הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

השימוש ב Ex Vivo מכשירי צ'נדלר Loop להערכת Biocompatibility של צינורות דם פולימרית השתנה

11.8K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/51871

⸱

20 באוגוסט 2014

 ,  ,  , 
1Division of Cardiology, Department of Pediatrics, The Children's Hospital of Philadelphia, 2University of Pennsylvania Perelman School of Medicine

במאמר זה

סיכום

חשיפת דם לצינורות דם פולימריים יוזמת את תגובת הגוף הזר המעורבת בסיבוכים קליניים. כאן מתואר מנגנון לולאת צ'נדלר, כלי ניסיוני המחקה זלוף דם דרך צינורות אלה. נספח של CD47 רקומביננטי מביא לירידה בעדויות לתגובת הגוף הזר בצינורות אלה.

תקציר

תגובת הגוף הזר מתרחשת כאשר משטח סינטטי הוא הציג לגוף. הוא מאופיין על ידי ספיחה של חלבוני דם ואת הקובץ המצורף וההפעלה הבאים של טסיות דם, מונוציטים / הידבקות מקרופאג, ואירועי תא איתות דלקתיים, שמוביל לסיבוכים לאחר פרוצדורליים. מכשירי צ'נדלר Loop הוא מערכת ניסיונית המאפשרת לחוקרים ללמוד את יחסי גומלין המולקולריים ותאיים המתרחשים כאשר כמויות גדולות של דם הן perfused מעל תעלות פולימריים. לשם כך, מנגנון זה שמש כמודל ex vivo המאפשר ההערכה של התכונות אנטי דלקתיות של שינויי משטח פולימרים שונים. המעבדה שלנו הראתה כי תעלות דם, הותאמו קוולנטית באמצעות כימיה photoactivation עם CD47 רקומביננטי, יכולות להעניק biocompatibility למשטחים פולימריים. צירוף CD47 למשטחים פולימריים יכול להיות אמצעי יעיל לקידום היעילות של צינורות דם פולימריים. שלהעין היא מתודולוגיה המפרטת את הכימיה photoactivation נהגה לצרף CD47 רקומביננטי לתעלות רלוונטיות קליני פולימריים דם והשימוש בלולאת צ'נדלר כvivo לשעבר מודל ניסיוני לבחינת אינטראקציות דם עם תעלות CD47 שונה ושליטה.

מבוא

נהלים רבים קליניים, כגון מעקף לב ודיאליזה, מחייבים את השימוש של צינורות דם פולימרים ולעתים קרובות קשורים לסיבוכים לאחר פרוצדורליים 1. כאשר perfused עם דם, פולימרים אלו לא חוקיים תגובת הגוף הזר (FBR), וכתוצאה מכך הספיחה של חלבוני דם וטסיות דם, הידבקות מונוציטים / מקרופאג, והשחרור של ציטוקינים פרו דלקתיים, כולם תורמים לסיבוכים וכדי שלאחר פרוצדורליים / או 2,3 כשל בהתקן. לפיכך, אסטרטגיות כדי לטפל בבעיה זו תישאר באזור חשוב ומתמשך של מחקר חומרים ביולוגיים. חוקרים ניסו לטפל בבעיה זו על ידי שינוי משטחי דם פנייה עם מולקולות ביו או bioinert 4-6. מחקר במעבדה שלנו התמקד בצירוף CD47 רקומביננטי (recCD47) לחומרים ביולוגיים פולימרים כאסטרטגיה לצמצום FBR ולהגדיל את היעילות של חומרים אלה. CD47 הוא transmembr הביע בכל מקוםחלבון ane עם תפקיד ידוע בהתחמקות חיסונית, מעמד של "עצמי" המקנה לי לבטא בתאים 7-10 ומופעים מבטיח בהענקת התאמה ביולוגית כאשר צורף למשטחים פולימריים 11-13. אות הרגולציה אלפא חלבון (SIRPα), קולטן מאותו המקור לCD47, וחבר במוטיב המבוסס על טירוזין immunoreceptor המעכב (עתים) המכיל משפחה של חלבונים הטרנסממברני, באה לידי ביטוי בתאים ממוצא מיאלואידית 14. אנחנו הוכחנו בעבר כי CD47, באמצעות איתות תא בתיווך SIRPα, למטה מסדיר את התגובות חיסוניות לפוליאוריטן (PU) ופולי ויניל כלוריד (PVC) במבחנה, vivo לשעבר, ובמודלי vivo 11-13.

