הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

קביעת תעריף הובלת xenobiotics ו ננו מעבר לשליה באמצעות

17.1K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/50401

⸱

18 ביוני 2013

 ,  ,  ,  , 
1Department of Obstetrics, Perinatal Pharmacology, University Hospital Zurich, 2Laboratory for Materials - Biology Interactions, EMPA Swiss Federal Laboratories for Materials Testing and Research, 3Graduate School for Cellular and Biomedical Sciences, University of Bern

במאמר זה

סיכום

לשעבר vivo מודל זלוף שליה אנושי הסירקולציה המחודשת כפול יכול לשמש כדי לחקור את העברת xenobiotics ו חלקיקים ברחבי שליית האדם. בפרוטוקול וידאו זה אנו מתארים את הציוד וטכניקות הנדרשות לביצוע מוצלח של זלוף שליה.

תקציר

לפני עשרות שנים שליית האדם נחשב מחסום בלתי חדיר בין האם והעובר. עם זאת, הגילוי של מומים מולדים-Induced תלידומיד ומחקרים רבים מאוחר יותר לאחר מכן הוכיח את ההפך. היום כמה xenobiotics מזיק כמו ניקוטין, הרואין, מתדון או תרופות, כמו גם מזהמים סביבתיים תואר להתגבר על המכשול הזה. עם השימוש הגובר של ננוטכנולוגיה, השלייה עשויה לבוא במגע עם חלקיקי רומן או בטעות או במכוון באמצעות חשיפה במקרה של יישומי nanomedical פוטנציאליים. נתונים מניסויים בבעלי החיים לא ניתן להסיק לבני אדם, כי השליה היא האיבר של היונקים מינים הספציפיים ביותר 1. לכן, vivo לשעבר זלוף שליה אנושי הסירקולציה המחודשת כפול, שפותח על ידי Panigel et al. בשינה 1967 2 ורציפות שונה על ידי שניידר ואח'. בשנת 1972 3, יכול לשמש כמודל לא מצויןo ללמוד את העברת xenobiotics או חלקיקים.

כאן, אנו מתמקדים כפול vivo לשעבר הסירקולציה המחודשת פרוטוקול זלוף שליה אנושי ופיתוח נוסף שלה לרכישת תוצאות לשחזור.

Placentae התקבלו לאחר הסכמה מדעת מהאמהות מהריונות טווח מסובכים שעברו לידה בניתוח קיסרית. כלי העובריים ואימהיים של טבורית השלמה היו cannulated וperfused לפחות במשך חמש שעות. כמודל חלקיקי חלקיקי פוליסטירן שכותרתו fluorescently עם גדלים של 80 ו -500 ננומטר בקוטר נוספו למעגל האימהי. ה -80 ננומטר החלקיקים הצליחו לחצות את מחסום השליה ולספק דוגמה מושלמת לחומר אשר מועבר על פני השליה לעובר ואילו 500 ננומטר החלקיקים נשמרו ברקמת השליה או מעגל אימהי. מודל זלוף השליה לשעבר vivo האנושי הוא אחד מכמה מודלים המספקים מידע אמין עלהתנהגות ההובלה של xenobiotics במחסום רקמה חשוב, אשר מספק נתונים רלוונטיים לניבוי וקליניים.

מבוא

השליה היא איבר מורכב האחראית על חילופי חמצן, פחמן דו חמצני, חומרים מזינים וחומרי פסולת ובו בזמן מסוגל לשמור על שני המעגלים של האם והעובר הגדל מופרד אחד מהשני בדם. בנוסף, הוא מונע דחייה של הילד על ידי מערכת החיסון האימהית ומפריש הורמונים כדי לשמור על הריון. המכשול הסלולרי נוצר על ידי תאי cytotrophoblast שהפתיל וליצור syncytium אמיתי בלי קרום תא לרוחב 4,5. כל השליה מאורגנת בכמה פסיגים, המכילים עץ אחד villous עוברי ומייצגים יחידה תפקודית אחת מהשליה.

