מניבה אוכלוסייה> 2.5 x 10 6 תאים עם> 90% כדאיויות תא. לcryosectioning, טריPPS ly המבודד שקוע בטמפרטורה בינונית אופטימלי חיתוך (אוקטובר), Snap-קפוא בחנקן נוזלי, ולאחר מכן נותח באמצעות cryomicrotome. קטעי רקמה (5-12 מיקרומטר) הם אוויר יבשים, קבועים עם אצטון או מתנול, ולאחר מכן נתונים לimmunolabeling.

מבוא

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

הטלאים של Peyer (PPS) הם אגרגטים מאקרוסקופיות של זקיקי הלימפה מאורגנים נוכחיים לאורך המעי הדק של בני אדם ועכברים (איור 1), ומהווים את האתרים העיקריים שבו תגובה חיסונית ברירית הם יזמו נגד אנטיגנים תזונתיים, חיידקי commensal, פתוגנים של חיידקים, וחיסונים דרך פה 1-4. בניגוד לרקמות הלימפה היקפיות אחרות כגון הבלוטות הלימפה mesenteric, PPS חסר lymphatics הביא. כאמורות, תגובות חיסוניות בהסתגלות PPS מונעות בתגובה לאנטיגנים הנגזרים מלומן המעי. הדגימה של אנטיגנים luminal מושגת על ידי האפיתל זקיק המשויך (Fae), אשר מורכב משני enterocytes ותאי אנטיגן דגימה הידועים כתאי M. מתחת Fae, באזור הכיפה תת אפיתל (SED), נמצאת רשת של תאים דנדריטים (DCS) מתערבים עם מקרופאגים, תאי B, ותאי T מסוג CD4 + 5-9. במרכזו של כל אחד follicl ימפואידית PPדואר הם תאי דנדריטים זקיקים (FDCs) ומרכז התא B עשיר מרכזי נבטי, מוקף באזורים עשירים בinterfollicular תא T. דגימת האנטיגן ע"י תוצאות PPS בפיתוח + plasmablasts IgA B הסלולרי ותאי CD4 + מפעיל וזיכרון שזרע propria lamina הסביבה ולספק חסינות למגוון רחב לפולשים ריריים.

לנתח את האירועים החיסוניים המורכבים הקשורים לאנטיגן דגימה, עיבוד, והצגה בPPS הוא משימה מרתיעה, בהתחשב בעובדה שתאי PP מהווים רק חלק זעיר מכלל תאי הלימפה ברירית מעי. כדי לסייע באפיון במבחנה של תאים בסביבה זו, אנו מספקים פרוטוקול להכנה כלל תאי PP עכבר לזרימת ניתוח cytometric ופונקציונלי, כמו גם פרוטוקול להכנת PP cryosections למיקרוסקופיה וimmunohistology immunofluorescence. הפרוטוקול שלנו לבידוד, אפיון, וimmunostaining של mousדואר תאי PP הוא לא רומן כשלעצמה, כפי שמעיד עובדה שיש אזכורים רבים שראשיתה יותר מ 25 שנים המצטטים את הטכניקות הללו 5,6,9-11. במקום זאת, הפרוטוקול שלנו מספק שיטה יעילה (ויזואלי) לחוקרי איסוף PPS בפעם הראשונה. את הטכניקות שבם הן שולט בקלות וללא קושי תנבנה מספר גדול של תאים עם> 90% כדאיויות תא. פרוטוקול cryosectioning מניב חלקים סדרתיים לשעתקו מאוד אידיאלי המתאימים מכתימה immunofluorescence והדמית confocal. יתר על כן, הפרוטוקול שלנו משלים את שני מאמרים יופיטר אחרונים אחרים. הראשון, על ידי פוקודה ועמיתיו, מתאר את השימוש במבחני הלולאה ileal גבעול להעריך את הספיגה של חיידקים פתוגניים על ידי תאי PP M 12. השני, על ידי Geem ועמיתיו, מתאר את הבידוד והאפיון של DCS ומקרופגים מרירית מעי העכבר, אך אינו כולל באופן מפורש PPS מהניתוח שלהם 13.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

בעלי חיים שוכנו בתנאים קונבנציונליים, ספציפיים לפתוגן חופשיים וטופלו בהתאמה מלאה לטיפולו של מרכז Wadsworth המוסדי בעלי החיים ושימוש הנחיות ועדה (IACUC).

