הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

אחזור כירורגי, בידוד ו

11.1K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/51597

⸱

30 באפריל 2014

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Medical Microbiology, Immunology & Cell Biology, Southern Illinois University School of Medicine, 2Division of Orthopaedics and Rehabilitation, Department of Surgery, Southern Illinois University School of Medicine, 3Department of Electrical and Computer Engineering, Biomedical Engineering Program, Southern Illinois University Carbondale, 4University of Illinois at Springfield

במאמר זה

סיכום

עבור יישומים עתידיים כתיקון כדי לתקן דמעות חלקיות של הקדמית הצולבת הרצועה (ACL), תאי שמקורם ACL האנושי בודדו מרקמות שהושגו במהלך הליכים שיקומיים, הרחיבו במבחנה וגדלו על פיגומי רקמה מהונדסת. הידבקות ומורפולוגיה תאיות הייתה אז מבוצעים כדי לאשר התאמה ביולוגית על פני פיגום.

תקציר

הפגיעה ACL היא בעיה בדרך נתקלה באנשים פעילים. אפילו דמעות חלקיות של רצועה בברך להוביל תוך מפרק זה לליקויים ביומכניים הפוגעים בתפקוד ויציבות. אפשרויות הנוכחיות לטיפול בדמעות ACL החלקיים נעות בין ניהול שמרני, שמרני לאפשרויות כירורגיות מרובות, כגון: שינוי תרמי, תיקון יחיד צרור, שחזור מלא, ובנייה מחדש של החלק הפגום של רצועת הילידים. מחקרים מעטים, אם בכלל, הוכיחו בכל שיטה יחידה עבור ניהול להיות מעולה באופן עקבי, ובמקרים רבים חולים ממשיכים להפגין חוסר יציבות מתמשכת ומחלות רקע אחרות.

מטרתו של מחקר זה היא לזהות מקור תא פוטנציאל לניצול בפיתוח של תיקון רקמות מהונדסות שיכול להיות מיושם בתיקון של ACL קרוע באופן חלקי. פרוטוקול רומן פותח להרחבת התאים שמקורם patieלילות עוברים שחזור ACL. כדי לבודד את התאים, רקמות hACL טחונות שהושגו במהלך שחזור ACL היו מתעכל בפתרון Collagenase. הרחבה בוצעה באמצעות מדיום DMEM/F12 תוספת 10% בסרום שור העובר (FBS) ו -1% פניצילין / סטרפטומיצין (P / S). התאים אוחסנו לאחר מכן ב-80 º C או בחנקן נוזלי בהקפאה בינונית בהיקף של DMSO, FBS ובינוני ההתרחבות. לאחר הפשרה, תאי hACL נגזרים היו אז זורעים על פיגום רקמה מהונדסת, PLAGA (לקטית, חומצה גליקולית שיתוף פולי) וקלקר תרבות רקמות שליטה (TCPS). לאחר 7 ימים, SEM בוצע כדי להשוות הידבקות סלולרית לPLAGA לעומת TCPS השליטה. מורפולוגיה תאית הוערכה באמצעות מכתים immunofluorescence. SEM micrographs (סריקת אלקטרונים מיקרוסקופ), הוכיח כי תאים גדלו ודבק בשני משטחי PLAGA וTCPS והיו מחוברות על פני כל המשטחים ביום 7. מכתים Immunofluorescence הראה מורפולוגיים רגיל, שאינו לחוץדפוסי אל על שני המשטחים. טכניקה זו מבטיחה עבור יישומים בהתחדשות ACL ובנייה מחדש.

מבוא

הרצועות הצולבות הקדמית (ACL) היא רצועת התוך מפרקים נפוצות נפצעה בברך. כ 200,000 פציעות (ACL) מדווחות מדי שנה בארצות הברית. מעל 75% מהחולים חווים opt פציעת ACL לניתוח שחזור אורתופדי 1,2,3,4. התערבות כירורגית היא לעתים קרובות הצביעה בשל פוטנציאל ריפוי לקוי מיסודו 3. שחזור ACL נעשה בדרך כלל באמצעות autograft או גיד של שתל. Autograft ושתל מייצגים את תקן הזהב לשיקום כפי שהם מתגאים בשיעורי הצלחה גבוהים, ותיקון תפר ראשוני, אפשרות טיפול אחרת, הראה שיעורי כישלון של עד 94% 5,6,7.

