הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

הכנת תאי לבלב acinar לצורך סידן ההדמיה, פגיעה בתא המדידות, וזיהום adenoviral

13K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/50391

⸱

5 ביולי 2013

 ,  ,  ,  ,  , 
1Rangos Research Center, Pediatric Gastroenterology, Hepatology, and Nutrition, Children's Hospital of Pittsburgh of UPMC, 2Department of Surgery, Tufts University Medical Center

במאמר זה

סיכום

אנו מתארים שיטת הכנה לשחזור של תאי לבלב acinar עכבר מעכבר לצורך בחינת אותות סיד סלולריים acinar ופציעה סלולרית עם גירויים רלוונטיים מבחינה פיזיולוגית ופתולוגית. שיטה לזיהום adenoviral של תאים אלה היא גם סיפק.

תקציר

תא acinar הלבלב הוא תא parenchymal העיקרי של הלבלב אקסוקרינית וממלא תפקיד עיקרי בהפרשת אנזימי לבלב לתוך צינור הלבלב. זהו גם האתר לייזום של דלקת בלבלב. כאן אנו מתארים כיצד תאי acinar מבודדים מכל רקמת לבלב ואותות סידן תוך נמדדים. בנוסף, אנו מתארים את הטכניקות של transfecting תאים אלה עם מבני adenoviral, ולאחר מכן מדידת הדליפה של חומצת החלב דהידרוגנז, סמן של פגיעה בתא, בתנאים אשר יגרום לפגיעה בתא acinar במבחנה. טכניקות אלה מספקים כלי רב עוצמה כדי לאפיין acinar תא הפיסיולוגיה והפתולוגיה.

מבוא

שינויים דינמיים בסיד cytosolic נחוצים לאירועים סלולריים acinar הן פיסיולוגיים ופתולוגיים. תופעות אלה מסתעפות של סידן נחשבות לנבוע מדפוסי מרחב ובזמן שונים של סידן איתות 1. לדוגמה, אנזים והפרשת נוזלים מתא acinar צמוד לקוצי סידן מאזור מוגבל של מוט הפסגה שבו ההפרשה מתרחשת 2. לעומת זאת, גל סידן גלובלי ואחרי אותות סידן שאינה oscillatory האינטנסיביים קשור לאירועים פתולוגיים מוקדמים שמובילים לדלקת לבלב חריפה 3,4. אלה כוללים הפעלת התוך acinar פרוטאז, הפרשת אנזים מופחתת, ופגיעה בתא acinar. המעבדה שלנו משתמשת מבודד לבלב acini ללמוד האירועים האלה תחילת פתולוגיים שיובילו למחלה גם in vivo ו במבחנה 5-7. השיטות, כמפורט כאן לתאר בידוד של תאי acinar העיקריים לצורך מדידת CYרמות הסידן tosolic ופגיעה בתא. שיטה לזיהום adenoviral של תאים אלה היא גם סיפק.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

