שיטות להשוואה בין חומרים מזינים בBeebread נוצרו על ידי דבורים דבש Africanized ואירופאי והשפעות על titers חלבון Hemolymph

סיכום

להלן שיטות לכימות חומרים מזינים באבקה לפני ואחרי הפיכתה ללחם דבורים על ידי שני תת-מינים של דבורי דבש. אנו מתארים טכניקות למדידת צריכת לחם דבורים וכתוצאה מכך טיטר חלבון בשני תת-המינים.

תקציר

דבורי דבש להשיג חומרים מזינים מאבקה שהם אוספים וחנות בכוורת כbeebread. פיתחנו שיטות לשליטה במקור האבקה שדבורים אוספות ולהמיר לbeebread על ידי הצבת מושבות שבנבנה במיוחד אזור טיסה סגורה. שיטות שפותחו כדי לנתח את הרכב חומצות אמינו של חלבון והאבקה וbeebread. אנו גם מתארים כיצד צריכת beebread נמדדה ושיטות המשמשות לקביעת titers חלבון hemolymph הדבורה עובד מבוגר לאחר ההאכלה על beebread ל4, 7 ו -11 ימים לאחר הופעתה. שיטות יושמו כדי לקבוע אם גנוטיפ משפיע על ההמרה של אבקה לbeebread והשיעור שדבורים לצרוך ולרכוש חלבון ממנה. שני תת-מינים (דבורי דבש אירופיים וAfricanized; EHB וAHB בהתאמה) סופקו עם אותו מקור האבקה. בהתבסס על השיטות שפותחו, beebread שנעשה על ידי שני תת-המין היה ריכוזים נמוכים יותר חלבון וערכי pH מהאבקה. באופן כללי, אמין con החומצההריכוזים בbeebread שנעשו על ידי שני EHB או AHB היו דומים והתרחשו ברמות גבוהות יותר בbeebread מאשר באבקה. שני AHB וEHB צרכו יותר באופן משמעותי של beebread שנעשה על ידי AHB מאשר על ידי EHB. למרות EHB וAHB צרכו כמויות דומות של כל סוג של beebread, ריכוזי חלבון hemolymph בAHB היו גבוהים יותר מאשר בEHB. הבדלים ברכישת חלבון בין AHB וEHB עשויים לשקף עיבודים סביבתיים הקשורים לאזור הגיאוגרפי שבו כל תת-מין התפתח. הבדלים אלה יכולים לתרום להקמה המוצלחת של אוכלוסיות AHB בעולם החדש בגלל ההשפעות על גידול גוזל וצמיחת מושבה.

מבוא

תזונה משחקת תפקיד מהותי בבריאות והמרץ של מושבות דבורי דבש ובהקמתם כאוכלוסיות. חומרים מזינים ממזון מספקים אנרגיה והרכיבים ביוכימיים הנדרשים לגידול גוזל, ויסות חום, ליקוט ותגובה חיסונית. למושבות דבורי דבש, החומרים המזינים דרושים כדי לגדול אוכלוסיות מושבה ולשמור על בריאותם מגיעה מצוף ואבקה. צוף מספק פחמימות ואבקה מספקת את הדרישות תזונתיות שנותרו כגון חלבון, שומנים, ויטמינים ומינרלים ^1.

תת-מין של דבורי דבש יכול להיות שונה בפרמטרי רמה-מושבה מבוססת מבחינה תזונתית כגון תוחלת חיים עובד, גידול גוזל, ומנגנוני חסינות חברתית ^2-6. הבדלים אלה עשויים להיות קשורים לדרך בי מזון, במיוחד האבקה מעובד על ידי המושבה ומתעכלת ביחידים. אבקה מאוחסנת בתאי מסרק ובאמצעות תסיסה חומצת חלב microbially תיווך משתנה כימי ^{7-10. האבקה מותססת נקראת beebread. יתכנה הבדלים בין תת-מין genotypic ביכולתם לרכוש חומרים מזינים מהאבקה שהם אוספים וחנות וזה יכול להשפיע על צמיחת מושבה והישרדות. השפעות Genotypic על עיבוד מזון ורכישת חומרים מזינים תועדו באורגניזמים אחרים הגורמים לאנשים מסוימים כדי להשיג יותר חומרים מזינים וקלוריות מאשר לאחרים תוך צריכת את אותם המאכלים 11-14.}