1. Gavage האוראלי

  1. (אופציונלי) עומס Gavage עכבר של בחירה עם אנטיגן חיידקים או מריבית באמצעות 22 G-x1.5 ב. מחט האכלה בוטה קצה (פופר המדעי, ניו הייד הפרק, ניו יורק). כרכי משלוח לא יעלו על 400 μl לעכבר.

2. בידוד של תאי PP עבור cytometry זרימה

  1. להרדים עכברים על ידי 2 CO חנק, על פי טיפול בבעלי חיים מוסדיים ושימוש בהנחיות ועדה (IACUC).
  2. לטהר את הבטן עם אתנול 70% או פולידין לפני הניתוח. בצע laparotomy סטנדרטי שכרוך אחת חתך (סנטימטר 1) באמצעות מספרי כירורגיות כיתה לאורך קו אמצע ההתחלה על 1.5 סנטימטרים מהבסיס של כלוב הצלעות. לחשוף את כלחלל itoneal ולזהות cecum. גוזז מעי הדק מסוף בצומת ileal-cecal ועדינות להסיר את המעי בשלמותו. הקפד לא hyperextend רקמת המעי כפי שהוא מוצא מחלל הצפק.
  3. הנח את המעי הדק על מצע של מגבות נייר רטובות או Kimwipes. הרטב את המעי דק בעדינות עם מלח למניעת התייבשות רקמות. חזותי לזהות PPS הבודד הנמצא בצד אנטי mesenteric של המעי (איור 1). בדרך כלל, עכבר אחת יש 5-10 PPS הגלוי שמופצים באופן שווה מהתריסריון (פרוקסימלי) לאילאום (דיסטלי). בממוצע, עכברים 4 יניבו 23 PPS.
  4. בעזרת מספריים מעוגלים ניתוח, PPS הבודד עדינות בלו ולמקם אותם בתמיסת המלח המאוזנת של האנק הקר (HBSS). הערה, המספריים צריכים להיות ממוקמים עקומה כלפי מעלה מעל PP ואז בעדינות להחיל את הרקמות. הבלו רק PP (לא surrounding רקמות) והעברה לHBSS הקר.
    הערה: כל incubations וצעדי צנטריפוגה מנקודה זו והלאה בסעיף 2 שצריכים לעשות ב 4 ° C כדי לשמר כדאיויות תא.
  5. העברת PPS לבינוני 5 מיליליטר טחול דיסוציאציה ודגירה במשך 15-20 דקות על 37 מעלות צלזיוס בזמן נענע בחוזקה ב 250 סל"ד. זמן דגירה ארוכה יותר יהיה השפעה שלילית על כדאיויות תא.
  6. כדי להפיק השעית תא בודדה, PPS מקום במסננת סטרילי (autoclaved) 70 מיקרומטר ניילון רשת סלולרית ולטחון בכוח את הרקמה לרשת באמצעות הבסיס של בוכנה ממזרק 1 סמ"ק. לחלופין, PPS כריך בין שתי שקופיות זכוכית החלבית סטריליים מיקרוסקופ (autoclaved במעטפות) ולטחון בעדינות רקמות בתנועה קדימה ואחורה. השתמש פיפטה העברה סטרילי להעביר השעית התא לתוך צינור 5 מ"ל פלקון.
  7. הוסף EDTA לריכוז סופי של 1 מ"מ להשעית התא. דגירה על נדנדה ל5 דקות בטמפרטורת חדר.
  8. השעית תא למזוג דרך מסננת תא שנייה 70 מיקרומטר כדי להסיר אגרגטים סלולריים נותרים או פסולת רקמות. איסוף תאים בצינור 15 או 50 מיליליטר חרוטים.
  9. תאים כפופים לצנטריפוגה העדינה (5 דקות ב 500 XG). תאי supernatant ו resuspend למזוג בחיץ זרימה, שהוא נאגר מלוח פוספט (PBS) המכיל 1% עגל בסרום עוברי (FCS).
  10. כדי לקבוע את מספר תא וכדאיות, לדלל את התאים 1:10 לtrypan כחול וחזותי לבדוק תאים באמצעות מיקרוסקופ אור וhemocytometer. לחלופין, רוזנת דלפק תא (Invitrogen) או מכשיר דומה ניתן להשתמש כדי למנות מספרים סלולריים ואת הכדאיות באופן אוטומטי.
    החל עם 20-25 PPS, פרוטוקול זה אמור להניב> 2.5 x 10 6 תאים בסך הכל. זה משווה ל ~ 0.8-1.2 x 10 6 תאים לכל עכבר.

