הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

הערכה של נדידת תאי האנדותל לאחר חשיפה לכימיקלים רעילים

8.5K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/52768

⸱

10 ביולי 2015

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Bundeswehr Institute of Pharmacology and Toxicology, 2Walther Straub Institute of Pharmacology and Toxicology, Ludwig-Maximilians-Universität München, 3Department of Molecular and Cellular Sports Medicine, German Sports University Cologne

במאמר זה

סיכום

חקירה של נדידה מוקדמת של תאי אנדותל (EEC) חשובה להבנת הפתופיזיולוגיה של מחלות מסוימות וכדי לזהות אסטרטגיות חדשות להתערבות טיפולית. הפרוטוקול הבא מתאר טכניקות להערכת נדידת תאים שהותאמו לחקר EEC.

תקציר

חשיפה לחומרים כימיים (כוללים חומרי לחימה כימית אלקילציה כמו חרדל גופרית וחנקן) לגרום לשפע של תסמינים קליניים כוללים הפרעת ריפוי פצע. התהליך הפיזיולוגי של ריפוי פצע הוא מורכב ביותר. ההיווצרות של רקמת פרור היא צעד מפתח בתהליך זה וכתוצאה מכך סגירת פצעים ראשונית ומתן רשת של כלי דם נימים חדשים - בין אם באמצעות vasculogenesis (היווצרות רומן) או אנגיוגנזה (הנבטה של ​​כלי קיימים). שני vasculo- ואנגיוגנזה דורשת הגירה פונקציונלית, בבימויו של תאי האנדותל. כך, החקירה של הגירה מוקדם תא האנדותל (EEC) חשובה להבין הפתופיזיולוגיה של פצע כימי הנגרם על ריפוי הפרעות ופוטנציאל לזהות אסטרטגיות חדשות להתערבות טיפולית.

חוקרים הערכנו ריפוי פצע לקוי לאחר אלקילציה חשיפת סוכן ונבדקו תרכובות מועמד פוטנציאליות לTReatment. אנחנו השתמשנו בסט של טכניקות שתוארו בפרוטוקול זה. קאמרי בוידן שונה כדי לחקור כמותית chemokinesis של השוק האירופי המשותף מתואר. יתר על כן, השימוש בריפוי הפצע assay בשילוב עם ניתוח מסלול להעריך הגירה איכותית בא לידי ביטוי. לבסוף, אנחנו מדגימים את השימוש בTMRM הצבע פלואורסצנטי לחקירת פוטנציאל קרום המיטוכונדריה לזהות מנגנונים של נדידת תאים מופרעת. הפרוטוקול הבא מתאר טכניקות בסיסיות שהותאמו לחקירת EEC.

מבוא

נדידת תאים היא חשובה בתהליכים פיסיולוגיים רבים וpathophysiological כוללים פיתוח, מחלות שונות, וריפוי פצעים לאחר פציעת עור.

בעקבות פציעת עור, דלקת מסירה כונני רקמה ופרור פגומים או נמקי סגירת פצע ראשונית ומאפשרת היווצרות של רשת של נימי דם חדשים באמצעות vasculogenesis (היווצרות רומן) או אנגיוגנזה (הנבטה של שלפוחית ​​הקיימת) 1-3. שני vasculo- ואנגיוגנזה דורשת הגירה של תאי האנדותל. הרשת הולכת והגדלה של כלי דם חיונית להובלת חמצן וחומרים מזינים למתרבה קרטינוציטים שסופו של דבר לעבור קרטיניזציה, יוצר האפיתל חדש ולספק סגירת פצע.

הגירה לקויה של תאי האנדותל היא סיבה בסיסית של ריפוי פצע הפרעת 4,5. הגירה כך, שיטות להערכה של תאי האנדותל מוקדמים נדרשות לחקור את pathophysiology של הפרעות נדידת תאים ולזהות אסטרטגיות חדשות להתערבות טיפולית.

חשיפת עור לסוכני אלקילציה (למשל, גופרית וחנקן חרדל) גורמת ריפוי פצע הפרעה 6. תרכובות כאלה היו בשימוש כחומרי לחימה כימית במספר עימותים במאה ה -20 ולהישאר סיבה לדאגה חזקה בשל מאגרים קיימים באזורים לא יציבים מבחינה פוליטית וסינתזה פשוטה יחסית. למרות שגז החרדל היה מסונתז ראשון בשנת 1822, פתולוגיה המולקולרית והקלינית של חשיפת SM אינה מובנת בפירוט ולא תרופה לחשיפת SM זוהתה.