המחקר של תפקוד מחסום השליה הוגבר עם הגילוי של מומים המושרה התלידומיד בשנתי ה -1960. מסיבות מובנות לא ניתן לבצע מחקרי טרנסלוקציה עם נשים בהריון. כתוצאה מכך, מודלים חלופיים שונים פותחו 6,7 . המודל הרלוונטי המבטיח ביותר וכנראה הקליני ביותר הוא מודל vivo לשעבר אנושי השליה זלוף שפותח על ידי Panigel ועמיתים לעבודה 2,3.

נשים רבות נחשפות לxenobiotics שונה כגון תרופות או מזהמים סביבתיים במהלך ההריון שלהם 8. לחלק מתרופות שכבר מנוהלות באופן קבוע במהלך הריון, במחקרי vivo יכול להתבצע על ידי השוואה של ריכוז הדם האימהי עם זה בדם של חבל טבור. עם זאת, בדרך כלל יש מידע מוגבל בלבד על הפרמקוקינטיקה ו- דינמיקה בעובר וteratogenicity של חומרים אלה.

לדוגמא אופיאטים כמו הרואין לחצות בקלות את מחסום השליה ויכול להוביל להגבלת צמיחה תוך רחמי, לידה מוקדמת או הפלה ספונטנית 9,10. לכן, במקרה של התנזרות חסרה בזמן הריון טיפול בתחליפי מתדון עם מומלץ. לשעברמודל זלוף שליה אנושי vivo חשף כי העברת מתדון למחזור הדם של העובר היא 11 זניחים, שקושר היטב עם הדם האימהי ליחס מחושב דם טבורי הריכוז לאחר לידת 12.

הננוטכנולוגיה היא תחום צומח ובמיוחד בתחום הרפואה. לכן, באופן טבעי מתחת לקנס (<2.5 מיקרומטר קוטר) וחלקיקי ultrafine (<0.1 מיקרומטר קוטר) בעשן של שריפות יער, התפרצויות הרי געש ואבק במדבר, החשיפה לננו מהונדס (ממד אחד לפחות <0.1 מיקרומטר 13 ) הולך וגדל. זה העלה שאלות לגבי הפוטנציאל של ננו טוקסיקולוגי מהונדס. למרות שאין סכנה לבני אדם ניתן יהיה להוכיח זאת, יש מחקרים ניסיוניים עיקריים מצביעים על כך שחלקיקים מהונדסים יכולים לגרום לתגובות ביולוגיות שליליות מובילות לתוצאות toxicological 14. לאחרונה, חלק מהמחקרים מצביעים על כך שחשיפה טרום לידתי כדיזיהום אוויר קשור לצורך גבוה יותר בדרכי הנשימה ודלקת בדרכי נשימה בתינוקות ובילדים 15,16. בנוסף, חלקיקים קטנים עשויים לשמש כנשאים תרופות לטיפול או לעובר או לאם באופן ספציפי. לכן, הוא הופך להיות ברור כי מחקרים מקיפים של xenobiotics או ננו שונים וביכולתם לחצות את מחסום השליה נדרשים. סקירה בפועל על המחקרים השוטפים על חדירות שליה לננו המהונדסים מסוכמים במנזס et al. 2011 17 וBuerki-Thurnherr et al. 2012 7.

הכפול vivo לשעבר הסירקולציה המחודשת מודל זלוף שליה אנושי מספק מערכת מבוקרת ואמינה לחקר התחבורה השליה של אנדוגני השונים ותרכובות אקסוגניים 3,11,12,18,19 ומגוון רחב של פונקציות אחרות של השליה כמו מנגנונים אחראים ל התפתחות של מצבים פתולוגיים כמו רעלת הריון 20-22. בפרוטוקול זה אנו מתמקדים בעיקר להגדיר, טיפול ושיטה המאפשר מחקר של הצטברות, תופעות ושיעורי טרנסלוקציה של מערך רחב של xenobiotics או חלקיקים.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