1. הכנת תאי לבלב acinar לסידן הדמיה

  1. הכן את חיץ הדגירה HEPES המכיל 20 HEPES המ"מ, 95 מ"מ NaCl, 4.7 מ"מ KCl, 0.6 מ"מ MgCl 2, 1.3 מ"מ CaCl 2, גלוקוז 10 מ"מ, גלוטמין 2 מ"מ, ו1 × חומצות אמינו לא החיוניות בינוני מינימום של הנשר. התאם את הפתרון הסופי ל-pH 7.4 עם NaOH.
  2. הכן את חיץ דגירה BSA על ידי הוספת BSA (1% w / v סופי) עד 25 מ"ל של חיץ הדגירה HEPES (כמתואר לעיל).
  3. הכן את חיץ עיכול collagenase על ידי הוספת 1.1 מ"ג / מ"ל ​​(200 יחידות / מ"ל) מסוג 4 collagenase ו1 מ"ג / מיליליטר מעכבי טריפסין סויה עד 6 מ"ל של חיץ הדגירה BSA (שתואר לעיל).
  4. coverslips מ"מ 22x22 חומצה לשטוף ידי טבילה בשני חלקי HNO 3 וחלק HCl אחד במשך שעה 2. ואז למזוג מים ובאמצעות חנות DI ב70% אתנול.
  5. להרדים את העכבר אחד בחנק CO 2. אוריינט בעלי החיים במצב שכיבה, ולהכין את שטח הבטן על ידי CLEaning עם 70% אתנול. בצע laparotomy לחשוף את חלל הבטן. לנתח את הלבלב ולשטוף באופן מיידי בסירה קטנה המכילה 6 שוקלים מ"ל של חיץ עיכול collagenase.
  6. שם לנתח את כל חתיכות גדולות של כלי דם או שומן נראים לעין, ולאחר מכן להסיר 5 מ"ל של חיץ עיכול collagenase ולהוסיף אותו בחזרה לצינור חרוטי 15 מ"ל.
  7. שימוש במספריים לנתיחה משובח טחון הלבלב בסירה הקטנה במשקל המכילה 1 מ"ל של חיץ עיכול collagenase. בשר טחון עד לפתרון שהתקבל מופיע מפוזר באופן שווה.
  8. העבר את המוצר הטחון בבקבוק פלסטיק Erlenmeyer מ"ל 125, ולהוסיף 5 מ"ל הנותר של חיץ עיכול collagenase למכל. ודא הרקמה היא שקועה באופן מלא במאגר.
  9. מניחים את הבקבוק באמבט מים 37 מעלות צלזיוס ולנער ב 90 סל"ד למשך 30 דקות. במהלך תקופה קצרה זו של השבתה, להכין אגוניסטים הפעלת סידן (למשל caerulein, carbachol) ולשטוף את מכסה חומצת שטף מ"מ 22x22התלושים עם מים די. יבש, ולאחר מכן למקם על גבי משטח שטוח בשורה של סרט מעבדה.
  10. לאחר 30 דקות לעכל הושלם, להעביר את ההשעיה חזרה לצינור חרוטי 15 מ"ל ולאפשר לתאים להתיישב. פיפטה בזהירות את חיץ עיכול collagenase ולהחליף עם 6 מ"ל של חיץ הדגירה BSA. בתוקף ללחוץ את הצינור ביד למשך 10 שניות על מנת לפזר את התאים לקבוצות קטנות יותר. מייד עם רועד, להסיר כל פסולת גדולה, צוף מהתקשורת בלתי המוסדרת.
  11. אפשר התאים שנותרו כדי להתיישב, ולהחליף את התקשורת עם חיץ הדגירה BSA טרי.
  12. חזור על שלב 1.11 פעמיים, עד שההשעיה מורכבת רק קבוצות קטנות שהן רק דק גלויות לעין בלתי מזוינת. התאים צריכים להיות דומים לאלו שמתוארים באיור 1 א (בשורה העליונה).
  13. הסר את חיץ הדגירה BSA ולהחליף עם חיץ הדגירה HEPES.
  14. להכין 750 מיקרומטר, מניות 100X של Fluo-04:00 ב10% DMSO.
  15. לטעון את התאים בצינור חרוטי 15 מ"ל המכיל את ההשעיה התא וחיץ הדגירה HEPES ללא BSA. כדי לעשות זאת, להוסיף נפח מתאים (1:100 דילול) של פתרון המניות להשעית התא. לאחר מכן צלחת μl 500 של השעיה זו על כל coverslip מ"מ 22x22.
  16. שמור coverslips בחושך בטמפרטורת חדר. קח Ca 2 + המדידות הראשון 30 דקות לאחר טעינה. הצבע יוסר באופן אוטומטי מהמדיום על התחלת זלוף, שאמור להתרחש 30 דקות לאחר טעינת צבע.

