מאמר שיטה

Nephrectomy 5/6th בשילוב עם דיאטת מלח גבוהה ועיכוב תחמוצת החנקן synthase כדי לגרום למחלת כליות כרונית בחולדת לואיס

23.3K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/50398

⸱

3 ביולי 2013

 ,  ,  , 
1Department of Nephrology & Hypertension, University Medical Center Utrecht

במאמר זה

סיכום

שיטת שני שלבים להקמת מחלת כליות כרוניות (CKD) בחולדת לואיס על ידי ניתוח להסרת הכליה 5/6th מסה מתוארת. שילוב של ההליך כירורגי, NOS-עיכוב ותזונה עתיר מלח מביאים למודל דומה למחלת כליות כרוניות אנושית, המאפשרים מחקר ופיתוח של מנגנונים של התערבויות טיפוליות חדשניות סיבתיים.

תקציר

מחלת כליות כרונית (CKD) היא בעיה עולמית. האטת התקדמות מחלת כליות כרונית היא בעדיפות בריאותית משמעותית. מאז מחלת כליות כרונית מאופיינת derangements מורכב של הומאוסטזיס, מודלים של בעלי חיים אינטגרטיביים נחוצים כדי ללמוד התפתחות והתקדמות של מחלת כליות כרונית. ללמוד פיתוח של התערבויות טיפוליות CKD ורומן במחלת הכליות כרונית, אנו משתמשים במודל אבלציה כריתת הכליה 5/6th, מודל ניסיוני ידוע של מחלת כליות מתקדמת, שמזכירים כמה היבטים של מחלת כליות כרונית אנושית. הפחתת ברוטו במסת הכליה גורמת גלומרולרי מתקדמים ופציעת tubulo-ביניים, אובדן nephrons השריד ופיתוח של יתר לחץ דם מערכתי וגלומרולרי. זה קשור גם עם אובדן הדרגתי intrarenal נימים, דלקות ופקעיות כליה. גורמי סיכון למחלת הכליות כרוניים תמיד השפעה על תפקוד האנדותל. כדי לחקות את זה, אנו משלבים הסרת 5/6th מסת כליות עם תחמוצת חנקן (NO) דלדול ודיאטה מלח גבוהה. לאחר הגעה והתאקלמות, בעלי חיים מחדשceive NO מעכב synthase (NG-ניטרו-L-ארגינין) (L-NNA) בתוספת למי שתייה (20 מ"ג / ליטר) לתקופה של 4 שבועות, ואחריו uninephrectomy צדדי הימנית. שבוע לאחר מכן, כריתת כלית סיכום ביניים (SNX) מתבצעת בצד השמאל. לאחר SNX, בעלי חיים אפשרו להתאושש במשך יומיים ואחרי LNNA במי שתייה (20 מ"ג / ליטר) לתקופה נוספת של 4 שבועות. תזונה עתירה מלח (6%), בתוספת בקרקע צ'או (ראה תרשים קו זמן 1), הוא המשיך לאורך כל הניסוי. התקדמות של אי ספיקת כליות ואחריו לאורך זמן על ידי מדידת פלזמה אוריאה, לחץ דם סיסטולי ופרוטאינוריה. בשישה שבועות לאחר SNX, אי ספיקת כליות פיתחה. תפקוד הכלייתי נמדד באמצעות אינולין ו" תקן זהב "טכנולוגית פינוי חומצת hippuric para-אמינו (PAH). מודל זה של מחלת כליות כרונית מתאפיין בירידה בקצב סינון הגלומרולרי (GFR) וזרימת פלזמה כליות יעילה (ERPF), יתר לחץ דם (לחץ דם סיסטולי> 150 מ"מ כספית), פרוטאינוריה (> 50 mg/24 HR) וuremia קל (> 10 מ"מ). תכונות היסטולוגית כוללות נזק tubulo-ביניים באו לידי ביטוי על ידי דלקת, ניוון צינורי וסיסטיק ופקעיות מוקד מוביל להפחתה מסיבית של glomeruli בריא בקרב אוכלוסיית השריד (<10%). מעקב עד 12 שבועות לאחר SNX מציג התקדמות נוספת של מחלת כליות כרונית.

