מאמר שיטה

עיצוב, משטח טיפול, סלולרי ציפוי, וCulturing של רשתות עצבי מודולרי מורכב ממעגלי קשרים בין פונקציונלי

DOI:

10.3791/52572

⸱

15 באפריל 2015

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Neurobiology, George S. Wise Faculty of Life Sciences, Tel-Aviv University, 2Department of Neuroscience and Brain Technologies, Istituto Italiano di Tecnologia, 3School of Electrical Engineering, Tel-Aviv University, 4School of Physics and Astronomy, Tel-Aviv University, 5Department of Informatics, Bioengineering, Robotics and System Engineering, University of Genova

* These authors contributed equally

במאמר זה

סיכום

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כתב יד זה מתאר פרוטוקול לגדול ברשתות מודולרי מבחנה המורכבת של מעגלים עצביים, מבחינה תפקודית בין מחוברים-מוגבלים במרחב. מסכת פולימרים משמשת לדפוס שכבת חלבון לקדם הידבקות סלולרית על מצע culturing. נוירונים מצופים לגדול באזורים מצופים יצירת קשרים ספונטניים ומציג פעילות אלקטרו.

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

המוח פועל באמצעות ההפעלה מתואמת והתקשורת הדינמית של מכלולים עצביים. שאלה פתוחה גדולה היא איך רפרטואר עצום של מוטיבים הדינמיים, העומדים ביסוד תפקודי מוח המגוונים ביותר, יכול לצאת מארגון טופולוגי ומודולרי קבוע של מעגלים חשמליים במוח. בהשוואה למחקרי in vivo של מעגלים עצביים המציגים קשיים ניסיוניים פנימיים, הכנות במבחנה מציעות אפשרות הרבה יותר גדולה כדי לתפעל ולחקור את התכונות מבניות, דינמיות וכימיות של מערכות עצביות ניסיוניות. עבודה זו מתארת ​​במבחנה מתודולוגיה ניסיונית המאפשר גידול של רשתות מודולרי הולחנו על ידי אסיפות מרחבית שונות, ביניהם מבחינה תפקודית עצביות. הפרוטוקול מאפשר שליטה הארכיטקטורה דו-ממדית (2D) של הרשת העצבית ברמות של מורכבות טופולוגי שונות.

דפוסי רשת רצויים יכולים להיותהושג הן על מכסה מחליק רגיל ומערכי אלקטרודה מיקרו מצע מוטבע. מבני micromachined מוטבעים על פרוסות סיליקון ומשמשים ליצירת שבלונות פולימרים ביולוגית, אשר משלבות את התכונות השליליות של ארכיטקטורת הרשת הרצויה. סטנסילים מונחים על מצעי culturing במהלך הליך ציפוי פני השטח בשכבה מולקולרית לקידום הידבקות סלולרית. לאחר הסרת שבלונות, נוירונים הם מצופים והם יופנו באופן ספונטני לאזורים המצופים. על ידי הפחתת המרחק בין התא, ניתן להשיג מעגלים עצביים או מבודדים או מחוברים. כדי לקדם את הישרדות תא, תאי שיתוף תרבותיים עם רשת עצבית תמיכה הממוקמת בפריפריה של המנה התרבות. קלטות אלקטרו אופטיות של הפעילות של רשתות מודולרי המתקבלות על ידי שימוש בהתאמה מערכי מצע משובץ מיקרו אלקטרודה והדמיה סידן מוצגות. בעוד כל מודול תערוכות spontסינכרונים הגלובליים aneous, ההתרחשות של סנכרון בין-מודול מוסדר על ידי הצפיפות של חיבור בין המעגלים.