2. מדידת הסידן בתאי לבלב acinar

  1. יש לשטוף את כל זלוף הגדרה עם מים די ולמלא עם כמות מתאימה של חיץ או אגוניסט. ראש כל מזרק עם חיץ או אגוניסט כדי להבטיח זרימה תקינה. הצמד מזרקים לטבעת עומד כ 1-2 מטרים מעל הבמה מיקרוסקופ.
  2. השתמש בפינצטה העדינה לתפוס בזהירות מההשעיה שלו קצה אחד coverslip המכילה תא. הטה את המכסהלהחליק 45 °, ולאפשר למאגר העודף לברוח. מקם את coverslip על גבי אטם הגומי עם התאים על גבי coverslip, ולהרכיב את החדר (איורים 2 א ו -2).
  3. אבטח את תא זלוף לבמה ולהכניס את הצינור המכיל חיץ לכניסה הראשונה של החדר (איור 2 ג). הפעל את המזרק המכיל חיץ על ולאפשר לחיץ perfuse על כל פני השטח של coverslip. ברגע שהמאגר שהגיע בקצה השני של החדר, להוסיף קו ואקום ליניקת הוואקום. הכנס את כל צינורות אחרים (המכיל אגוניסט, מעכבים, וכו ') למקומו המתאים שלהם לאורך החדר.
  4. דמיינו את התאים או באמצעות, או אובייקטיבי 200X 400X 1.4 מספרי צמצם וארגון לייזר כדי לרגש את צבע Fluo-04:00 באורך גל של 488 ננומטר (איור 1 א, למטה). כוח ההגדרות של לייזר צריכים להיות מותאמות באופן שהצינור המכפיל (PMT) אינו רווי באור הנפלט. בנוסף, מתח על פני PMT צריך להיות מותאם לגילוי אור מרבי.
  5. אותות פליטה ארוכים לעבור של 515 ננומטר> נאספים במהירויות מסגרת של 2-5 שניות / מסגרת להמחשה של דפוסי oscillatory איטיים ו0.2-0.3 שניות פריימים / המאפשר הדמיה מהירה יותר, גלי סיד הגלובליים (איורים 3 ו -4).
  6. לאחר ההדמיה הושלמה, סגור את המזרקים ולהסיר את כל צינורות. לפרק את התא וחזור על שלבי 2.2-2.4.
  7. איסוף נתונים כערכים מספריים של עוצמת הקרינה לאורך זמן והעברה לתמונת J (חבילת תוכנה המסופקת כתוכנה החופשית על ידי המכון הלאומי לבריאות וניתן למצוא בhttp://rsb.info.nih.gov/ij/).
  8. צפה בתמונות סלולריות בזמן אמת ולזהות אזורים של עניין (ROIs, כלומר הפסגה, basolateral, גרעיני, וכו ')
  9. רוכש את עוצמות הקרינה לROIs אלה וRepresent כעוצמת הקרינה בעוצמה / תחילת המחקר הקרינה (כלומר F/F0).
  10. ליצור העתקים על ידי התוויית F f / 0 לעומת זמן. בנוסף להעתקים, תמונות נציג מסופקות בדרך כלל ומוצגות באמצעות pseudocolor.

3. הכנת תאי לבלב acinar למבחני פגיעה בתא

  1. תקשורת חמה DMEM-F-12 (ללא פנול האדום) ל 37 ° C.
  2. הוסף BSA (0.1% w / v סופי), וHCl (50 מיקרומטר סופי) לתקשורת את ה-F-12 DMEM.
  3. Aliquot 50 מ"ל של DMEM לתוך צינור חרוטי.
  4. הכן את חיץ collagenase על ידי הוספת 0.5 מ"ג / מ"ל ​​(12 U / מ"ל) של collagenase הסוג IV עד 10 מ"ל של תקשורת בתוספת DMEM-F-12.
  5. להרדים את העכבר אחד בחנק CO 2. אוריינט בעלי החיים במצב שכיבה, ולהכין את שטח הבטן על ידי ניקוי עם 70% אתנול. בצע laparotomy לחשוף את חלל הבטן. לנתח את הלבלב ולשטוף באופן מיידי בסירה קטנה במשקל גontaining 6 מ"ל של חיץ collagenase.
  6. לרכך את הרקמה באמצעות מספריים לנתיחה קנס עבור 3-5 דקות או עד לפתרון שהתקבל מופיע מפוזר באופן שווה.
  7. העבר את הרקמה הטחון בבקבוק 125 מ"ל Erlenmeyer עם 5 מ"ל של חיץ collagenase נוסף, ולאחר מכן למקום 37 ° C אמבט מים עם הרועד בסל"ד 90 למשך 5 דקות.
  8. מרשימת שייקר, לאפשר לתאים להתיישב לזמן קצר, וחילופים עם 5 מ"ל של חיץ collagenase טרי. ואז דגירה של 35 דקות נוספות ב 37 ° C אמבט מים עם הרעד ב90 סל"ד.
  9. במרץ resuspend לעכל באמצעות פיפטה העברה עד ההשעיה מופיעה הומוגנית ללא גושי תא ברורים. ואז בעדינות פיפטה ההשעיה התא דרך רשת ניילון מראש רטובה לתוך בקבוק חרוטי.
  10. במרץ פיפטה 3 מ"ל נוסף של תקשורת ה-F-12 DMEM טרי (עם collagenase) מבעד לרשת, על מנת לכפות דרך כל תאים הנותרים.
  11. הוסף 6-10 מ"ל נוסף של DMEM מדיה F-12 וllow התאים ליישוב במשך 2-3 דקות. חזור על פעולה זו פעמיים, ולהסיר את supernatant לאחר לשטוף הסופי.
  12. הוסף מדיה טרי DMEM-F-12, resuspend התאים, ואת צלחת μl 500 של השעיה תא לתוך באר כל צלחת תרבית רקמת 48 היטב. התאים צריכים להיות דומים לאלו שמתוארים באיור 1.
  13. לאפשר את הצלחת לשבת באמבט מים 37 מעלות צלזיוס ב 90 סל"ד במשך 5 דקות לפני הוספת אגוניסטים.
  14. לגרות את התאים עם משתנה אגוניסטים במשך 2-4 שעות.
  15. הטה את הצלחת בזווית כדי לאפשר לתאים להתיישב ופיפטה בזהירות aliquot של תקשורת (בדרך כלל 100 μl) והקפאת הבזק בחנקן נוזלי.
  16. פלאש להקפיא את ההשעיה התא הנותרת. הקפאת פלאש היא לא חיונית למדידות LDH. כפי שניתן שמרו לדגימות אלטרנטיביות על קרח, אם הם יהיו assayed באותו היום או לאחסן -20 ° C עבור אחסון לטווח ארוך.

