אנו מתארים פרוטוקול כללי לin vivo מעקב תא באמצעות MRI במודל של עכברים עם תאי שכותרתו לשעבר vivo. פרוטוקול טיפוסי לתיוג תא, עיבוד רכישת תמונה וכימות כלול.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
במאמר זה
סיכום
תקציר
In vivo 19 F-MRI מאפשר מעקב תא כמותית ללא השימוש בקרינה מייננת. זוהי טכניקה לא פולשנית שיכול להיות מיושמת על בני אדם. כאן אנו מתארים פרוטוקול כללי לתיוג תא, הדמיה, ועיבוד תמונה. הטכניקה היא ישימה לסוגים שונים של תאים ומודלים של בעלי חיים, למרות שכאן אנחנו מתמקדים במודל של עכברים אופייני למעקב אחר תאי חיסון עכבריים. הנושאים החשובים ביותר לתיוג תא מתוארים, שהינם רלוונטיים לכל הדגמים. כמו כן, פרמטרים הדמיה מפתח מפורטים, אם כי הפרטים משתנים בהתאם למערכת ה-MRI וההתקנה בודדת. לבסוף, אנו כוללים פרוטוקול עיבוד תמונה לכימות. וריאציות לזה, ובחלקים אחרים של הפרוטוקול, נבחנים בסעיף הדיון. בהתבסס על הנוהל מפורט שתואר כאן, המשתמש יצטרך להתאים את הפרוטוקול לכל אחד מסוגי תאים מסוימים, תווית תא, מודל חיה, והתקנת הדמיה. שימו לב כי protocol גם יכול להיות מותאם לשימוש בבני אדם, כל עוד הגבלות קליניות הם נפגשו.
מבוא
במעקב תא vivo הוא חיוני לאופטימיזציה והניטור של תרופות תאיות 1. בשל האופי פולשני שלה, הדמיה מציעה הזדמנויות מצוינות כדי לפקח על תאים בגוף חי. הדמיית תהודה מגנטית (MRI) אינה תלויה בקרינה מייננת ומאפשרת הדמיה ברזולוציה מעולה ולעומת זאת רקמות רכות פנימיות. מעקב סלולרי המבוסס על MRI כבר בשימוש קליני לעקוב תאי דנדריטים בחולים מלנומה 2. MRI הקליני הקונבנציונלי מתבצע בגרעין H 1, הנמצא במים ניידים ברקמות. כמו כן ניתן לבצע בדיקת MRI על גרעינים פעילים אחרים, כגון 13 C, נ 19 ו23 Na. עם זאת, רק 19 F-MRI כבר מיושם בהצלחה בvivo מעקב תא כפי ש....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
הערה: כל הניסויים וההליכים כרוכים בבעלי חיים חייבים להתבצע בהתאם לקווים מנחים אתיים רלוונטיים ובקנה אחד עם טיפול בבעלי חיים סטנדרטי ודרישות הומניות.
1. תיוג תא (תקן לפרוטוקול עם Coincubation)
- הוספת 19 תווית F 8 לDCs בשלה בריכוז של 4 mg/10 6 תאים (ב2 בינוני מיליליטר). מערבולת בעדינות לתערובת.
- דגירה התאים עם התווית במשך 3 ימים לפני התבגרות וקציר DCS.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
כאן אנו מראים את התוצאות האופייניות לפרוטוקול של ההעברה 19 תאים שכותרתו-F ביות לבלוטות לימפה ניקוז. איור 2 מראה ספקטרום 19 F תמ"ג של 10 6 תאים שכותרתו באמצעות התייחסות TFA. התקנת ההדמיה בוצעה כפי שתוארה בפרוטוקול (איור 3). עבור vivo ההדמיה, השתמשנו התייחסות המורכבת מצילינדר אטום של אותה התווית המשמש לתאים ממוקמים בין רגליו של העכבר. תמונה מעובדת נציג מוצגת באיור 4. על ידי יישום הפרוטוקול מ.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
הפרוטוקול המתואר כאן מתאר את הנוהל הכללי לin vivo 19 מעקב תא F-MRI. למרות שיטת שיתוף דגירה שתוארה, ישנם מספר פרוטוקולים שונים לתיוג תאים עם סוכן F 19. עם זאת, שיתוף הדגירה משמשת לרוב ויכולה להיות מותאם לדוגמא עוד יותר על ידי תוספת של סוכני transfection 6. פרוטוקול תיוג תא בפועל יהיה תלוי בסוג התא. רק צעדי תיוג מפתח מתוארים בפרוטוקול כאן. באופן כללי, את התווית מוכנה והוסיפה לתאים לזמן שנבחר נע בין כמה שעות לכמה ימים. לבסוף, התאים י.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
יש המחברים אין ניגודי אינטרסים לחשוף.
תודות
ברצוננו להודות נדין Henn וארנד Heerschap לסיוע רב ערך שלהם. עבודה זו נתמכה על ידי המכון ההולנדי לרפואת רגנרטיבית (NIRM, FES0908), ENCITE האיחוד האירופי FP7 התכנית (HEALTH-F5-2,008-201,842) וTargetBraIn (HEALTH-F2-2012-279,017), מענק מקרן פולקסווגן ( I/83 443), ארגון הולנד למחקר מדעי (Veni 700.10.409 וVidi 917.76.363), ERC (מתקדם גרנט 269,019), ומרכז Radboud אוניברסיטת ניימיכן הרפואי (AGIKO-2008-2-4).
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| <חזק>ריאגנטים | |||
| PBS | סיגמא-אולדריץ' | MFCD00131855 | |
| TFA | סיגמא-אולדריץ' | 76-05-1 | |
| קטמין (קטבט) | פייזר | 778-551 | |
| קסילזין (רומפון) | באייר | QN05 cm92 | |
| משחת עיניים | Ophtosan | Produlab Pharma | 2702 |
| <חזק>שם החומר | |||
| סורק MRI | Bruker Biospec | ||
| ספקטרומטר NMR | Bruker Biospec |
מקורות
- Srinivas, M., et al. Imaging of cellular therapies. Adv. Drug Deliv. Rev. 62, 1080-1093 (2010).
- de Vries, I. J., et al. Magnetic resonance tracking of dendritic cells in melanoma patients for monitoring of cellular therapy. Nat. Biotechnol.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