כאן אנו מתארים שיטות משמשות להשוואת ההרכב והצריכה של beebread שנעשה על ידי תת-מין שונה של דבורי דבש. שיטות למדידת titers כתוצאה hemolymph החלבון בדבורים פועל גם מתוארות. מחקרים קודמים על הרכב התזונתי של beebread נעשו עם דבורי דבש אירופיים (EHB) ^10,15,16. עם זאת, ייתכנו הבדלים בbeebread שנעשה על ידי דבורים של תת-מין שונה גם כאשר הם מאכילים באותו האבקה. EHB וAHB הושוו כי צוללות אלהיש לי pecies בדלים התנהגותיים ופיסיולוגיים שונים שעשויים להיות קשור לעיבוד מזון ומזין רכישה ^17. חלק מההבדלים הבולטים ביותר הוא שAHB לאסוף ולצרוך יותר מאשר אבקת EHB ונראה להמיר אותו בקלות רבה יותר לגוזלים ^18. יש מושבות AHB שיעורים גבוהים יותר מאשר רץ EHB ולהתחמק כאשר משאבי מזון הפכו מוגבל ^19-23. Absconding הוא נדיר בEHB. AHB יש גם קצב חילוף חומרים גבוה יותר מ ^-24 EHB. הבסיס התזונתי להבדלים ברמה בין המושבה EHB וAHB עשוי להיות קשור לשיעור גביית אבקה וגם לתוכן התזונתי שלה (למשל, חומצות אמינו וחלבונים) אחרי שהוא מומר לbeebread. צריכת Beebread ורכישת חלבון וכתוצאה מכך גם עשויות לשחק תפקיד בהבדלים ברמה בין המושבה EHB וAHB. על פי השיטה, EHB וAHB עשו beebread מאותו מקור האבקה. Beebread לאחר מכן האכיל בחזרה לדבורים של EACתת-מין h ויכול לקבוע אם דבורים לרכוש חלבון מbeebread באופן ייחודי לתת-המין שלהם או למקור של beebread.

פרוטוקול

1. קבלת Beebread ממושבות AHB וEHB

1. מניחים מלכודות אבקה במושבות דבורי דבש ולאסוף אבקה. טוחנים את האבקה לאבקה דקה (בדומה לאבקה לשפוך ממאבקים) באמצעות מטחנת קפה.
2. להקים מושבות 5 כל אחד מAHB וEHB באזור טיסה סגור (EFA), כך שדבורים ללקט רק באבקה הניתנת. כדי למנוע מעובדים נסחפו בין EHB ומושבות AHB, לחלק את EFA לחלקים נפרדים, כך שדבורים לא יכולים לעבור ביניהם. הנח EHB הבודד או מושבות AHB עם 3,500-4,000 דבורים פועל, מסרק שעווה עם צוף, דבש, להרהר בשלה ומסרק ריק בכל קטע של EFA.
   הערה: המושבות לא אחסן אבקה כאשר הוקמו. שיעור האבקה שמאוחסן יכול להיות מוגבר על ידי לא כולל מלכת הנחת במושבות.
3. להאכיל את אבקת קרקע למושבות על ידי הנחת מגש עם האבקה בכל קטע של EFA. מתפשט על 60 גרם של אבקה על כל מגש כך foragin שדבורי g יכולים לאסוף אותו המון corbicular וכלאחסן את האבקה במושבות שלהם כbeebread. המשך מתן אבקה טרי על כל מגש יומי במשך 3 שבועות.
4. עיין beebread מהקולוניות האירופיות כbeebread האירופי (גאות), ומן מושבות Africanized כbeebread Africanized (ABB).