מבוא

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

עדויות ניסויית ותיאורטיות תומכות באפשרות שהמוח פועל באמצעות הפעלה מתואמת של מכלולי תא 1-5, שיכול להיחשב כיחידות פונקציונליות דינמיות שtransiently לתקשר אחד עם השני, עיצוב ומדינות שונות במוח בסיסי. המודולריות פונקציונלית תלויה גם ובקשור לארגון מודולרי המבני של המעגלים חשמליים במוח 6,7. איך תפקוד ומבנה של מעגלים חשמליים במוח באופן הדדי לעצב אחד את השני הוא עדיין אחת השאלות פתוחות העיקריות במדעי המוח. כדי לספק הבנה עמוקה יותר של שאלה זו, חשוב לזהות מסגרות ניסיוניות אופטימליות בו ניתן לטפל ב, לפחות באופן חלקי, בנושאים אלה. מאז נשלט מניפולציה של דינמיקת מרחב ובזמן של רשתות עצביות בניסויי in vivo הוא מאתגר, פיתוח המודלים רשתות עצביות במבחנה הוא עניין משמעותי בשל acc הקלessibility, ניטור, מניפולציה ודוגמנות 8,9. בשנים האחרונות, בטכנולוגיות מבחנה הנתמכות על ידי שיטות דפוסי מצע מתקדמות אפשרו לגרום לרשתות עצביות לפתח מגוון של מבנים מודולריים מוגדרים מראש 3 וללמוד את המאפיינים הפונקציונליים של רשתות עם טופולוגיות הוטלו 10. בפרט, שיטות שמשו לאחרונה לארגן רשתות על ידי הטלת מגבלות פיזיות 4,11. ואכן, כדי ללמוד את הקשר בין המבנה ותפקוד ברשתות עצביות ולספק ייצוג פשוט אך מתקבל על הדעת של אינטראקציה מכלולים עצביים, במבחנה מערכות אמורות לספק תת-אוכלוסיות עצביות בין המחובר. תרבויות הומוגני 2D נחקרו באופן נרחב עצביות לא להטיל מגבלות כלשהן על מרחבי החיווט מתהווה, באמצעות התארגנות העצמית של המעגלים. לכן גישה אפשרית לעצב אסיפות תא מלאכותי ביניהם היא למצב את האוכלוסיות עצביות שונות בירקאזורי ially מובחנים. המרחק בין האזורים אלה אינו מונע את הקשרים בין המכלולים. גישה זו, תוך הבטחת שליטה ניכרת על מורכבות רשת, הוכח לספק רפרטואר עשיר של דגמי סנכרון 6,7,12.

על מנת להקל על culturing שחזור של מכלולים עצביים מודולרי, פרוטוקול להרכיב את הארגון העצמי של רשתות עצביות לאשכולות מקושרים על ידי אקסונים ודנדריטים מוצג ומתואר. מבנה פולימרים לבידוד הפיזי של תרבויות עצביות נוצר מpolydimtheylsiloxane (PDMS). PDMS הוא אלסטומר בשימוש נרחב עבור יישומים ביו-רפואיים בשל biocompatibility, שקיפותה וחדירות לגזים 13. PDMS מוכן ולא נכלל בSU8 micromachined 2,075 14,15 מבנים על ידי PDMS נוזלי על "אדון", כפי שתואר בעבר באל ג'קמן et ציפוי ספין. 16 Tהוא השיג בדוגמת רשתות עצביות מורכבות ממודולים מחוברים בין גודל שונה והם התקבלו בהצלחה בשני coverslips ומערכי מיקרו אלקטרודה (MEAs) 17-20. הצפיפות של קשרים בין המודולים יכולה לשנות את התכונות של סנכרון הרשת, מרשת מסונכרנת באופן מלא, אופיינית לתרבויות אחידות, למדינות חולפות של סנכרון בין המודולים.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ההליך נעשה בהתאם לתקני NIH לטיפול ושימוש בחיות מעבדה ואושר על ידי ועדת אוניברסיטת תל-אביב הטיפול בבעלי חיים והשימוש (מספר רישיון - L-14-019).