דמעות חלקיות של ACL מייצגות 10% ל28% מכל דמעות ACL 8. במחקר פרוספקטיבי, נויס ואח'. ההערכה היא כי 50% מהחולים עם דמעות חלקיות משפיעים על יותר ממחצית ACL התקדמו כדי להשלים ספיקת ACL לאחר איטיפול אופרטיבי 9. מחקרים אחרים מדווחים על חוסר יציבות מתמשכת וירידה בתפקוד עם פחות מ 30% מהחולים יוכלו לחזור ל9,10,11,12,13 רמת פעילות שלפני פציעתם. אפשרויות טיפול מוגבלות וכוללות שיטות שמרניות, הצטמקות תרמית של ACL שנותר, או שחזור ACL. לאחרונה, יש כבר עלה עניין בתיקון עיקרי מתוגבר. טכניקות אלה להשתמש ביולוגיים כדי לשפר את תיקוני תפר עיקריים 14. מחקר שנערך לאחרונה ניסה לקצור hACL כמו mesenchymal נגזר בתאי גזע כדי לעקוף מגבלות שתל, 31,32 אבל התוקף והיעילות של תאים אלה עדיין אינם ידועים. נראה מקור התא האידיאלי עבור יישומי הנדסת רקמות להיות בלתי mesechymal hACL נגזר תאי פיברובלסטים.

מחקר הנוכחי התמקד בזיהוי חומר מטריצה ​​מתאים ומקור תא לפיגום המהונדס. זה הליך סטנדרטי עבור ACL קרוע להיות מושלך כמו suפסולת rgical במהלך ניתוח שחזור, לעומת זאת, רצועה פגום עשויה להיות מקור באיכות לרכישת התאים הדרושים כדי לפתח ולשפר את רקמה מהונדסת אידיאלית החלפת ACL. המעבדה שלנו פיתחה פרוטוקול להרחבה במבחנה של תאי hACL נקטפו אלה נגזרים. שימוש במטריצת 2D מהונדס רווי תאי hACL נגזרים, עיצבנו תיקון שעלול להגדיל את תיקון ACL חלקי ולחזק את הרצועות קרועות.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

1. אחזור כירורגי

הערה: אישור IRB הושג לאסוף את גדם ACL במהלך ניתוח שחזור ACL. פטור IRB ניתנו כגדם ACL משמש, בדרך כלל, מושלך כפסולת כירורגית. 20 חולים שימשו כדי לאסוף את גדם ACL.

  1. לנהל הרדמה כללית ואנטיביוטיקה לפני ניתוח לפי הפרוטוקול של מוסד למטופל.
  2. החל חוסם עורקים ולנפח מעל לחץ דם הסיסטולי 100 מ"ג.
  3. למקם את המטופל במצב שכיבה. לעשות חתך anterolateral אופקי עם הברך בכיפוף ° 30-45 לפורטל 5 מ"מ ולהכניס נקז ארתרוסקופי ומצלמה לתוך כיס suprapatellar ב30 מעלות.
  4. לבצע ארתרוסקופיה אבחון שגרתית.
  5. הזן ברמה גבוהה וdebride הסינוביום הקרומי על ACL הקרוע.
  6. השתמש במכונת גילוח 4.5 מ"מ וablator לזהות את גדם ACL.
  7. השתמש במקור ברווז ישר מרים לאסוף SPE מרובהcimens מגדם ACL הנותר.
  8. לשמור על המדגם במלח רגיל במכל סטרילי.
  9. שלח את הדגימות לפתולוגיה לפענוח ואספקה ​​סופית למתקן במעבדה.
  10. לשחזר מטופל ולבצע טיפול שלאחר ניתוח לפי הפרוטוקול של המוסד.