1. הכנת מערכת זלוף

  1. להגדיר את מערכת זלוף בהיקף של אמבט מים, חדר זלוף, בשתי עמודות עבור חמצון, שתי משאבות peristaltic, שתי מלכודות בועה, שני תנורי זרימה וחיישן לחץ אחד (איור 1). רכיבים אלה להתחבר עם קטעי צינורות מורכבים מחומרי כלוריד סיליקון ופוליוויניל על פי התכנית באיור 2. סוף סוף יש שני מעגלים המייצגים את המעגל העוברי ואימהי, בהתאמה.
  2. הפעל את האמבטיה במים, זרימה ואת תנורי חימום לתא זלוף. הטמפרטורה צריכה להיות 37 מעלות צלזיוס
  3. לחמם את מדיום זלוף (NCTC-135 מדיום תרבית רקמת דילול 01:02 עם החיץ של ארל (6.8 גר '/ L נתרן כלורי, אשלגן כלורי 0.4 גר' / ל ', 0.14 גר' / ל 'מונוסודיום פוספט, מגנזיום סולפט 0.2 גר' / ל ', 0.2 גר' / סידן כלוריד L, 2 גרם גלוקוז / L) בתוספת גלוקוז (ז 1 / L), dextran 40 (10 גר '/ ל'), אלבומין בסרום השור (10 גר '/ L), הפרין נתרן (2,500 IU / L), amoxicilline (250 מ"ג / ליטר) וסודיום ביקרבונט (2.2 גר '/ ל'); pH 7.4) באמבט המים.
  4. רצף לשטוף את מערכות עורקים של המעגל העוברי ואימהי עם מיליליטר מים מזוקקים 200), ב) 50 הידרוקסיד מיליליטר 1% נתרן, ג) 1% חומצה זרחתית ו-D) שוב מים מזוקקים 200 מ"ל (קצב זרימה: 15 - 20 מ"ל / דקה).
  5. חבר את הצינורית העוברית (O 1.2 מ"מ; מחט קהה צריכה להיות מחובר לסט עירוי מחט מכונף שונה) לצינורות דם העוברי.
  6. שוטפים את מערכות עורקים של המעגל העוברי ואימהי עם מדיום זלוף עד שכל הצינורות מכילים בינוניים (קצב זרימה: מ"ל / דקה 15-20). במהלך שלב זה למלא את מלכודות הבועה ולהסיר את כל בועות במורד הזרם של המלכודת. אז להפסיק את המשאבות. זה באמת חשוב כי צינורות העורקים מביא תמיד חופשיים של בועות, אחרת אחרי cannulation במיוחד את כלי העובר העדינים יכולים להיקרע.
  7. הפעל את זרימת הגז. המעגל האימהי הוא מחומץ wi5% דו תחמוצת הפחמן, וה 95% אוויר סינטטי ומעגל העוברי עם 5% פחמן דו חמצני ו 95% חנקן.
  8. התחל את ההקלטה של ​​חיישן הלחץ.

