הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

עירוי stereotaxic של Oligomeric עמילואיד-ביתא להיפוקמפוס העכבר

18.7K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/52805

⸱

17 ביוני 2015

 ,  ,  ,  , 
1Department of Pathology and Cell Biology, Columbia University Medical Center, 2The Taub Institute for Research on Alzheimer's Disease and the Aging Brain, Columbia University Medical Center, 3Department of Neurology, Columbia University Medical Center

במאמר זה

סיכום

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לעירוי מוח סטריאוטקסי ישיר של עמילואיד-בטא. מתודולוגיה זו מספקת מודל עכבר in vivo חלופי לטיפול בהשפעות קצרות הטווח של עמילואיד-בטא על נוירונים במוח.

תקציר

מחלת אלצהיימר היא מחלה ניוונית של מערכת עצבים המשפיעה על הזדקנות האוכלוסייה. תכונת נוירו מפתח של המחלה היא ייצור היתר של עמילואיד-ביתא והתצהיר של לוחות עמילואיד-ביתא באזורים במוח של האנשים הנגועים. לאורך שנות מדענים יצרו מודלים עכבר מחלת אלצהיימר רבים המנסים לשכפל את הפתולוגיה עמילואיד-ביתא. למרבה הצער, המודלים העכבר רק באופן סלקטיבי לחקות את תכונות המחלה. מוות עצבי, השפעה בולטת במוחם של החולים במחלת האלצהיימר, חסר ניכר בעכברים אלו. לפיכך, אנו ואחרים מועסקים שיטה של ​​יציקת ישירות מינים מסיסים oligomeric של עמילואיד-ביתא - צורות של עמילואיד-ביתא שהוכחו כרעילים ביותר לתאי עצב - stereotaxically לתוך המוח. בדוח זה אנו מנצלים זכר C57BL / 6J לתעד טכניקה ניתוחית זו של הגדלת רמות עמילואיד-ביתא באזור במוח בחר.יעד עירוי הוא gyrus המשונן של ההיפוקמפוס בגלל מבנה המוח הזה, יחד עם המוח הקדמי הבסיסי שמחובר על ידי מעגל כולינרגית, מייצג את אחד מהאזורים של ניוון במחלה. התוצאות של הרמת עמילואיד-ביתא ברכס המשונן באמצעות עירוי stereotaxic לחשוף עלייה באובדן תא עצב ברכס המשונן בתוך השבוע 1, בעוד שיש עלייה במקביל במוות של תאים ואובדן תא עצב כולינרגית באיבר האנכי של הלהקה האלכסונית של ברוקה של המוח הקדמי הבסיסי. תופעות אלה נצפו עד 2 שבועות. הנתונים שלנו מצביעים על כך שמודל עירוי עמילואיד-ביתא הנוכחי מספק מודל עכבר חלופי לטיפול במות נוירון ספציפי אזור בבסיס לטווח קצר. היתרון של מודל זה הוא שעמילואיד-ביתא יכול להיות מורם באופן מרחב ובזמן.

מבוא

פיקדונות עמילואיד פלאק, אשר מורכבים של עמילואיד-ביתא (Aβ 1-42), הם תכונה מרכזית של הפתולוגיה של מחלת אלצהיימר (AD). מחקרים רבים הראו כי רמות גבוהות או רעילות של Aβ oligomeric רקומביננטי 1-42 לעורר מוות עצבי, ניוון הסינפטי, אובדן וחוסר תפקוד; וכן את גירעונות למידה וזיכרון 1-4. אזורים במוח המושפעים כוללים את ההיפוקמפוס, קליפת המוח, ומבנים קורטיקליים כגון המוח הקדמי הבסיסי ו5,6 האמיגדלה. נכון להיום, יש מודלים עכבר מהונדסים מרובים המנסים לדמות את הפתולוגיה Aβ 1-42 של הספירה. בהתאם לזן בעלי חיים אלה להוכיח להיות שימושיים בבדיקה פתולוגית תכונות נבחרות של הספירה. למרבה הצער, למעט 2 קווים מהונדסים, APP23 ו5XFAD, עכברים אלה לא לשכפל באופן מלא איבוד עצבי, היבט מרכזי של הספירה. אפילו עם האובדן העצבי שנצפה בAPP23 ו5XFAD, obser המוות העצביved היה עדין, גיל תלוי, ומבודד לאזורים נבחרים כמה 7,8.