2. עיכול רקמות ובידוד hACL

  1. העברת רקמת ACL האדם קיבלה מהפתולוגיה בצלחת פטרי עם תמיסת מלח סטרילית / PBS (פוספט שנאגרו מלוח).
  2. לרכך את הרקמה באמצעות מספריים סטרילי לתוך 1-2 מ"מ 3 חתיכות ולשטוף את הרקמה הטחון עם מי מלח לפחות 3 פעמים.
  3. לעכל את הרקמה הטחון עם Collagenase 0.4% בDMEM/F-12 (50/50, 1x) בינוני בתוספת 10% בסרום שור העובר (FBS) ו -1% פניצילין / סטרפטומיצין ל4-6 שעות על 37 ° C.
  4. צנטריפוגה התאים XG ב 1000 למשך 5 דקות ולאחר מכן resuspend התאים במדיום.
  5. לשטוף את התאים עם המדיום ל2-3 פעמים ולאחר מכן seed / תרבות בT-25 צלוחיות ל2-3 ימים.

3. ההרחבה נייד, הקפאה להפשרה

  1. השתמש במיקרוסקופ אור כדי להמחיש את התאים בתרבית למשך 2-3 ימים בבקבוק T-25.
  2. לשמור על התאים ב37 מעלות צלזיוס בDMEM/F-12 (50/50, 1x) הבינוני בתוספת 10% בסרום שור העובר (FBS) ו -1% פניצילין / סטרפטומיצין (P / S).
    הערה: שנה את התקשורת כאשר תאים להראות דבקות ומורפולוגיה סטנדרטית. השתמש במיקרוסקופ אור כדי לבחון את התאים.
  3. שוטף את התאים ומחוברות עם PBS ביום 7 (~ 1.3 X 10 6 תאים / בקבוק). הוספת טריפסין (0.5 g / L) ו דגירה התאים ב 37 מעלות צלזיוס למשך 5 דקות. הוסף מדיה לתאים הושעו לנטרל טריפסין. מחלקים את תערובת מדיה התאים בין שלוש T-25 צלוחיות.
  4. שוטף את התאים ומחוברות עם PBS, להוסיף טריפסין (0.5 גר '/ ל'), וresuspend אותם בהקפאת מדיום המכיל DMSO, FBS ובינוני המלא (DMEM/F-12 בינוני + 10% P FBS 1% + / S) ב 1:02:07 יחס.
  5. חנותבקבוקוני קריוגני ב -80 ° C אם התאים ישמשו בתוך חודש, ובחנקן נוזלי, אם התאים יישמרו במשך תקופות ארוכות.
  6. להפשיר את המבחנות באמבט מים 37 מעלות צלזיוס לשימוש חוזר.
    הערה: בדרך כלל תאי 90-95% לשרוד.

4. ייצור של רקמות מהונדסות 2-D לקטית, חומצה גליקולית שיתוף פולי פיגום (PLAGA)

  1. להמס 1 גרם של PLAGA ב12 מיליליטר dichloromethane בבקבוקון נצנץ 20 מיליליטר ומערבולת הפתרון במשך 8 שעות במהירות קבועה (800 סל"ד).
    הערה: תיאור פרטני בגופטה ואח' 15.
  2. מעביר את הפתרון המומס לצלחת פטרי זכוכית מרופדת בנייר הגנת Fluorinated.
  3. מניחים את צלחת פטרי מתחת למכסת מנוע ואקום ל30 דקות. השאר את צלחת פטרי ב -20 מעלות צלזיוס למשך לילה ולאחר מכן בטמפרטורת חדר. הנח את צלחות פטרי בlyophilizer כדי להבטיח אידוי של הממס מלא להשיג סרטים דקים של הפולימר.
  4. הנח בדיוני הפולימרLMS בייבוש ל24 שעות.
  5. חותכים את סרטי פולימר ל12 דיסקים עגולים בקוטר מ"מ ולאחסן אותם בתא ייבוש עד צורך.

