מאמר זה מתאר שיטת striaghforward ויעילה של intubating עכברים למדידת תפקוד הריאתי או החדרה ריאתי, שמאפשרת לעכברים להתאושש ולהיחקר בתקופות מאוחרות יותר. ההליך כרוך מקור אור סיב אופטי יקר שמאיר ישירות לקנה נשימה.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
במאמר זה
סיכום
תקציר
הליך פשוט לצנרר עכברים למדידת תפקוד ריאתי הייתי כמה יתרונות במחקרים ארוכי טווח עם מספרים מוגבלים או בעלי חיים יקרים. אחת הסיבות לכך שזה לא נעשה באופן שגרתי יותר הוא שזה קשה יחסית, למרות שקיים מספר מחקרים שפורסם שמתארים דרכים להשגתה. במאמר זה אנו מדגימים הליך שמבטל אחד המכשולים העיקריים הקשורים באינטובציה זה, כי מלדמיין את קנה הנשימה במשך כל הזמן של אינטובציה. הגישה משתמשת במקור אור סיב אופטי 0.5 מ"מ המשמש כintroducer לכוון את הצינורית לקנה נשימת אינטובציה העכבר. אנחנו מראים שאפשר להשתמש בהליך זה כדי למדוד מכניקת ריאות בעכברים בודדים לאורך מסלול זמן של לפחות מספר שבועות. הטכניקה יכולה להיות מוגדרת עם חשבון ומומחיות יחסית קטנים, וזה יכול להיות באופן שגרתי הושג עם הכשרה מועטת יחסית. זה צריך MAKדואר מאפשר לכל מעבדה לשגרה לבצע אינטובציה זו, ובכך לאפשר מחקרים ארוכים טווח בעכברים בודדים, ובכך לצמצם את מספר העכברים הנדרשים ולהגדיל את הכח הסטטיסטי באמצעות כל עכבר כשליטה שלו.
מבוא
בשנת 1999, בראון ואח'. פרסם מאמר המתאר שיטה לאינטובציה של ריאת 1 עכבר. כגון טכניקה יש תועלת רבה בתפקוד הריאתי עושה חוזר או שטיפת רונכואלוואולרית בעכברים בודדים במחקרים ארוכי טווח 2. מאז אותו המאמר מקורי, יש כבר כמה עיתונים אחרים שתארו גישות שונות לאינטובציה העכבר 3-9. בעוד כל השיטות האלה יכולות לשמש בהצלחה, הם בדרך כלל דורשים הכשרה או בעלות ניכרת. אחד הנושאים העיקריים עם אינטובציה כזו היא שככל שמתקרבת לגישות צינורית אינטובציה החדרה ממתינה קנה הנשימה, הצינורית עוצמה חוסמת את האור ולכן ההדמיה של בו הוא צריך ללכת. לפיכך, ההכנסה הופכת לעיוורת בזמן הקריטי ביותר. במאמר זה אנו מראים כיצד פשוט וזולים למיגור בעיה להדמיה זו, ובכך להבטיח אינטובציה המוצלחת עם אימונים או מועטים יחסיתניסיון.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
1. הכנה לנוהל
אחד צריך לקבל 1 ולהכין את הפריטים הבאים:
- קנולה. לאינטובציה של 20-35 עכברים גרמו, אנחנו משתמשים 1 אינץ או 1.5 ארוך, קטטר 20 המד הרביעי (BD Insylte, ניצוצות, MD או Jelco Optiva, קרלסבד, קליפורניה). קטטר סטרילי חדש יכול לשמש לכל עכבר, אבל גם צנתרים ניתן לעשות שימוש חוזר לאחר עיקור על ידי השרייה באתנול 70% בין הלילה. למרות שאף לא לוע קנה הנשימה של העכבר הוא נהלים סטריליים נאותים ניקיון, כולל שימוש בכפפות ומכשירים סטריליים, צריך להיות אחריו.