1. הכנה של מכשירים וPDMS

  1. הכן את הרקיק (טבלה של חומרים, או להורות על הרקיק ממעבדת microfabrication), אזמל, ופינצטה - העיקור אינו נחוץ.
  2. הפוך poly-D- ליזין פתרון (PDL) על פי התנאים הבאים: 4 מ"ג / מיליליטר במאגר M 0.1 borate, pH 8, ולאחסן ב -20 ° C.
  3. הכן סטנסילים PDMS על פי הנוהל הבא:
    1. הכן polydimethylsiloxane (PDMS, אלסטומר סיליקון) על ידי ערבוב יחד הבסיס וסוכן הריפוי עם יחס של 10: 1, ולאחר מכן מערבבים את החומרים 2 לכ 5 דקות.
    2. בועות מניחים בתא ואקום פעמיים במשך 15 דקות בכל פעם ולאמת נעלמו.
    3. מתיPDMS מוכן, להכין coater ספין: ידיות חנקן פתוחות על מנת לאפשר שימוש בגז, הנח את פרוסות סיליקון (איור 1 א) על טווה, ולהשתמש בוואקום כדי למנוע ממנה לזוז.
    4. יוצקים PDMS על פרוסות סיליקון ולהפעיל את הטווה דקות 1 ב 1000 סל"ד (יוצר כ 100 מיקרומטר גובה).
    5. מניחים פרוסות על צלחת חמה ב 100 מעלות צלזיוס למשך 30 דקות.
    6. כאשר PDMS יש קשוח, לסמן הגבולות של סטנסיל עם PDMS, באמצעות פיפטה פסטר. מניחים פרוסות על צלחת חמה ב 100 מעלות צלזיוס למשך 30 דקות.
    7. כאשר גבולות PDMS הקשיחו, השתמש באזמל כדי לחתוך שבלונות לפי הגבולות ולקלף את השבלונה סיליקון מהרקיק (PDMS ריבוע המכיל תבנית אחת).

2. צלחת פטרי והכנת Slip כיסוי

  1. הכן 23 מ"מ מכסה מחליק זכוכית מרובעת ולנקות אותם לפי הסדר הבא:
    1. לשטוף עם מים מזוקקים, 70% אתנול, ואצטון.
    2. לשטוף עם isopropanol ומהיר יבש עם חנקן.
  2. הנח סטנסילים PDMS דוגמת על coverslip, ולחץ בעדינות כדי לוודא שהם מחוברים היטב למשטח הזכוכית. מניחים בתא ואקום במשך 15 דקות.
  3. ירידה של 1 מיליליטר של PDL בסטנסיל. הכנס את coverslip לתא הוואקום פעמיים במשך 20 דקות בכל פעם, ולהשאיר PDL O / N לייבוש.
  4. הכן צלחת פטרי ליצירת רשת סלולארי תומכת:
    1. מכסה את פני השטח של המנה (3.5 סנטימטרים) עם 1 מיליליטר של PDL לשעה 2 בRT. הסר את ירידת PDL בעזרת פיפטה.
    2. לשטוף עם מים מזוקקים ולהשאיר לייבוש. מניחים ירידה קטנה מאוד של שמן סיליקון על כל פינה של coverslip.
  5. מניחים את coverslip במרכז צלחת פטרי (כלומר, PDMS צריך לפנות כלפי מעלה) ולחץ בעדינות כדי לוודא קובץ מצורף.
  6. להסיר בעדינות PDMS מcoverslip באמצעות פינצטה. לעיקור, לחשוף לתאורת UV במשך 7 דקות.
"> 3 Multi אלקטרודה-Array le. (MEA) הכנה

  1. MEA הנקי בצו זה (טבלה של חומרים):
    1. לשטוף עם מים תחת ברז וsonicate בחומר ניקוי מרוכז, האנזימטית 3 פעמים.
    2. Sonicate במים מזוקקים 3 פעמים.
    3. לשטוף עם מים מזוקקים (במכסת מנוע, 1,000 קצה μl) במשך 3 פעמים ומקום תחת UV למשך 30 דקות.
  2. תמיכת הכנת רשת:
    1. הכן את עובש רשת תמיכה שתוכנן.
      1. יוצקים לתוך צלחת PDMS 12 גם (22 מ"מ קוטר).
      2. כאשר PDMS הוא התקשה להוציא את התבנית ובאמצעות אזמל, לחתוך חור באמצע כדי ליצור צורת טבעת.
      3. מניחים תבנית רשת תמיכה שתוכננה במרכז MEA (איור 2 א) ולכסות את שאר פני השטח עם PDL לשעה 2 ב RT.
    2. הסר PDL באמצעות פיפטה ולשטוף עם מים מזוקקים.
    3. להסיר את התבנית ולהשאיר לייבוש (איור 2 א).
  3. יישר סטנסיל לMEA באופן הבא:
    1. הנח סטנסיל על מניפולטור מיקרו מיועד. שימוש במיקרוסקופ הפוכה כדי ליישר במדויק מבנה בדוגמת לאלקטרודות, ולהפחית את השבלונה עד שהוא ממוקם על פני השטח MEA (איור 2).
      הערה: לתקשר עם MEA לנקות היטב מספק הידבקות תחרותית בין PDMS וMEA עצמו.
    2. הרם את micromanipulator ואם יש צורך, להשתמש בפינצטה כדי למרוח כמות קטנה של לחץ מעל PDMS כדי למנוע את זה ניתוק מMEA.
    3. לחץ בעדינות על סטנסיל למשטח MEA, ולהשתמש במיקרוסקופ כדי לוודא שהוא מחובר היטב, ומיושר היטב. (איור 2C-D).
  4. הנח MEA בתא ואקום במשך 15 דקות; לשים טיפת 1 מיליליטר של PDL בסטנסיל.
  5. הכנס לתא ואקום 2 פעמים במשך 20 דקות כל אחד. השאר PDL לייבוש O / N בחממה.
  6. לפני הציפוי, להסיר את PDMS סטנסילים מMEAs ולשטוף באמצעות סטרילי wאטר. הנח תחת תאורת UV במשך 7 דקות.