מבוא

בשל אופייה המתקדם, מחלת כליות סופנית שלאחר מכן, ותחלואה לב וכלי דם ותמותה הקשורים, מחלת כליות כרונית היא בעיה בריאותית ציבורית גוברת 1. האטת התקדמות מחלת כליות כרונית היא אפוא בראש סדר עדיפויות בריאותי משמעותי. מאז מחלת כליות כרונית מאופיינת derangements מורכב של הומאוסטזיס, מודלים של בעלי חיים אינטגרטיביים נחוצים כדי ללמוד התפתחות והתקדמות של מחלת כליות כרונית. הכליה מורכבת ממגוון רחב של סוגי תאים שונים הפועלים באינטראקציה אחד עם השני. מורכבות זו לא ניתן חיקתה במבחנה.

ללמוד התערבויות טיפוליות חדשניות במחלת הכליות כרונית, אנו משתמשים במודל 5/6th כריתת הכליה אבלציה, מודל ניסיוני ידוע של מחלת כליות מתקדמת, שמזכיר כמה היבטים של מחלת כליות כרונית אנושית 2,3. הפחתת ברוטו במסת הכליה גורמת גלומרולרי מתקדמים ופציעת tubulo-ביניים, אובדן nephrons השריד ופיתוח של יתר לחץ דם מערכתי וגלומרולרי. היא מזוהה עם progrאובדן essive intrarenal נימים 4, דלקת ופקעיות כליה. גורמי סיכון למחלת הכליות כרוניים תמיד השפעה על תפקוד האנדותל 5. השתמשנו זן עכברים (לואיס) שהוא עמיד יחסית להתפתחות של מחלת כליות כרונית, ולכן אנחנו בשילוב הסרת 5/6th מסת כליות עם תחמוצת חנקן (NO) דלדול 6, 7, 8 ו 9 גבוהה דיאטת מלח. לאחר הגעה והתאקלמות, בעלי חיים מקבלים שום מעכב synthase (L-NNA) בתוספת למי שתייה (20 מ"ג / ליטר) לתקופה של 4 שבועות, ואחריו uninephrectomy צדדי הימנית (UNX) עם המשך של L-NNA אחרי יומיים . שבוע לאחר מכן, כריתת הכליה (SNX) ההסרה כלומר סכום הביניים של 2/3rds של מסת הכליה מבוצעת בצד השמאל. לאחר SNX, בעלי חיים מותר לשחזר עבור 2 ימים לאחר מכן שוב על ידי 20 מ"ג / ליטר LNNA במי שתייה לתקופה של 4 שבועות. תזונה עתירה מלח (6%), בתוספת בקרקע צ'או (ראה תרשים קו זמן 1), הוא המשיך לאורך כל הניסוי. Tהוא הסיבה לביצוע UNX בצד הימין וSNX בצד השמאל הוא שכלי הכליות הם כבר בצד השמאל שהופך אותו קל יותר לגשת הכליות ללא מתיחת כלי יותר מדי כאשר הכליות חשופה מחוץ לגוף . בספרות, מודלים מתוארים שבקטבים של הכליה השמאלית יוסרו ראשון, ואחרי UNX של הכליה הימנית כעבור שבוע 10,11,12. בידיים שלנו מודל זה הראה התפתחות הרבה יותר מהיר של אי ספיקת כליות, אלא גם וריאציה הרבה יותר גדולה באובדן של תפקוד כליות. התקדמות של אי ספיקת כליות ואחריו לאורך זמן על ידי מדידת פלזמה אוריאה, לחץ דם סיסטולי ופרוטאינוריה. בשישה שבועות לאחר SNX, אי ספיקת כליות פיתחה, המתאפיינת בירידה ניכרת בקצב סינון גלומרולרי (69%) וזרימת פלזמה כליות יעילה (62%) 13 יתר לחץ דם (לחץ דם סיסטולי> 150 מ"מ כספית), פרוטאינוריה (> 50 mg/24 uremia HR) והמתון (> 10 מ"מ). תכונות היסטולוגית כוללות טובולנזק O-ביניים בא לידי ביטוי על ידי דלקת, ניוון צינורי וסיסטיק ופקעיות מוקד מוביל להפחתה מסיבית של glomeruli בריא בקרב אוכלוסיית השריד (<10%). מעקב עד 12 שבועות לאחר SNX מציג התקדמות נוספת של מחלת כליות כרונית, המספק חלון ההזדמנויות להערכה של התערבויות טיפוליות.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