5. סריקה מיקרוסקופית אלקטרונים (SEM)

  1. לשטוף את התאים (50,000 תאים / דיסק) זורעים על TCPS השליטה ופיגום PLAGA עם PBS 7 ימים לאחר זריעה.
  2. השתמש glutaraldehyde 1.5% במאגר M 0.1 cacodylate לתקן תאים ו2.5% Oso 4 במאגר M 0.1 cacodylate להודעה קיבעון.
  3. לשטוף את התאים הקבועים עם מאגר M 0.1 cacodylate. ייבש את התאים הקבועים באמצעות התייבשות סידורי אתנול (50%, 70%, 80%, 90% ו100%) ל15 דקות כל אחד, ועוד יותר יבש בHexamethyldisilazane (HMDS) למשך לילה.
  4. Vent הקאמרית של מערכת ציפוי גמגום SEM עם שסתום לחץ ולהעלות את הצלחת העליונה.
  5. מניחים את הדגימות יבשות בחדר. מנמיכים את הצלחת העליונה.
  6. לעבור את ידית השליטה לשאוב כדי להתחיל בפינוי החדר.
  7. שסתום דליפת ארגון פתח. חכהלוואקום לרדת ל 0.05 mbar.
  8. דגימות המעיל היבשים בשכבה דקה (0.13 ננומטר) של זהב / פלדיום.
  9. להחזיר את שסתום דליפת ארגון למצב הסגור שלה.
  10. לעבור את ידית שליטה לכבויה.
  11. Vent קאמרי עם שסתום לחץ ולהעלות את הצלחת העליונה.
  12. הסר את הדגימות ולאחסן אותם בתא ייבוש ל24 שעות.
  13. שים לב הדגימות תחת מיקרוסקופ אלקטרונים סורק.

6. Immunofluorescence מכתים

  1. לשטוף את התאים (50,000 תאים / דיסק) זורעים על TCPS השליטה ופיגום PLAGA עם PBS 7 ימים לאחר זריעה.
  2. תקן את התאים באמצעות 70% אתנול (קר) ל10 דקות.
  3. דגירה התאים הקבועים בטמפרטורת חדר עם 1% הסרום אלבומין שור (BSA) ב-PBS שיש 0.05% טריטון X-100 עבור 20 דקות.
  4. לטבול את הדגימות בTween 1% בטמפרטורת חדר למשך 20 דקות.
  5. הוסף נוגדן חד שבטי עכבר Anti-β-אקטין (1:400) ודגירת התאים overnighלא ב 4 ° C.
  6. לשטוף את התאים עם Tween 0.05%. הוספת נוגדנים משני (עז אנטי העכבר F (ab ') 2 שבר של IgG מצומדות עם בדיקה הקרינה, 1:400) לתאי דגירה במשך שעה 1 בטמפרטורת חדר.
  7. לשטוף את התאים עם PBS. כתם התאים עם כתם גרעיני והר באמצעות 80% גליצרול.
  8. שים לב לתאים תחת מיקרוסקופ confocal.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

מודל העבודה לאחזור כירורגית, עיכול רקמה ובידוד של הקדמית הצולבת הרצועה האנושית (hACL) תאי שמקורם מוצג באיור 1. התאים הגרו מexplants ודבקו בחולצת 25 צלוחיות. תאים אלה היו בתרבית במשך 3 ימים ולאחר מכן היו דמיינו תחת מיקרוסקופ אור (איור 2). Monolayer מחוברות הושג ביום 7. נוכחותם של תאים בריאים ובת קיימא הצביעה על שליפה והתרבות המוצלחות של תאי hACL נגזרים.

