הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

באמצעות קאקו-2 תאים לחקר ליפידים תחבורה במעי

19.4K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/53086

⸱

20 באוגוסט 2015

 , 
1Department of Pharmaceutical and Biomedical Sciences, College of Pharmacy, California Northstate University, 2Department of Biomedical Sciences, James H. Quillen College of Medicine, East Tennessee State University

במאמר זה

סיכום

תאי Caco-2 יכולים לשמש כמודל במבחנה לחקר הובלת האנטרוציטים של שומנים, ותרופות/ויטמינים מסיסים בשומנים. מערכת הממברנה החדירה מפרידה בין התא האפיקלי לתא הבסיסי, בעוד שמערכת ביטוי ה-lentivirus מציעה שיטת ביטוי יתר יעילה של גנים. בידוד הליפופרוטאינים מאושר על ידי TEM.

תקציר

מחקרים על ספיגת שומן בתזונה נערכים בדרך כלל על ידי שימוש במודל של בעלי חיים המצוידים בצינורית לימפה. למרות שמודל בעלי חיים זה מקובל כמודל in vivo לספיגת שומן תזונתי, הטכניקות הכירורגיות המעורבות מאתגרות ויקרות. מניפולציה גנטית של המודל החייתי היא גם יקרה וגוזלת זמן. ניתן לטעון שמודל האלטרנטיבה במבחנה הוא זול יותר, חוסך זמן ופחות מאתגר. חשוב לציין, מודל המבחנה מאפשר לחוקרים לבחון את האנטרוציטים כמערכת מבודדת, ולהפחית את המורכבות הטבועה במודל האורגניזם השלם. מאמר זה מתאר כיצד תאי קרצינומה של המעי הגס האנושי (Caco-2) יכולים לשמש כמודל מבחנה לחקר הובלת אנטרוציטים של שומנים, ותרופות וויטמינים מסיסים בשומנים. הוא מסביר את התחזוקה הנאותה של תאי Caco-2 ואת הכנת תערובת השומנים שלהם; והוא דן עוד באפשרות החשובה של שימוש במערכת הממברנה החדירה. מכיוון שתאי Caco-2 מובחנים מקוטבים, היתרון העיקרי בשימוש במערכת הממברנה החדירה הוא בכך שהיא מפרידה בין האפיקל לתא הבסיסי. כתוצאה מכך, ניתן להוסיף את תערובת השומנים לתא האפיקלי ואילו את הליפופרוטאינים ניתן לאסוף מהתא הבסיסי. בנוסף, נדונה היעילות של מערכת הביטוי של נגיף הלנטי בוויסות ביטוי גנים בתאי Caco-2. לבסוף, מאמר זה מתאר כיצד לאשר את הבידוד המוצלח של ליפופרוטאינים במעי על ידי מיקרוסקופ אלקטרונים הולכה (TEM).

מבוא

מחקרים של ספיגה במעיים של שומן, ותרופות מסיסים בשומנים וויטמינים יכולים להתנהל in vivo על ידי שימוש במודל פיסטולה הלימפה 1 - 4. עם זאת, הטכניקות הניתוחיות המעורבים הן לא רק אתגר, אבל גם יקרות. למרות in vivo גישות המבוסס על ניתוח צואה עשויה להיות מנוצלת, הם משמשים בעיקר כדי לקבוע את ספיגת אחוזים על ידי מערכת עיכול 2,5. המודל במבחנה המתואר במאמר זה הוא יותר חסכוני, והטכניקות מעורבות הן ללא ספק פחות מאתגרות. מחקרי הנדסה גנטיים הם גם חסכוניים יותר ופחות כאשר הם נערכו באמצעות מודל במבחנה זה זמן רב.