כל הניסויים מבוצעים בהתאם לקווים המנחים של בעלי החיים הניסיוניים האתיים של ועדת בעלי החיים הניסיונית אוטרכט. הפרוטוקול מבוצע תחת הדרכתו ואישורו של הטיפול בבעלי החיים של המוסד של המחבר ועדת שימוש.

מחלת כליות כרונית היא מושרה בזכר לואיס חולדות מולדות (צ'ארלס ריבר, Sulzfeld, גרמניה) בגיל 8 שבועות. חולדות הם שוכנו בתנאים סטנדרטיים בסביבת אור, טמפרטורה והלחות מבוקרת.

1. הכנת ניתוח

  1. לעקר מכשירי ניתוח:
    • רקמת תלמיד 1 מלקחיים 1-2 שיניים 12 ס"מ
    • מלקחיים דפוס רגילים תלמיד 1
    • 2 מלקחיים Semken
    • 1 מספריים מאיו
    • 1 איריס מספריים תלמיד
    • בעל מחט אולסן-Hegar 1 עם מספריים
    • שמיכה
  2. לבדוק את רשימת המלאי:
    • הפעלת שולחן עם כרית החימום ומנורה
    • O 2, isoflurane
    • רקמות
    • מגלח
    • מאזנים
    • ערכת הפעלה סטרילי
    • 5x5 גזה סטרילית ו10x10
    • 70% אלכוהול
    • 0.9% NaCl פתרון
    • מזרק 1 מ"ל
    • מחטים (25G)
    • כריות קצף ג'ל: spongostan
    • Vicryl 4.0 ו 5.0
    • עצירות מ"ג 0.03 ק"ג / (1:10 דילול במלח פיסיולוגי)
    • כלוב נקי לחולדות לאחר ניתוח

2. Uninephrectomy צד ימין

  1. לחטא את הטבלה עם 70% אלכוהול.
  2. עכברוש מקום בתיבת אינדוקציה ולגרום הרדמה עם 4% isoflurane וזרימת 1 ליטר של O 2. הערה: בהתאם לזן העכברים משמש, שיכוך כאבים לפני וPerioperative נקבעו, זה צריך להיות נדון עם הווטרינר המקומי.
  3. העבר את העכבר לשולחן ומקום האף לקונוס. החולדה וחרטומו מונחים על כרית חימום כדי לשמור על טמפרטורת הגוף של החולדה. אני העכברוששל מאוורר בתערובת של 2% isoflurane ו1 ליטר O 2.
  4. לגלח את אגפו של העכברוש ולחטא עם אלכוהול. לשטוף ולחטא את ידי וללבוש כפפות כירורגיות סטריליות. ללבוש כובע ראש ומסכה. הפוך 1-1.5 ס"מ חתך מקביל לצלעות באמצעות מלקחיים אנטומיים ומספריים קהים. לחשוף את הכליה על ידי נתיחה בוטה של ​​שרירי הגב.
  5. הקוטב התחתון של הכליה הוא גלוי, להשתמש בזהירות את המלקחיים הבוטים הקטנים לאחוז רקמות שומן perirenal. להחצין את הכליה על ידי משייכתו בעדינות בשומן perirenal עם מלקחיים. תשמור על עצמך שלא להפריע את בלוטת יותרת הכליה בהליך זה. בלוטת יותרת הכליה ניתן להסיר בקלות על ידי הצבת מלקחיים באתר המדיאלי ברקמות שומן ובעדינות כלפי מעלה עברה בין בלוטת יותרת הכליה והכליה כמתואר באיור 2.
  6. הנח בעדינות על כליות גזה וברורה של רקמות שומן וחיבור. זהה את העורק ווריד הכליה ולמקם את מייתר (5.0vicryl) עם קשר יחיד סביב כלי הדם, אך לא לקשור את הקשר.
  7. הזז את הקשר הרופף בזהירות לאורך כלי כלפי אב העורקים בכ 0.5 ס"מ, כדי ליצור חלל שבין הכליות ואת הקשר. הדבר נעשה כדי למנוע את הקשירה מלהחליק ולנפול לאחר החיתוך.
  8. לקשור קשר עם שני קשרים כפולים. אם זלוף הוא נעצר, הצבע של הכליה ישתנה מייד לחום. אל תחתוך את הקצוות של המייתר.
  9. חותכים את כלי הכליות הקרובים לכליות ולהסיר את הכליה. משוך בעדינות על הקצוות הארוכים של המייתר כדי לבדוק לדימום של כלי הכליות. הקשירה צריכה להישאר במקום על כלי השיט. חותכים את הקצוות הארוכים של המייתר. שימו לב, את כלי כליות השריד יהיה לסגת לתוך חלל הבטן באופן מיידי.
  10. כתם כליות נכרתה לייבש ולשקול אותו.
  11. סגירה חתך שריר השלד עם הריצה עם תפרי Vicryl 5.0. הזרק 0.10 מ"ל (0.03 מ"ג / ק"ג) עצירות im בגפיים האחוריות. סגור אתעור עם Vicryl 4.0 עם תפרי intracutaneous. זה מונע את החולדות מפתיחת הפצע. הערה: עקב דיכוי נשימתי בחולדות לואיס, אנחנו נותנים שיכוך כאבים שלאחר הניתוח רק לפני כיבוי isoflurane.
  12. בית החולדה בכלוב בודד נקי עם גישה קלה למזון ומים. מניחים את החצי הכלוב על התחממות כרית O / N ולבדוק בזהירות את העכברוש ביום שלמחרת. כאשר הפצע סגור והעכברוש הוא פעיל, שהיא בדרך כלל בין 6 ל 12 שעות לאחר ניתוח, ניתן להציב בחזרה את החולדה לדיור קבוצה.