4. Dissection ותרבות

  1. הכן תרבויות כפי שמתואר בהרצוג et al. 2011 21.

5. ציפוי

  1. לחשב מספר התאים הדרושים לציפוי, באמצעות hemocytometer (צפיפות אופטימלית בהתאם לגודלו של המעגל כפי שנדון בתוצאה).
    1. ודא שחדר הספירה (hemocytometer) הוא נקי ובמקום להחליק כיסוי עליו (אלכוהול שימוש לנקות).
    2. לדלל 10 μl של ההשעיה התא 190 μl של ציפוי בינוני (דילול 1:20).
    3. טען 10 μl של התאים בדילול מלא על קצה חדר הספירה ולאט לאט פיפטה את התאים המאפשר לתא כדי למלא את עצמו.
    4. באמצעות מיקרוסקופ הפוכה, לדמיין את רשת haemocytometer. לקבוע את מספר התאים בתא על ידי ספירה ישירה (תאים בריאים צריכים להיות עגולים). ספירת התאים בתוך witho המרובע הגדולut אלה שחצו את הקצוות.
    5. חשב את הריכוז של תאים:
      מספר כולל של תאים / 1000 μl = סה"כ תאים נספרו × גורם לדילול × 10 4 (שטח של hemocytometer).
      הערה: לדוגמא, אם היה הגורם לדילול 20 והתאים הכולל נספרו היו 100:
      100 × 20 × 10 4 = 0.1 10 7 תאים / μl 1,000 x או 1 x 10 6/100 μl. כדי צלחת 0.75 x 10 6 תאים, לקחת 75 μl מתוך התאים.
  2. קח את מספר התאים הדרושים לציפוי לMEA הבודד או צלחת פטרי, resuspend התאים כדי למנוע צבירה, וצלחת אותם במרכז, על גבי שטח patternate (במידת צורך, ניתן לדלל את התאים במדיום) . לMEA, מקום טיפת 100 μl באמצע. לכיסוי להחליק, מקום טיפת 1,000 μl באמצע.
  3. דגירה התאים המצופה ב 37 מעלות צלזיוס במשך 40 דקות. הוסף בינוני ציפוי לתאים מצופים, עד 1מיליליטר לMEA ו -2 מיליליטר לכיסוי להחליק.
  4. שמור על 37 מעלות צלזיוס ו, כל 4 ימים, לדלל עם מדיום גידול טרי מועשר עם 0.5 פן-דלקת, 2% Glutamax B-27 ושל 0.75%.
  5. מ6/7 DIV, לאחר שראה את הקשרים בין האיים, לדלל בינוני עם 10 μl / מיליליטר FUDR (uridine deoxyuridine + 62.5 מ"ג 25 מ"ג ב12.5 מיליליטר ממ (בינוני נשר חיוני מינימאלי)), או כל סוכן אנטי mitotic אחר כדי למנוע גליה יתר.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

