מודלים של בעלי חיים למחלות ילדים יכולים לחוות התפרצות מוקדמת והתקדמות מחלה אגרסיבית. מבחינה קלינית משלוח טיפול רלוונטי למודלים של עכברים צעירים יכול להיות קשה מבחינה טכנית. פרוטוקול זה מתאר שיטת הזרקה תוך ורידית לא פולשנית לעכברים שזה עתה נולדו בתוך שני הימים לאחר הלידה הראשונה של חיים.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
במאמר זה
סיכום
תקציר
הזרקה תוך ורידית היא אופן קליני רלוונטי כדי לספק תרופות. מכרסמים מבוגרים ובעלי חיים גדולים יותר, זריקות תוך-ורידית הן אפשריים מבחינה טכנית ושגרתיות. עם זאת, בחלק מדגמי העכבר יכול להיות התחלה מוקדמת של מחלה עם התקדמות מהירה שעושה ממשל של טיפולים פוטנציאליים קשה. הווריד הזמני (או פנים) הוא רק קדמי לניצן האוזן בעכברים והוא נראה בבירור ביומיים הראשונים שלאחר לידה בכל צד של הראש באמצעות מיקרוסקופ לנתח. במהלך חלון זה, הווריד הזמני יכול להיות מוזרק בנפחים של עד 50 μl. הזריקה היא בטוחה ונסבל היטב על ידי שני הגורים והסכרים. הליך הזרקה טיפוסי יושלם בתוך 1-2 דקות, לאחר שהגור חוזר לכלוב בבית. מהיום ליום שלאחר הלידה השלישי הווריד קשה לדמיין והליך ההזרקה הופך מבחינה טכנית לא אמין. טכניקה זו הייתה בשימוש למסירה של vect וירוס adeno הקשורים (AAV)ORS, אשר בתורו יכול לספק, ביטוי transgene יציב כמעט גוף-רחב לחייו של בעל החיים בהתאם לסרוטיפ הנגיפי נבחר.
מבוא
משלוח תרופות למערכת העצבים המרכזי (CNS) במודלים עכבריים למחלת ילדים עדיין מהווה אתגר. עכברים שמצבי מחלה שזה עתה נולדו מודל הם גוץ והתפתחותית בשלה, ולכן יכול להיות קשה להזריק ישירות במבנים מתאימים בתוך מערכת העצבים המרכזית. הזרקה תוך-של סוכנים טיפוליים היא שיטה לא פולשנית, נסבלת היטב כדי לספק תאים, תרופות, או וקטורים ויראליים לכל הגוף כולל מערכת העצבים המרכזית ו1-5 3,5-9 רשתית. פרסומים קודמים לתאר הזרקת פנים וריד זמנית באמצעות transilluminator 10,11, ללא מיקרוסקופ לנתיחה 11,12, או דורשים שני אנשים להזריק 10. טכניקת ההזרקה תוארה בפרוטוקול זה יש יתרון משום שאדם אחד יכול להזריק גורים, ומק....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
כל הנהלים המפורטים בפרוטוקול אושרו מכון לשימוש בבעלי חיים ובועדה לטיפול (IACUC) מאוניברסיטת מדינת אוהיו.
1. הכנת סביבת העבודה
- לאסוף קרח רטוב כדי להרדים את גורי העכבר, כלוב ריק להפריד את הסכר מההמלטה, מיקרוסקופ לנתח, מקור אור שיכול להיות ממוקם בזווית להזרקה (שימוש במקור אור ב° 90 זווית על הזריקה מטשטשת את הווריד), משטח נקי למקום חי להזרקה, צמר גפן, 3/10 מזרק אינסולין סמ"ק עם 3/8 "30 מחט G (אחד לכל חיה) ו -1% אוונס הכחול צבע ( עשה עם מי מלח פוספט שנאגרו פ....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
במהלך הזרקה נכונה, הווריד לרגע להפוך, או לחלוט ברורים. אם הזרקה לצבוע כל הגור צריך להפוך לכחול בתוך שניות. אם הזרקה לא תקינה התרחשה, לעתים קרובות יש בולוס תת עורי מרוכז בראש או בצוואר וinjectant עלול לדלוף מאתר ההזרקה. זריקות לא נכונה יכולות גם לגרום להופעה של שטפי דם בצוואר. גורים המקבלים זריקות תת עורית (כלומר ההזרקה לא נמסרה באופן מלא בווריד) חווים בדרך כלל אין תופעות לוואי שליליות ובאופן שיגרתי מגיבים לטיפול כמו העכברים שהוזרקו כהלכה לעשות.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
משלוח תוך-סוכנים למערכת העצבים המרכזית או בכל הגוף קשה במודלים עכבריים יילודים של מחלה. הפרוטוקול המתואר הוא דרך מהירה, יחסית לא פולשנית לניהול לוריד פתרונות לעכברי יילודים עם דרישות ציוד מינימליות. למרות וריד הפנים הזמני ניתן לראות בעין בלתי מזוינת, ייתכן שיש לי זריקות דיוק רב יותר בשימוש במיקרוסקופ ומקור אור בסיבים אופטיים, במיוחד להזרקה בלתי מיומנת. יש זריקות תוך-בעכברים בילוד שיעור הצלחה גבוה 12, ואת הולכת AAV נצפתה בגורים מוקדמים, גם אם חלק מinjectant מנוהל תת עורי.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
יש לי המחברים אין לחשוף.
תודות
המחברים מבקשים להודות NINDS, FightSMA, ומשפחות של SMA לתמיכה כספית. SEGL נתמך על ידי מענק # הכשרת NINDS 5T32NS077984-02.
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| מזרק אינסולין Thinpro | Terumo | SS30M3009 | 3/10 סמ"ק, מחט 3/8 אינץ', 30 גרם, 1 לכל עכבר |
| צבע כחול אוונס | סיגמא-אולדריץ' | E2129 | מדלל ל-1% עם 1x אפליקטורים עם קצה כותנה מלוח פוספט חוצץ |
| פישר סיינטיפיק | 23-400-101 | ||
| מקור אור סיבים אופטיים | פישר סיינטיפיק | 12-562-36 | |
| ניתוח מיקרוסקופ |
מקורות
- Foust, K. D., et al. Intravascular AAV9 preferentially targets neonatal neurons and adult astrocytes. Nature. 27, 59-65 (2009).
- Dominguez, E., et al. Intravenous scAAV9 delivery of a codon-optimized SMN1 sequence rescues SMA mice. ....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