2. Cannulating השליה

  1. השג placentae ללא פגע מהריונות מסובכים טווח לאחר ניתוח קיסרי ראשוני. יש הסכמה בכתב שיינתן (הושג במקרה של המחקרים שלנו) על ידי אמהות לפני הלידה ויש המחקר שיאושר על ידי ועדת האתיקה המקומית (שהיה במקרה במחקרים שלנו). שליטה חזותית ראשונה צריך להיעשות על ידי מיילדות כדי להבטיח שליה בריאה ושלמה.
  2. Cannulation של השליה הוא שלב קריטי! במהלך זלוף כל שיבוש קטן ברקמות יכול להוביל לדליפה בין מחזור הדם האימהי ועוברי. יש לשליה להתקבל תוך 30 דקות לאחר לידה.
  3. בחר טבורית ללא פגע באזור השולי של השליה ללא הפרעות נראות לעין בצד האימהי. בצלחת כוריוני,לקשור את שני הענפים הקשורים של עורק טבור וריד במעלה הזרם לצד cannulation מאוחר יותר (לכיוון חבל הטבור) על ידי שימוש בחומר תפר כירורגי. הפוך תמיד שני קשרים.
  4. Cannulate העורק העוברי הראשונה. עורקי השליה העובריים הם תמיד קטנים יותר ודקים יותר מהוורידים.
  5. הפוך תפר סביב העורק העוברי, אבל לא לקשור אותו באופן מיידי. החזק את הכלי עם מלקחיים, לחתוך את הכלי בזהירות ולשים את הצינורית הקטנה (מ"מ Ø 1.2) בעורק. ואז לקשור את התפר (שני קשרים).
  6. להמשיך עם הווריד העוברי באותו אופן, אלא להשתמש בצינורית גדולה יותר (O 1.5-1.8 מ"מ; מחט קהה צריכה להיות מחוברת לסט עירוי מחט מכונף שונה).
  7. הפעל את משאבת העובר (2 מ"ל / דקה). אם אין נזילה נראית לעין ודם נובע מצינורית הווריד העוברית, להגביר את הזרימה באיטיות עד 4 מ"ל / דקה. שימו לב ללחץ בעורק העובר, זה לא יעלה על 70 מ"מ כספית. אם דולף החוצה נוזל בעובר או בת זוגrnal צינורית לתקן אותם עם תפר אחר.
  8. מניחים את השליה על בעל הרקמה העוברי עם הצד ולמשוך את קרום השליה ורקמות על הקוצים. בסופו של טבורית perfused צריכה להיות באמצע החור בבעל הרקמות.
  9. לייצב את החלק שבו רק הקרום מחזיק את השליה עם קרום סיליקון (1 מ"מ O) או לחלופין שתי חתיכות parafilm.
  10. להרכיב את בעל הרקמה השלם, להדק את הברגים ולחתוך את הרקמה העילית. שים לב שהוורידים והעורקים cannulae לא צבטו אלא שכב בתעלות הקטנות של בעל הרקמה.
  11. סובב את בעל הרקמה הפוך, הכניס אותו לתוך תא זלוף ולהוסיף את הכיסוי. עכשיו, בצד האימהי צריך להיות בחלק העליון. בדקו תמיד אם המעגל העוברי עדיין לא נפגע ובינוני זורם מצינור הווריד העוברי.
  12. הפעל את המשאבה האימהית (12 מ"ל / דקה). להציג את השלושה הבוטה cannulae (O 0.8 מ"מ) בשעה הסוף הדואר של צינור העורקים האימהי אל תוך חלל intervillous על ידי חדירת צלחת decidual. כדי לחזור perfusate למעגל האימהי לשים צינור ניקוז ורידים כאחד שזה קשור גם עם המשאבה האימהית למיקום הנמוך ביותר בחלקו העליון של תא זלוף.
  13. חבר את הצינורית לווריד העוברית וריד הצינור העוברי.