3. צד שמאל Nephrectomy סיכום ביניים

  1. שבעה ימים לאחר מכן, אותם ההכנות נעשות בצד השמאל כמו בצד ימין כמתואר 2.1-2.5. לפני הניתוח, כמות רקמת כליה שצריכה להסיר מקביל לכ 2/3rds של המשקל של הכליה הימנית מחושבת. הכן חתיכות קטנות של קצף ג'ל (Spongostan, ג'ונסון אנד ג'ונסון, ניו ג'רזי) לפני הניתוח.
  2. הנח מספריים חדים סביב הקוטב העליון של הכליה השמאלית ולכרות את המוט העליון במכה אחת (למיקום מספריים, ראה איור 3). לכסות מייד עם פיסת קצף ג'ל ולהפעיל לחץ מתון עם גזה סטרילית.
  3. חזור עם המוט התחתון של הכליות כמו ב3.3.
  4. הרם כליות כדי למנוע קרישה על עור. לשמור על לחץ מתון על שתי כריות קצף ג'ל עם גזה סטרילית עד שהדימום ייעצר. כאשר דימום נמשך, להוסיף משטח קצף אחר.
  5. הנח כליות שריד עם כריות קצף ג'ל חסיד בתוך הבטן. סגור את השרירים והעור ופעל 2.9-2.12.

4. שאם ניתוח

  1. פקדים המופעלים דמה לעבור את אותו תהליך, במטרה לחשוף את הכליות. במקום כריתה מוחלטת כליות או חיתוך קטבי שבוע אחד מאוחר יותר, שתי הכליות decapsulated במרווח שבוע אחד, נזהרת שלא להפריע לבלוטת יותרת הכליה. סגירת פצע וטיפול שלאחר הניתוח הם identical ול2.11 2.12.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

לאחר כריתת כלית סכום ביניים, כ 1/6th מסת כליה מוחלטת שנשאר. איור 4 מראה את משקליו של חלק מוסר של הכליה הימנית עם סטיית תקן ממוצעת בשני ניסויים קודמים. אחד צריך לזכור כי בשבוע אחרי UNX, היפרטרופיה של הכליה השמאלית מתרחשת; מצביע על כך שהמשקל שיש להסיר מחושב על בסיס המשקל של הכליה הימנית תמיד תוצאות בפחות מהסרת 5/6th. עם זאת, מאחר שלא ניתן לקבוע את המשקל של הכליה השמאלית במהלך ניתוח; זו הדרך מדויקת ביותר כדי להסיר כ 5/6th של מסת הכליה המקורית.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