- כבל הסיב האופטי. אנו משתמשים ≈ 70 סנטימטר של כבל אופטי 0.5 מ"מ מאדמונד אופטיקה, אבל האורך הוא לא קריטי. חשוב לוודא סיבים יש מוחלק לקצה שלה, שכן לאחר חיתוך הכבל לאורך בתער, הקצה נשאר חד יחסית, וזה לא לוקח הרבה מאמץ כדי לחדור קיר של קנה הנשימה. עם זאת, זה אניקל מאוד להחליק קצה זאת על ידי לחיצה על סיבי 2 סנטימטר מקצה ואז עושה עיגולים קטנים לכמה שניות עם קצות הקצה לגעת בפיסת נייר 1000 לחרוק שמיר (ראה הדגמה בווידאו והאיור 1 של מקדונלד, et al. 10). הקצה השני מוחדר דרך פקק גומי. המטרה זו מושגת בקלות על ידי דחיפת 1 מחט 18-מד דרך הפקק, החדרת הסיב האופטי דרך קדח המחט, ואז משייכת המחט. פקק הגומי מחובר למקור אור הלוגן 150 ואט (למשל NCL-150, Volpi ארה"ב, או מכל מקור אחר, או אור, אפילו פחות מ 150 ואט). חשוב להקפיד להשתמש בפקק עשוי מגומי סיליקון (או חומר עמיד חום אחר), שכן גומי או פקק רגיל עלול לשרוף כשנמצאים כל כך קרוב למקור האור החם.
2. ביצוע אינטובציה
- ראה איורים 1 ו 2. הכנס כבל סיב אופטי לאhrough קטע קצר של צינור גומי סיליקון (≈ 0.8 המ"מ x 4 מ"מ מזהה OD, קול-פאלמר, EW-96410-13). לקשור את צינור הגומי הזה הדוק למדי, תוך מתן אפשרות לכבל הסיב האופטי להיות מותאם. החדרת צינורית סיליקון בנוחות בסוף luer של הצינורית פותרת את עמדת כבל הסיב האופטי בתוך הצינורית. להתאים את המיקום של כבל הסיב האופטי, כך שהוא מרחיב דרך צינורית ≈ 4 המ"מ מול קצה הצינורית.
- הנח את העכבר מורדם בתמיכה אנכית, הושעה על ידי השיניים החותכות העליונות שלו (איור 3). רוב החוקרים למצוא את ההדמיה הטובה ביותר עם הצד הגחוני של העכבר מול עצמם. מאוד בעדינות לשלוף את הלשון ולהחזיק באגודל ובאצבע מורה. האצבע האמצעית מונחת בין הצוואר וגוף פלסטיק. מתיחה על הלשון עם האצבע ואגודל משמשת כדי לפתוח את הפה, וליישר את דרך אינטובציה, את הזווית של הראש מותאמת עם האצבע האמצעית מאחורי הצווארמוצג באיור 3.
- באמצעות כבל הסיב האופטי כמקור אור והיכרויות, לדחוף אותו דרך מייתרי קול באופן חזותי. אם את המייתרים אינם גלויים, משוך בעדינות קשה על הלשון בעזרת אצבע האמצעית כתמיכה. כאשר הוכנס, לקדם את צינורית ≈ 5 מ"מ נוסף. ואז, נזהר מאוד שלא להעביר את הצינורית, לשלוף כבל הסיב האופטי. לשקר העכבר למטה ולאבטח את הצינורית עם חתיכת הסרט ולתמוך רכזת הצינורית על פיסת פלסטלינה (פלסטלינה), כפי שמוצג באיור 4.
- ההליך בשלב 3 לא יכול להיות הפגין בקלות או אפילו למד, שכן הוא במבצע סולו. עם זאת, על ידי התאמות עדינות של המתיחה על הלשון והתמיכה מאחורי הראש כמעט כל מי שינסה את זה בקרוב תמצא את הדרך הנכונה למצב את העכבר כדי להמחיש את מייתרי קול.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
כהערכה של השיטה, השתמש ארבעה עכברי BALB / ג גבריים בן 20 בשבוע עם משקל ממוצע (± SEM) של 27.7 ± 0.40 גרם. הם למדו על חמישה שבועות רצופים, בי התנגדות הריאות נמדדה תוך שימוש במערכת כפי שתוארה קודם לכן 11. כל עכבר היה מורדם עם קטמין (100 מיקרוגרם / g BW) וxylazine (15 מיקרוגרם / g BW) בתמיסת מלח בהזרקת ה-IP. אז הם מחוברים לצינורות כמתוארים לעיל. אם יש ספק כלשהו אם הצינורית היא בקנה הנשימה ולא בוושט, זה יכול להיות מאומת באמצעות מראה שיניים קטן. שמור על המראה במקפיא, וכאשר יש...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
ההליך המתואר כאן יש מספר יתרונות. ראשית המנגנון הוא פשוט וזול יחסית .. הייצור של המכשיר אינו דורש שום כלים מיוחדים או ציוד יקר. השימוש בקטטר שמציג גם הוא מקור האור אומר שלעולם אינו רואה את פתיחת קנה הנשימה כintroducer מתקרב פתיחת קנה הנשימה. השימוש בintroducer 0.5 מ"מ משמש גם כדי למזער את הטראומה שעלולה להתרחש עם כניסה ראשונית של צינורית רחבה יותר. נשי לב שבדיקה אופטית דומה זמינה מספק מסחרי (Braintree Scientific, Braintree, MA). המכשיר שלהם משתמש במקור אור על מצברים וסיבים או...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
אף אחד מהמחברים יש ניגודי עניינים כדי לגלות.