4. מדידה דלף קטט דהידרוגנאז

    דהידרוגנז דליפת חומצת החלב מדוד (LDH), תוך שימוש בעיקר בחומרים הכימיים וההנחיות שסופקו בערכת 96 Promega CytoTox ללא רדיואקטיבי Cytotoxicity assay (ראה טבלה של חומרים כימיים וחומרים ספציפיים).
  1. מחדש את מצע LDH (המסופק בערכה) עם 12 מ"ל של חיץ assay (גם סיפק).
  2. הפשירי השעיה תא קפוא ודגימות תקשורת באמבט מים בטמפרטורת חדר.
  3. צלחת μl 50 של כל דגימת תקשורת בצלחת 96 היטב.
  4. להשעית התא, להוסיף נפח ההכרחי של מאגר תמוגה 10X, כך שהריכוז הסופי הוא 1X. בקצרה מערבולת ולדגור על 37 מעלות צלזיוס למשך 60 דקות.
  5. צנטריפוגה דגימות lysed ב 250 XG במשך 4 דקות לפסולת תא גלולה.
  6. לlysates התא, צלחת μl 50 של דילול 1:10 לבאר כל צלחת 96 באר.
  7. הוסף 50 μl של מצע משוחזר היטב כל אחד, דגירה את הצלחת בחושך בטמפרטורת חדר למשך 30 דקות.
  8. לעצור את התגובה על ידיהוספת 50 μl של להפסיק פתרון (מסופק בערכה) זה טוב.
  9. מדוד הספיגה ב 490 ננומטר.
  10. השתמש בנוסחות הבאות לחישוב זליגת% LDH. הצפיפות האופטית מתחת מתוקנות על ידי הפחתה מתוך קריאת OD ריקה מהיטב המכיל רק PBS, מצע, ולהפסיק פתרון.

LDH בתקשורת = (מדיה OD492) X (גורם לדילול תקשורת) X (כרך של תקשורת) * מאז הוא בדרך כלל מיותר לדלל דגימות בתקשורת, גורם לדילול יהיה לרוב equal1.

סה"כ LDH = (X X (lysate OD 490) (גורם לדילול lysate) (כרך א בהשעית תא)) + (X X (מדיה OD 490) (גורם לדילול) (כרך של תקשורת aliquoted לדגימה))

figure-protocol-1

5. הדבקה של תאי לבלב עם acinar Adenovirus

  1. להכיןתאי לבלב acinar כאמור בסעיף 3.
  2. בעקבות צעד 3.12, להוסיף 10 יחידות 7 זיהומיות (IFUs) של אדנווירוס להשעית תא דגירה למשך 30 דקות ב 37 ° C.
  3. באופן שווה צלחת 2 מ"ל של השעיה תא בצלחת 6 באר.
  4. עבור רוב בונה ביטוי, תאים צריכים להיות מספקת נגועים בתוך 18 שעות, ועבור חלק ממבני לוציפראז, רק בתוך 6 שעות.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

דוגמה של מדידות סיד סלולריים acinar בתגובה לגירויים פיסיולוגיים מסופקת באיור 3. תאי acinar היו עמוסים הסיד לצבוע Fluo-4 וperfused עם אצטילכולין האנלוגי carbachol (CCH; 1 מיקרומטר)) 8. תאים הגיבו בצורה של גל סיד אשר יוזם באזור הקודקוד ומתפשט לאזור basolateral 3,9. העתקי נציג המוצגים באיור 3 מדגימים את דפוס שיא הרמה הטיפוסי נצפה בדרך כלל עם carbachol 1 מיקרומטר. לעומת זאת, שימוש במינונים תת מקסימאלי של כולציסטוקינין האנלוגי cae...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