מספר מחקרים שנערכו להבין ומודל ריפוי פצע לקוי לאחר חשיפת SM ולבדוק לתרכובות מועמד פוטנציאליות מסוגלים להזמין השפעה ש. שמידט ואח '. (2009) בדק את ההשפעה של כלוראמבוציל, מתחם אלקילציה עם מאפיינים דומים לSM בmouדגמי SE גוף embryoid ומצא לפעמים ירידה בהיווצרות כלי 7 דרמטית, יותר מ 99%. השפעה שלילית זו בולטת ביותר בשלב של פיתוח אשר, בתנאים פיסיולוגיים, הוא נשלט על ידי ההתפשטות והנדידה של תאי האנדותל של כלי דם מבשר. כך, תאים אלה זוהו להיות רגישים במיוחד לאלקילציה סוכנים. Steinritz et al. (2010) נבדק אוכלי נבלות של מיני חמצן מגיבים (ROS), ב, N-acetylcysteine ​​מסוים (NAC) וחומצת אלפא לינולנית (ALA) ביכולתם להפחית את רעילות SM במודלי גוף עכבר embryoid ובפרט, ל לשחזר היווצרות כלי 8. השפעות מגנות זמניות נצפו, מצביעה על כך שהיווצרות ROS מוגזמת עשוי לתרום להשפעות השליליות של SM בריפוי פצעים. תופעות אלה לא היו קבועות ותרכובות שני המועמד לא יכולות להיות מסוגלים להחזיר היווצרות כלי וריפוי פצע בטווח הארוך 8. However, ניסויים אלה בוצעו במודל 3D מורכב שעשה יאפשר חקירה של נדידת תאים. לפיכך, אנו לאחר מכן נבדקו NAC וALA להשפעות מועילות על נדידת תאים של השוק האירופי המשותף שיש להם תפקיד מפתח בתהליך של היווצרות כלי 9.

יתר על כן, יש ראיות כי קוטביות התא נדרש לנדידת תאים. תפקוד לקוי של המיטוכונדריה המובילה להיווצרות ROS הוצג לפגוע בקוטביות תא ועלול להשפיע לרעה על כך נדידת תאים. לכן, הדמיה תא חי בכל קשור לתפקוד המיטוכונדריה בוצעה ואת ההשפעות של אוכלי נבלות ROS נבדקו. הפרוטוקול הבא מתאר דרישות כלליות לגידול של השוק האירופי המשותף, assay קאמרי בוידן, ריפוי הפצע assay כולל ניתוח מעקב תא והשימוש בTMRM להערכה של תפקוד המיטוכונדריה בפירוט. היבטים חשובים של פרוטוקולי ניסוי לגידול וההגירה EEC מודגשים.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

הפרוטוקול הבא מתאר טכניקות לחקירה של נדידת תאי אנדותל המוקדמת. הטיפוח הנכון של תאי האנדותל של כלי דם דורש מראש ציפוי של צלוחיות תרבית תאים עם ג'לטין כדי להבטיח שגשוג ותחזוקה נאותים של פנוטיפ האנדותל.

1. טרום ציפוי של צלוחיות תרבית תאים

  1. ממיסים ג'לטין ב 0.1 M PBS לריכוז סופי של 0.1%.
  2. החיטוי הפתרון עם פרמטרים למעוקר נוזלי (לפרטים ראו הוראות של החיטוי הספציפי).
  3. להוסיף נפח מספיק של פתרון ג'לטין autoclaved לבקבוק תרבות תא סטרילי (למשל, לפחות 5 מיליליטר לבקבוק תרבית תאי T25).
  4. העבר את צלוחיות לחממה (37 מעלות צלזיוס, 5% CO 2 אינו נדרש אבל לא מפריע) לפחות 30 דקות.
  5. הסר את פתרון ג'לטין שנותר. השתמש בצלוחיות מצופים מראש לאחר מכן (ראה טיפוח תא) או שלקרע בתנאים סטריליים עד לשימוש.

2. טיפוח תא של תאי האנדותל מוקדמים

הערה: תאי האנדותל מוקדמים בתאי גזע עובריים נגזרים (EEC) התקבלו מגופי embryoid עכברי מובחנים על ידי מיון תא מופעל מגנטי של שבריר התא החיובי PECAM-1 כמתואר לעיל 10,11.