מאז חומרי שומנים מסיסים הנלקחים על ידי enterocytes ארוזים ליפופרוטאינים 6,7, את האפקטיביות של מודל זה במבחנה כדי לייצר ליפופרוטאינים היא קריטיות. Intestina שתי העיקריליפופרוטאינים l הם chylomicrons ומאוד ליפופרוטאין בצפיפות נמוכה (VLDL). Chylomicrons, מוגדר כיפופרוטאינים עם 80 ננומטר או יותר בקוטר, מיוצר אך ורק על ידי המעי הדק כאשר שומנים הם בשפע נוכחי בלומן במערכת העיכול. מאז הם יפופרוטאינים הגדולים, chylomicrons הם להעלות על הדעת מובילי שומנים יעילים ביותר. מודל זה במבחנה, שהוא מסוגל לייצר chylomicrons 8, יכול לשמש כדי לחקור קליטה תזונתית שומן, ספיגת ויטמין מסיס בשומנים על ידי המעיים, וזמינות ביולוגית תרופה אוראלית lipophilic. הנוכחות של מולקולות שומנים מסיסים, ויטמינים, או סמים בשבריר ליפופרוטאין היא אינדיקטור של קליטתם על ידי המעי הדק. כפי שנאמר קודם לכן, מודל זה יכול לשמש כדי לשפר את הזמינות הביולוגית תרופה אוראלית lipophilic 6.

מאמר זה מתאר כיצד יש לשמור על קאקו-2 תאים בקרום חדיר או מנות בתרבית רקמה רגילות, איך מיל השומניםxture לגירוי ייצור ליפופרוטאין צריך להיות מוכן, איך מערכת ביטוי lentivirus יכולה להיות מועסקות על מנת להשיג ביטוי יתר יעיל, וכיצד יש לנתח יפופרוטאינים המבודדים.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

1. תחזוקה של קאקו-2 תאים

  1. שימוש בכלים בתרבית רקמה רגילים
    1. להפשיר את קאקו-2 תאים מבקבוקון קפוא על ידי הצבת את הבקבוקון באמבט מים 37 מעלות צלזיוס, ומייד להוסיף אותם לצלחת תרבית רקמת 10 סנטימטרים המכילה 10 מיליליטר של תקשורת צמיחה (15% בסרום שור עוברי מחומם מראש (FBS ) בנשר בינוני השתנה Dulbecco (DMEM)).
      1. כאשר קאקו-2 התאים הגיעו 50-70 מפגש%, לפצל אותם 1: 6 על ידי דוגרים התאים עם 3 מיליליטר של 0.05% חומצת ethylenediaminetetraacetic / 0.53 מ"מ טריפסין (EDTA) על 37 מעלות צלזיוס עד שהם מנותקים (15 דקות) . כדי למנוע clumping תא, לערבב את התאים מספר פעמים על ידי pipetting העדין. הוסף 0.5 מיליליטר של תאי trypsinized לצלחת תרבית רקמת 10 סנטימטרים המכילה 10 מיליליטר של תקשורת צמיחה מחוממת מראש.
    2. נער בעדינות את המנות כמה פעמים בכיוון קדימה ואחורה ואחריו כיוון שמאלה וימינה. הימנע מתערבל המנותכפי שהוא עשוי לגרום לפיזור של תאים שאינו שווה.
    3. מניחים את הכלים על משטח שטוח בחממה 37 ° C מסופקת עם 5% CO 2. משטחים משופעים עשויים גם לגרום לפיזור של תאים שאינו שווה.
    4. לשנות את תקשורת צמיחת יום לאחר תחילת הדגירה.
    5. צג התאים ולהקליט את היום שהם מגיעים למפגש. זה ייקח כ 1 שבוע לתאים מגיעים למפגש מהיום שהם נפרדו.
    6. לשנות את תקשורת הצמיחה פעמיים בשבוע לפני התאים להגיע למפגש. ברגע שהתאים הגיעו מפגש, לשנות את תקשורת צמיחה בכל יום אחר. אחרי התאים 7 ימים לאחר מחוברות, לשנות את תקשורת הצמיחה יומית.
      הערה: התאים מוכנים לניסויים כאשר הם 13 ימים שלאחר מחוברות (איור 1). מאז תאי סופו של הדבר להיות פחות יעילים בייצור יפופרוטאינים, להשתמש בתאים שבין 13 עד 17 ימים לאחר מחוברות 8. עבור לשלב 3 על איך לבצע את הניסוי.
  2. שימוש במערכת הקרום החדיר
    1. זרעי קאקו-2 תאים בכנס הקרום החדיר כמתואר בשלב 1.1.1.1. לעיל. הימנע משימוש בתאים מבקבוקון קפוא כי צמיחת התאים שלהם היא בדרך כלל איטית יותר (תקופת החלמה). בקצרה, להוסיף 0.5 מיליליטר של תאי trypsinized לתא הפסגה (תא עליון) המכיל 10 מיליליטר של תקשורת צמיחה מחוממת מראש. כמו כן, להוסיף 10 מיליליטר של תקשורת צמיחה המחוממת מראש לתא basolateral (בתא תחתון).
      הערה: התרגול הטוב ביותר, להוסיף את תקשורת הצמיחה לתא הפסגה הראשונה ולאחר מכן לתא basolateral. כאשר מוציא את המדיה הישנה, ​​להסיר את המדיה basolateral לפני תקשורת הפסגה. הימנע תוקע את קרום פוליקרבונט כפי שהוא עשוי להיקרע הקרום.
    2. בשל הראות לקויה תא דרך קרום פוליקרבונט, זרע קאקו-2 התאים בצלחת תרבית רקמה רגילה עם צפיפות דומה, ולהשתמש במנה זו לשפוט את מפגש התא.
    3. עקוב יםteps 1.1.2-1.1.6 לעיל.