קובץ מצורף נייד אל פני השטח...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

המטרה העיקרית של מחקר פיגום hACL/2D זה הייתה להשתמש בתאים שהתקבלו בתיקון כדי להגדיל את התיקון עיקרי של דמעות ACL חלקיות. ניהול שמרני של דמעות ACL חלקיות עשוי לכלול תקופה קצרה של חוסר תנועה, מחזק אותו, תכנית שיקום מתקדמת, והערכות מעקב קבועות 13,16,17. עם זאת, מחקרים רבים מראים כי טיפול שמרני בספורטאים נקשר עם תוצאות וכישלון עניים. באקלי et al. העריך 25 חולים עם דמעות ACL חלקיות במעקב ביניים ומצא כי רק 44% מהחולים התחדשו ספורט ברמה שלפני הפציעה שלהם, ו72% דיווחו ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

החוקרים מצהירים כי אין להם אינטרסים כלכליים מתחרים.

תודות

המחברים מבקשים להודות לקרן ומחלקה למענק מחקר ניתוח מדרום אוניברסיטת אילינוי, בית הספר לרפואה של סטארט אפ; ומענק הקרן רפואית לזכר.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
צלחת פטריפישר סיינטיפיק08-757-103C
פוספט חוצץ מלח (PBS)פישר סיינטיפיקBP3994
קולגנאזגיבקו17018-029חנות ב 4 & #176; C
DMEM/F-12Cellgro10-092-CVחנות ב 4 & #176;C. חם ב 37 & #176; C אמבט מים לפני השימוש.
סרום בקר עוברי (FBS)חנות Gibco10082בטלפון -80 & #176; C
Penicillin/StreptomycinLonza17-602EStore ב-4 & #176;
C צינורות צנטריפוגה- 15 מ"לקורנינג430790
צלוחיות T-25 BDFalcon3013
תערובת טריפסין-וורסןחנות Lonza17-161Eב 4 & #176;C. חם ב 37 & #176; C אמבט מים לפני השימוש.
DMSOפישר סיינטיפיקBP231-100נוזל דליק. עלול לגרום לגירוי בעור, בעיניים ובדרכי הנשימה.
בקבוקונים קריוגנייםCorning430489
PLAGAPurac BiomaterialsPurasorb PLG8523 חנות ב-80 & #176;
C דיסקים TCPSפישר סיינטיפיק12-545-82
דיכלורומתאןפישר סיינטיפיקAC36423-0010סכנת סרטן אפשרית. יש לאחסן במקום יבש וקריר.
נייר BytacSaint gobin ביצועים פלסטיק1420652
בקבוקון נצנוץפישר סיינטיפיק03-339-21G
סרום בקר אלבומין (BSA)Sigma AldrichA7906חנות ב 4 & #176; C
TweenFisher ScientificBP337-500
נוגדן נגד &בטא;-אקטין לעכבר (1° Ab)Sigma AldrichA5441ב-20 & #176; C
נוגדן נגד עכבר עז (2° Ab)Cell Signaling4408Store ב-20 & #176;
C Hoechst dyeSigma Aldrich14530חנות ב -20 & #176; C
גליצרולFisher ScientificBP229-1
GlutaraldehydeFisher ScientificBP2547-1רעיל בשאיפה ובבליעה. גורם לכוויות בכל דרכי החשיפה.
HexamethyldisilazaneFisher ScientificAC43085-1000נוזל דליק ואדים. גורם לכוויות בכל דרכי החשיפה.
מספריים סטרילייםMcKesson25-716
צנטריפוגהEppendorf5804R
מיקרוסקופ אוראולימפוסCK40
אמבט מיםתרמו מדעי2845
מערבולתLabnetVX-200
צלחות פטרי זכוכיתפישר מדעיS31473
אקו-פונץ'אקודרם בע"מP1225Acu-Punch שימש לחיתוך דיסקים של 12 מ"מ
מאגר CacodylateSigma Aldrich97068נוזל דליק, מסרטן ומגרה.
אוסמיום טטראוקסידסיגמא אולדריץ'201030
טריטון X-100סיגמא אולדריץ'T8787רעיל במיוחד מזיק אם נבלע
אתנולDecon Labs2705יש להרחיק מחום, ניצוצות, להבה וצורות אחרות של הצתה.
הרדמה כללית/אזוריתAmphastar תרופות1% לידוקאין, 0.25% Bupivacaine, חומרי הרדמה לאינדוקציה ותחזוקה
אנטיביוטיקהHospira0409-0805-01Ancef 1 g i.v.
טרוקר ארתרוסקופיהסמית ואחיין
ארתרוסקופיה מצלמהסמית ואחיין
תופס ארתרוסקופי ומרירארתרקס
מכונת גילוח 4.5 מ"מארתרקס
ברגי נירוסטהארתרקס
ציפוי מקרטעפולרוןE5400
חנות ברגי הפרעות