  1. תרבות EEC על תרבות מנות תא ג'לטין המצופה DMEM בתוספת 15% FCS, 50 U / פניצילין מיליליטר, 50 U / ml סטרפטומיצין, L-גלוטמין 200 מיקרומטר, SS-mercaptoethanol 100 מיקרומטר ו 1% חומצות אמינו לא חיוניות. לטפל בתאים בתנאים סטריליים. לטפח את התאים עם 5% CO 2 על 37 מעלות צלזיוס ולחות של 95% עד תת-מפגש (מקסימום. 80%).
  2. בתת-מפגש, לפצל את התאים ביחס של 1: 5. הערה: הפלוגה של תאי האנדותל היא שלב קריטי.
    1. לקצור את התאים עם Accutase RT. הסר את המדיה, לשטוף עם PBS ולהוסיף 1 מיליליטר של Accutase 25 סנטימטר ל 2.
    2. דגירה הבקבוק ב RT עבור 2-10 דקות, עד שהתאים מנותקים. לפזר את התאים ולהעביר אותם ליישום הרצוי. הערה: נטרול כימי של Accutase אינו נדרש כפי שהוא מתרחש כאשר תאי זרע מאוחסנים בחממה על 37 מעלות צלזיוס. עם זאת, Accutase פעילות יכולה גם להיות ירידה על ידי הוספת DMEM FCS המכיל.

3. וידן קאמרית

הערה: מבחני קאמריים בוידן מבוצעים על ידי השימוש במערכות הכנס terephthalate פוליאתילן אור-אטומה עם גודל נקבובית 8 מיקרומטר.

  1. טרום מעיל מוסיף מסנן (נכון שבתוך בארות תרבית תאים ובכך ליצור חדר וידן) על ידי הוספת 500 μl של ג'לטין 0.1% מומס ב0.1 M PBS לפחות 30 דקות.
  2. אם תאים הם להיחשף לחומרים כימיים רעילים, לחשוף על פי תכנון הניסוי הספציפי לפני קצירת תא. הערה: תאים נחשפו ל12.5 מיקרוגרם כלוראמבוציל / מיליליטר DMEMלמשך 24 שעות. בכל קשור לתכנון הניסוי הספציפי, הוראות עשויות להשתנות.
  3. קציר EEC ולקבוע את המספר הסלולרי באמצעות תא תא ספירה. הערה: ניתן להשתמש במכשירי ספירה אוטומטיים, אך יש להשתמש בזהירות: ספירת תאים במדריך היא מדויקת יותר ומומלצת מאוד.
  4. הוסף 500 בינוני תרבית תאי μl לתוך תא התא התחתון של לשכת וידן.
  5. להוסיף בדיוק 10 4 EEC ב 500 בינוני תרבית תאי μl להוספת מסנן בתא התא העליון. לחסל את הבועות.
  6. דגירה מוסיף מסנן בחממה במשך 8 שעות בדיוק.
  7. לשטוף עם PBS אחת ולהחליף בינוניים עם paraformaldehyde 0.5 מיליליטר 4% בשני התאים במשך 25 דקות לקיבוע תא. שטוף את המסנן בהרחבה אבל לפחות 3 פעמים עם 0.1 M PBS.
  8. בלו הקרומים עם אזמל.
  9. הר הקרום בין שני תלושי כיסוי זכוכית עם הרכבה בינונית מכילים DAPI לstainin הגרעיניז. שים לב לנטייה. ודא כי תאים רק שהגרו לכיוון צד התא התחתון של הקרום נספרים.
  10. ספירת תאים שהגרו לכיוון צד התא התחתון של הקרום עם מיקרוסקופ פלואורסצנטי בהגדלה 400X. אל תבלבלו את הנקבוביות קרום עם תאים נדדו (איור 1 א, 1 ב '). לחקור מספר סביר של חזרות ביולוגיות (לפחות 3 משכפל ביולוגי למצב).