2. ג'ין ביטוי יתר

  1. שימוש בגישת transfection הרגילה
    1. זרעי קאקו-2 תאים בצלחת תרבית רקמה, כמתואר ב1.1.1.1.-1.1.4 לעיל.
      הערה: כאשר התאים כ 40-50% ומחוברות, הם מוכנים להיות transfected.
    2. להוסיף 67 μl של מגיב transfection לμl 472 של התקשורת בסרום המופחתת בצינור microcentrifuge. יש להימנע ממגע של מגיב transfection חי עם קיר הצינור.
    3. להוסיף 23 מיקרוגרם של pLL3.7 משופרים חלבון ירוק ניאון (eGFP) 9 למגיב transfection / תערובת תקשורת סרום מופחתת.
    4. דגירה את התערובת במשך 20 דקות ב RT.
    5. החלף תקשורת צמיחת קאקו-2 תאים עם 8 מיליליטר של 10% FBS בDMEM.
    6. מוסיף את תערובת DNA / מגיב transfection / מדיה סרום מופחתת ירידה מבחינת לצלחת.
    7. נער בעדינות את המנות כמה פעמים בקדימה ותואר ראשוןכיוון ckward אחרי כיוון שמאלה וימינה.
    8. מניחים את הצלחת בחממת 37 ° C.
    9. החלף את המדיה בצלחת עם 10 מיליליטר של תקשורת צמיחת יום לאחר תחילת הדגירה.
    10. לפקח על ביטוי גנים.
      1. צג ביטוי גנים ללא 6-diamidino-2-phenylindole צביעת 4 ', (DAPI). באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי, לקבוע את האחוזים של תאים שהם ירוקים. אחוז מייצג את יעילות transfection.
      2. צג ביטוי גנים עם מכתים DAPI.
        1. לשטוף את התאים עם מי מלח פוספט (PBS) שלוש פעמים.
        2. תקן את התאים על ידי הוספת 10 מיליליטר של פורמלדהיד 4% ב- ​​PBS (דגירה 10 דקות ב RT).
        3. לשטוף את התאים עם PBS פעמים שלוש.
        4. דגירה התאים בחושך במשך 15 דקות ב RT עם 8 מיליליטר של PBS המכיל 1: 500 DAPI, BSA 1%, digitonin 0.01%.
        5. לשטוף את התאים עם PBS פעמים שלוש.
        6. Uלשיר מיקרוסקופ פלואורסצנטי, לקבוע את מספר התאים שהם בצבע ירוק / כחול ביחס לאלה ש( פנל עליון איור 2) כחול. בחישוב אחוז מייצג את יעילות transfection.
  2. שימוש במערכת ביטוי יתר lentivirus 10
    1. תאי זרע אנושיים כליה עוברית (HEK) 293T בצלחת תרבית רקמת 15 סנטימטר (10% FBS בDMEM כתקשורת הצמיחה שלהם).
      הערה: כאשר התאים כ 60-70% ומחוברות, הם מוכנים להיות transfected.
