כאן אנו מתארים פרוטוקול להפקת תאי גזע pluripotent אנושי הנגרם מהדם היקפי באמצעות אסטרטגית תכנות מחדש episome מבוסס ומעכבי היסטון deacetylase.
Method Article
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
|---|---|---|---|
| Ficoll-Paque PLUS | Fisher Scientific | 45-001-750 | יש לאחסן בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס. |
| חנות DPBS | Life Technologies | 14190-250 | ב-4 מעלות צלזיוס. |
| RPMI 1640 | Life Technologies | 11875-093 | חנות ב-4 מעלות צלזיוס. |
| סרום בקר עוברי (FBS) | Life Technologies | חנות 10437028 | ב-20 מעלות; C עד הצורך. הפשרה, עליון, חנות ב -4 מעלות צלזיוס. |
| דימתיל סולפוקסיד (DMSO) | Sigma-Aldrich | 154938 | יש לאחסן בטמפרטורת החדר. |
| QBSF-60 בינוני ללא סרום | Fisher Scientific | 50-983-234 | חנות ב -4 מעלות צלזיוס. |
| פניצילין/סטרפטומיצין | Life Technologies | חנות 15140122 | ב-4 מעלות צלזיוס. |
| ערכת נוקלאופקטור קו תאים V | Lonza | VCA-1003 | חנות בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס. |
| תמיסת ג'לטין 2% | Sigma-Aldrich | G1393 | חנות ב-4 מעלות; C, נוזל ב-37 מעלות; C אמבט מים לפני השימוש. |
| תמיסת מלח מאוזנת של האנק (HBSS) | Life Technologies | 14175-103 | חנות ב-4 מעלות צלזיוס. |
| Modified Eagle Medium (DMEM) Life | Technologies | 11965-092 | ב-4 מעלות צלזיוס. |
| Medium Medium (IMDM) | Life Technologies | 12440-061 | ב-4 מעלות |
| L-גלוטמין, 200 מ"מ | Life Technologies | 25030-081 | Aliquot, הקפאה ב-20 מעלות צלזיוס. |
| חומצות אמינו לא חיוניות (NEAA), 100X | Life Technologies | 11140-050 | יש לאחסן בטמפרטורה של 4 מעלות; C, הרחק מאור. |
| DMEM/Ham's F12, 1:1 | חנות פישר סיינטיפיק | SH30023.02 | ב-4 מעלות צלזיוס. |
| KnockOut Serum Replacement | Life Technologies | 10828-028 | Aliquot, הקפאה ב-20 & מעלות צלזיוס. |
| נתרן פירובט, 100 מ"מ | Life Technologies | 11360-070 | חנות ב-4 מעלות צלזיוס. |
| נתרן ביקרבונט, 7.5% | Life Technologies | חנות 25080094 | ב-4 מעלות צלזיוס. |
| גורם גדילה פיברובלסטים בסיסי (bFGF) | Life Technologies | PHG0263 | הכינו מלאי של 10 מ"ג/מ"ל ב-DPBS, להקפיא ב-20 מעלות צלזיוס. לאחר ההפשרה, יש לאחסן בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס. |
| נתרן בוטיראט | Sigma-Aldrich | B5887-1G | הכינו מלאי 2000x (400 מ"מ) ב-DPBS, עליון, הקפאה ב-20 מעלות צלזיוס. לאחר ההפשרה, יש לאחסן בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס. |
| שיבוט תאי hES & תוסף התאוששות | Stemgent | 01-0014-500 | חנות ב-20 מעלות; C עד הצורך. לאחר ההפשרה, יש לאחסן בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס. |