מרכזי לחקירות שלנו היא כימיה יחסית רומן photoactivation, שתתואר בהמשך, שבו קבוצות תיאול כימי תגובתי הן קוולנטית המצורפות לצינורות פולימריים ידי מגיב צינורות עם פולימר רב תכליתי (PDT-BZPh), מורכב מ2-pyridyldithio (PDT), benzophenone photoreactive (BzPh) וpolyallylamine-הותאם carboxy 11-13. צמצום קבוצות PDT המצורף קוולנטית עם טריס (2-carboxyethyl) hydrochloride phosphine (TCEP) 11 מניב משטח thiolated שיכול להיות לאחר מכן הגיב בmoieties הטיפולי. המפורטים כאן ובעבר 12,13, recCD47, הותאם עוד יותר עם ​​התוספת של זנב poly-ליזין C-מסוף 12,13, הוא הגיב עם Sulfosuccinimidyl-4 [N -maleimidomethyl] cyclohexane-1-carboxylate (sulfo-SMCC) עבור שעה 1 כדי ליצור קבוצות תיאול-reactive, המאפשר קשר monosulfide היווצרות בין צינורות ו11 recCD47. היכולת אנטי דלקתית של משטחי CD47 פונקציונליות נבדקה, לשעבר יו o, באמצעות מכשירי צ'נדלר Loop עם דם אנושי כולו, שתואר בשנת 1958 במקור כמודל במבחנה של קרישה טרומבוטיים 15. המנגנון מסתמך עלמערכת צינור סגורה באופן חלקי עם אוויר ומנוע סיבובי כדי להפיץ את הדם דרך צינורות 15. מודל ניסיוני זה מספק את ההזדמנות כדי לבחון את ההשפעה של חשיפת דם על משטחים שונה וללא שינוי, כמו גם את ההשפעה של שינויי שטח אלה על הפיסיולוגיה של תאי הדם.

יכול יצורף recCD47 למגוון משטחים פולימריים באמצעות כימיה photoactivation זה, והיכולת אנטי דלקתית שלה ניתן להעריך על ידי ניצול מודל ex vivo רלוונטי קליני מחקה זלוף דם על משטחים פולימריים 11,12. צינורות דם קליניים כיתה שונה עם recCD47 להראות פחות באופן משמעותי הטסיות ומצורפת תא דלקתי בהשוואה לפולימרים ללא שינוי כאשר הם נחשפים לדם אדם במנגנון. תיאור צעד אחר צעד של תהליך שינוי זה הנו כמפורט להלן.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

1 משטחים פולימריים שינוי עם recCD47

הערה:. הפרוטוקול מסוכם סכמטי באיור 1 איור 1 א ממחיש דור של משטחים פולימריים תיאול-reactive איור 1 מדגים דור של recCD47 תיאול-reactive..