תיוג נוגדן של תאים לזרימת cytometry

<תחילת ol = "11">
  • לוותר תאים (10 5 לטובים) לתוך בארות של צלחת תחתונה 96-גם עגולה.
  • צלחת כפוף לצנטריפוגה העדינה (5 דקות ב1000 XG), וsupernatant מזוג ידי ההיפוך בעדינות את הצלחת.
  • Resuspend תאים במאגר בלוק Fc ולדגור על קרח במשך 15 דקות. אמנם יש מספר החוצצים לחסום FC הזמינים מסחרי (למשל חולדה אנטי עכבר CD16/CD32, BD Biosciences), אנחנו פשוט להשתמש במדיום בילה מעכברוש תא B היברידומה (ATCC 2.4.G2) שמפרישה 1 IgG חד שבטי כנגד עכברי Fcγ קולטנים לצעד זה.
  • צלחת כפוף לצנטריפוגה העדינה (5 דקות ב1000 XG) כאמורים לעיל, וsupernatant מזוג ידי ההיפוך בעדינות את הצלחת.
  • הוסף נוגדני fluorophore-מצומדות ישירות למתלים סלולריים בדילול רצוי, ולדגור על קרח למשך 30 דקות עם נדנדה רציפה.
  • צלחת כפוף לצנטריפוגה העדינה (5 דקות ב1000 XG), ומזוגsupernatant ידי ההיפוך בעדינות את הצלחת.
  • שטוף תאים עם 100 μl של חיץ זרימה.
  • צנטריפוגה צלחת ב1000 XG למשך 5 דקות, וsupernatant מזוג ידי ההיפוך בעדינות את הצלחת.
  • תאי resuspend חיץ 400 μl קיבעון, אשר מורכב מ300 μl של חיץ זרימה ו100 μl של paraformaldehyde 1% בPHEM חיץ (60 צינורות מ"מ, 25 מ"מ, HEPES 10 mM EGTA, 4 מ"מ MgCl 2 בשעה 6 pH).
  • תאי נושא לזרום cytometry באמצעות FACSCalibur או שווה ערך. נתח את התוצאות באמצעות גרסה הסלולרית Quest Pro תוכנת 5.2.

    • 3. הכנת Cryosections PP

    1. מראש של אוסף רקמות, להוסיף חיתוך טמפרטורה אופטימלי מתחם (אוקטובר) ל7x7x5 תבניות בסיס פלסטיק מ"מ. כמו כן להכין ברכה של חנקן נוזלי (מ"ל> 750) בדלי דיואר או קרח.
    2. להרדים את העכבר ולבצע laparotamy, כפי שתואר לעיל. הסרת מעי ומניח על מגבות נייר רטובות.
    3. אללבודד PPS לcyrosectioning, לחתוך קטעי 0.5 סנטימטר רוחביים של מעי דק המכילים PP אחת ורקמת העברה לצלחת פטרי המכילה PBS. לשטוף בעדינות לומן של מגזרים אלה עם PBS על מנת להסיר שאריות צואה לא רצוי.
    4. הנח קטעי רקמת מעי אנכי בתוך תבניות בסיס המכילות אוקטובר לטבול את התבניות בחנקן נוזלי ולאפשר לרקמה להקפיא לחלוטין (1-2 דק '). הצבע של אוקטובר ישתנה מברור ללבן כאשר הרקמה קפוא לחלוטין. . לקירור הדרגתי יותר (לדוגמה, כדי להפחית את הפיצוח של אוקטובר), עובש לטבול באמבט של isopentane המקורר עם אדי חנקן נוזליים שים לב: יש להרכיב משקפי בטיחות מתאימים בעת עבודה עם חנקן נוזלי.
    5. הסר תבניות בסיס קפואות מהחנקן הנוזלי באמצעות מלקחיים ולאפשר את התבנית לחמם בטמפרטורת חדר רק מספיק זמן (~ 10-15 שניות) כדי לאפשר את הקצוות של בלוק אוקטובר כדי לרכך. אז כדי להסיר את החסימה מקפואה של אוקטוברהעובש, היפוך העובש ולחץ בעדינות על הגב כדי להוציא את הגוש על פיסת 4 4 x סנטימטר נקיה של רדיד אלומיניום. מייד עוטף את הרקמה בנייר הכסף ומניח בשקית דגימה שכותרתו מאוחסן בחנקן נוזלי או בקרח יבש. לחלופין, להעביר את הרקמות במקפיא (<-20 ° C). השתמש ברקמות תוך שבוע, אחרת את אובניים יהפוך פריך.