העירוי הישיר של Aβ oligomeric 1-42 לתוך מוח עכבר wild-type מספק מצוין במודל vivo שמשכפל את היבט המוות העצבי של amyloidopathy 1,9,10. בניגוד למודלי העכבר המהונדס הנפוצה ניצלו את מודל עירוי oligomeric Aβ 1-42 הוא אידיאלי עבור חריפות הרמת Aβ 1-42 רמות באופן מרחב ובזמן. היתרון של שימוש בעכברי wild-type עבור דגם זה מבטל השפעות פיצוי או צד פוטנציאל מהמוטציות הציגו בקווי עכבר מהונדסים. מחקרים קודמים הראו כי רמות רעילות של יציקת Aβ 1-42 להיפוקמפוס מעוררת מות נוירון בקרבת אתר ההזרקה בתוך השבוע 1 1. יתר על כן, עולה בקנה אחד עם התצפית שAβ 1-42 הוא רעיל לתאי עצב כולינרגית 11 המוח הקדמי הבסיסיאוכלוסיית כולינרגית נוירון (BFCN) שמקרינה להיפוקמפוס היא ירד 20-50% בתוך 7-14 ימים הבאים עירוי בטא-עמילואיד בעכברי 1,10, ביעילות ומאפשרת לבחינות של מעגלים עצביים במוח מבודד. מאז פרויקט BFCN ipsilaterally לgyrus המשונן של 12 היפוקמפוס, לשליטה חלק / הרכב וAβ 1-42 פתרונות oligomeric ביותר ניתן להזריק בכל צד של המוח ומאפשר השוואות שנעשו בין האונות ימנית והשמאלי 1.

בדוח זה אנו מספקים מתודולוגיה ניתוח והזרקה מפורטת לC57BL / 6J עכברים בוגרים wild-type. זן עכבר זה נבחר בשל השימוש הרחב שלה במחקר. מבחינה טכנית, כל אזור במוח יכול להיות ממוקד לעירוי, אולם כאן אנו משתמשים ברכס המשונן של ההיפוקמפוס כמטרה להמחיש את הטכניקה.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

הערה: כל הניסויים בבעלי החיים, מוסדי והנחיות הלאומיות לטיפול ושימוש בבעלי החיים במעבדה היו במעקב.

1. הכינו מכשירי ניתוח ופתרונות לניתוח

  1. החיטוי כל מכשירי ניתוח הנירוסטה.
  2. הכן אתנול 70% על ידי דילול אתנול מוחלט 200 הוכחה עם deionized מים כיתה מולקולרית סטרילי מזוקק.
  3. צרף את מחט G 29 למזרק המילטון. נקה את הפנים של מזרק המילטון ומחט על ידי ציור ומים ולהוציא שוב ושוב nanopure דקות 1. חזור על תהליך זה עם 70% אתנול.
    1. הסר את הבוכנה ומחט ממזרק המילטון. אוויר יבש החלקים בO מכסה המנוע זרימה למינרית / N.
    2. מכשיר את המחט ומזרק עם אור אולטרה סגול למשך 30 דקות לפני השימוש.
  4. הכן תמיסת מלח על ידי המסת NaCl במי כיתה מולקולריות למשקל סופי לריכוז נפח של 0.9%. SteriliZE את הפתרון על ידי סינונו דרך מסנן 0.2 מיקרומטר נקבובית.

2. הכן Oligomeric Aβ 1-42

  1. Monomerize וresuspend Aβ 1-42 האנושי רקומביננטי בDMSO ל5 מ"מ בדיוק כפי שמתוארת בפרסום פא 'ואחרים 13.
  2. לדלל 5 מ"מ Aβ 1-42 עם סטרילי (1x) PBS ביום 100 מיקרומטר לפני הניתוח.
  3. מערבבים את הפתרון היטב על ידי טחינה דקה.
  4. דגירה פתרון Aβ 1-42 במשך 12 שעות ב4C.
    הערה: פתרונות בקרה כגון דילול DMSO ב PBS או מקושקשת / הפוכים Aβ 1-42 פפטיד צריך להיות מוכן באותו אופן כמו Aβ 1-42.

3. לקבוע את קואורדינטות הזרקה

  1. השתמש באטלס מוח עכבר המבוגר כדי לקבוע קדמי, אחורי המדויק (AP), המדיאלי-רוחב (ML), וגב-הגחון (DV) קואורדינטות לאזור במוח של עניין 14.
    לאטה: כדי להמחיש את הטכניקה שהרמנו gyrus המשונן של ההיפוקמפוס כיעד עם הקואורדינטות מגבחת הבאות: AP, -2.00 מ"מ; ML, ± 1.3 מ"מ; DV, -2.2 מ"מ. הסימן השלילי שקדמו לערך AP מציין שזה 2.00 מ"מ אחורי של גבחת. סימן ± שקדמו לערך ML מצביע על כיוון ימין ועל שמאל מהמרכז. לבסוף, הסימן השלילי שקדמו לDV מציין הוא נע ventrally מפני שטח של המוח.

