הריון גורם לשינויים משמעותיים בהרכב חומצות שומן של רקמות אימהיות. ניתן להשיג פרופילי שומנים בדם באמצעות גז כרומטוגרפיה כדי לאפשר זיהוי וכימות של חומצות שומן בכיתות שומנים בודדות בקרב חולדות קבלו תזונה שומן גבוה ונמוך שונות במהלך הריון.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
השימוש בגז כרומטוגרפיה לנתח הלחנה שינויים של חומצות שומן ברקמות חולדה כבד במהלך הריון
במאמר זה
סיכום
תקציר
גז כרומטוגרפיה (GC) היא שיטה רגישה מאוד המשמשת לזיהוי ולכמת את תכולת חומצות שומן של שומנים ברקמות, תאים ופלזמה / סרום, מניב תוצאות ברמת דיוק גבוהה ושחזור גבוה. במחקרים מטבוליים והתזונה GC מאפשר הערכה של שינויים בריכוז חומצות השומן הבאים התערבויות או במהלך שינויים במצב פיסיולוגי כגון הריון. מיצוי שלב מוצק (SPE) באמצעות aminopropyl מחסניות סיליקה מאפשר הפרדה של מעמדות שומנים בדם הגדולות, כולל triacylglycerols, פוספוליפידים שונים, ואסטרים כולסטריל (CE). GC בשילוב עם SPE שימש כדי לנתח את השינויים בהרכב חומצות שומן של שבריר CE בכבדים של חולדות בתולה והרות שקבלו תזונה שומן גבוהה ונמוכה שונות. ישנן השפעות אינטראקציה דיאטה / הריון משמעותיות על תכולת חומצות אומגה 3 ואומגה 6 וחומצות השומן של CE כבד, מצביעים על כך שנשים בהריון יש תגובה שונה לmanipulat התזונתייון ממה שראה אצל נקבות בתולה.
מבוא
גז כרומטוגרפיה (GC) היא טכניקה מבוססת היטב המשמשת לזיהוי ולכמת את השילוב של חומצות שומן לתוך בריכות שומנים בדם וקרומים תא 1,2 בתנאי תוספים או פיסיולוגיים כמו השמנה (ומחלות הקשורות כגון סוכרת) או הריון - 3 5. זה מתאים גם לניתוח הסוגים והכמויות של שומנים במזון. זה שימושי כאשר אפיון דיאטות ניסיוניות, כמו גם להבטיח כי תעשיית המזון עומדת בתקנות. לדוגמא, GC ניתן להשתמש כדי לאשר את זהותו וכמות של חומצות שומן בתוך מוצר כגון תוסף תזונה כדי להבטיח התיוג שהוא נכון ותקנות הם דבקו 6,7. ניתוח של חומצות שומן יכול לספק תובנות רבות ערך חילוף חומרים של שומנים בבריאות ובחוליים, את ההשפעה של שינוי תזונתי, ואת ההשפע....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
1. נהלי בעלי חיים
- כל העבודה של בעלי החיים צריכה להתבצע בהתאם לבעלי חיים בית המשרד (הליכים מדעיים) Act (1986).
- Mate חולדות Wistar בני 10 שבועות ישנים על ידי רבייה מונוגמיים, ולאשר את ההריון על ידי הופעתו של תקע נרתיק. להקליט זה כמו יום 1 של הריון, ולהתחיל בדיאטה ניסיונית. לנקבות בתולה, בית עכברוש אחד בנפרד, ולהתחיל בדיאטה ניסיונית.
- לאחר האכלת הדיאטות הניסיוניות ל20 ימים להרדים חולדות על ידי CO מחנק 2 ואחריו נקע בצוואר הרחם. <....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
ההצלחה של שיטה זו תלויה בביצוע הפרוטוקול מדויק ועל שימוש בממסים וריאגנטים נקיים על מנת להקטין 'רעש' וזיהום שיכול להופיע על הכרומתוגרמה. דגימות מזוהמות הן יותר מאתגר כדי לנתח, הפחתת הדיוק של השטח מתחת לעקומת החישובים. יש לקבל אם הפרוטוקול ואחריו בהצלחה הכרומתוגרמה עם פסגות סימטריות ברורות, מוגדרות היטב ועם רעשי רקע מינימאליים כפי שמודגם באיור 3. אם הזיהום התרחש הכרומתוגרמה תציג פסגות נוספות ולהציג פסגות אינן סימטריות (מוטות) כפי שמודגמת באיור 4.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
גז כרומטוגרפיה היא טכניקה מדויקת לשימוש לניתוח חומצות שומן, והשחזור הגבוה שלו ימצא לטכניקה זו מתאימה לניתוחים קליניים. עמודות GC מתאימות חייבים להיות בשימוש על מנת לאפשר זיהוי של חומצות שומן של עניין, עם עמודות זמינות שיש וריאציות בקוטביות של השלב נייח, אורך עמודה והקוטר פנימי. השימוש בעמודת נימי סיליקה התמזגו בשיטה זו של ניתוח מספק יציבות תרמית טובה ושחזור גבוה של פעמים שמירה בשל אדישותה משטח הגבוהה ורזולוציה טובה 8.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
המחברים מצהירים שום אינטרסים כלכליים מתחרים.
תודות
המחברים רוצים להכיר בתרומתם של Meritxell רומאו-נדאל למחקר החולדה.
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| מתנול | פישר סיינטיפיק | M/4056/17'CAUTION | ' אדי - HPLC |
| Grade Chloroform | Fisher Scientific | C/4966/17'CAUTION | ' אדי - HPLC Grade |
| BHT | Sigma- Aldrich | W218405'CAUTION' אדי אבק - | |
| NaCl | Sigma- Aldrich | S9888 | הקסאן |
| נטול מיםFisher Scientific | H/0406/17'CAUTION | ' Pomes - | |
| כוויות חומצה אצטית קרחונית | Sigma- Aldrich | 695084'זהירות' - 99.85% | |
| כוויות חומצה גופרתית | Sigma- Aldrich | 339741'זהירות' - 99.999% | |
| אשלגן פחמתי | Sigma- Aldrich | 209619 | 99% ACS בדרגת ריאגנט |
| אשלגן ביקרבונט | סיגמא- Aldrich | 237205 | 99.7% ACS בדרגת Reasgent |
| אתיל אצטט | פישר סיינטיפיק | 10204340'זהירות' אדי - 99+% GLC ספציפי | |
| טולואן | פישר סיינטיפיק T | /2300/15'זהירות | ' אדי |
| אתר דיאתיל סיגמא-אולדריץ | ' | 309966'זהירות' אדים | |
| צילינדר חנקן (ללא חמצן) BOC | 44-w | 'זהירות' גז דחוס - סכנת פיצוץ | |
| אמינופרופיל סיליקה SPE מחסניות | Agilent | 12102014 | מחסנית - מסת חרוזים 100 מ"ג |
| סיליקה ג'ל SPE קרטיג'ס | Agilent | 14102010 | מחסנית - מסת חרוזים 100 מ"ג |
| Seives מולקולרית | סיגמא- אולדריץ | 334324 | כדורים, AW-300, פיפטות פסטר מזכוכית 1.6 מ"מ |
| פישר סיינטיפיק | FB50251 |
מקורות
- Browning, L. M., et al. Incorporation of eicosapentaenoic and docosahexaenoic acids into lipid pools when given as supplements providing doses equivalent to typical intakes of oily fish. Am. J. Clin. Nutr. 96 (4), 748-758 (2012).
- Cao, J., Schwichtenberg, K. A., Hanson, N. Q., Tsai, M. Y.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