2. דבורים האכלה בכלובים

1. מסגרות מקום להרהר עובד חתום ממושבות AHB וEHB בכלובים נפרדים הופעה בחדר סביבתי נקבעו על 32-34 ° C ו 40% לחות יחסית ..
2. כאשר העובדים לצאת ועומדים 24 שעות ישנות, להקים 12 כלובי המבדק פרספקס (ממדים = 11.5 x 7.5 x 16.5 סנטימטר ³⁾ ולהוסיף או 100 EHB יצא זה עתה או 100 דבורים פועל AHB יצאו זה עתה לכל כלוב. הנח סעיף של מסרק עם מספר ידוע של תאים או גאות או ABB (24-30 תאים לכל כלוב) בכל כלוב כדי ליצור שילובי הטיפול הבאים: AHB fed ABB, EHB fed ABB, AHB fed גאות וEHB fed גאות. (4 טיפולים; 6כלובים לטיפול; 24 כלובים בסך הכל).
3. להוסיף בקבוקונים של מים ודבש 50% ופתרון מים שנוסחו על ידי נפח לכל כלוב. למלא בקבוקוני דבש ומים יומיים לתקופת המחקר 11 היום.

3. דבורים דגימת עבודה וBeebread וצריכת הערכה

1. לדוגמא 10 יצאה זה עתה עובדי EHB וAHB לפני הצבת אותם בכלובים. עיין באלה כ0 דבורי היום ויש להם לשמש כבסיס לריכוזי חלבון hemolymph.
2. הסר 10 דבורים מכל כלוב לאחר שהאכיל בגאות או ABB עבור 4, 7, ו -11 ימים.
3. הנח את הדבורים חיים בצינורות microcentrifuge בודדים ולהגדיר בשקיות קרח. בחר subsample של ארבעה דבורים לניתוח של ריכוז חלבון hemolymph.
4. לאחר דגימת דבורים ביום-11, לספור את מספר תאי מסרק שעדיין מכילים beebread. זהו מדד יחסי של צריכת beebread.
5. הסר את beebread שנותר מהתאים בכל כלוב ולאחסן בseparאכלתי צינורות microcentrifuge פי כלוב. שמור את דגימות beebread ב -80 ° C עד ניתח עבור pH, ריכוז חלבון מסיס, ותוכן של חומצות אמינו.

4. הערכת pH של אבקה וBeebread

1. קח שש דגימות 0.3 גרם אקראיות של האבקה המוזנת לדבורים בEFA ולפזר אותו ב300 μl של מים מזוקקים. למדוד את ה- pH באמצעות חנית pH הצומת כפולה עמיד למים עם דיוק של 0.01.
2. קח 0.3 מדגם g של beebread שנותר לאחר תקופת ההאכלה 11 היום בכל כלוב. ממיסים את beebread ב300 μl של pH מים והמידה מזוקק כפי שתואר לאבקה (4.1).

ניתוח 5. חלבון

1. קח שש דגימות של האבקה ומדגם של גאות וABB מכל כלוב. דגימות חנות ב -20 ° C עד ניתחו לריכוז חלבון מסיס.
2. מערבבים 20 מ"ג של אבקה או או beebread עם 1,000 μl של 0.1 פתרון M פוספט חיץ (PBS).
3. ווrtex התערובת במשך 10 שניות ו צנטריפוגות ב XG 571.2 דקות 1.
4. הסר מדגם 10 μl של supernatant והמקום בבארות של צלחת 96 גם שטוחה תחתונה EIA / RIA קלקר. לשכפל כל דגימה בשלוש בארות.
5. לצייר hemolymph מדבורים שנאספו מכל כלוב על ידי החדרת צינור נימי 20 μl (שחומם ומשך לנקודת מחט החדה) לחלק לרוחב תקין של בית החזה ליד נקודת ההתקשרות של הכנפיים. לאסוף hemolymph נוסף, במידת צורך, על ידי החדרת הצינור לתוך הקרום בין tergites הבטן.
6. הוסף 1 μl של hemolymph עד 9 μl של 0.1 M PBS. אחסן את פתרון hemolymph ב -20 ° C עד לניתוח לחלבון מסיס.
7. לקבוע ריכוזים כולל חלבון מסיס באבקה, beebread, ודגימות hemolymph באמצעות ערכה assay החלבון מסחרית ברדפורד. בצע את הוראות היצרן.
8. הקמת עקומת סטנדרט להעריך מסיס ג חלבוןoncentration בדגימות על ידי מדידת ספיגת חלבון עם ריכוזי חלבון ידועים באלבומין בסרום שור (BSA). למדוד ספיגת חלבון ב595 ננומטר באמצעות ספקטרופוטומטר.