3. ביצוע השלב טרום וניסויית של זלוף

  1. כדי לאפשר לרקמות להתאושש מתקופת איסכמי לאחר לידה וכדי לשטוף את הדם בחלל intervillous, שלב טרום פתיחה של 20 דקות היא הכרחית. זה אומר וריד האימהי ועוברי לא מוביל בחזרה למאגר המכיל עורקים בינוניים זלוף. לאסוף את יצוא הוורידים העוברי ואימהי בבקבוק וזורקים אותו לאחר השלב טרום.
  2. על מנת להעריך את היושרה של זלוף לבצע עוד לפני שלב של 20 דקות, אבל במעגל סגור. השתמש בשני מאגרים נפרדים עם מדיום זלוףלמעגל העוברי ואימהי ולסגור המעגלים על ידי מוביל יצוא הוורידים העוברי בחזרה במאגר העוברי ויצוא חזרה ורידים האימהי במאגר האימהי.
  3. לצורך ניסוי זלוף העיקרי להכין שתי צלוחיות עם 120 מ"ל זלוף בינוני (אחד לאחד האימהית והעוברי למאגר). הוסף 14 C-antipyrine radiolabeled (4 NCI / מ"ל; משמש כביקורת חיובית; זהירות: חומר רדיואקטיבי) וxenobiotic או חלקיקים שכותרתו fluorescently שאחד רוצה לנתח למאגר האימהי. מערבבים היטב perfusate האימהי.
  4. התחל את הניסוי על ידי החלפת מדיום זלוף הטהור עם שתי צלוחיות סיים (מאגרים עובריים ואימהיים). סגור את המעגלים על ידי מוביל יצוא חזרה ורידים העוברי במאגר העוברי ויצוא חזרה ורידים האימהי במאגר האימהי.
  5. המשך לזלוף 6 שעות ולקחת דגימות באופן קבוע. תמיד resuspend הבינוני בעובר ואימהימאגר לפני הנסיגה.
  6. לשלוט בלחץ בעורק העובר (לא תעלה על 70 מ"מ כספית), pH בשני המעגלים (צריך להיות בטווח פיסיולוגי 7.2-7.4) והנפח של שני מאגרים (אובדן נפח עוברי לא יעלה על 4 מ"ל / שעה) במהלך זלוף . אם יש צורך להתאים את ערכי ה-pH או באמצעות חומצה הידרוכלורית או נתרן הידרוקסידי.
  7. אם אובדן הנפח במאגר העובר עולה על 4 מ"ל / שעה יש דליפה ברקמה וצריך לעצור את טפטוף. שיעור ההצלחה של זלוף ל6 שעות ללא דליפה הוא כ 15-20%.
  8. לעצור את טפטוף לאחר 6 שעות. לכבות את המשאבות, אמבט מים, תנורי חימום זרימה וזרימת גז.
  9. הסר את השליה מבעל הרקמות, לחתוך טבורית perfused (בהירה יותר מרקמות unperfused) ולשקול אותו.
  10. לקחת דגימות מunperfused (חלק מהשליה שנחתכה בתחילת; יכול להיות כבר נלקח במהלך השלב טרום) ורקמות perfused (כל גרם על 1) ולאחסן אותם ב -20 מעלות צלזיוסעד הומוגניזציה או בחנקן נוזלי לניתוח מאוחר יותר. תקן את דגימת רקמות אחרת בפורמלין 4% להערכת histopathological. הדגימות צריכה לכלול את כל השכבות של השליה.
  11. יש לנקות את הצינורות לאחר זלוף על ידי שטיפה ברציפות מערכות העורקים של המעגל העוברי ואימהי עם מיליליטר מים מזוקקים 200), ב) 50 הידרוקסיד מיליליטר 1% נתרן, ג) 1% חומצה זרחתית 50 מ"ל וד) שוב מים מזוקקים 200 מ"ל (זרימה: מ"ל / דקה 15-20).

הליך העבודה השלם של ניסוי זלוף השליה מתואר באיור 3.

4. ניתוח דוגמאות

  1. צנטריפוגה דגימות perfusate עבור 10 דקות ב 800 XG לפני ניתוח כדי להסיר אריתרוציטים שיורית. קח את supernatant לניתוח נוסף. ניתן להשאיר את דגימות לילה בשעה 4 ° C. לניתוח של ייצור הלפטין וhCG ניתן לאחסן את הדגימות ב -20 ° C.
  2. כדי להעריך את החדירות שלשליה לנתח C-14 antipyrine ידי נצנץ נוזלי. מערבבים 300 μl של הדגימות עובריות ואימהיות עם קוקטייל 3 מיליליטר נצנץ ומדד במשך 5 דקות בדלפק בטא.
  3. על מנת להעריך את ההעברה של חלקיקי הניאון או xenobiotic עניין לקרוא את הקרינה בעירור 485 ננומטר ופליטת ננומטר 528 בקורא microplate (אורכי גל שצוין הם לניתוח של התווית הירוקה הצהובה שהיינו לחלקיקים).
  4. כדי לקבוע את הכדאיות של רקמת השליה במהלך זלוף מדד צריכת גלוקוז וייצור חומצת החלב במעגל העוברי ואימהי עם מערכת גז דם אוטומטית. בנוסף, להעריך את הייצור של ההורמונים האנושי choriongonadotropin השליה (hCG) ולפטין בדגימות הרקמה הומוגני ואת perfusates ידי assay immunosorbent אנזים צמוד (ELISA).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