| מטריגל BD מוסמך ESC | BD Biosciences | 35-4277 | מפשיר לילה על קרח ב-4 מעלות; C, מכניסים לצינורות מקוררים מראש באמצעות קצות פיפטה מקוררים מראש. יש לאחסן בטמפרטורה של -20 מעלות; C עד הצורך. הפשרה ב-4 מעלות; ג, יש להשתמש מיד. |
| StemSpan SFEM | STEMCELL Technologies | 9650 | Aliquot, הקפאה ב-20 מעלות צלזיוס. |
| חומצה אסקורבית, אבקת | Sigma-Aldrich | A4403-100MG | הכינו מלאי של 5 מ"ג/מ"ל ב-DPBS, מסנן סטרילי, אחסן ב-4 מעלות צלזיוס. |
| גורם תאי גזע אנושי רקומביננטי (SCF) | R & D Systems | 255-SC-010 | Make 100 μ מלאי g/m ב-SFEM, aliquot, קפוא ב-20 °C. לאחר ההפשרה, יש לאחסן בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס. |
| אינטרלוקין אנושי רקומביננטי 3 (IL-3) | מו"פ & D Systems | 203-IL-010 | Make 100 μ מלאי גרם/מ"ל ב-SFEM, aliquot, להקפיא ב-20 מעלות צלזיוס. לאחר ההפשרה, יש לאחסן בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס. |
| אריתרופויטין (EPO) | מו"פ & D Systems | 287-TC-500 | הכינו מלאי של 1000 U/ml ב-SFEM, להקפיא ב-20 מעלות צלזיוס. לאחר ההפשרה, יש לאחסן בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס. |
| גורם גדילה רקומביננטי דמוי אינסולין אנושי 1 (IGF-1) | מו"פ & D Systems | 291-G1-200 | Make 100 μ מלאי גרם/מ"ל ב-SFEM, aliquot, להקפיא ב-20 מעלות צלזיוס. לאחר ההפשרה, יש לאחסן בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס. |
| &בטא;-מרקפטואתנול | סיגמא-אולדריץ' | M7522 | הכינו מלאי פי 1000 (100 מ"מ) ב-DPBS. |
| דקסמתזון | סיגמא-אולדריץ' | D4902-25MG | הכינו מלאי פי 50 (50 μ M) ב-DPBS, מסנן סטרילי, יש לאחסן בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס. |
| SAHA (vorinostat) | קיימן כימיקלים | 149647-78-9 | הכינו מלאי פי 2,000 (400 מ"מ) ב-DPBS, aliquot, הקפיאו ב-20 מעלות צלזיוס. לאחר ההפשרה, יש לאחסן בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס. |
| צלחת תרבית רקמות 12 באר | פישר סיינטיפיק | 08-772-29 | |
| 15 מ"ל צינור חרוטי | Sarstedt | 62553002 | |
| 1.5 מ"ל צינור אפנדורף | פישר סיינטיפיק | 05-408-129 | |
| 6 צלחת תרבית רקמות | באר פישר סיינטיפיק | 08-772-1B | |
| 35 מ"מ צלחות תרבית tisue BD | Biosciences | 353001 | |
| 10 מ"ל פיפטות סרולוגיות חד פעמיות | פישר סיינטיפיק | 13-675-20 | |
| 5 מ"ל פיפטות סרולוגיות חד פעמיות | פישר סיינטיפיק | 13-675-22 | |
| 2 מ"ל פיפטות סרולוגיות חד פעמיות | פישר סיינטיפיק | 13-675-17 | |
| 20 μ l קצות פיפטה, קצות מחסום | Genessee | 24-404 | |
| פיפטות פסטר זכוכית | פישר סיינטיפיק | 13-678-20D | |
| סיוע פיפטה | פישר סיינטיפיק | 13-681-15 | |
| pCXLE-hOCT3/4-shp53-F | Addgene | 27077 | |
| pCXLE-hSK | Addgene | 27078 | |
| pCXLE-hUL | Addgene | 27080 | |
| pCXLE-EGFP | Addgene | 27082 | |
| pCXWB-EBNA1 | Addgene | 37624 |
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article
Request Permission