4. הגדרת מסגרת stereotaxic

  1. ללבוש מסכה כירורגית פנים, מעבדה מעיל נקי, וכפפות מנתחים סטרילית.
  2. נגב את מכשיר stereotaxic ומתאם עכבר עם 70% אתנול.
  3. נשכב לעטוף כירורגית סטרילית על הדלפק.
  4. מניחים את מכשיר stereotaxic עם מתאם עכבר על גבי וילון ניתוח סטרילי.
  5. נגב את כרית חימום עכבר עם 70% אתנול. מקם את כרית החימום מעל מיטת מסגרת stereotaxic. השתמש labora מטרות הכלליקלטת תיוג הטורים לקלטת את כרית החימום מעל מיטת מתאם עכבר.
    1. צרף את כרית החימום למשאבת recirculator מים החמה על פי הוראות יצרן.
    2. הפעל את משאבת recirculator מים החמה ולהגדיר את הטמפרטורה ל -37 מעלות צלזיוס, ולאחר מכן לחכות עד שזה מגיע לטמפרטורה.
  6. להדביק את מזרק המילטון 50 μl עם מחט G 29 על מסגרת stereotaxic ידי הברגה אותו על מוט הזרקה האנכי הממונע על פי הוראות יצרן.
  7. הפעל מעקר את החרוז ולחכות עד שהוא מגיע לטמפרטורה שנקבעה מראש של היצרן.
    הערה: זה משמש לחיטוי מכשירי נירוסטה בין בעלי החיים. זה לוקח 20 שניות מכשירים מגע עם חרוזים לעיקור.
  8. הפעל צלחת חמה ולהגדיר אותו 42 מעלות צלזיוס ולמקם את כלוב ריק נקי על גבי.
  9. בעוד מזרק המילטון קבוע במסגרת stereotaxic להשתמש אני stereotaxic הממונעnjector לצייר את פתרון Aβ 1-42.
    הערה: צייר יותר מ 4 μl של הפתרון לתוך המזרק ולאחר מכן להשתמש במזרק stereotaxic להגדיר הזרקת הנפח. הפעל את המזרק לפי הוראות יצרן.

5. הכנת בעלי החיים

  1. לקבוע את המשקל של העכבר באמצעות לשקול בקנה מידה.
  2. הרדימי עכבר עם קוקטייל קטמין / xylazine על 100 מ"ג / קילוגרם קטמין ו -10 מ"ג / קילוגרם xylazine על ידי הזרקת intraperitoneally (IP). צג עומק ההרדמה על ידי האובדן של רפלקס קמצוץ הבוהן.
  3. לאחר העכבר מסומם לקחת גוזז השיער ולגלח את ראשו כדי לחשוף את העור מעל הגולגולת.
  4. מניחים את העכבר על גבי כרית החימום על גבי מיטת stereotaxic.
  5. השתמש במרית כדי לפתוח את הפה ולמקם את השיניים החותכות בתוך שומר השיניים. Secure מזנקים על פניו של העכבר. הצמד אותו בעדינות ולא חזק מדי.
  6. POSItion crossbars האוזן דו-צדדי לmeatus השמיעתי כדי לאבטח את הראש. העבר כל משקוף בעד שהוא פוגע בגולגולת, ולאחר מכן הפעל את הבורג כדי לנעול אותו.
    1. כדי לוודא את הראש מאובטח להשתמש האצבע שלך לדחוף בעדינות על הראש. אם הראש הוא מאובטח כראוי זה לא ייתן את או להעביר בעת הקשה.
  7. החל ירידה של קרם עיניים או טיפי עיניים לעיניים כדי לשמור אותם לחים. ודא העיניים לחות לאורך כל ההליך כירורגי.
  8. לחטא את האתר כירורגית להשתמש צמר גפן סטרילי ליישם פתרון בבטאדין לעור על הגולגולת, ואחריו אתנול 70%. בצע את בטאדין משתנה ואתנול 70% ניקיון פי 2 יותר.