הסרה כירורגית של 5/6th מסת כליה בחולדת לואיס, בשילוב עם דיאטה עתירת מלח ועיכוב NOS זמני מובילה למודל של מחלת כליות כרונית דומה למחלת כליות כרוניות אנושית ומאפשרת למחקר של מנגנונים סיבתיים ויעילות של התערבויות טיפוליות במחלת הכליות כרונית.

מודל כריתת כלית 5/6th הוא מודל ידוע ותאר בהרחבה למחלת הכליות כרונית. עם זאת, פשוט הסרת 5/6th מסת הכליה אינה מוביל לאי ספיקת כליות מיידית בכל זני החולדה. אנו משתמשים בחולדות לואי...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

יש מחברים אין לחשוף.

תודות

אנו מודים קריסטה דן Ouden לקבלת סיוע הטכני המעולה שלה. טכניקה זו נתמכה כלכלית על ידי קרן הכליה ההולנדית, מענק C06.2174. MCV נתמך על ידי הארגון ההולנדי למחקר מדעי (NWO) Vidi-המענק 016.096.359.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
   <חזק>ריאגנט
L-NNAסיגמא-אולדריץ'N5501 
Spongostan dental: רפידות קצף ג'ל 1x1x1 ס"מJohnson& ג'ונסוןMs0005 
Ethicon Vicryl FS-2S naald 4/0 V392H p/36EthiconV303H 
Ethicon Vicryl RB-1+ naald 5/0 V303H p/36EthiconV392H 
בופרנורפין (0.3 מ"ג/מ"ל)באמצעות רוקח מקומי שהוזמן על ידי רקיט בנקיזר תרופותלא ידוע 
   <חזק>ציוד
מלקחיים לרקמות סטודנטים - 1x2 שיניים 12 ס"מכלי מדע עדין (FST)91121-12 
מלקחיים דפוס סטנדרטי לתלמידFST91100-12 
מספרייםמאיו FST14010-15 
2X מלקחיים של SemkenFST11008-13 
מספריים איריס סטודנטיתFST91460-11 
מחזיק מחט אולסן-הגרFST12002-14 