שיטת בידוד התא והמבחנים שלאחר מכן מתוארות כאן מייצגים כלים רבי עוצמה שבה ללמוד את התכונות הפיזיולוגיות וpathophysiological של הלבלב אקסוקרינית. השיטה לבידוד תאי לבלב acinar מפוזר תוארה לראשונה על ידי אמסטרדם וג'יימיסון 11 בשינה 1972. השיטות שהוצגו כאן הותאמו משיטות הבידוד האחרונות יותר שתוארו על ידי ואן אקר ועמיתיו 12. למרות שטכניקות אלה הן שחזור מאוד ולמד בקלות, יש כמה תכונות קריטיות לכל שיטה שצריכה להתבצע באופן מדויק. הבנת פרטים טכניים אלה תאפשר ליישום ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

אין ניגוד האינטרסים הכריז.

תודות

עבודה זו נתמכה על ידי מכון לאומי לבריאות DK083327 גרנט, וDK093491 (לSZH).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
עכבריםNCIN/Aזכר 20-30 גרם; כמעט כל זן אמור להניב תוצאות דומות.
HEPESAB00892ביואנליטי אמריקאי
נתרן כלוריJ.T. Baker3624-05
אשלגן כלוריJ.T. Baker3040-01
מגנזיום כלורידSigmaM-8266
סידן כלורידפישרC79
דקסטרוזJ.T. בייקר1916-01
L-גלוטמיןסיגמאG-8540
1X מינימום תערובת חומצות אמינו בינוניות לא חיוניות של נשרGibco11140-050
נתרן הידרוקסידEMSX0593
סרום בקר אלבומיןסיגמאA7906
קולגנאזוורת'ינגטון4188
מעכב טריפסין פולי סויהסיגמאT-9003
פחמן דו חמצניMatheson Gas124-38-9
125 מ"ל בקבוק פלסטיק ErlenmeyerCrystalgen26-0005
ערכת חיתוךFine Science Tools14161-10
70% אתנולLabChemLC222102
P1000, P100, P10 פיפטותגילסוןFA10005P
סירת שקילההית'רו סיינטיפיקHS1420A
פיפטות העברת פלסטיקארה"ב סיינטיפיק1020-2500
15 מ"ל צינורות חרוטייםBD Falcon352095
50 מ"ל צינורות חרוטייםBD Falcon352070
1.5 מ"ל צינור מיקרו-צנטריפוגהפישר05-408-129
0.65 מ"ל צינור מיקרו-צנטריפוגהVWR20170-293
22 x 22 מ"מ כיסויי זכוכיתפישר032811-9
חומצה חנקתיתפישרA483-212
חומצה הידרוכלוריתפישרA142-212
מים נטולי יוניםN/AN/A
18 x 18 מ"מ כיסוייםפישר021510-9
סרט מעבדהParafilmPM-996
Fluo-4AMInvitrogenF14201
דימתילסולפוקסידסיגמאD2650
Luer lockBecton Dickinson932777
60 מ"ל מזרקBD BioscienceDG567805
23 & #190; מחט מדBD Bioscience9328270
PE50 צינורותקליי אדםPE50-427411
מברג ראש שטוח N/AN/A
DMEM F-12, ללא פנול אדוםGibco21041-025
30.5 מד מחטBD Bioscience305106
5 CC מזרקBD Bioscience309603
25 מ"ל בקבוק Erlenmeyer פילסקפישרFB50025
ניילון מסנן רשת Nitex03-150/38150 אום גודל נקבוביות
48 צלחת תרבית רקמותבאר Costar3548
96 צלחת תרבית רקמות באר Costar3795
6 צלחת תרבית רקמותבאר Costar3506
חנקן נוזליMatheson Gas7727-37-9
ערכת בדיקת ציטוטוקסיותPromegaG1782
Adeno-GFPN/AN/Aמתנה מג'יי וויליאמס
<חזק>ציוד
מעמד טבעת עם מהדקיםUnited ScientificSET462
תא פריפוזיהN/AN/A תוכנן על ידי SZH ועמיתיו באוניברסיטת ייל
קו ואקוםManostat72-100-000
אמבט מים עם שייקר51220076
ZeissLSM 710
BioTek Synergy H1 קורא צלחותBioTek11-120-534
קולט אדים לתרבית רקמותNuaireNU-425-600
חממת תרבית רקמותThermo3110
מיקרוסקופ קונפוקלי מדעי מדויק