6. ניתוח ועירוי

  1. השתמש אזמל לעשות חתך 2-3 מ"מ בקו האמצע של הקרקפת, ולאחר מכן להשתמש במספריים עדינים ישר להאריך את קו החתך ל1.0-1.5 סנטימטר לחשוף את תפר sagittal, גבחת, ומבדה של הגולגולת, אתרים שקואורדינטות stereotaxic מבוססות על. השתמש מהדק מיקרו כדי לשמור על העור בנפרד.
    הערה: עמדות גבחת ומבדה מוסברות באטלס מוח העכבר "מוח העכבר בStereotaxic קואורדינטות" 14.
  2. קח מקלון צמר גפן, לטבול אותו בתמיסת מלח סטרילית, ולהשתמש בו כדי לנקות את הגולגולת. לאחר מכן, השתמש ספוגית נקייה כותנה יבשה לייבש את הגולגולת.
  3. השתמש בעט נקודת קנס סטרילי כדי לסמן נקודה על גבחת. השתמש micromanipulator stereotaxic כדי למקם את מזרק המילטון, כך שקצה המחט רק נוגע בנקודה על גבחת.
    1. רשום את DV התיאום.
    2. כדי לבדוק אם ציר AP של הגולגולת הוא ברמה להזיז את מזרק המילטון בדיעבד, כך שקצה המחט נוגע בנקודה למבדה.
    3. רשום את עמדת DV. ודא DV קואורדינטות עבור גבחת ומבדה נמצא 0.5 מ"מ.
      הערה: המטרה היא למזער את ההבדל בין DV גבחת ולמבדה.
  4. השתמש במ 'icromanipulator להחזיר את קצה מחט מזרק המילטון חזר לנקודת גבחת.
  5. רשום את עמדת AP מתחילה.
  6. לחשב את מיקום AP סיום על ידי הפחתת 2.00 מ"מ מAP מתחיל לתאם.
  7. השתמש micromanipulator כדי למקם את מחט מזרק המילטון לAP הסופי לתאם.
  8. רשום את ML הנוכחי לתאם.
  9. לחשב את ימין ועל השמאל שהסתיים ML קואורדינטות על ידי הוספה או הפחתה של 1.3 מ"מ ממתחיל ML לתאם.
  10. השתמש micromanipulator להזיז את מחט מזרק המילטון לאו ML הסיום לתאם.
    1. לגעת בקצה המחט אל פני השטח של הגולגולת על שני קואורדינטות ML הסתיימו ולהקליט את קואורדינטות DV ולוודא הערכים הם בתוך 0.5 מ"מ.
      הערה: המטרה היא למזער את ההבדל בין DV שני מסתיימים ML קואורדינטות.
    2. בעוד בסיום לתאם למשוך את המחט עד 0.5-1 סנטימטר מעל הגולגולת. קח עט משובח סטרילי כדי לסמן נקודה על המשטח דואר של הגולגולת. חזור על שלב זה לצד הנגדי של הגולגולת.
  11. Swing מזרק המילטון ברור מהדרך.
  12. צרף ראש מקדח 0.8 מ"מ לתרגיל. קח את התרגיל בשתי הידיים, מרפקים להגדיר על פני השטח של השולחן ליציבות, ולמקם את ראש המקדח מעט מעל הנקודה לנוכל על השמאל או ימין ML לתאם. הפעל את התרגיל, להוריד את קצה המקדח על פני הגולגולת להציג חור בגולגולת. חזור על שלב זה לצד הנגדי.
    הערה: דימום מסוימים עשוי להתרחש מהחורים החדשים הציגו. אם יש דימום ולאחר מכן להשתמש ספוגית נקייה כותנה יבשה להספיג את הדם.
  13. הזז את מזרק המילטון בחזרה להגנה על אחד מחורי ML החדשים הציגו. מנמיכים את מחט המילטון רק עבר הגולגולת. בשלב זה להיזהר לא לנקב את המוח. כדי לוודא שהמחט עברה את הגולגולת לקחת האצבע שלך ודחפה בעדינות את המחט נגד הגולגולת לעשות surדואר המחט לא לצאת מהחור.
  14. רשום את DV מתחיל לתאם.
  15. לחשב את DV הסיום לתאם ידי הפחתה של 2.2 מ"מ מDV מתחיל לתאם.
  16. מנמיכים את המחט עד לסיום DV לתאם.
  17. הפעל את משאבת הזרקת stereotaxic לשאוב 4 μl של Aβ 1-42 לgyrus המשונן בשיעור של 0.5 μl / דקה.
  18. כאשר העירוי יושלם לתת את המחט להישאר במקום במשך דקות 1 נוספת כדי למזער backflow של פתרון מאתר ההזרקה.
  19. להזיז את המחט לצד השני של המוח האחר וחזור על השלבים 6.13-6.18.