  1. יום 1
    1. הכן פתרון של PDT-BzPh (1 מ"ג / מ"ל) ואשלגן ביקרבונט (KHCO 3) (0.7 מ"ג / מ"ל) במים סטריליים. מערבבים לילה ב 4 ° C (להגן מפני אור).
  2. יום 2
    1. חותכים צינורות פולימריים לחתיכות ארוכות 40 סנטימטר (ארוך מספיק כדי להתאים סביב גלגלים מסתובבים).
    2. משרים צינורות בפתרון 0.1% מימיים של hexacylpyridinium ל90 דקות בטמפרטורת חדר על שייקר או במכשירי צ'נדלר Loop. יש לשטוף את הצינורות עם 3x מים סטריליים לאחר דקות 90 לספוג.
    3. להפוך לחומצת הפתרון של PDT-BzPh מיום 1 על ידי הוספת 15% monobasic אשלגן זרחה מימיים (KH 2 PO 4). הוסף 50 μl KH 2 PO 4 לכל מ"ל של PDT-BzPh, ויצר פתרון micellar מעונן.
    4. משרים את הצינורות בפתרון PDT-BzPh acidified ל40 דקות בטמפרטורת חדר על שייקר או במנגנון.
    5. יש לשטוף את הצינורות עם חומצה אצטית מהולה (1: 1,000) פעם אחת.
    6. לחשוף את הצינורות לקרינת UV למשך כולל של 60 דקות. סובב צינורות ¼ להפוך כל 15 דקות כדי להקרין את פני השטח כולו.
    7. משרים את הצינורות בתמיסה של אשלגן ביקרבונט / מ"ל 20 מ"ג (KHCO 3) ל20 דקות בטמפרטורת חדר על שייקר או במנגנון.
    8. יש לשטוף את הצינורות עם 3x מים סטריליים ולאחסן ב 4 ° C במים סטריליים.
  3. יום 3
    1. ממיסים 5 מ"ג Sulfo-SMCC ב200 dimethylformamide μl (DMF) (זהירות: בצע במנדף).
    2. הוסף 50 μl של פתרון Sulfo-SMCC הכין בשלב 1 כדי 0.1 מ"ג / מ"ל ​​של תמיסת פולי ליזין recCD47, ומערבבים ל60 דקות ב roטמפרטורת אום.
    3. במהלך 60 מערבבים דק ', דגת סטרילית בופר פוספט של Dulbecco (DPBS) ומניחים בצד.
    4. לטהר Sulfo-SMCC הגיב recCD47 באמצעות טור 7K משקל מולקולרי חתוך ספין desalting לפי הוראות יצרן. אסוף זרימה דרך סופי (recCD47 תיאול-reactive באיכות גבוהה) ולדלל את נפח דרוש למעייל הפנימי של הצינור עם DPBS.
    5. יש לשטוף את הצינורות מיום 2 עם סטרילי, degassed 3x DPBS.
    6. מגיב משטח שונה של הצינורות עם פתרון של 20 מ"ג / מ"ל ​​עם טריס hydrochloride phosphine (2-carboxyethyl) (TCEP) בDPBS degassed פחות מ 2 דקות. יש לשטוף את הצינורות עם 4x DPBS degassed סטרילי.
    7. הוסף את recCD47 הגיב-Sulfo-SMCC לצינורות ודגירת הלילה בשעה 4 ° C על שייקר או במנגנון.

.2 Immunoassay כימות recCD47 על משטחים השתנה

  1. יש לשטוף את הצינורות שונה כדי לכמת מיום 3 שנינותDPBS 3x h. צינורות חנות אינו משמשים לכימות בDPBS על 4 מעלות צלזיוס.
  2. השתמש בביופסית 4 מ"מ כדי להפוך את דגימות צינור כפולות ומניח את האגרופים ביופסיה בבארות של צלחת 96 היטב.
  3. הכן שליטה שלילית בהיקף של מדגם צינור ללא שינוי לא טופל בנוגדן זיהוי. הכן שליטת נוגדן המורכבת ממדגם צינור ללא שינוי טופל בנוגדן זיהוי. הכן את דגימות בדיקת צינורות שונה שטופלו בנוגדן זיהוי.
  4. דגימות בלוק עם אלבומין 0.4% בסרום שור (BSA) בDPBS ל60 דקות בטמפרטורת חדר על שייקר.
  5. לאחר חסימה, BSA לשאוב ולשטוף עם שנאגרו מלוח טריס בתוספת 1% 3x (TBST) 20-Tween, 10 דקות כל אחד על שייקר.
  6. הכן דילול עבודה של נוגדן בBSA 0.4% בהתאם לדילול המומלץ של היצרן לimmunoassays. לדלל CD47 האנושי נוגדן B6H12-FITC 1: 100 בBSA 0.4%.
  7. הוסף 200 μl דילול נוגדן לבארות מתאימות. אינקובטוריםבקרות שליליות te עם BSA 0.4% בלבד. דגירה בטמפרטורת חדר למשך 60 דקות על שייקר (להגן מפני אור).
  8. לשטוף עם TBST 3x, 10 דקות כל אחד על שייקר. לשאוב שטיפת TBST האחרונה ולהוסיף 200 DPBS μl לבארות מדגם צינור.
  9. לאסוף את הזרימה דרך סופית, שהוא CD47 רקומביננטי תיאול-reactive באיכות גבוהה ולדלל את נפח דרוש למעייל הפנימי של צינורות עם DPBS.
  10. קראו עוצמת אות FITC באמצעות קורא microplate עם עירור FITC (485 ננומטר) ופליטה (538 ננומטר) הגדרות.
  11. חישוב מחויב recCD47 למשטח פולימרים המבוססים על ערכים סטנדרטיים, והיוו אוטומטי הקרינה ואינה ספציפי מחייב ממדגם שליטת נוגדן.