6. חומצת אמינו ניתוח

1. דוגמאות בודדות בריכה מתאי מסרק של כל מושבה כדי ליצור מדגם מייצג של גאות וABB לניתוח.
2. קח אבקת 50 מ"ג או מדגם beebread שקל לתוך צלוחיות autosampler, ולהוסיף 1 מיליליטר של מים מזוקקים לבקבוקון, יחד עם פתרון 50 ng / μl הפנימי סטנדרטי בהיקף של ד ₄ -alanine 100 μl, ד ₂₃ חומצת -lauric, ¹³ C -glucose ₆ וד ₃₉ חומצת -arachidiac.
3. כובע המדגם sonicate במשך 5 דקות.
4. להתנות מחסנית HLB על ידי הוספת 1 מיליליטר של מתנול, equilibrated על ידי הוספת 1 מיליליטר של מים מזוקקים ואחריו התוספת של 1 מיליליטר של מדגם beebread או אבקה. לשטוף את המחסנית עם 1 מיליליטר של 5.0% MeOH / H ₂ O וelute עם 1 מיליליטר של 80% MeOH / H ₂ O.
5. להתאדות המדגם ליובש תחת זרם של חנקן. מחדש את המדגם עם 50 μl של פירידין ושל N, trifluoroacetamide O-Bis (trimethylsilyl) + Trimethylchlorosilane (BSTFA + TMCS) 100 μl.
6. כובע דגירה המדגם ב 70 מעלות צלזיוס למשך 30 דקות.
7. לאפשר את המדגם כדי לקרר ולהעביר אותו לבקבוקון autosampler נקי.
8. כובע ומניחים את המדגם לתוך מסת סלקטיבי גלאי ממשק לגז כרומטוגרף לנתח הדגימות הן לתרכובות נדיפות וחומצות אורגניות. הפרד את חומצות סוכר ואורגניים הבאים derivatization TMS עם BSTFA + TMCS באמצעות טור (id 30 mx 0.25 מ"מ) בעובי 1.0 מיקרומטר סרט.
9. הגדר את תנור הטור ב 50 צלזיוס למשך 2 דקות, ולאחר מכן להעלות את הטמפרטורה באופן ליניארי 290 ° C ב 5 C / min. ולהחזיק במשך 7 דקות. הגדר את מזרק GC וממשק / MS GC 250 ° C ו- 290 ° C, בהתאמה.
   1. השתמש בהליום כנשא בפלהשיעור w של 1.0 מיליליטר / דקה. הגדר את טמפרטורת מקור MS 230 מעלות צלזיוס.
10. מנגינה ולכייל את ספקטרומטר המסה יומי עם Perfluorotributylamine (PFTBA). השתמש בהזרקת μl 1 של PFTBA בסריקה המלאה (35-700 האמו) מצב יון חיובי לקבל נתונים על הנוכחות וריכוזים של חומצות אמינו.

תוצאות

Beebread אוחסן ב-80 מעלות צלזיוס למשך פחות מחודש לפני שנתח לריכוז pH וחלבון, ובמשך כ 4 חודשים לפני ניתוח חומצת אמינו. Beebread שונה מהאבקה בpH וריכוז חלבון (איור 1). PH של beebread היה נמוך מהאבקה כפי שהיה ריכוז החלבון. EHB וAHB שני צרכו יותר מ ABB גאות (איור 2).