7. הסרת בעלי חיים ולאחר ניתוח טיפול

  1. להתיר את הברים אוזן ושומר פנים / האף. הסר את העכבר מן המנגנון.
  2. השתמש במלקחיים דפוס סטנדרטיים תלמיד למשוך לסגור את הקרקפת ולאחר מכן לאטום את הפצע עם תפר.
  3. הזרק 1 מיליליטר של תמיסת מלח סטרילית לעכבר באמצעות IP ללחות.
  4. בעצירות JECT (0.1 מ"ג / קילוגרם) תת עורי כדי להקל על כאב.
  5. לשמור על העכבר בכלוב הריק הנקי להגדיר על גבי צלחת חמה 42 מעלות צלזיוס עד שמתעורר, ואז להחזיר אותו לכלוב הדיור שלה עם אוכל ומים בשפע.
  6. לנהל עצירות באמצעות הזרקה תת עורית כל 12 שעות במשך 3 ימים להקלה על כאב.

הסרת 8. תפר

  1. הרדימי עכבר עם קוקטייל קטמין / xylazine על 100 מ"ג / קילוגרם קטמין ו -10 מ"ג / קילוגרם xlyazine ידי ה- IP. הערה: זה נעשה 7-10 ימים לאחר הניתוח.
  2. השתמש במלקחיים תלמיד סטנדרטיים דפוס ומספריים עדינים ישר להסיר את התפר.
  3. הזרק 1 מיליליטר של תמיסת מלח סטרילית לעכבר באמצעות IP ללחות.
  4. לשמור על העכבר בכלוב ריק נקי להגדיר על גבי צלחת חמה 42 מעלות צלזיוס עד שמתעורר, ולאחר מכן להחזיר אותו לכלוב הדיור שלה עם אוכל ומים בשפע.

עיבוד קורבן ורקמות 9. בעלי חיים

  1. להרדים את העכבר ועמ 'erfuse אותו עם 4% paraformaldehyde 15, להסיר את המוח, ולעבד אותו לcryosectioning 16.
    הערה: התזמון של הקרבת בעלי החיים תלוי בניסוי. עם זאת, ללימודים שלנו בחרנו 7 ו -14 ימים שלאחר ניתוח.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

השיטה הנוכחית של הכנת Aβ 1-42 oligomeric רקומביננטי האנושי מניבה מיני oligomeric מסיסים בהיקף של מונומרים, הדימרים, trimers, וtetramers (איור 1 א). מינים אלה נמוכים משקל מולקולרי Aβ 1-42, אבל לא את הסיבים ושלטים, הוכחו בהגדרות רבות להיות רעיל ביותר לתאי עצב 1,4,9,17-19. כדי לקבוע אם או לא oligomeric Aβ 1-42 גורם למוות תאי עצב במוח העכבר Aβ 1-42 (4 μl של 100 מיקרומטר פתרון מניות) היה החדיר לתוך DG של ההיפוקמפוס...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

כדי להשיג הזרקת Aβ 1-42 מוצלחת הנסיין או המנתח חייב: 1) להשתמש בטכניקה האספטי; 2) בצורה נכונה לזהות את האזור במוח של עניין עם קואורדינטות מדויקות; 3) להיות מסוגל לאבטח את העכבר כראוי במסגרת stereotaxic עם המוח המפולס בציר AP וML; 4) יש את היכולת להפעיל את micromanipulator עם דיוק; 5) להבטיח טיפול שלאחר ניתוח נכון. אם הם אחרי השלבים העיקריים אלה העכבר צריך לשרוד את הניתוח ללא זיהום הנצפה.

בקנה אחד עם מח...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

המחברים מצהירים שאין להם אינטרסים כלכליים מתחרים.

