השתלת כליה עכבר: מודלים של דחיית השתל

סיכום

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לחקר האימונולוגיה של דחייה. המודל הכירורגי הציג דוחות על זמן ניתוח קצר וטכניקה תמציתית. בהתאם לשילוב הזן של התורם-מקבל, הכליה המושתלת עלולה לפתח דחייה תאית חריפה או נזק כרוני לאלוגרפט, המוגדר על ידי פיברוזיס אינטרסטיציאלי וניוון צינור.

תקציר

דחיית הכליה המושתלת בבני אדם היא עדיין גורם עיקרי לתחלואה ותמותה. מודל העכבר של השתלת כליה משכפל מקרוב את התהליכים הטכניים והפתולוגיים המתרחשים בהשתלת כליה אנושית. למרות שקיימים מודלים עכבריים של דחייה אלוגנית באיברים שאינם הכליה, והם אפשריים יותר מבחינה טכנית, ישנן עדויות לכך שאיברים שונים מעוררים מצבי דחייה ודינמיקה שונים, למשל מהלך הזמן של דחייה בהשתלת לב וכליה שונה באופן משמעותי בשילובי זנים מסוימים. דגם זה הוא כלי אטרקטיבי מסיבות רבות למרות האתגרים הטכניים שלו. מכיוון שהפלוטיפים של זן עכברים מולד מאופיינים היטב, ניתן לבחור שילובי תורם ונמען כדי לדגמן דחיית אלוגרפט חריפה על ידי השתלה על פני מיקומי MHC Class I ו-II. לעומת זאת, על ידי השתלה בין זנים עם הפלוטיפים דומים, ניתן לעורר תהליך כרוני אם כליית האלוגרפט מפתחת פיברוזיס אינטרסטיציאלי וניוון צינור. שינינו את הטכניקה הניתוחית כדי להפחית את זמן הניתוח ולשפר את קלות הניתוח, אולם עדיין יש להתגבר על עקומת למידה על מנת לשכפל את המודל בנאמנות. מחקר זה יספק נקודות מפתח בהליך הכירורגי ויסייע בתהליך ביסוס טכניקה זו.

מבוא

השתלת כליה מוצלחת לטיפול באי ספיקת כליות תוארה לראשונה בשנת 1955 בין תאומים מונוזיגוטיים ^1, מאז זה הפך להיות טיפול מהפכני בחולים עם אי ספיקת כליות סופנית בכל רחבי העולם, המציע גם שיפור באורך ואיכות החיים ^2. עם זאת הישרדות שתל לטווח ארוך כבר הקשתה על ידי מספר רב של תהליכים פתולוגיים וכתוצאה מכך לנזק של שתל כרוני ^3.

דחיית הכליה המושתלת בבני אדם עדיין אחד גורמים עיקריים לתחלואה, למרות שיפור משמעותי במשטרי טיפול immunosupporessive. המטרה לפתח מודל עכבר של השתלת כליה היא לשכפל את התהליך ופתולוגיה מצא בהשתלת הכליה אנושית ⁴....

פרוטוקול

אתיקה מוסדית מקומית ולאומית מתאימה צריכה להיות במקום לפני ביצוע ניסויים בבעלי חיים. באופן ספציפי בבריטניה הניסויים הבאים נערכו תחת בעלי חיים (הליכים מדעיים) Act 1986. איפה שתי microsurgeons זמין להפעלה בו זמנית מנתח התורם צריך לבצע צעדים 1.1-1.16 אז 3.1-3.5, בעוד מנתח הנמען מבצע 2.1-2.8 . למפעיל יחיד יכולים להיות אחרי הצעדים ברצף.

.1 תורם הכנה

הערה: ההליך שהוצג כאן הוא לתורם C57BL / 6 ^BM12 ונמען / 6 עכברי זכרי C57BL בגילים שבין 8 עד 16 שבועות ישנים עם משקל גוף גדול יותר מ20 גרם. עם ז....

תוצאות

דחייה של שתל כליה ניתן להעריך על ידי ניתוח היסטולוגית של חלקי רקמות קבועות methacarn המוטבע פרפין של הכליה המושתלת (איור 2). השתלת Isograft של כליות בין תוצאות עכברי syngeneic בפגיעה reperfusion איסכמי כליות, אולם ב -4 שבועות tubules התאוששה ונמצאת בהיסטולוגיה דומה לכליות ילידים. דחייה חריפה יכולה להיות מודל על ידי C57BL השתלת כליה / 6 למקבלי BALB / ג, בתוך השבוע 1 יש חדירת תא mononuclear מפוזרת ברחבי parenchyma הכליות, מעורב interstitium, glomeruli וצינוריות. נזק.......

דיון

האופן ביותר המתואר היטב כדי לבצע את ההשקה העורקים הוא להשתמש באב העורקים הדיסטלי של התורם, עם עורק הכליה בהמשך, באופן מקצה לצד לאב עורקי הנמען. אנו מתארים את השימוש בתיקון אב העורקים, דומה לשיקוף 'Carrell תיקון' שבוצע בהשתלת כליה אנושית שאנו מאמינים שהוא נוח יותר. למרות דיווחים בספרות של תורם ואופרטיבי נמען זמן הם דלילים אנו מאמינים כי ניצול תיקון אב העורקים לאב עורקי נמען במקום אב העורקים תורם מקצה לצד לנמען אב העורקים הוא עדיף. באמצעות תיקון שולל את הצורך לנתח את כל ענפי.......