רמות של חלבון מסיס בhemolymph של AHB היו גבוהות יותר באופן משמעותי מEHB ללא תלות בסוג של beebread הם צרכו (איור 3). הבדלים אלה ברמות חלבון hemolymph התרחשו למרות EHB וAHB צרכו כמויות דומות של כל סוג של beebread. גיל הדבורים בזמן הדגימה מושפע באופן משמעותי ריכוזי חלבון מסיסים בhemolymph. ריכוזי חלבון היו נמוכים באופן משמעותי ביום-4 דבורים בהשוואה ליום-7 או 11 שלא היה שונה.

_content "> של 10 חומצות אמינו חיוניים לדבורי דבש, אבל כל היסטידין אותרו באבקה. ברוב המקרים, ריכוזי חומצת אמינו שנמדדו בbeebread היו גבוהים יותר מאשר באבקה (איור 4). לדוגמא, ריכוזים של לאוצין ותראונין היו כ -60% גבוהים יותר בהשוואה לbeebread אבקה, והריכוזים ולין היו כ -25% גבוהים יותר. אלנין, רמות חומצה, גלוטמין, ומתיונין אספרטית גם היו גבוהות יותר בbeebread מאשר באבקה. ריכוזי חומצות אמינו לא היו שונים באופן משמעותי בין ABB והגאות למעט פנילאלנין וציסטאין. רמות פנילאלנין היו על גבוהים פי שתיים בהשוואה לABB או גאות או אבקה. ריכוזי ציסטאין היו נמוכים יותר בגאות בהשוואה ל ABB או אבקה. טריפטופן היה נוכח חומצת אמינו רק בריכוזים גבוהים יותר ב אבקה מאשר בגאות או ABB. ריכוזים של פרולין באבקה וABB היתה גבוהה יותר מאשר בשפל.

"תמיד">
איור 1: השוואות של pH () וריכוזים מסיסים חלבון (B) באבקה וbeebread שנעשה על ידי אירופאי (EHB) או דבורי דבש Africanized (AHB). PH של אבקה היה גבוה יותר באופן משמעותי מbeebread כפי שנקבע על ידי ניתוח שונות (F = _2,12 3725, p <0.0001) ואחריו מבחן השוואה מרובה Tukeys W-. ריכוז החלבון בפולן היה גבוה באופן משמעותי מאשר בbeebread שנעשה על ידי EHB (גאות) או AHB (ABB) (F = _2,27 16.49; p <0.0001). אמצעים המיושמת על ידי אותו המכתב אינם שונים באופן משמעותי ברמה 0.05.

איור 2: האחוז הממוצע של cells מכיל beebread שנצרכו לחלוטין על מרווח של 11 יום על ידי דבורים בכלוב. beebread נעשה על ידי שני דבורים אירופיים (EHB) או Africanized (AHB) באמצעות אותו מקור האבקה. אמצעי נאמד מחמישה כלובים של כל טיפול; אלה עם אותו המכתב אינם שונים באופן משמעותי ברמה 0.05, כפי שנקבעו על ידי ניתוח דרך אחת שונות (F = _3,16 7.3, p = 0.003) ומבחן W של Tukey. איור זה שונה מ ^-25.

beebread הריכוז הממוצע של חלבון בhemolymph מאירופה (EHB) או Africanized דבורים (AHB) דבש האכיל שנעשה על ידי אירופאי (גאות) או Africanized דבורים (ABB) עבור 4, 7, ו -11 ימי ניתוח מדידות חוזרים של: איור 3. שונות מצביעות על הבדלים משמעותיים בין הגיד 4קבוצות tment (F = _3,20 19.7, p <0.001). רמות של חלבון מסיס בAHB fed ABB היו גבוהות יותר באופן משמעותי מEHB fed ABB (p = 0.008) או הגאות (p = 0.018). גיל הדבורים בזמן הדגימה מושפע באופן משמעותי ריכוזי חלבון מסיסים בhemolymph. רמות היו נמוכות באופן משמעותי ביום-4 דבורים בהשוואה ליום-7 (p <0.0001) או 11 (p = 0.001). דבורי יום 7 וday11 לא היו שונים (p = 0.149). נתון זה שונה ^מ-25.