איור 4 א מציג את פרופילי הטפטוף של חלקיקי פוליסטירן קטנים (80 ננומטר) שהובלו על פני השליה בהשוואה לחלקיקי פוליסטירן גדולים יותר (500 ננומטר), אשר לא הועברו לתא העוברי. כל נקודת נתונים מייצגת את ריכוז החלקיקים הממוצע לנקודת הזמן נתון של לפחות 3 ניסויים בלתי תלויים. לחלקיקי פוליסטירן העברת השליה היא 19 גודל תלוי. לאחר 3 שעות של זלוף השליה כבר 20-30% מחלקיקי פוליסטירן 80 ננומטר הוסיפו בתחילה מהאימהי הועברו למעגל העוברי, ואילו 500 החלקיקים פוליסטירן ננומטר ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

מתחת לזלוף הסירקולציה המחודשת הכפול הראה כאן, ישנם מספר תצורות ניסיוניות אחרות אפשריות, תלויות בשאלה אשר צריכה להיות ענה. הזלפות שליה במיוחד פתוחות משמשות בדרך כלל כדי להעריך את אישור התרופה בריכוז המצב יציב 3. זלוף הסירקולציה המחודשת ההגדרה יכול להיות מיושם גם כדי לאשר את ההעברה פעילה של חומרים אנדוגניים או אקסוגני. לגישה זו את אותו הריכוז של xenobiotic יש להוסיף להאם וזרימת הדם העוברית. להניח כי קיימת תחבורה פעילה נגד מפל הריכוזים, הצטברות של חומר בדיקה בכל אחד משני ה...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

החוקרים מצהירים כי אין להם אינטרסים כלכליים מתחרים.

תודות

עבודה זו נתמכת כלכלית על ידי הקרן הלאומית שוויצרי, (תכנית מפד"ל 64, אין להעניק 4064-131,232).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
NCTC-135 בינוניICN Biomedicals, Inc.10-911-22Cבמדיום 199 מסיגמא (M3769)
נתרן כלורי (NaCl)סיגמא-אולדריץ', פלוקה71381
אשלגן כלורי (KCl)בית מרקחתאפשרי גם: סיגמא (P9541)
מונוסודיום פוספט (NaH2PO4 · H2O)Merck106346
מגנזיום גופרתי (MgSO4 · H2O)Sigma-Aldrich, Fluka63139
סידן כלורי (CaCl, נטול מים)Merck102388
D(+) גלוקוז (נטול מים)Sigma-Aldrich, Fluka49138
נתרן ביקרבונט (NaHCO3)Merck106329
דקסטרן מ-Leuconostoc spp.Sigma-Aldrich31389
אלבומין בסרום בקר (BSA)ApplichemA1391
אמוקסיצילין (קלמוקסיל)GlaxoSmithKline AG2021101A
נתרן הפריןב. בראון רפואי AG3511014
נתרן הידוקסיד (NaOH) כדוריMerck106498זהירות: קורוזיבי
חומצה אורתו-זרחתית 85% (H<תת>3PO4)Merck100573זהירות: תערובת גזים אימהית קורוזיבית
: 95% אוויר סינטטי, 5% CO2PanGas AG
תערובת גז עוברי: 95% N2, 5% CO2PanGas AG
אנטיפירין (N-methyl-14C)American Radiolabeled Chemicals, Inc.ARC 0108-50 ו-#956; זהירות: חומר רדיואקטיבי (פעילות ספציפית: 55mCi/mmol)
קוקטייל נצנוץ (IrgaSafe Plus)Zinsser Analytic GmbH1003100
חלקיקי פוליסטירן 80 ננומטרPolyscience, Inc.17150
חלקיקי פוליסטירן 500 ננומטרPolyscience, Inc.17152
<חזק>ציוד
אמבט מיםVWR462-7001
תרמוסטטIKA-Werke GmbH Co. KG3164000
משאבות פריסטלטיותIsmatecISM 833
מלכודות בועות (זכוכית)UNI-GLAS Laborbedarf
חיישן לחץ + תוכנה לאנליזותMSR Electronics GmbH145B5
מחשב ניידHewlett Packard
מחליף גז מיניאטורי מחמצןמערכות חי מכשורLSI-OXR
Tygon Tube (ID: 1.6 מ"מ; OD: 4.8 מ"מ)IsmatecMF0028
למשאבות (PharMed BPT; ID: 1.52 מ"מ)IsmatecSC0744
צינורית קהה (0.8 מ"מ)מרכז רפואי פולימד03.592.81
צינורית קהה (1.2 מ"מ)מרכז רפואי פולימד03.592.90
צינורית קהה (1.5 מ"מ)מרכז רפואי פולימד03.592.94
צינורית קהה (1.8 מ"מ)מרכז רפואי פולימד03.952.82
ParafilmVWR291-1212
תא זלוף עם מחזיק רקמות (פרספקס)מחלקהציוד דומה זמין מ-Hemotek Limited, בריטניה
חומר תפר כירורגי (PremiCron)B. Braun Medical AGC0026005
סט עירוי מחט מכונפת (21G Butterfly)Hospira, Inc.ASN 2102
תא עצירה רב כיווני (דיסקופיקס C-3)B. Braun Medical AG16494C
מספריים כירורגייםB. Braun Medical AGBC304R
מספריים לניתוחB. Braun Medical AGBC162R
מחזיק מחטB. Braun Medical AGBM200R
מלקחיים לניתוח,B. Braun Medical AGBD215R
מערכת גזי דם אוטומטית רדיומטר רפואי ApSABL800 FLEX
קורא מיקרו-פלטות רב מצביםBioTekSynergy HT
מנתח נצנוץ נוזליGMI, Inc.Packard Tri-Carb 2200
צינורות נצנוץ 5.5 מ"לZinsser Analytic GmbH3020001
הומוגנייזר רקמותOMNI, Inc.מד pH TH-220
+ אלקטרודהVWR662-2779
ניתן להחליף את בית חולים מחמם זרימה UNI-GLAS Laborbedarf צינורות טכנית פנימית ,