מקורות

  1. Toescu, E. C., Lawrie, A. M., Petersen, O. H., Gallacher, D. V. Spatial and temporal distribution of agonist-evoked cytoplasmic Ca2+ signals in exocrine acinar cells analysed by digital image microscopy. Embo J. 11, 1623-1629 (1992).
  2. Ito, K., Miyashita, Y., Kasai, H. Micromolar and submicromolar Ca2+ spikes regulating distinct cellular functions in pancreatic acinar cells. Embo J. 16, 242-251 (1997).
  3. Husain, S. Z., et al. The ryanodine receptor mediates early zymogen activation in pancreatitis. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 102, 14386-14391 (2005).
  4. Raraty, M., et al. Calcium-dependent enzyme activation and vacuole formation in the apical granular region of pancreatic acinar cells. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 97, 13126-13131 (2000).
  5. Orabi, A. I., et al. Dantrolene mitigates caerulein-induced pancreatitis in vivo in mice. Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 299, G196-G204 (2009).
  6. Shah, A. U., et al. Protease Activation during in vivo Pancreatitis is Dependent upon Calcineurin Activation. Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. , (2009).
  7. Muili, K. A., et al. Pharmacologic and genetic inhibition of calcineurin protects against carbachol-induced pathologic zymogen activation and acinar cell injury. Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. , (2012).
  8. Orabi, A. I., et al. Ethanol enhances carbachol-induced protease activation and accelerates Ca2+ waves in isolated rat pancreatic acini. J. Biol. Chem. 286, 14090-14097 (2011).
  9. Nathanson, M. H., Padfield, P. J., O'Sullivan, A. J., Burgstahler, A. D., Jamieson, J. D. Mechanism of Ca2+ wave propagation in pancreatic acinar cells. J. Biol. Chem. 267, 18118-18121 (1992).
  10. Reed, A. M., et al. Low extracellular pH induces damage in the pancreatic acinar cell by enhancing calcium signaling. J. Biol. Chem. 286, 1919-1926 (2011).
  11. Amsterdam, A., Jamieson, J. D. Structural and functional characterization of isolated pancreatic exocrine cells. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 69, 3028-3032 (1972).
  12. Van Acker, G. J., et al. Tumor progression locus-2 is a critical regulator of pancreatic and lung inflammation during acute pancreatitis. J. Biol. Chem. 282, 22140-22149 (2007).
  13. Ito, K., Miyashita, Y., Kasai, H. Kinetic control of multiple forms of Ca(2+) spikes by inositol trisphosphate in pancreatic acinar cells. J. Cell Biol. 146, 405-413 (1999).
  14. Leite, M. F., Burgstahler, A. D., Nathanson, M. H. Ca2+ waves require sequential activation of inositol trisphosphate receptors and ryanodine receptors in pancreatic acini. Gastroenterology. 122, 415-427 (2002).
  15. Paredes, R. M., Etzler, J. C., Watts, L. T., Zheng, W., Lechleiter, J. D. Chemical calcium indicators. Methods. 46, 143-151 (2008).
  16. Schild, D., Jung, A., Schultens, H. A. Localization of calcium entry through calcium channels in olfactory receptor neurones using a laser scanning microscope and the calcium indicator dyes Fluo-3 and Fura-Red. Cell Calcium. 15, 341-348 (1994).
  17. Saluja, A. K., et al. Secretagogue-induced digestive enzyme activation and cell injury in rat pancreatic acini. Am. J. Physiol. 276, 835-842 (1999).
  18. Husain, S. Z., et al. Ryanodine receptors contribute to bile acid-induced pathological calcium signaling and pancreatitis in mice. Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. , (2012).
  19. Gurda, G. T., Guo, L., Lee, S. H., Molkentin, J. D., Williams, J. A. Cholecystokinin activates pancreatic calcineurin-NFAT signaling in vitro and in vivo. Mol. Biol. Cell. 19, 198-206 (2008).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

גלה מאמרים נוספים

עיכול באמצעות קולגנאזמבחן דליפת LDHמיקרוסקופיה קונפוקליתמיקרוסקופיה פלואורסצנטיתתחליל אינקובציה BSAתחליל אינקובציה Hepes
הכנת תאי לבלב acinar לצורך סידן ההדמיה, פגיעה בתא המדידות, וזיהום adenoviral
צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.