תודות
נתמך על ידי NIH HL-10342.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| חומר | חברה | קטלוג # | הערה |
| צינורית אינטובציה | BD Insylte, ניצוצות, MD או Jelco Optiva, קרלסבד, קליפורניה | , 20-1-מד קטטר פנימה ארוך תוך ורידים (IV) | |
| כבל סיב אופטי | אופטיקה אדמונד, רינגטון, NJ | # NT02-542 | כ אורכו של סיב אופטי 0.5 המ"מ 2-רגל (סיבי פלסטיק תקשורת כיתה). קצה קצה הסיב שמוכנס לתוך קנה הנשימה צריך להיות מעוגל בעדינות על ידי החזקת סיבי ≈ 2 סנטימטר מקצה ואז עושים עיגולים קטנים בעת גרירת הקצה לכמה שניות על 1000-לחרוק נייר אמורי. |
| מקור אור | Volpi | NCL-150 | למרות שאנו משתמשים מקור 150-W הלוגן אור, כל מקור אור מקביל, גם עם הספק נמוך בהרבהניתן להשתמש בו. |
| פקק גומי סיליקון | פקק גומי סיליקון # 1 מתאים את מקור האור המשמש בהפגנה הזאת. מקורות אור שונים עשויים לדרוש גודל שונה. | ||
| צינור גומי סיליקון קטן | קול-פאלמר | EW-96410-13 | ≈ פיסת 1.5 סנטימטר של צינור גומי סיליקון (0.8 קוטר פנימי, קוטר חיצוני 4 מ"מ) |
| עמדת תמיכה זוויתי | הוא constucted מפלקסיגלס, אבל כל חומר שיכול להיות מודבק חוט או חוט כדי להחזיק את העכבר בזווית כמעט אנכית יכול להיות בשימוש. |
מקורות
- Brown, R. H., Walters, D. M., Greenberg, R. S., Mitzner, W. A method of endotracheal intubation and pulmonary functional assessment for repeated studies in mice. J. Appl. Physiol. 87, 2362-2365 (1999).
- Walters, D. M., Wills-Karp, M., Mitzner, W. Assessment of cellular profile and lung function with repeated bronchoalveolar lavage in individual mice. Physiol. Genomics. 2, 29-36 (2000).
- Rivera, B., Miller, S., Brown, E., Price, R. A novel method for endotracheal intubation of mice and rats used in imaging studies. Contemporary Topics in Laboratory Animal Science / American Association for Laboratory Animal Science. 44, 52-55 (2005).
- Hamacher, J., et al. Microscopic wire guide-based orotracheal mouse intubation: description, evaluation and comparison with transillumination. Laboratory Animals. 42, 222-230 (2008).
- Spoelstra, E. N., et al. A novel and simple method for endotracheal intubation of mice. Laboratory Animals. 41, 128-135 (2007).
- Zhao, X., et al. A technique for retrograde intubation in mice. Lab Animal. 35, 39-42 (2006).
- Vergari, A., et al. A new method of orotracheal intubation in mice. European Review for Medical and Pharmacological Sciences. 8, 103-106 (2004).
- Vergari, A., Polito, A., Musumeci, M., Palazzesi, S., Marano, G. Video-assisted orotracheal intubation in mice. Laboratory Animals. 37, 204-206 (2003).
- Hastings, R. H., Summers-Torres, D. Direct Laryngoscopy in Mice. Contemporary Topics in Laboratory Animal Science / American Association for Laboratory Animal Science. 38, 33-35 (1999).
- MacDonald, K. D., Chang, H. Y., Mitzner, W. An improved simple method of mouse lung intubation. J. Appl. Physiol. 106, 984-987 (2009).
- Ewart, S. L., Levitt, R. C., Mitzner, W. Respiratory system mechanics in mice measured by end-inflation occlusion. Journal of Applied Physiology. 79, 560-566 (1995).
- MacDonald, K. D., McKenzie, K. R., Mitzner, W., Zeitlin, P. L. Lung Mechanics in Heterozygous CF Mice after Repeated LPS Dosing. Am. J. Respir. Crit. Care Med. 175 (4), A930(2007).
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