איור 4:. ריכוזים של חומצות אמינו (מיקרוגרם לגרם של אבקה או beebread) באבקה או beebread עשה ממנו הגאות הוא beebread שנעשה על ידי דבורים אירופיים וABB נעשה על ידי דבורי Africanized. טריפטופן, ציסטאין, פנילאלנין ופרולין היו זממו בנפרד לצורך ההבהרה מראשsenting הכמויות שלהם. נתון זה שונה ^מ-25.

דיון

שימוש בשיטות שתוארו לעיל, מצאנו כי beebread שנעשה על ידי AHB היה נצרך בכמויות גדולות יותר על ידי שני AHB וEHB. למרות EHB וAHB צרכו כמויות דומות של כל סוג של beebread, היה לי AHB titers חלבון hemolymph גבוה יותר. ממצאים מבוססים על השיטות שלנו היו דומים לדיווחים קודמים שבו רמות חלבון hemolymph בAHB היו גבוהות יותר מאשר בEHB אם כי שניהם האכילו אותו הדיאטות ^26. על ידי מדידת הצריכה של גאות וABB שנצרכו בשיעורים שונים על ידי שני EHB וAHB, נקבע כי ריכוז חלבון hemolymph בכל תת-מין לא יכול להיות שהועלה על ידי הגדלת צריכת מזון. נראה שיש רמת ריכוז חלבון hemolymph בעובדים בגיל דבורת אחות וכי הנקודה להגדיר לרמה גבוהה יותר בAHB מ EHB.

ישנם כמה תנאים חשובים להקמת מושבות לייצור beebread שיהיה לייעל את קצב אחסון אבקה. ראשית, שיתוףlonies צריך מסגרות עם להרהר פתוח. בלי להרהר פתוח להאכיל, עובדים לא יגבו הרבה אבקה. שנית, המושבה חייבת להיות ללא מלכה ולכן אין להרהר נוסף מיוצרת. גידול גוזל דורש כמויות גדולות של אבקה, והאבקה עודפת רק מאוחסנת. במושבות הקטנות שהוקמו בEFA, לא יהיה אבקה קטנה לאחסון כbeebread אם אזורי הקינון התרחבו כל כך מושבות צריכים להיות ללא מלכה. לבסוף, לbeebread להתבצע, אבקה יש לאסוף כמו המון corbicular ומאוחסן בתאי מסרק. אם האבקה נאסף במלכודות אבקה, זה חייב להיות בשטח לאבקה דקה לפני הצגתו לדבורים, כדי שתוכל לאסוף אותו כהמון corbicular.

השיטות למדידת צריכת beebread נוצרה איכותית ולא הערכות מוחלטות. הצריכה היחידה שנספרה הייתה כאשר תאים התרוקנו לחלוטין לחם דבורים. הערכה מדויקת יותר מסך צריכת לחם דבורה עשויה להיות מושגת על ידי הסרת br הדבורהEAD מהתאים והופכים אותו לקציצה שיכול להישקל לפני ואחרי תקופת המחקר. עם זאת, אנחנו רוצים לשמור על לחם הדבורה בתאים, כך שהדבורים יכולים להאכיל אותו כפי שהם היו במושבה, ואולי ימשיכו לעבד אותו במהלך תקופת המחקר. ההבדל במשקל של חלקי מסרק לפני ואחרי המחקר לא היה בשימוש כאומדן לצריכה בגלל המשקל אולי עלה כי דבורי הדבש המדולל לשים האכיל אותם בחלק מהתאים.