    Cryosectioning

    1. Cryosection הרקמות באמצעות יקה CM3050S cryomicrotome או שווה ערך. טמפרטורת החדר בcryostat צריכה להיות מוגדרת -21 ° C.
    2. חתור לסעיפים 12-14 שמיקרומטר בעובי.
    3. איסוף חלקים על פישר SuperFrost שקופיות מיקרוסקופ זכוכית פלוס (או שווה ערך) ולבדוק חזותיים באמצעות מיקרוסקופ אור רגיל בעצמה נמוכה. אם חלקים מרובים עוברים נאספו בשקופית, לוודא שהם התקבצו יחדיו ליישומי מכתים במורד זרם.
    4. חנות לאהוא מחליק בטמפרטורת חדר ובשקופית תיבה, באופן אידיאלי, להשתמש בם בתוך ימים ספורים.

    תיוג נוגדן של Cryosections וניתוח מיקרוסקופיה confocal

    1. שקופיות לטבול באצטון (או מתנול) בצנצנת רקמות מכתימות או מדפים עבור 2 דקות. דגירה ממושכת עלולה לגרום לרקמות להתנתק מהשקופית.
    2. העברת שקופיות לצנצנת מכתימה חדשה ולשטוף 3 פעמים עם PBS-T (1X PBS עם 0.05% Tween-20) ל3 דקות כל אחד.
    3. להקיף את החלקים עם עט הידרופובי ImmEdge. זה יבטיח כי יישארו מרותקים ריאגנטים ונוגדנים לאזור זה במהלך incubations.
    4. דגירת שקופיות בחיץ בלוק (2% סרום עיזים בPBS) למשך 30 דקות ב 37 מעלות צלזיוס בתא humidified, מוגנות מפני אור.
    5. דגירת שקופיות עם חיץ בלוק Fc (ראה לעיל) למשך 10 דקות בשעת 37 ° C.
    6. טובל את השקופיות בPBS-T ואזור יבש סביב סעיפים באמצעות Kimwipes או רקמות סופגות אחרות.יש להיזהר שלא לגעת בחלקי הרקמה בפועל.
    7. סעיפי רקמות ריבוד עם פתרון עיקרי נוגדן ודגירה במשך 30 דקות על 37 מעלות צלזיוס בתא humidified. נוגדן ראשוני מדולל בדרך כלל במאגר הבלוק לריכוז סופי של 20 מיקרוגרם / מ"ל. השימוש בנוגדנים עיקריים שכותרת-ישירות רצוי, כי ניתן לשלב עד שלושה נוגדנים ישירות בשלב זה. נוגדנים שכותרת-ישירות גם לבטל את הצורך בצעדי דגירת נוגדנים נוספים.
    8. שטפים מחליקים 3 פעמים (5 דקות כל אחת) על ידי טבילה בPBS.
    9. אם, שקופיות אינקובטורים דרושות עם נוגדנים משניים רלוונטיים למשך 30 דקות ב 37 מעלות צלזיוס בתא לחות.
    10. שטפים מחליקים 3 פעמים (5 דקות כל אחת) על ידי טבילה בPBS.
    11. דגירת שקופיות במשך 4 דקות בparaformaldehyde 1% בחיץ PHEM, כפי שתוארו לעיל.
    12. יש לשטוף את שקופיות עם PBS לדקות 1.
    13. אזור יבש סביב סעיפים באמצעות Kimwipes או אחר לספוגרקמת אוזן גרון. יש להיזהר שלא לגעת בחלקי הרקמה בפועל. באמצעות פיפטה או טפטף, מניח בעדינות טיפה להאריך בינוני זהב הרכבה ישירות על הסעיף. החל coverslip זכוכית על ההרכבה הבינונית לטפל כדי למנוע בועות. השתמש בנייר סופג כדי לספוג כל מדיום הרכבה עודף.
    14. חותם coverslips לשקופיות מיקרוסקופ עם לק המסחרי ולאפשר לאוויר יבש.
    15. צפו בשקופיות עם ליקה TCS SP5 confocal מיקרוסקופ או שווה ערך.

    הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

    תוצאות

    $$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

    ניתוח cytometric זרימת השעיות monodisperse של תאי PP כלל מגלה הבחנה ברורה בין הכנות סלולריות טובות וגרועות. בהכנות סלולריות טובות עם מעל 80% כדאיות, הרוב המכריע של תאים להדגים פיזור גבוה קדימה (FSC), חיווי של נפח תא גבוה, ופיזור נמוך צד (SSC), חיווי של גרעיניות נמוכה של תאים (איור 2 א). בניסוי זה, אנחנו גם מוכנים מכוון "הכנת תא מסכנת" על ידי דוגרי תאי PP במהלך שלבי הבידוד בטמפרטורת חדר (במקום על קרח), ובשלב האחרון, דגירת תאים עם PBS בתוספת 1% FCS (במקום PHEM מאגר)...

    הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

    דיון

    $$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

    במאמר זה, אנו מספקים פרוטוקולים מקבילים להכנת PP הכנות תא בודדות לזרימת ניתוח וcryosections cytometric ופונקציונלי לimmunostaining. שני שיטות לשחזור ומאוד נגישים, ובלבד cytometer זרימה וcryostat זמינים. לחוקרים בפעם הראשונה אותו יש לציין כי בהשוואה לטחול, תשואות סלולריות הכוללות מPPS הן דלות יחסית. עם זאת, הפרוטוקול שמתארים בדרך כלל תשואות בין 0.8-1.2 10 6 תאי PP כלל x מעכבר אחת. סולם למעלה הוא אפשרי, למרות שאנחנו בדרך כלל לא יותר מ 20-25 ברכה PPS, משום שמניסיוננו, צביר...

    הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

    גילויים

    $$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

    אין ניגודי האינטרסים הכריזו.

    תודות

    $$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

    אנו מודים שיר Renjie (Core cytometry זרימת מרכז Wadsworth) לקבלת סיוע בניתוח תא והלן ג'ונסון (Wadsworth מרכז בעלי חי היסטופתולוגיה Core) להכנת קטעי פרפין. אנו מודים לד"ר ריצ'רד א קול (Core המיקרוסקופי אור מרכז Wadsworth) לקבלת סיוע במיקרוסקופיה confocal ואוסף תמונה. ברצוננו להודות אנדי נטלי (צילום Wadsworth מרכז ואיור) לקבלת סיוע עם אנימציות.

    MDJ נתמך על ידי קרן מחקר מדעי החיים, הווארד יוז רפואי במכון (HHMI) מלגה. SA נתמך על ידי מלגת Wadsworth מרכז-בריאות מחקר בע"מ הבתר ביצוע עצמית. עבודה זו נתמכה בחלקו על ידי מענקי NIH HD061916 וGM082978.

    הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

    חומרים

    352350

    רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
    שםחברהמספר קטלוגהערות
    פריט חברה חתול. # תגובות (אופציונלי)
    מתחם אוקטובר רקמה-Tek 4583
    7x7x5 תבניות בסיס מ"מ Fisherbrand 22-363-552
    ImmEdge עט מעבדות וקטור H-4000
    Superfrost פלוס שקופיות Thermo Scientific 4951
    אדג' Rite Blade Thermo Scientific 4280L
    אנטי עכבר CD11c-PE eBioscience 17-0114-82
    אנטי עכבר CD45R/B220-APC BD Pharmigen 553092
    Anti-CD3 מאוס-FITC BD Pharmigen 561798
    אנטי עכבר CD4-PE BD Pharmigen 553652
    אנטי עכבר CD8-PE BD Pharmigen 553032
    Anti-CD19 מאוס-PercP BioLegend 115531
    הפתרון של האנק המלח המאוזן (HBSS) בלי אדום פנול הפישר סיינטיפיק 14175-079
    מסננת תא 70 מיקרומטר BD פלקון
    בינוני דיסוציאציה טחול טכנולוגיות תאי גזע 7915
    סרום עיזים Invitrogen 16210-072
    Fc בלוק ATCC 2.4.G2 HB-197 מפקחים מתקבלים מ2.4.G2 שורת התאים
    מספריים מעוגלים FST 14061-09
    Cryostat ליקה 3050S
    FACS Calibur BD
    דלפק סלולרי רוזנת Invitrogen
    Hematoxylin ריצ'רד אלן 7211
    Eosin ריצ'רד אלן 71304
    פורמלין Starplex מדעי 3661

    טבלת 1. ריאגנטים וציוד המשמשים במחקר זה.

    מקורות

    $$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
    1. Mantis, N. J., Rol, N., Corthesy, B. Secretory IgA's complex roles in immunity and mucosal homeostasis in the gut. Mucosal. Immunol. 4, 603-611 (2011).
    2. Neutra, M., Mantis, N., Kraehenbuhl, J. P. Collaboration of epithelial cells with organized mucosal lymphoid tissue. Nature Immunology. 2, 1004-1009 (2001).
    3. Rescigno, M., Sabatino, A. D. i Dendritic cells in intestinal homeostasis and disease. J. Clin. Invest. 119, 2441-2450 (2009).
    4. Suzuki, K., Kawamoto, S., Maruya, M., Fagarasan, S. GALT: organization and dynamics leading to IgA synthesis. Adv. Immunol. 107, 153-185 (2010).
    5. Iwasaki, A., Kelsall, B. L. Localization of distinct Peyer's patch dendritic cell subsets and their recruitment by chemokines macrophage inflammatory protein (MIP)-3alpha, MIP-3beta, and secondary lymphoid organ chemokine. Journal of Experimental Medicine. 191, 1381-1394 (2000).
    6. Iwasaki, A. Mucosal dendritic cells. Annu. Rev. Immunol. 25, 381-418 (2007).
    7. Lelouard, H., Fallet, M., de Bovis, B., Meresse, S., Gorvel, J. P. Peyer's Patch Dendritic Cells Sample Antigens by Extending Dendrites Through M Cell-Specific Transcellular Pores. Gastroenterology. 42, 592-601 (2011).
    8. Lelouard, H., et al. Pathogenic bacteria and dead cells are internalized by a unique subset of Peyer's patch dendritic cells that express lysozyme. Gastroenterology. 138, 173-184 (2010).
    9. Shreedhar, V. K., Kelsall, B. L., Neutra, M. R. Cholera toxin induces migration of dendritic cells from the subepithelial dome region to T- and B-cell areas of Peyer's patches. Infect. Immun. 71, 504-509 (2003).
    10. Favre, L., Spertini, F., Corthesy, B. Secretory IgA possesses intrinsic modulatory properties stimulating mucosal and systemic immune responses. J. Immunol. 175, 2793-2800 (2005).
    11. Kelsall, B. L., Strober, W. Distinct populations of dendritic cells are present in the subepithelial dome and T cell regions of the murine Peyer's patch. J. Exp. Med. 183, 237-247 (1996).
    12. Fukuda, S., Hase, K., Ohno, H. Application of a Mouse Ligated Peyer's Patch Intestinal Loop Assay to Evaluate Bacterial Uptake by M cells. J. Vis. Exp. (58), e3225(2011).
    13. Geem, D., Medina-Contreras, O., Kim, W., Huang, C. S., Denning, T. L. Isolation and Characterization of Dendritic Cells and Macrophages from the Mouse Intestine. J. Vis. Exp. (63), e4040(2012).
    14. Lopez-Guerrero, D. V., et al. Rotavirus infection activates dendritic cells from Peyer's patches in adult mice. J. Virol. 84, 1856-1866 (2010).

    הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

    הדפסות חוזרות והרשאות

    בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

    בקש הרשאה

    תגיות

    Peyer Patches

    מאמרים קשורים