4. ריפוי פצע Assay

  1. בהתאם לציוד זמין, לבחור בקפידה את מנות תרבית תאים או צלחות: בעת השימוש במיקרוסקופ דסק"ש, להימנע ממאכלים המבוססת תרבות משטח פלסטיק או צלחות טובות, אבל להשתמש במכשירים מבוססים זכוכית במקום.
    הערה: אם באמצעות מיקרוסקופ שלב בניגוד, יכולות לשמש גם צלחות פלסטיק מבוססת.
  2. לטפח EEC במכשיר תרבית תאים מתאים (למשל, צלחת פטרי 4 סנטימטר זכוכית תחתונה מתאים להדמיה תא חי) עד מפגש 80%. חשוב: לא לטפח את התאים כדי להשלים מפגש.
  3. לגרד את monolayers עם 10 טיפים פיפטה μl סטרילי. דחף את הקצה בעדינות בלי יותר מדי לחץ על פני השטח הצלחת ולהעביר אותו בקו ישר בצורה חלקה מצד אחד לother.Wash התאים פעמיים עם 0.1 M PBS להסיר תאים מנותקים.
  4. הוספת נפח מספק של מדיום למנה התרבות. במידת צורך, להוסיף תרכובות שיש לחקור.
    הערה: 1.5 מיליליטר בינוני מכיל 15 ng / ml אלפא חומצה לינולנית נוסף.
  5. הר צלחת התרבות תחת מיקרוסקופ מסוגל הדמיה תא חי. ודא 5% CO 2, 37 מעלות צלזיוס ואווירת humidified.
    הערה: לחות חשוב במיוחד כדי למנוע אידוי בינוני.
  6. לרכוש תמונות זמן לשגות מעל 24 שעות ב 10 דקות במרווחים. תכנית לגדלי קבצים גדולים. הערה: רזולוציה של 512 x 512 פיקסלים היא בדרך כלל מספיק; עם זאת, אנו ממליצים להשתמש בתמונות של לפחות 1,024 x 1,024.
  7. מדוד את רוחב הפער בזמן t = 0 שעה ובזמן t = 24 שעות באמצעות כלי האורך של התוכנה המסופק עם מיקרוסקופ או להשתמש בתוכנת קוד פתוח (לדוגמא, ImageJ). הערה: בתוכנת רכישת תמונה וניתוח ספציפית כללית מסופק על ידי היצרן. לכן, לפרטים טכניים בנוגע לשימוש בתוכנה, עיינו במדריך.

מעקב 5. סלולארי

  1. בהתאם לציוד זמין, לבחור בקפידה את מנות תרבית תאים או צלחות: בעת השימוש במיקרוסקופ דסק"ש, להימנע ממאכלים המבוססת תרבות משטח פלסטיק או צלחות טובות, אבל להשתמש במכשירים מבוססים זכוכית במקום.
    הערה: אם באמצעות מיקרוסקופ שלב בניגוד, יכולות לשמש גם צלחות פלסטיק מבוססת.
  2. זרע 5 x 10 4 EEC DMEM בתוספת במכשיר תרבית תאים מתאים (למשל, צלחת 24 multiwell) ולטפח את התאים עם 5% CO 2 על 37 מעלות צלזיוס ולחות% 95 במשך 1-2 ימים.
  3. כאשר התאים גדלו עד 80מפגש%, להסיר את המדיה ותרבות התאים עם המדיה חדשה בנוכחות חומרי הבדיקה המתאימות (למשל, 12.5 מיקרוגרם כלוראמבוציל / מיליליטר DMEM). תמיד כוללים תאי שליטה (שטופלו בממס, למשל, אתנול) על 37 מעלות צלזיוס למשך פרק זמן מסוים (24 שעות, בהתאם למערכת assay הבודד).
  4. הר צלחת התרבות תחת מיקרוסקופ מסוגל הדמיה לחיות תא (37 מעלות צלזיוס, 5% CO 2 ולחות של 95%). לרכוש תמונות זמן לשגות מעל 24 שעות במרווחים מוגדרים מראש. לרכוש תמונות במרווחים של 10 דקות.
  5. לבצע באופן ידני מעקב של השוק האירופי המשותף על ידי השימוש בתוסף ImageJ MTrackJ. בחר 10 תאים באופן אקראי משדה הראייה ולעקוב אחר תנועותיהם על ידי הוספת נקודה לכל נקודת נתונים בזמן באמצעות "הוסף" הפקודה של MTrackJ.

הערה: MTrackJ זמין בחינם ובImageJ הוא availab [Meijering, Mtrackj "http://www.imagescience.org/meijering/software/mtrackj/".]le ב[ Rasband, ImageJ. "http://rsbweb.nih.gov/ij/"]. במדריך מפורט על תוסף MTrackJ זמין ב" http://www.imagescience.org ".