מקורות

  1. AS, G. o, Chertow, G. M., Fan, D., McCulloch, C. E., Hsu, C. Y. Chronic kidney disease and the risks of death, cardiovascular events, and hospitalization. N. Engl. J. Med. 351 (13), 1296-1305 (2004).
  2. Fleck, C., Appenroth, D., et al. Suitability of 5/6 nephrectomy (5/6NX) for the induction of interstitial renal fibrosis in rats--influence of sex, strain, and surgical procedure. Exp. Toxicol. Pathol. 57 (3), 195-205 (2006).
  3. Griffin, K. A., Picken, M. M., Churchill, M., Churchill, P., Bidani, A. K. Functional and structural correlates of glomerulosclerosis after renal mass reduction in the rat. J. Am. Soc. Nephrol. 11 (3), 497-506 (2000).
  4. Kang, D. H., Kanellis, J., et al. Role of the microvascular endothelium in progressive renal disease. J. Am. Soc. Nephrol. 13 (3), 806-816 (2002).
  5. Baylis, C. Nitric oxide synthase derangements and hypertension in kidney disease. Curr. Opin. Nephrol. Hypertens. 21 (1), 1-6 (2012).
  6. Bongartz, L. G., Braam, B., et al. Transient nitric oxide reduction induces permanent cardiac systolic dysfunction and worsens kidney damage in rats with chronic kidney disease. Am. J. Physiol. Regul. Integr. Comp. Physiol. 298 (3), 815-823 (2010).
  7. Fujihara, C. K., De N, G., Zatz, R. Chronic nitric oxide synthase inhibition aggravates glomerular injury in rats with subtotal nephrectomy. J. Am. Soc. Nephrol. 5 (7), 1498-1507 (1995).
  8. Fujihara, C. K., Sena, C. R., Malheiros, D. M., Mattar, A. L., Zatz, R. Short-term nitric oxide inhibition induces progressive nephropathy after regression of initial renal injury. Am. J. Physiol. Renal Physiol. 290 (3), F632-F640 (2006).
  9. Dikow, R., Kihm, L. P., et al. Increased infarct size in uremic rats: reduced ischemia tolerance? J. Am. Soc. Nephrol. 15 (6), 1530-1536 (2004).
  10. Elrashidy, R. A., Asker, M. E., Mohamed, H. E. Pioglitazone attenuates cardiac fibrosis and hypertrophy in a rat model of diabetic nephropathy. J. Cardiovasc. Pharmacol. Ther. 17 (3), 324-333 (2012).
  11. Haylor, J., Schroeder, J., et al. Skin gadolinium following use of MR contrast agents in a rat model of nephrogenic systemic fibrosis. Radiology. 263 (1), 107-116 (2012).
  12. Moriguchi, Y., Yogo, K., et al. Left ventricular hypertrophy is associated with inflammation in sodium loaded subtotal nephrectomized rats. Biomed. Res. 32 (2), 83-90 (2011).
  13. van Koppen, A., Joles, J. A., et al. Healthy bone marrow cells reduce progression of kidney failure better than CKD bone marrow cells in rats with established chronic kidney disease. Cell Transplant. , (2012).
  14. Baylis, C., Corman, B. The aging kidney: insights from experimental studies. J. Am. Soc. Nephrol. 9 (4), 699-709 (1998).
  15. Szabo, A. J., Muller, V., Chen, G. F., Samsell, L. J., Erdely, A., Baylis, C. Nephron number determines susceptibility to renal mass reduction-induced CKD in Lewis and Fisher 344 rats: implications for development of experimentally induced chronic allograft nephropathy. Nephrol. Dial Transplant. 23 (8), 2492-2495 (2008).
  16. Darling, I. M., Morris, M. E. Evaluation of "true" creatinine clearance in rats reveals extensive renal secretion. Pharm. Res. 8 (10), 1318-1322 (1991).
  17. Levey, A. S. Measurement of renal function in chronic renal disease. Kidney Int. 38 (1), 167-184 (1990).
  18. Myers, G. L., Miller, W. G., et al. Recommendations for improving serum creatinine measurement: a report from the Laboratory Working Group of the National Kidney Disease Education Program. Clin. Chem. 52 (1), 5-18 (2006).
  19. Hostetter, T. H., Meyer, T. W. The development of clearance methods for measurement of glomerular filtration and tubular reabsorption. Am. J. Physiol. Renal Physiol. 287 (5), F868-F870 (2004).
  20. Koeners, M. P., Racasan, S., Koomans, H. A., Joles, J. A., Braam, B. Nitric oxide, superoxide and renal blood flow autoregulation in SHR after perinatal L-arginine and antioxidants. Acta. Physiol. (Oxf). 190 (4), 329-338 (2007).
  21. van den Brandt, J., Wang, D., Kwon, S. H., Heinkelein, M., Reichardt, H. M. Lentivirally generated eGFP-transgenic rats allow efficient cell tracking in vivo. Genesis. 39 (2), 94-99 (2004).
  22. Kreutz, R., Kovacevic, L., Schulz, A., Rothermund, L., Ketteler, M., Paul, M. Effect of high NaCl diet on spontaneous hypertension in a genetic rat model with reduced nephron number. J. Hypertens. 18 (6), 777-782 (2000).
  23. Liu, Z. C., Chow, K. M., Chang, T. M. Evaluation of two protocols of uremic rat model: partial nephrectomy and. 25 (6), 935-943 (2003).
  24. Griffin, K. A., Picken, M., Bidani, A. K. Method of renal mass reduction is a critical modulator of subsequent hypertension and glomerular injury. J. Am. Soc. Nephrol. 4 (12), 2023-2031 (1994).
  25. Meyer, F., Ioshii, S. O., et al. Laparoscopic partial nephrectomy in rats. Acta. Cir. Bras. 22 (2), 152-156 (2007).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

PAH

מאמרים קשורים