תודות

עבודה זו נתמכה על ידי המכון הלאומי להפרעות נוירולוגיות ושבץ להעניק NS081333 (לCMT), NIRG-10-171,721 אלצהיימר מענק האיגוד והמכון הלאומי לבריאות נפש מענק MH096702 (לUH), ומכון לאומי להזדקנות במימון מחקר מחלת אלצהיימר מרכז בAG008702 מענק טייס אוניברסיטת קולומביה (לYYJ וJB).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
קטמין הידרוכלוריד (100 מ"ג/מ"ל)Henry Schein Medical1049007100 מ"ג קטמין לכל 1 ק"ג בעל חיים
קסילזין (20 מ"ג/מ"ל)Henry Schein Medicalלא זמין 10מ"ג קסילזין לכל 1 ק"ג בעל חיים
בופרנקס (0.3 מ"ג/מ"ל)Henry Schein Medical12177930.1 מ"ג בופרנקס לכל 1 ק"ג בעל חיים
A&BETA; <תת>1-42דיוויד טפלו/UCLAלא זמין100 μ M; עמילואיד זה שימש במאמר
Aβ 1-42BachemH-1368ניתן להשתמש במקום עמילואיד ממעבדת Teplow
Aβ <תת>1-42אמריקאי פפטיד62-0-80Bיכול לשמש במקום עמילואיד ממעבדת Teplow
Scrambled Aβ 1-42American Peptide62-0-46Bיכול לשמש כפפטיד בקרה להשוואת Aβ 1-42
נוגדן NU4 (נוגדן עמילואיד אוליגומרי)מתנה מוויליאם קליין/נורת'ווסטרן ארה"ב.לא זמין1:2,000 דילול
נוגדן אנטי עמילואיד אוליגומרי   (ארנב רב-שבטי)EMD MilliporeAB9234עשוי לשמש במקום Nu4; צריך  להיבדק על ידי משתמש הקצה
נוגדן 6E10 (עכבר חד שבטי) (נוגדן עמילואיד)Biolegendsig-393201:1,000 דילול
נוגדן ChAT (עז פוליקלונלית)MilliporeAB144P1:100 דילול
DeadEnd מערכת TUNEL פלואורומטריתPromegaG3250עקוב אחר הוראות היצרן עבור השתמש
ב-Prolong Gold Antifade Reagent עם DAPIInvitrogenP36935השתמש בעת החלקת כיסוי שקופיות
פלואורוגולדפלואורוכרום, LLCלא זמין2% תמיסה
אתנול מוחלט (200 הוכחה)Fisher ScientificBP2818-4להכנת 70% אתנול לחיטוי וחיטוי
Novex 10-20% טריצ'ין ג'לLife TechnologiesEC6625BOXלהפרדת A&BETA; 1-42
Novex Tricine SDS Running Buffer (10X)Life TechnologiesLC1675להפעלת 10-20% ג'ל טריצ'ין
Novex Tris-Glycine Transfer Buffer (25X)Life TechnologiesLC3675להעברת 10-20% ג'ל טריצ'ין
SuperSignal Western Blot EnhancerThermo Scientific46640לשיפור Aβ אות 1-42; עקוב אחר פרוטוקול היצרן
Protran BA79 קרום ספיגת ניטרוצלולוזה, 0.1 μ mGE Healthcare Life Sciences10402088להעברת 10-20% ג'ל טריצ'ין
Xcell SureLock Mini-CellLife TechnologiesEI0001Electrophoresis aparatus להפעלת 10-20% ג'ל טריצ'ין
ג'ל עיניים GenTeal Lubricant EyeGel Novartisאינו זמיןלשמירה על לחות עיני העכבר במהלך הניתוח; ניתן למצוא בחנויות בתי המרקחת המקומיות
 