מקורות

  1. Johnson, R. J. The anterior cruciate ligament: A dilemma in sports medicine. Int J Sports Med. 3, 71-79 (1982).
  2. Owings, M. F., Kozak, L. F. Ambulatory and inpatient procedures in the United States, 1996. Vital Health Stats. 13, 1-119 (1998).
  3. Frank, C. B., Jackson, D. W. The science of reconstruction of the anterior cruciate ligament. J Bone Joint Surg Am. 79, 1556-1576 (1997).
  4. Miyasaka, K. C., Daniel, D. M., Stone, M. L., Hirshman, P. The incidence of knee ligament injuries in the general population. Am J Knee Surg. 4, 3-8 (1991).
  5. Taylor, D. C., Posner, M., Curl, W. W., Feagin, J. A. Isolated tears of the anterior cruciate ligament: over 30 year follow-up of patients treated with arthrotomy and primary repair. Am J Sports Med. 37 (1), 65-71 (2009).
  6. Liljedahl, S. O., Lindvall, N., Wetterfors, J. Early diagnosis and treatment of acute ruptures of the anterior cruciate ligament: a clinical and arthrographic study of forty-eight cases. J Bone Joint Surg Am. 47, 1503-1513 (1965).
  7. Oensten, M., Lysholdm, J., Gillquist, J. Suture of fresh ruptures of the anterior cruciate ligament: A 5 year follow up. Acta Orthop Scan. 55, 270 (1984).
  8. Buckley, S. L., Barrack, R. L., Alexander, A. H. The natural history of conservatively treated partial anterior cruciate ligament tears. Am J Sports Med. 17 (2), 221-225 (1989).
  9. Noyes, F. R., Mooar, L. A., Moorman, C. T. 3rd, McGinnis, H. G. Partial tears of the anterior cruciate ligament. Progression to complete ligament deficiency. J Bone Joint Surg Br. 71 (5), 825-833 (1989).
  10. Bak, K., Scavenius, M., Hansen, S., Norring, K., Jensen, K. H., Jorgensen, U. Isolated partial rupture of the anterior cruciate ligament. Long term followup of 56 cases. Knee Surg Sports Traumatol Arthrosc. 5 (2), 66-71 (1997).
  11. Fritschy, D., Panoussopoulos, A., Wallensten, R., Peter, R. Can we predict the outcome of a partial rupture of the anterior cruciate ligament? A prospective study of 43 cases. Knee Surg Sports Traumatol Arthrosc. 5 (1), 2-5 (1997).
  12. Sommerlath, K., Odensten, M., Lysholm, J. The late course of acute partial anterior cruciate ligament tears. A nine to 15 year follow-up evaluation. Clin Orthop. , 281-2152 (1992).
  13. Barrack, R. L., Buckley, S. L., Bruckner, J. D., Kneisl, J. S., Alexander, A. H. Partial versus complete acute anterior cruciate ligament tears: the results of nonoperative treatment. J Bone Joint Surg Br. 72 (4), 622-624 (1990).
  14. Murray, M. M. Current status and potential of primary ACL repair. Clin Sports Med. 28 (1), 51-61 (2009).
  15. Gupta, A., et al. Single walled carbon nanotube composites for bone tissue engineering. J Orthop Res. 9, 1374-1381 (2013).
  16. Fruensgaard, S., Johannsen, H. V. Incomplete ruptures of the anterior cruciate ligament. J Bone Joint Surg Br. 71, 526-530 (1989).
  17. Sandberg, R., Balkfors, B., Nilsson, B., Westlin, N. Operative versus non-operative treatment of recent injuries to the ligaments of the knee. A prospective randomized study. J Bone Joint Surg Am. 69, 1120-1126 (1987).