פרוטוקול מכשירים .3 צ'נדלר Loop

לחפש מוסדי מועצה לביקורת אישור (IRB) של פרוטוקול איסוף דם וניירת הסכמה מדעת לפני תחילת איסוף דגימות דם של בני אדם. השג מידעrmed הסכמת מתורם דם אדם.
הערה: תרשים המתאר את המנגנון מוצג באיור 2.

  1. מלא אמבט מים עם מים מזוקקים עד כ 1/2 של הגלגלים בקוטר שקועים. להוסיף מספיק אקונומיקה לאמבטיה המים כדי להפוך את פתרון אקונומיקה 10%. אמבטיה להגדיר מים ל37 מעלות צלזיוס ולאפשר טמפרטורה לאזן.
  2. לאסוף מתאמי מתכת (שמוצגים באיור 1 ב '), צינורות ללא שינוי וצינורות שונה, ולהרכיב סביב גלגלי מנגנון, כפי שמוצג באיור 1 ג. ודא צינורות שמתאים מלבב סביב הגלגל עם מתאם המתכת במקום.
  3. להשיג 30 מ"ל דגימת דם באמצעות פרוטוקול שאושר IRB, בבקבוקון מלא מראש עם 2 מ"ל של ציטראט או נוגדי קרישה אחרים, ומערבבים על ידי היפוך כדי למנוע קרישת פעם אחת את הדגימה שנאספה.
  4. להוסיף כ 10 מ"ל של דם לכל צינור באמצעות שסתום המתכת ומזרק, והשאיר קצת אוויר בצינור. אבטח את כובע השסתום וrסוב ל3 שעות.
  5. מסננים את הדם לתוך מבחנה פסולת שטופלה בתמיסת אקונומיקה 10% (או כפי שנדרש על ידי מדיניות מוסדית).
  6. בעדינות ולשטוף פנים צינורות עם DPBS כדי להסיר כל העקבות של דם. אסוף זרימה דרך בכוס הפסולת. השלך דם בהתאם למדיניות מוסדית.
  7. לחטא את המכשירים וכל דם מחלקת משטחים באמצעות פתרון אקונומיקה 10% או פי מדיניות מוסדית.
  8. דגימות תהליך למיקרוסקופ אלקטרונים מיקרוסקופי או סריקת ניאון כפי שתתוארנה להלן.

.4 פלורסנט מיקרוסקופית וספירה תאים

  1. הכן פתרון paraformaldehyde 4% (PFA) (זהירות: בצע במנדף).
  2. דגירה צינורות ב4% פתרון PFA הלילה ב 4 מעלות צלזיוס.
  3. לאחר דגירה הלילה, להסיר את PFA 4% ולשטוף סרטים מאוד בעדינות עם DPBS.
  4. חותך את צינורות לחלקים על מנת לחשוף את פני השטח לומן לצביעה.
  5. כתםסעיף של הצינור עם כמה טיפות של הרכבה תקשורת עם 4 ', 6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) ל30 דקות בטמפרטורת חדר (להגן מפני אור). לאחר צביעה, יש לשטוף את צינורות בעדינות עם DPBS להפחית אות DAPI רקע.
  6. תמונה באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי מצויד במסנן DAPI ומצלמה דיגיטלית לספור את מספר התאים ב9 שדות בצורה עיוורת שנבחרו להציג תחת הגדלה 200X.
  7. רשומה התא סופר לכל שדה ראיה ולבצע ניתוחים סטטיסטיים מתאימים כדי לקבוע מובהקות סטטיסטיות של תוצאות.

.5 מיקרוסקופית אלקטרונים סורק

  1. הכן 2% פתרון glutaraldehyde (זהירות: בצע במנדף).
  2. דגירה צינורות בפתרון glutaraldehyde 2% בין לילה ב 4 ° C..
  3. לאחר דגירה הלילה, בעדינות לשטוף 3x צינורות עם DPBS.
  4. הכן פתרון 1% מtetroxide אוסמיום (זהירות: סכנת משאיפת חמורה! השתמש במנדף).
  5. דגירה צינורות בפתרון 1% מtetroxide אוסמיום 15 דקות בטמפרטורת חדר.
  6. לשטוף בעדינות את 3x צינורות עם DPBS.
  7. הכן סדרה של ריכוזי אתנול (25%, 50%, 75%, 95%, ו100% אתנול).
  8. מייבש את צינורות על ידי דגירה בסדרה של ריכוזי אתנול. דגירה ב25%, 50%, 75%, ו95% אתנול ל20 דקות כל אחד. דגירה ב100% אתנול למשך 30 דקות.
  9. נקודה קריטית לייבש את צינורות עם CO 2 דקות 45 כדי להסיר את כל הלחות.
  10. חלקי צינור הר על בדל דגימה עם דבק כסף או גרפיט.
  11. חלקי צינור מעיל עם 12.5 ננומטר של זהב-פלדיום.
  12. בדוק במיקרוסקופ אלקטרונים סורק.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