[header]
Refresh Optive Lubricant Eye DropsAllerganאינו זמיןלשמירה על לחות עיני העכבר במהלך הניתוח; ניתן למצוא בחנויות בתי מרקחת מקומיות; ניתן להשתמש במקום GenTeal
BetadineStoelting50998לחיטוי וחיטוי
מרית עגולה/מחודדת VWR82027-490לפתיחת פה
של בעלי חיים בולדוג סרפינס מהדקים (עמום הלסת 9X1.6 מ"מ; אורך 28 מ"מ)כלי מדע עדינים18050-28אופציונלי; לשמירה על עור הקרקפת מרוחק במהלך ההזרקה
מספריים עדינים ישרים (קצה חיתוך 25 מ"מ; אורך 11.5 ס"מ)כלי מדע עדינים14060-11לחיתוך קרקפת
#3 ידית אזמלכלי מדע עדינים10003-12
#11 להב כירורגיכלים מדעיים עדינים10011-00לביצוע חתך בקרקפת
מלקחיים דפוס סטנדרטי לסטודנטים (קצה עמעם. 2.5x1.5 מ"מ; אורך 11.5 ס"מ)Fine Science Tools91100-12להחזקת קרקפת סגורה במהלך תפירה
ערכת גוזם משולבתKent ScientificCL9990-1201לגילוח שיער
T/Pump מחזור מים חמים קנט סיינטיפיק TP-700להתחממות בעלי חיים במהלך ניתוח
כרית מלחמה ניתנת להפעלה (5 אינץ' x 10 אינץ')קנט סיינטיפיק TPZ-0510FEAלהצמדתו למחזור המים החמים T/Pump כדי לחמם את החיה במהלך הניתוח
מקדחה מיקרו אלחוטית58610השתמש בקוצי פלדה 0.8 מ"מ כדי לקדוח חורים במעבדת הגולגולת
מכשיר סטריאוטקסי סטנדרטי עם עכבר & מתאם עכברוש יילודים51615
רק עבור עכבר סטריאוטקסימכשיר סטולינג51730יכול להשתמש בזה במקום סטולינג חתול. #51615
מזרק סטריאוטקסי מובהק53311
מעקר חרוזי זכוכית יבשה50287לעיקור מכשירי נירוסטה
וילון כירורגי סטרילי (18 אינץ' x 26 אינץ')Stoelting50981
מזרק המילטון 50 מ"ל, דגם 705 RN SYR, NDLHamilton Company7637-01להזרקת מוח; השתמש במזרקים שונים לתמיסות שונות
29 G Needle, Small Hub RN NDLHamilton Company7803-06לחיבור למזרק המילטון להזרקת מוח
1 מ"ל BD מזרקי טוברקוליןVWRBD309659למתן הרדמה ומי מלח
30 גרם מחט (0.5 אינץ')VWRBD305106למתן הרדמה ומי מלח
סולם סדרת CS אלקטרוני נייד (Ohaus)VWR65500-202לשקילת בעלי חיים לקביעת מינון הרדמה
פלטה חמה (צלחת עליונה עמעמת 7.25x7.25 אינץ')VWR47751-148לחימום בעלי חיים לאחר ניתוח
חיתוך תפר משי Sofsilk C-1 3/8, 12 מ"מCovidienS1173לסגירת
פצע דבק רקמות Vetbond (3M)Santa Cruz Biotechnologysc-361931אופציונלי: לסיוע בסגירת פצעים; יש להשתמש עם תפרים.
אפליקטורים סטריליים עם פיר עץ כותנהפישר מדעי22-029-488לניקוי וייבוש פצע כירורגי
פישרברנד סופרפרוסט פלוס מיקרוסקופ שקופיותפישר סיינטיפיק 12-550-15לאיסוף חלקי מוח
VWR מיקרו כיסוי זכוכית 24 X 50 מ"מVWR48393241להרכבת שקופיות מיקרוסקופ
Thermo Scientific Nalgene מזרק מסנן 0.2 μ mFisher Scientific194-2520לעיקור תמיסת מלח
סמני עור סטריליים עם קצה כפול של ViscotMedical MedlineVIS1422SRL91לסימון קואורדינטות על הגולגולת