6. הדמיה של תא חי / הערכה של מיטוכונדריאלי ממברנה פוטנציאלי

  1. לטפח EEC במכשיר תרבית תאים מתאים (למשל, 4 סנטימטר צלחת זכוכית תחתונה פטרי מתאימה להדמיה תא חי) עד מפגש 80%.
    חשוב: אל לטפח את התאים כדי להשלים מפגש.
  2. במידת צורך, לחשוף את התאים לכימיקלים. הערה: תאים נחשפו לכלוראמבוציל / מיליליטר 12.5 מיקרוגרם למשך 24 שעות. בכל קשור לתכנון הניסוי הספציפי, הוראות עשויות להשתנות.
  3. הכן פתרון 10 מ"מ מניות של tetramethylrhodamine (TMRM) בDMSO. להגן מפני אור. הערה: פתרון המניות ניתן לאחסן ב -20 ° C.
  4. לדלל את פתרון המניות במדיום תרבית תאים לפתרון עובד עם ריכוז של 10 מיקרומטר (1: 1,000 דילול). להגן מפני אורולהשתמש בהקדם האפשרי. הערה: הפתרון עובד יכול להיות כל הזמן בRT לכמה זמן (HR> 1), לעומת זאת, הכנה של פתרון עובד טרי מומלצת מאוד.
  5. הוסף 2 μl של הפתרון עובד עד 1 מיליליטר בינוני (פתרון טעינה) תרבית תאים טרי.
  6. טען את התאים על ידי החלפה בינוני תרבית תאים עם פתרון הטעינה. דגירה במשך 15 דקות על 37 מעלות צלזיוס, 5% CO 2 ואווירה humidified (חממה). זהירות: כמעט כל האינדיקטורים הקרינה מיוצאים על ידי תאי חיים לאורך זמן; לכן להימנע מהעמסה ממושכת או ניתוח מתעכב.
  7. ללא שטיפה, מניח את הצלחת תחת מיקרוסקופ המתאים להדמיה תא חי. חשובה: מדדי הקרינה הם רגישים מאוד לאור, ולכן, יש להימנע מחשיפה לאור מיותרת.
  8. לרכוש תמונות מבלי לשנות את הפרמטרים הרכישה כדי להבטיח השוואתיים בין תמונות שונות.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

חשיפת עור לסוכני אלקילציה מעוררת אודם, היווצרות כיב כיב עורי ושמזוהה עם הפרעת ריפוי פצע. ריפוי פצע דורש vasculogenesis angio- ואשר מבוססים על הגירה של תאי האנדותל. הגירה כמותי יכולה להיות מוערכת על ידי שימוש של assay קאמרי בוידן. כפי שניתן לראות בתרשים 1C חשיפה של השוק האירופי המשותף לכלוראמבוציל סוכן אלקילציה הביא לירידה משמעותית בתא הגירה 9. תוספת של חומצת אלפא-ROS הנבלות לינולנית (ALA) מייד לאחר החשיפה לכלוראמבוציל למשך 24 שעות הצילה באופן משמעותי פנ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

חשיפת עור לחומרים כימיים רעילים לעתים קרובות תוצאות הפרעה בריפוי פצע חמורה. המנגנונים הם במידה רבה לא ידועים. ריפוי פצע הוא תהליך מורכב הכולל שלבים שונים (עצירת דימום, דלקת, שגשוג ושיפוץ). נדידת תאים מעורבת בכל שלב, לעומת זאת, זה הוא בעל חשיבות עליונה ליצירת רקמת פרור. הנה, כלי דם חדשים נוצרים גם על ידי angio- או vasculogenesis.

שני התהליכים דורשים הגירה מושפעת של מבשר ותאי האנדותל מוקדמים. הערכה של נדידת תאים וה...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

למחברים אין מה לחשוף.