יצירת משטחים פולימריים תיאול-reactive באמצעות PDT-BzPh וTCEP יחד עם תיאול-reactive פולי ליזין recCD47 באמצעות SMCC מאפשרת החיבור של recCD47 למשטחים פולימריים. תהליך השינוי הוא סיכם באופן סכמטי באיור 1. הנוחות של תהליך השינוי הזה היא שהוא יכול להיות מיושם על חלבונים רבים ושונים ומשטחים פולימריים שונים, הנחה החלבון יכולה להיות שונה עם קבוצות כימי תגובתי מספיק כגון lysines ומכיל האמינים שיש לו את הפולימר פחמימנים זמינים במידה מספקת.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

הכימיה photoactivation (המסוכמת באיור 1) מאפשרת לשינוי של כל משטח כמעט פולימר שיש פחמימנים מספיק כדי להקל על התקשרות PDT-BzPh וקרינת UV לאחר צילום להפעיל PDT-BzPh. Functionalizing משטח פולימרים עם קבוצות תיאול תגובתי מאפשר לקובץ המצורף שלאחר מכן של מגוון רחב של מולקולות הניתנות לבדיקה של עניין. במחקרים מסוימים שלנו בחרנו רקומביננטי CD47 11-13. הכימיה נטיה המסוימת שהשתמשנו בי מעורבת התגובה של הקבוצות האמינים של החלבון עם מקשר צלב bifunctional SMCC 1...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

המחקר המדווח בפרסום זה נתמכה על ידי המכון הלאומי ליו הדמיה וההנדסה ביוטכנולוגיה, תחת מספר הפרסים R21 EB015612 (SJS), והלאומי ללב, ריאות ודם מכון, תחת מספר הפרסים T32 HL007915 (JBS וRJL), של הלאומי מכון לבריאות.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
16% פרפורמלדהיד (PFA)ThermoScientific58906זהירות! לשימוש במכסה אדים
25% גלוטראלדהידVWRAAA17876-AP זהירות! שימוש במכסה אדים
2-pyridyldithio,benzophenone (PDT-BzPH)מסונתז במעבדה/A
סרום בקר אלבומין (BSA)SigmaA3059-100G
ציטראטSigmaS5770-50ML
מצלמה דיגיטליתLeicaDC500יצא מייצור
Dimethylformamide (DMF)Sigma270547-100MLזהירות! השתמש במכסה אדים
Dulbecco' s פוספט חוצץ מלח (DPBS)Gibco/Life Technologies14190-136
מיקרוסקופ פלואורסצנטיNikonTE300
חומצה אצטית קרחוניתפישר מדעיA38-212זהירות! שימוש במכסה אדים
CD47 אנושי (B6H12) – נוגדן FITCSanta Cruz BiotechnologySC-12730
Osmium TetroxideAcros Organics197450050זהירות! שימוש בקולטי אדים
אשלגן ביקרבונט (KHCO3)Sigma237205-100G
אשלגן פוספט מונובייסי (KH2PO4)SigmaP5655-100G
צינורות PVC (ערכת הליך לב וכלי דם)Terumo Cardiovascular Systems60050רוב הצינורות בדרגה קלינית יעבדו
סריקת אלקטרונים מיקרוסקופJEOLJSM-T330A
נתרן כלורי (NaCl)פישר סיינטיפיקBP358-212
קורא מיקרופלייטמכשירים מולקולרייםSpectramax Gemini EM 
Sulfo-SMCCSigmaM6035-10MGרגיש ללחות!
tris (2-carboxyethyl) פוספין (TCEP-HCl)Thermo Scientific20491
Tween-20Bio-Rad170-6531
Vectashield עם DAPIFisher ScientificH-1200רגיש לאור!
עמודי המלח ספין זבה – 7 K MWCOThermo Scientific89891
N