מקורות

  1. Ala-Kokko, T. I., Myllynen, P., Vahakangas, K. Ex vivo perfusion of the human placental cotyledon: implications for anesthetic pharmacology. Int. J. Obstet. Anesth. 9, 26-38 (2000).
  2. Panigel, M., Pascaud, M., Brun, J. L. Radioangiographic study of circulation in the villi and intervillous space of isolated human placental cotyledon kept viable by perfusion. J. Physiol. (Paris). 59, 277(1967).
  3. Schneider, H., Panigel, M., Dancis, J. Transfer across the perfused human placenta of antipyrine, sodium and leucine. Am. J. Obstet. Gynecol. 114, 822-828 (1972).
  4. Enders, A. C., Blankenship, T. N. Comparative placental structure. Adv. Drug Deliv. Rev. 38, 3-15 (1999).
  5. Takata, K., Hirano, H. Mechanism of glucose transport across the human and rat placental barrier: a review. Microsc. Res. Tech. 38, 145-152 (1997).
  6. Saunders, M. Transplacental transport of nanomaterials. Wiley Interdiscip. Rev. Nanomed. Nanobiotechnol. 1, 671-684 (2009).
  7. Buerki-Thurnherr, T., von Mandach, U., Wick, P. Knocking at the door of the unborn child: engineered nanoparticles at the human placental barrier. Swiss Med. Wkly. 142, w13559(2012).
  8. Gendron, M. P., Martin, B., Oraichi, D., Berard, A. Health care providers' requests to Teratogen Information Services on medication use during pregnancy and lactation. Eur. J. Clin. Pharmacol. 65, 523-531 (2009).
  9. Burns, L., Mattick, R. P., Lim, K., Wallace, C. Methadone in pregnancy: treatment retention and neonatal outcomes. Addiction. 102, 264-270 (2007).
  10. von Mandach, U. Drug use in pregnancy. Ther. Umsch. 62, 29-35 (2005).
  11. Malek, A., Obrist, C., Wenzinger, S., von Mandach, U. The impact of cocaine and heroin on the placental transfer of methadone. Reprod. Biol. Endocrinol. 7, 61(2009).
  12. Hutson, J. R., Garcia-Bournissen, F., Davis, A., Koren, G. The human placental perfusion model: a systematic review and development of a model to predict in vivo transfer of therapeutic drugs. Clin. Pharmacol. Ther. 90, 67-76 (2011).
  13. International Organization for Standardization (ISO). Technical Specification (ISO/TS) 27687. Nanotechnologies – Terminology and definitions for nano-objects – Nanoparticles, nanofibre and nanoplate. , (2008).
  14. Pietroiusti, A. Health implications of engineered nanomaterials. Nanoscale. 4, 1231-1247 (2012).
  15. Latzin, P., Roosli, M., Huss, A., Kuehni, C. E., Frey, U. Air pollution during pregnancy and lung function in newborns: a birth cohort study. Eur. Respir. J. 33, 594-603 (2009).
  16. Lacasana, M., Esplugues, A., Ballester, F. Exposure to ambient air pollution and prenatal and early childhood health effects. Eur. J. Epidemiol. 20, 183-199 (2005).