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
מכשירים כירורגיים
מספריים קהים לניתוח כלים	מדעיים משובחים	14072-10	לחיתוך עור
מספריים מעוקלים Castoviejo	כלי מדע עדינים	15017-10	לחיתוך רקמות
מספריים קפיצים – ישר	כלי מדע עדינים	15000-08	לחיתוך תפרים
מלקחיים משוננים 1x2 שיניים	כלי מדע עדינים	11021-12
2 x מלקחיים עם קצה עדין (דומונט מס '5)	כלי מדע עדינים	11251-20
מלקחיים עם קצה עדין בזווית (Dumont No. 5/45)	Fine Science Tools	11253-25	לחיתוך קהה
מלקחיים מעוקלים עם קצה עדין (Dumont No.7)	Fine Science Tools	11273-22	שימושי למעבר בין כלים
Curved Crile Haemostat	Fine Science Tools	1300-04
מוליך מיקרו קליפ עם מנעול	Fine Science Tools	18056-14
2 x Micro serrefines רוחב קפיץ 2 מ"מ, אורך לסת 4 מ"מ	Fine Science Tools	18055-04	מהדקים מיקרו-וסקולריים
2 x Colibri 3 ס"מ מפסק חוט	Fine Science Tools	17000-03
מחזיק מחט Castroviejo עם מנעול	Fine Science Tools	120660-01
מוליך קליפ פצע	Fine Science Tools	12031-07
7 מ"מ קליפס פצע	מדע משובח כלים	12032-07	הסר 7 עד 10 ימים לאחר הניתוח
ציוד
מיקרוסקופ פיקו OPMI	Carl Zeiss	S100
יחידת צריבה תרמית עם קצה עדין	גייגר	150A
כרית אלקטרונית חום	Cozee Cumfort	n/a
Euroklav 23-S	Melag	n/a	Autoclave
חד פעמי ציוד
7/O תפר קלוע משי	פירסל	30514
10/O תפר דפילון (פוליאמיד)	B-Braun
6/O Vicryl (plygalectin)	Ethicon	W9537
מחט משופעת רגילה, 1 אינץ', 21G	Bection, Dickinson and Company	305175	לאנסטמוזיס שופכן
מחט משופעת רגילה, 5/8 אינץ', 25G	Bection, Dickinson and Company	305122
מחט משופעת רגילה, 1/2 אינץ', 30G	Bection, Dickinson and Company	304000
מחט אינסולין 1 מ"ל, 29 גרם	Bection, Dickinson and Company	324827
מחט אינסולין 0.3 מ"ל, 30G	Bection, Dickinson and Company	324826
1 מ"ל קצה החלקה של מזרק	Bection, Dickinson and Company	300184
5 מ"ל קצה החלקה של מזרק	Bection, Dickinson and Company	302187
Wypall נייר ספוגיות	קימברלי-קלארק	L40	מעוקר על ידי אוטוקלאב
ניצני צמר גפן	ג'ונסון אנד ג'ונסון	n/a	מעוקר על ידי אוטוקלאב
וילונות רגילים	Guardian	CB03	מעוקר על ידי חיטוי
צלחת תרבית תאים 60 מ"מ x 15 מ"מ	Corning Incorporated	430166
סיכת חלוקה	B-Braun	DP3500L / 413501	בשימוש עם NaCl 0.9%
ריאגנטים ותרופות
(Lacri-Lube) פרפין לבן רך 57.3%, שמן מינרלי 42.5% ואלכוהול לנולין 0.2%	אלרגן בע"מ	21956GB10X
(וידן) פובידון-יוד 10%	Ecolab Ltd	PL 04509/0041
(Vetalar V) קטמין הידרוכלוריד	פייזר בריאות בעלי חיים	Vm 42058/4165	תמיסה של 100 מ"ג/מ"ל (מינון 200 מ"ג/ק"ג)
(דומיטור) Medetomidine hydrochloride	אוריון פארמה	Vm 06043/4003	1 מ"ג/מ"ל (מינון 0.5 מ"ג/ק"ג)
(וטרינטרי) בופרנורפין הידרוכלוריד	Alsto Animal Health	Vm 00063/4002	0.3 מ"ג/מ"ל (מינון 0.05 מ"ג/ק"ג)
(אנטיסדאן) Atipamezole hydrochoride	Orion Pharma	Vm 06043/4004	5 מ"ג/מ"ל (מינון 2 מ"ג/ק"ג)
אוניברסיטת ויסקונסין Solution	Belzer Bridge to Life	n/a	מינון כ-500 מיקרוליטר לעכבר
NaCl 0.9%	בקסטר	FKE1323
הפרין סולפט	לא קנייני	N/A	5000 יחידות/מ"ל (מינון 5 יחידות/עכבר)

G1118099