עובש SU8-2075 על פרוסות סיליקון בעובי תכונה של כ 100 מיקרומטר שימש לעצב את PDMS. הדפוס היה מורכב מריבועים של מספר ממדים, עם אורך צד ומרחק משתנים בין 200 ל 700 מיקרומטר (איור 1). הגודל של הכיכר נבחר כדי להתאים את שדה ראייה של 10X (לאיים עם אורך צד <800 מיקרומטר) ושל מטרת 20X (לאיים עם אורך צד <400 מיקרומטר). שלושה פרמטרים, כלומר צפיפות תאי ציפוי, מרחק בין מעגלים, הגודל 'המעגלים הם הקובע לקבלת monolayers או מעגלי מקובצים כמו גם להטיל ולעצב את הקישוריות שלהם. ע...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

פרוטוקול לגדול רשתות עצביות מודולרי 2D במבחנה המורכבת ממעגלים תפקודי-היתר קשור מתואר. ההליך מבוסס על דפוסי שכבת דבק סלולרית. דפוסים מושגת עם שבלונות PDMS לשחזר את התכונה השלילית של ארכיטקטורת הרשת הרצויה. סטנסילים PDMS להגדיר את האזורים שבם שכבת הדבק הסלולרית מופקדת. ברגע שתאים מצופה, הם באופן ספונטני להרכיב לאיים המצופים ועצמיים לארגן למעגלים בין המחובר פעילים. הקלטות של רשתות מודולרי פונקציונליות שהוקלטו באמצעות MEAs והדמיה סידן הוצגו.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

יש לי המחברים אין לחשוף.

תודות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

עבודה זו נתמכה על ידי האירופית פרויקט BRIANBOW (הסיירים צעירים FP7-, המחברים מבקשים להודות לד"ר יאקופו Tessadori על הערות מועילות על כתב היד, וסילביה Chiappalone על עזרתה בהפקת הגרפיקה המשמשת בוידאו.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
PDMS, Sylgard 184Dow Corning
Nalgene תא ואקוםThermo5305-0609
פולי-D-ליזין PDLSigmaP7886
גריז סיליקון - SILICAID 1010aidchim LtdH3375
ציפוי ספיןלורל - Technologies CorporationWS-650-23
צלחת תרבית 12 בארותסיגמאCLS3336
5-פלואורו-2'-דאוקסיורידיןסיגמאF0503
אורידיןסיגמאU3003
MEA1060-Inv-BCמערכות רב ערוציות
TC02רב ערוציות
עט סטרפטוקוקוסתעשיות ביולוגיות בית העמק03-033-1c
B-27ג'יבקו17504044
glutaMAXגיבקו35050-038
MEM מינימום חיוני בינוני-נשרתעשיות ביולוגיות בית העמק01-025-1B
מערכי מיקרו אלקטרודות 4Qמערכות רב ערוציות60-4QMEA1000iR-Ti-prמדריך ניקוי: http:// www.multichannelsystems.com
פרוסת סיליקוןSU8-2075פרוטוקול הכנה: http://www.microchem.com
מערכות מיקרוכימיה