  17. Menezes, V., Malek, A., Keelan, J. A. Nanoparticulate drug delivery in pregnancy: placental passage and fetal exposure. Curr. Pharm. Biotechnol. 12, 731-742 (2011).
  18. Muhlemann, K., Menegus, M. A., Miller, R. K. Cytomegalovirus in the perfused human term placenta in vitro. Placenta. 16, 367-373 (1995).
  19. Wick, P., et al. Barrier capacity of human placenta for nanosized materials. Environ. Health Perspect. 118, 432-436 (2010).
  20. Dancis, J. Why perfuse the human placenta. Contrib Gynecol. Obstet. 13, 1-4 (1985).
  21. May, K., et al. Perfusion of human placenta with hemoglobin introduces preeclampsia-like injuries that are prevented by alpha1-microglobulin. Placenta. 32, 323-332 (2011).
  22. Guller, S., et al. Protein composition of microparticles shed from human placenta during placental perfusion: Potential role in angiogenesis and fibrinolysis in preeclampsia. Placenta. 32, 63-69 (2011).
  23. Challier, J. C. Criteria for evaluating perfusion experiments and presentation of results. Contrib. Gynecol. Obstet. 13, 32-39 (1985).
  24. Kraemer, J., Klein, J., Lubetsky, A., Koren, G. Perfusion studies of glyburide transfer across the human placenta: implications for fetal safety. Am. J. Obstet. Gynecol. 195, 270-274 (2006).
  25. leal, J. K., et al. Modification of fetal plasma amino acid composition by placental amino acid exchangers in vitro. J. Physiol. 582, 871-882 (2007).
  26. athiesen, L., et al. Quality assessment of a placental perfusion protocol. Reprod. Toxicol. 30, 138-146 (2010).
  27. Myllynen, P., et al. Preliminary interlaboratory comparison of the ex vivo dual human placental perfusion system. Reprod Toxicol. 30, 94-102 (2010).
  28. Malek, A., Sager, R., Schneider, H. Maternal-fetal transport of immunoglobulin G and its subclasses during the third trimester of human pregnancy. Am. J. Reprod. Immunol. 32, 8-14 (1994).
  29. Prouillac, C., Lecoeur, S. The role of the placenta in fetal exposure to xenobiotics: importance of membrane transporters and human models for transfer studies. Drug Metab. Dispos. 38, 1623-1635 (2010).
  30. Poulsen, M. S., Rytting, E., Mose, T., Knudsen, L. E. Modeling placental transport: correlation of in vitro BeWo cell permeability and ex vivo human placental perfusion. Toxicol. In Vitro. 23, 1380-1386 (2009).
  31. Mathiesen, L., Rytting, E., Mose, T., Knudsen, L. E. Transport of benzo[alpha]pyrene in the dually perfused human placenta perfusion model: effect of albumin in the perfusion medium. Basic Clin. Pharmacol. Toxicol. 105, 181-187 (2009).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

גלה מאמרים נוספים

הסעה של קסנוביוטיקההעברה של ננוחלקיקיםשליה אנושיתמודל ex vivoמחסום שלייתיננוחלקיקי פוליסטירןהעברה מאם לעוברתא פרפוזיהדיפוזיה פסיבית
קביעת תעריף הובלת xenobiotics ו ננו מעבר לשליה באמצעות
צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.