מקורות

  1. Baleriola, J., et al. Axonally Synthesized ATF4 Transmits a Neurodegenerative Signal across Brain Regions. Cell. 158 (5), 1159-1172 (2014).
  2. Haass, C., Selkoe, D. J. Soluble protein oligomers in neurodegeneration: lessons from the Alzheimer's amyloid beta-peptide. Nature reviews. Molecular cell biology. 8 (2), 101-112 (2007).
  3. Knowles, J. K., et al. The p75 neurotrophin receptor promotes amyloid-beta(1-42)-induced neuritic dystrophy in vitro and in vivo. The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 29 (34), 10627-10637 (2009).
  4. Troy, C. M., et al. beta-Amyloid-induced neuronal apoptosis requires c-Jun N-terminal kinase activation. Journal of neurochemistry. 77 (1), 157-164 (2001).
  5. Crews, L., Rockenstein, E., Masliah, E. APP transgenic modeling of Alzheimer's disease: mechanisms of neurodegeneration and aberrant neurogenesis. Brain structure & function. 214 (2-3), 111-126 (2010).
  6. Gotz, J., Ittner, L. M. Animal models of Alzheimer's disease and frontotemporal dementia. Nature reviews. Neuroscience. 9 (7), 532-544 (2008).
  7. Calhoun, M. E., et al. Neuron loss in APP transgenic mice. Nature. 395 (6704), 755-756 (1998).
  8. Oakley, H., et al. Intraneuronal beta-amyloid aggregates, neurodegeneration, and neuron loss in transgenic mice with five familial Alzheimer's disease mutations: potential factors in amyloid plaque formation. The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 26 (40), 10129-10140 (2006).
  9. Jean, Y. Y., et al. Caspase-2 is essential for c-Jun transcriptional activation and Bim induction in neuron death. The Biochemical journal. 455 (1), 15-25 (2013).
  10. Sotthibundhu, A., et al. Beta-amyloid(1-42) induces neuronal death through the p75 neurotrophin receptor. The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 28 (15), 3941-3946 (2008).
  11. Kar, S., Quirion, R. Amyloid beta peptides and central cholinergic neurons: functional interrelationship and relevance to Alzheimer's disease pathology. Progress in brain research. 145, 261-274 (2004).
  12. Leranth, C., Frotscher, M. Organization of the septal region in the rat brain: cholinergic-GABAergic interconnections and the termination of hippocampo-septal fibers. The Journal of comparative neurology. 289 (2), 304-314 (1989).
  13. Fa, M., et al. Preparation of oligomeric beta-amyloid 1-42 and induction of synaptic plasticity impairment on hippocampal slices. Journal of visualized experiments : JoVE. (41), (2010).
  14. Paxinos, G., Franklin, K. B. J. The Mouse Brain in Stereotaxic Coordinates. , Second edn, Academic Press. (2001).
  15. Gage, G. J., Kipke, D. R., Shain, W. Whole animal perfusion fixation for rodents. Journal of visualized experiments : JoVE. (65), (2012).
  16. Currle, D. S., Monuki, E. S. Flash freezing and cryosectioning E12.5 mouse brain. Journal of visualized experiments : JoVE. (4), (2007).
  17. Jin, M., et al. Soluble amyloid beta-protein dimers isolated from Alzheimer cortex directly induce Tau hyperphosphorylation and neuritic degeneration. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 108 (14), 5819-5824 (2011).
  18. Lambert, M. P., et al. Diffusible, nonfibrillar ligands derived from Abeta1-42 are potent central nervous system neurotoxins. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 95 (11), 6448-6453 (1998).
  19. Masters, C. L., Selkoe, D. J. Biochemistry of amyloid beta-protein and amyloid deposits in Alzheimer disease. Cold Spring Harbor perspectives in medicine. 2 (6), a006262(2012).
  20. Chakrabarti, M., et al. Estrogen receptor agonists for attenuation of neuroinflammation and neurodegeneration. Brain research bulletin. 109C, 22-31 (2014).
  21. Cirrito, J. R., et al. In vivo assessment of brain interstitial fluid with microdialysis reveals plaque-associated changes in amyloid-beta metabolism and half-life. The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 23 (26), 8844-8853 (2003).
  22. Puzzo, D., et al. Picomolar amyloid-beta positively modulates synaptic plasticity and memory in hippocampus. The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 28 (53), 14537-14545 (2008).
  23. Puzzo, D., et al. Endogenous amyloid-beta is necessary for hippocampal synaptic plasticity and memory. Annals of. 69 (5), 819-830 (2011).
  24. Akpan, N., et al. Intranasal delivery of caspase-9 inhibitor reduces caspase-6-dependent axon/neuron loss and improves neurological function after stroke. The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 31 (24), 8894-8904 (2011).
  25. Fulmer, C. G., et al. Astrocyte-derived BDNF supports myelin protein synthesis after cuprizone-induced demyelination. The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 34 (24), 8186-8196 (2014).
  26. Thakker-Varia, S., et al. The neuropeptide VGF is reduced in human bipolar postmortem brain and contributes to some of the behavioral and molecular effects of lithium. The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 30 (28), 9368-9380 (2010).
  27. Greferath, U., et al. Enlarged cholinergic forebrain neurons and improved spatial learning in p75 knockout mice. The European journal of neuroscience. 12 (3), 885-893 (2000).
  28. Brashear, H. R., Zaborszky, L., Heimer, L. Distribution of GABAergic and cholinergic neurons in the rat diagonal band. Neuroscience. 17 (2), 439-451 (1986).
  29. Clarke, D. J. Cholinergic innervation of the rat dentate gyrus: an immunocytochemical and electron microscopical study. Brain research. 360 (1-2), 349-354 (1985).
  30. Garcia-Osta, A., Alberini, C. M. Amyloid beta mediates memory formation. Learning & memory. 16 (4), 267-272 (2009).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

Dentate GyrusBasal Forebrain
עירוי stereotaxic של Oligomeric עמילואיד-ביתא להיפוקמפוס העכבר
צור קשר
המלצה לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

2026 © זכויות יוצרים MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.