מודל הפקקת המושרה FeCl3 בעכברים מתואר כאן. מוצגת שיטה לניטור צמיחת פקקת על ידי תצפית מיקרוסקופיה תוך-חיונית על כלי מזנטרי ועל ידי מדידת זרימת דם בעורק הצוואר.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
פקקת עכבר דגם על עורק ראשי וכלי לפדר מושרה כלוריד Ferric
במאמר זה
סיכום
תקציר
פקקת חמורה והשלכותיה האיסכמיות כגון אוטם שריר הלב, תסחיף ריאתי ושבץ מוחי הן בעיות בריאות עולמיות גדולות. פגיעת כלוריד ברזל היא כיום טכניקה מבוססת היטב לגרימת היווצרות פקקת במהירות ובדייקנות בוורידים חשופים או בעורק בקוטר קטן וגדול. מודל זה מילא תפקיד מפתח בחקר הפתופיזיולוגיה של פקקת, בגילוי ותיקוף של תרופות אנטי-טרומבוטיות חדשות ובהבנת מנגנון הפעולה של חומרים חדשים אלה. כאן מוצג היישום של טכניקה זו על כלי מזנטרי ועורק צוואר בעכברים. השיטה מתארת כיצד לסמן לויקוציטים וטסיות דם במחזור בצבע פלואורסצנטי ולהתבונן, במיקרוסקופיה תוך-חיונית על המזנטריה החשופה, בהצטברותם בדופן כלי הדם הפגוע המובילה להיווצרות פקקת. בעורק הצוואר, החסימה הנגרמת מהיווצרות הקריש נמדדת על ידי ניטור זרימת הדם באמצעות בדיקת דופלר.
מבוא
המחקר של המנגנונים מעורבים בהתפתחות פקקת וההערכה האפקטיביות של תרופות אנטי-טרומבוטיים דורש מבוסס היטב מודלים של בעלי חיים ניסיוניים. המודלים של בעלי חיים גדולים היו הראשון שהשתמש בכפי שהם מספקים כלי גדול יותר דומה לבני אדם מאשר מכרסמים 1. עם זאת, עלות גבוהה, המתקנים הגדולים יותר הנדרשים והקושי בלתמרן אותם מבחינה גנטית חסרונות עיקריים לשימוש בם ובעלי חיים גדולים כיום מוגבלים למחקרים פרה-קליניים מאוחר פעם אחת בדיקות ראשוניות על מכרסמים נתנו תוצאות חד משמעיות 2. עם זמינות רחבה של זנים מהונדסים ונוקאאוט וגודלם הקטן שממזער את כמות התרופות נוגדות נדרשות לבדיקת in vivo, עכברים משמשים בעיקר למחקר פקקת. לכ....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
כל הניסויים מעורבים בעלי חיים אושרו על ידי המחקר הרפואי אלפרד והוועדה חינוך של קריית בעלי החיים אתיקה (E / 1534/2015 / ב '). כל המניפולציות כירורגית בוצעו בהרדמה מלאה והבעלים החיים לא חוו כאב בכל שלב. כל הניסויים המתוארים הנן ללא התאוששות.
1. הכנה
- חותך רצועות דקות של נייר סינון (1 מ"מ x 2 מ"מ).
- טרי להכין 2 פתרונות של כלוריד Ferric של 4% (w / v) ו -6% (w / v) מדולל למים ללא יונים. הכן פתרון 6G rhodamine 0.3% ב- PBS, מס....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
תצפית הניאון המיקרוסקופית Intravital של לפדר תגלה ההצטברות של Rhodamine 6G כותרת טסיות דם וכדוריות דם לבנות לאורך קיר הכלי נפגע FeCl 3. ההיווצרות ההדרגתית של פקיק חלקי מנוטרת בכלי 200 מיקרומטר לפדר (איור 1). פקיק מופיע לאט וברור לזיהוי אחרי דקות הראשונות של חשיפה לFeCl 3 (איור 1, t = 60 שניות). 40 שניות לאחר הסרת נייר הסינון ספוג עם FeCl 3, פקקת במהירות התקדמות וסוף סוף נוכחי על הקיר של כל סעיף הכלי נצפה (א.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
המודל פקקת כלוריד מושרה הברזל הוא כלי מחקר מעולה. כפי שניתן לראות במחקר זה, זה מאוד קל ליישום וכאשר משתמש בו בשילוב עם מיקרוסקופיה intravital או flowmeter דופלר, הוא מספק ניטור בזמן אמת טוב של היווצרות קריש דם. התאמת חשיפת הזמן והריכוז של FeCl 3, היא מציעה גם את האפשרות לייצר thrombi או שאינו אוטם או אוטם.
עם זאת, שיטה זו יש גם כמה מגבלות. בעורק התרדמה, החסרון העיקרי הוא שלמרות יעילות ניתן לשנות את זמן.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
למחברים אין מה לחשוף.
תודות
המחברים מבקשים להודות תמיכה טכנית מג'וי יאו וד"ר קארן Alt, כמו גם מימון מNHMRC וNHF.
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| נייר כרומטוגרפיה | Whatman GE Healthcare | 3030917 | |
| ברזל (III) כלוריד 40% (w/v) | VWR | 24212.298 | |
| רודמין 6G | Sigma | R4127 | |
| מיקרוסקופ הפוך | Olympus | IX81 | |
| מצלמה דיגיטלית בשחור-לבן | אולימפוס | XM10 | |
| מד זרימה דופלר | טרנסוניק | TS420 | |
| בדיקת זרימה ננו-דופלר | טרנסוניק | 0.5 PBS | |
| קטמין | הוספירה | 0409-2051-05 | |
| קסילזין (רמפון) | באייר | 75313 | |
| צלחת פטרי | Sarstedt | 82.1472 | |
| מזרק אינסולין (29 גרם) | עדינים במיוחד | 326103 | |
| כותנה | BSN רפואי | 211827A | |
| Dynek dysilk תפרים | Dynek Pty Ltd | CS30100 | |
| מאגר פוספט של Dulbecco (PBS) | Gibco life technologies | 21600-069 | |
| כרית חימום | קירשנר | T60 |
מקורות
- Leadley, R. J., Chi, L., Rebello, S. S., Gagnon, A. Contribution of in vivo models of thrombosis to the discovery and development of novel antithrombotic agents. J Pharmacol Toxicol Methods. 43 (2), 101-116 (2000).
- Johnson, G. J., Griggs, T. R., Badimon, L.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