מקורות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Buzsaki, G. Neural syntax: cell assemblies, synapsembles, and readers. Neuron. 68, 362-385 (2010).
  2. Meunier, D., Lambiotte, R., Bullmore, E. T. Modular and hierarchically modular organization of brain networks. Frontiers in Neuroscience. 4, 200(2010).
  3. Levy, O., Ziv, N. E., Marom, S. Enhancement of neural representation capacity by modular architecture in networks of cortical neurons. European Journal of Neuroscience. 35, 1753-1760 (2012).
  4. Berdondini, L., et al. A microelectrode array (MEA) integrated with clustering structures for investigating in vitro neurodynamics in confined interconnected sub-populations of neurons. Sensors and Actuators B-Chemical. 114, 530-541 (2006).
  5. Bisio, M., Bosca, A., Pasquale, V., Berdondini, L., Chiappalone, M. Emergence of bursting activity in connected neuronal sub-populations. PloS One. 9, e107400(2014).
  6. Shein Idelson, M., Ben-Jacob, E., Hanein, Y. Innate synchronous oscillations in freely-organized small neuronal circuits. PloS One. 5, e14443(2010).
  7. Shein-Idelson, M., Ben-Jacob, E., Hanein, Y. Engineered neuronal circuits: a new platform for studying the role of modular topology. Frontiers in Neuroengineering. 4, 10(2011).
  8. Bonifazi, P., et al. In vitro large-scale experimental and theoretical studies for the realization of bi-directional brain-prostheses. Front Neural Circuits. 7, 40(2013).
  9. Jungblut, M., Knoll, W., Thielemann, C., Pottek, M. Triangular neuronal networks on microelectrode arrays: an approach to improve the properties of low-density networks for extracellular recording. Biomedical Microdevices. 11, 1269-1278 (2009).
  10. Marconi, E., et al. Emergent functional properties of neuronal networks with controlled topology. PloS One. 7, e34648(2012).
  11. Taylor, A. M., Jeon, N. L. Microfluidic and compartmentalized platforms for neurobiological research. Critical Reviews in Biomedical Engineering. 39, 185-200 (2011).
  12. Sorkin, R., et al. Compact self-wiring in cultured neural networks. J Neural Eng. 3, 95-101 (2006).
  13. Mata, A., Fleischman, A. J., Roy, S. Characterization of polydimethylsiloxane (PDMS) properties for biomedical micro/nanosystems. Biomedical Microdevices. 7, 281-293 (2005).
  14. Campo, A. G. C. SU-8: a photoresist for high-aspect-ratio and 3D submicron lithography. Journal of Micromechanics and MicroengineeringEmail alert RSS feed. 17, 81-95 (2007).
  15. Liu, G. T. Y. Kan Y Fabrication of high-aspect-ratio microstructures using SU8 photoresist. Microsystem Technologies. 11, 343-346 (2005).
  16. Jackman, R. J., Duffy, D. C., Cherniavskaya, O., Whitesides, G. M. Using elastomeric membranes as dry resists and for dry lift-off. Langmuir. 15, 2973-2984 (1999).
  17. Pine, J. Recording action potentials from cultured neurons with extracellular microcircuit electrodes. Journal of Neuroscience Methods. 2, 19-31 (1980).
  18. Gross, G. W., Rieske, E., Kreutzberg, G. W., Meyer, A. New Fixed-Array Multi-Microelectrode System Designed for Long-Term Monitoring of Extracellular Single Unit Neuronal-Activity In vitro. Neuroscience Letters. 6, 101-105 (1977).
  19. Gross, G. W., Williams, A. N., Lucas, J. H. Recording of spontaneous activity with photoetched microelectrode surfaces from mouse spinal neurons in culture. Journal of Neuroscience Methods. 5, 13-22 (1982).
  20. Thomas, C. A., Springer, P. A., Loeb, G. E., Berwald-Netter, Y., Okun, L. M. A miniature microelectrode array to monitor the bioelectric activity of cultured cells. Experimental Cell Research. 74, 61-66 (1972).
  21. Herzog, N., Shein-Idelson, M., Hanein, Y. Optical validation of in vitro extra-cellular neuronal recordings. J Neural Eng. 8, 056008(2011).
  22. Maccione, A., et al. A novel algorithm for precise identification of spikes in extracellularly recorded neuronal signals. Journal of Neuroscience Methods. 177, 241-249 (2009).
  23. Dworak, B. J., Wheeler, B. C. Novel MEA platform with PDMS microtunnels enables the detection of action potential propagation from isolated axons in culture. Lab Chip. 9, 404-410 (2009).
  24. Georger, J. H., et al. Coplanar Patterns of Self-Assembled Monolayers for Selective Cell-Adhesion and Outgrowth. Thin Solid Films. 210, 716-719 (1992).
  25. Torimitsu, K., Kawana, A. Selective Growth of Sensory Nerve-Fibers on Metal-Oxide Pattern in Culture. Developmental Brain Research. 51, 128-131 (1990).
  26. Branch, D. W., Corey, J. M., Weyhenmeyer, J. A., Brewer, G. J., Wheeler, B. C. Microstamp patterns of biomolecules for high-resolution neuronal networks. Medical & Biological Engineering & Computing. 36, 135-141 (1998).
  27. Petrelli, A., et al. Nano-volume drop patterning for rapid on-chip neuronal connect-ability assays. Lab on a Chip. 13, 4419-4429 (2013).
  28. Boehler, M. D., Leondopulos, S. S., Wheeler, B. C., Brewer, G. J. Hippocampal networks on reliable patterned substrates. Journal of Neuroscience Methods. 203, 344-353 (2012).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

PDMSin vitro

מאמרים קשורים