מקורות

  1. Bruck, S. D. Medical applications of polymeric materials. Med. Prog. Technol. 9 (1), 1-16 (1982).
  2. Anderson, J. M., Rodriguez, A., Chang, D. T. Foreign body reaction to biomaterials. Semin. Immunol. 20 (2), 86-100 (2008).
  3. Levy, J. H., Tanaka, K. A. Inflammatory response to cardiopulmonary bypass. Ann. Thorac. Surg. 75, S715-S720 (2003).
  4. Sperling, C., Maitz, M. F., Talkenberger, S., Gouzy, M. F., Groth, T., Werner, C. In vitro blood reactivity to hydroxylated and non-hydroxylated polymer surfaces. Biomaterials. 28, 3617-3625 (2007).
  5. Sperling, C., Schweiss, R. B., Streller, U., Werner, C. In vitro hemocompatibility of self-assembled monolayers displaying various functional groups. Biomaterials. 26, 6547-6457 (2005).
  6. Vasita, R., Shanmugam, I. K., Katt, D. S. Improved biomaterials for tissue engineering applications: surface modification of polymers. Curr. Top. Med. Chem. 8, 341-353 (2008).
  7. Subramanian, S., Parthasarathy, R., Sen, S., Boder, E. T., Discher, D. E. Species- and cell type-specific interactions between CD47 and human SIRPalpha. Blood. 107 (6), 2548-2556 (2006).
  8. Tsai, R. K., Discher, D. E. Inhibition of 'self' engulfment through deactivation of myosin-II at the phagocytic synapse between human cells. J Cell Biol. 180 (5), 989-1003 (2008).
  9. Berg, T. K., vander Schoot, C. E. Innate immune 'self' recognition: a role for CD47-SIRPalpha interactions in hematopoietic stem cell transplantation. Trends Immunol. 29 (5), 203-206 (2008).
  10. Oldenborg, P. A., Zheleznyak, A., Fang, Y. F., Lagenaur, C. F., Gresham, H. D., Lindberg, F. P. Role of CD47 as a marker of self on red blood cells. Science. 288 (5473), 2051-2054 (2000).
  11. Stachelek, S. J., et al. The effect of CD47 modified polymer surfaces on inflammatory cell attachment and activation. Biomaterials. 32 (19), 4317-4326 (2001).
  12. Finley, M. J., Rauva, L., Alferiev, I. S., Weisel, J. W., Levy, R. J., Stachelek, S. J. Diminished adhesion and activation of platelets and neutrophils with CD47 functionalized blood contacting surfaces. Biomaterials. 33, 5803-5811 (2012).
  13. Finley, M. J., Clark, K. A., Alferiev, I. S., Levy, R. J., Stachelek, S. J. Intracellular signaling mechanisms associated with CD47 modified surfaces. Biomaterials. 34, 8640-8649 (2013).
  14. Ravetch, J. V., Lanier, L. L. Immune inhibitory receptors. Science. 290, 84-89 (2000).
  15. Chandler, A. B. In vitro thrombotic coagulation of blood: a method for producing a thrombus. Lab Invest. 7, 110-114 (1958).
  16. Thorsen, T., Klausen, H., Lie, R. T., Holmsen, H. Bubble-induced aggregation of platelets: effects of gas species, proteins, and decompression. Undersea Hyperb Med. 20 (2), 101-119 (1993).
  17. Ritz-Timme, S., Eckelt, N., Schmidtke, E., Thomsen, H. Genesis and diagnostic value of leukocyte and platlet accumulations around “air bubbles” in blood after venous air embolism. Intl J of Legal Med. 111 (1), 22-26 (1998).
  18. Miller, R., Fainerman, V. B., Wüstneck, R., Krägel, J., Trukhin, D. V. Characterization of the initial period of protein adsorption by dynamic surface tension measurements using different drop techniques. Colloids and Surfaces A. 131 (1-3), 225-230 (1998).
  19. Oeveren, W. V., Tielliu, I. F., de Hart, J. Comparison of modified chandler, roller pump, and ball valve circulation models for in vitro testing in high blood flow conditions: application in thrombogenicity testing of different materials for vascular applications. Int J Biomater. 2012, (2012).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

גלה מאמרים נוספים

מודל Ex Vivoמודיפיקציה של CD47 רקומביננטיכימיה של פוטו-אקטיבציההערכת תאימות ביולוגיתניתוח היצמדות תאיםמיקרוסקופיה פלואורסצנטיתמיקרוסקופיה אלקטרונית סורקתמודל פרפוזיה של דם
השימוש ב Ex Vivo מכשירי צ'נדלר Loop להערכת Biocompatibility של צינורות דם פולימרית השתנה
צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.