העובדים גם היו יכולים להוסיף כמה מהדבש המדולל ללחם הדבורים. מסיבות אלה, תאים המכילים כמויות שווה של לחם דבורה לפני ואחרי תקופת ההאכלה נספרו ונוצרו מדידה איכותית. ובכל זאת, יש הבדל בולט בין שני הסוגים של beebread במספר תאי ABB הריקים נספרו לעומת גאות לאחר 11 ימים.

קביעה כאשר אבקה מאוחסנת הופכת beebread יכולה להיות דיfficult כי דבורים להוסיף הרף אבקה לתאים. המושבות המשמשות לייצור beebread הוקמו עם מסגרות של גוזלים פתוחים כל כך דבורים לאסוף אבקה. עם זאת, המושבות היו ללא מלכה כך היו זחלים להאכיל רק כ 9 ימים לאחר המושבה הוקמה. ליתרת תקופת 3 שבועות כאשר מושבות היו בEFA, האבקה שהדבורים שנאספו אוחסנו ומרה לbeebread. שמירה על האבקה מאוחסנת בתאי מסרק ל-11 ימים נוספים כאשר מאכילים אותו לדבורים בכלובים גם אפשר שהמשיכה את הטיפול באבקה לbeebread. המרה של אבקה ללחם דבורה לוקחת בערך 7 ימים ^8. Beebread המוזן לEHB וAHB היה pH וריכוז חלבון מופחת בהשוואה לfed האבקה נמוכים יותר. ממצאים דומים של שינויים באבקה לאחר beebread ההמרה דווחו על ידי אחרים ^7,10,27. התוצאות שלנו שונות מדיווחים קודמים עם זאת, בכך שהיו הבדלים בריכוזים oחומצות אמינו מסוימות f בין beebread ואבקת פרחים. השינויים בשני ריכוזי חומצת אמינו החלבון ויכולים להיות בגלל הפעילות של אנזימי מפרקי חלבונים, שמקורו יכול להיות הדבורים עצמם או קהילות החיידקים הוקמו בbeebread ^7,8,28,29.

השיטות המשמשות למדידת ריכוז חלבון היו דומות לאלה שתוארו קודם לכן כדי לקבוע את ההשפעות של חלבון בתזונה בAfricanized ודבורים אירופיים ^26. כשלוחה של השיטות, שהיינו מסוגלים להעריך חלבון מסיס באבקה וbeebread. שיטות אלה שנוצרו על ממצאים דומים לדיווחים קודמים ^7,10,27. הממצאים שלנו מספקים ראיות נוספות שAHB ביעילות רבה יותר להטמיע חלבון תזונתי מאשר EHB, ושזה יכול להיות גורם מפתח בדומיננטיות האקולוגיות של AHB ברוב האזורים שבם הוא עלה והפך הוקם ^30-32.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
צומת כפול עמיד למים pH spear	תרמו פישר
	מר קפה	דגם 1DS77
תמיסת חיץ פוספט של Dulbecco	Emd-millipore	BSS-1005-B
EIA/RIA לוח פוליסטירן	סיגמא-אולדריץ'-קורנינג	CLS3590-100EA
צנרת מיקרו-נימית	Kimble Glass Inc.
ערכת בדיקת חלבון ברדפורד להתחלה מהירה 2	Bio-Rad	#500-0202
ספקטרופוטומטר	Biotek Synergy HT
גלאי סלקטיבי מסה	מחסנית
HLB
	אג'ילנט	6930
טור כרומטוגרפיה של גז	א J& W מדעי	DB-1701
d4-alanine	סיגמא-אולדריץ'	488917
d23-lauric acid	Sigma-Aldrich	451401
13C6-glucose	Sigma-Aldrich	389374
Pyridine	סיגמא-אולדריץ'	270970
N,O-Bis (טרימתילסיליל)טריפלואורואצטמיד +
טרימתילכלורוסילן (BSTFA + TMCS)	סיגמא-אולדריץ'	33148
פרפלואורוטריבוטילאמין (PFTBA)	סיגמא-אולדריץ'	442747-U
d39-חומצה ארכידיאק	איזוטופ קיימברידג'