  18. Lamar, D. S., Bartolozzi, A. R., Freedman, K. B., Nagda, S. H., Fawcett, C. Thermal modification of partial tears of the anterior cruciate ligament. Arthroscopy. 21 (7), 809-814 (2005).
  19. Indelli, P. F., Dillingham, M. F., Fanton, G. S., Schurman, D. J. Monopolar thermal treatment of symptomatic anterior cruciate ligament instability. Clin Orthop. 407, 138-147 (2003).
  20. Smith, D. B., Carter, T. R., Johnson, D. H. High failure rate for electrothermal shrinkage of the lax anterior cruciate ligament: a multicenter follow-up past 2 years. Arthroscopy. 24 (6), 637-641 (2008).
  21. Buda, R., Ferruzzi, A., Vannini, F., Zambelli, L., Di Caprio, F. Augmentation technique with semitendinosus and gracilis tendons in chronic partial lesions of the ACL: clinical and arthrometric analysis. Knee Surg Sports Traumatol Arthrosc. 14 (11), 1101-1107 (2006).
  22. Sekiya, J. K., Golladay, G. J., Wojtys, E. M. Autodigestion of a hamstring anterior cruciate ligament autograft following thermal shrinkage: a case report and sentinel of concern. J Bone Joint Surg Am. 82 (10), 1454-1457 (2000).
  23. Farquharson-Roberts, M. A., Osborne, A. H. Partial rupture of the anterior cruciate ligament of the knee. J Bone Joint Surg Br. 65, 32-34 (1983).
  24. Rue, J. P., Ghodadra, N., Bach, B. R. Jr Femoral tunnel placement in single-bundle anterior cruciate ligament reconstruction: a cadaveric study relating transtibial lateralized femoral tunnel position to the anteromedial and posterolateral bundle femoral origins of the anterior cruciate ligament. Am J Sports Med. 36, 73-79 (2008).
  25. Carey, J. L., Dunn, W. R., Dahm, D. L., Zege, S. L., Spindler, K. P. A systematic review of anterior cruciate ligament reconstruction with autograft compared with allograft. J Bone Joint Surg. 91, 2242-2450 (2009).
  26. Murray, M. M., Martin, S. D., Martin, T. L., Spector, M. Histological changes in the human anterior cruciate ligament after rupture. J Bone Joint Surg Am. 82, 1387-1397 (2000).
  27. Andrish, J., Holmes, R. Effects of synovial fluid on fibroblasts in tissue culture. Clin Orthop Relat Res. (138), 279-283 (1979).
  28. Murray, M. M., Spindler, K. P., Ballard, P., et al. Enhanced histologic repair in a central wound in the anterior cruciate ligamentwith a collagen-platelet-rich plasma scaffold. J Orthop Res. 25, 1007-1017 (2007).
  29. Carter, T. R. Anterior cruciate ligament thermal shrinkage. Clin Sports Med. 21, 693-700 (2002).
  30. Perry, J. J., Higgins, L. D. Anterior and posterior cruciate ligament rupture after thermal treatment. Arthroscopy. 16, 732-736 (2000).
  31. Cheng, M. T., Yang, H. W., Chen, T. H., Lee, O. K. Isolation and characterization of multipotent stem cells from human cruciate ligaments. Cell Prolif. 42 (4), 448-460 (2009).
  32. Matsumoto, T., et al. Isolation and characterization of human anterior cruciate ligament-derived vascular stem cells. Stem Cells Dev. 21 (6), 859-872 (2012).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

תאים המופקים מרסן השליבה הקדמית (ACL)בידוד תאיםעיכול בקולגנאזהרחבת תאיםפיגום PLAGAמיקרוסקופיה אלקטרונית סורקתצביעה אימונופלואורסצנטיתפוליסטירן לתרביות רקמה
אחזור כירורגי, בידוד ו
צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.