תודות

עבודה זו מומנה על ידי משרד ההגנה הגרמני (מענק מס' M-SAB1-6-A009).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
בוידן צ'יימבר 
תוספות שטופלו בתרבית רקמות Corning FluoroBlok (TC), 24 באר - 3 ומיקרו; mCorning Incorporated#351151
Corning FluoroBlok Tissue Culture (TC) תוספות מטופלות, 24 באר - 8 ומיקרו; mLife Sciences#351152
(לשימוש עם Falcon Insert 24 well Companion Plate (353504)
Wound  Healing Assay
Bottom Instruments Word Precision, Inc.#FD35-100
הערכת הפוטנציאל
TMRM (tetramethylrhodamine methylester)Life Technologies#T669
תרבית
AccutasePAA, Pasching, אוסטריה# L11-007
&-חומצה לינולניתFluka (Sigma), Steinheim, גרמניה # L2376
כלורמבוצילפלוקה (סיגמא), שטיינהיים, גרמניה# 23125
ג'לטיןסיגמא-אולדריץ', שטיינהיים, גרמניה# G2500-100 גרם
Glass המיטוכונדריאליתאים

מקורות

  1. Bauer, S. M., Bauer, R. J., Velazquez, O. C. Angiogenesis, vasculogenesis, and induction of healing in chronic wounds. Vascular and Endovascular Surgery. 39, 293-306 (2005).
  2. Reinke, J. M., Sorg, H. Wound repair and regeneration. European Surgical Research. Europaische Chirurgische Forschung. Recherches Chirurgicales Europeennes. 49, 35-43 (2012).
  3. Hart, J. Inflammation. 1: Its role in the healing of acute wounds. Journal of Wound Care. 11, 205-209 (2002).
  4. Liu, Z. J., Hyperoxia Velazquez, O. C. endothelial progenitor cell mobilization, and diabetic wound healing. Antioxidants & Redox Signaling. 10, 1869-1882 (2008).
  5. Gallagher, K. A., Goldstein, L. J., Thom, S. R., Velazquez, O. C. Hyperbaric oxygen and bone marrow-derived endothelial progenitor cells in diabetic wound healing. Vascular. 14, 328-337 (2006).
  6. Kehe, K., Balszuweit, F., Steinritz, D., Thiermann, H. Molecular toxicology of sulfur mustard-induced cutaneous inflammation and blistering. Toxicology. 263, 12-19 (2009).
  7. Schmidt, A., et al. Nitrogen mustard (Chlorambucil) has a negative influence on early vascular development. Toxicology. 263, 32-40 (2009).
  8. Steinritz, D., et al. Effect of N-acetyl cysteine and alpha-linolenic acid on sulfur mustard caused impairment of in vitro endothelial tube formation. Toxicological Sciences. 118, 521-529 (2010).
  9. Steinritz, D., et al. Chlorambucil (nitrogen mustard) induced impairment of early vascular endothelial cell migration - Effects of alpha-linolenic acid and N-acetylcysteine. Chemico-biological Interactions. 219C, 143-150 (2014).
  10. Schmidt, A., et al. Influence of endostatin on embryonic vasculo- and angiogenesis. Developmental Dynamics : an Official Publication of the American Association of Anatomists. 230, 468-480 (2004).
  11. Dainiak, M. B., Kumar, A., Galaev, I. Y., Mattiasson, B. Methods in cell separations. Advances in Biochemical Engineering/Biotechnology. 106, 1-18 (2007).
  12. Wang, Y., et al. Regulation of VEGF-induced endothelial cell migration by mitochondrial reactive oxygen species. American Journal of Physiology. Cell physiology. 301, C695-C704 (2011).
  13. Boyden, S. The chemotactic effect of mixtures of antibody and antigen on polymorphonuclear leucocytes. The Journal of Experimental Medicine. 115, 453-466 (1962).
  14. Relou, I. A., Damen, C. A., van der Schaft, D. W., Groenewegen, G., Griffioen, A. W. Effect of culture conditions on endothelial cell growth and responsiveness. Tissue & Cell. 30, 525-530 (1998).
  15. Smeets, E. F., von Asmuth, E. J., vander Linden, C. J., Leeuwenberg, J. F., Buurman, W. A. A comparison of substrates for human umbilical vein endothelial cell culture. Biotechnic & Histochemistry : Official Publication of the Biological Stain Commission. 67, 241-250 (1992).
  16. Perry, S. W., Norman, J. P., Barbieri, J., Brown, E. B., Gelbard, H. A. Mitochondrial membrane potential probes and the proton gradient: a practical usage guide. BioTechniques. 50, 98-115 (2011).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

Boyden Chamber AssayTMRMChlorambacilROS
הערכה של נדידת תאי האנדותל לאחר חשיפה לכימיקלים רעילים
צור קשר
המלצה לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

2026 © זכויות יוצרים MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.