    2. להוסיף 162 μl של מגיב transfection ל1,133 μl של התקשורת בסרום המופחתת בצינור microcentrifuge 11. יש להימנע ממגע של מגיב transfection חי עם קיר הצינור.
    3. להוסיף 24 מיקרוגרם של pLL3.7 eGFP (או מבנה אחר), 15.6 מיקרוגרם של אלמנט תגובת Rev (RRE), 6.0 מיקרוגרם של REV, ו -8.4 מיקרוגרם של גליקופרוטאין וירוס stomatitis שלפוחי (VSVG) למגיב transfection / Rתערובת תקשורת הסרום צמח.
    4. דגירה את התערובת במשך 20 דקות ב RT.
    5. החלף את המדיה הצמיחה עם 16 מיליליטר של 10% FBS בDMEM.
    6. מוסיף את תערובת DNA / מגיב transfection / מדיה סרום מופחתת ירידה מבחינת לצלחת.
    7. נער בעדינות את המנות כמה פעמים בכיוון קדימה ואחורה ואחריו כיוון שמאלה וימינה. זה נורמלי לראות כמה תאי HEK293T מנותקים בשלב זה.
    8. מניחים את הצלחת בחממה.
    9. לאחר 24 שעות של דגירה, להחליף את התקשורת בצלחת עם 25 מיליליטר של תקשורת צמיחה.
    10. ביום הבא, לאסוף תקשורת הצמיחה המכילה lentivirus (האוסף הראשון).
    11. חזור על שלב 2.2.10 לאסוף יותר lentivirus (האוסף השני).
    12. בריכת האוסף הראשון והשני, ולהסיר פסולת תא על ידי צנטריפוגה (2500 XG במשך 5 דקות).
    13. סנן את האוסף עם מסנן בקבוק העליון חד פעמי (0.45 מיקרומטר נקבובית), ולרכז את הנגיף על ידי צנטריפוגה האוסף ב31,400 XG לשעה 2 ב RT (JA-20 הרוטור). סמן את החלק התחתון של צינור צנטריפוגות בי גלולה נמצא. למזוג supernatant, ולהשאיר את הצינור ההפוך ב RT במשך 15 דקות על.
    14. Resuspend גלולה המכיל וירוס עם של 1X PBS 100 μl. למנוע בועות.
    15. אחסן את הווירוס מרוכז ב -80 ° C. הימנע מחזורים להקפיא להפשיר.
    16. לקבוע את הכמות האופטימלית של וירוס צריך transduce קאקו-2 תאים על ידי טיטרציה. כדי לחסוך בעלויות, השתמש בצלחת 24 גם (0.3 מיליליטר של תקשורת צמיחה / טוב) במקום צלחת תרבית רקמת 10 סנטימטרים לטיטרציה.
      1. להוסיף כמויות גדלות והולכות של הנגיף המרוכז (0, 1, 2, 5, 10, 25, ו -50 μl / טוב) בתוספת polybrene (ריכוז = 5 מיקרוגרם / מיליליטר סופי) ולמחוברות 40-70% קאקו-2 תאים. לנער את צלחת 24 גם בעדינות כפי שמתואר ב1.1.2.
      2. צג ביטוי גנים שלהם (שלב 2.1.10.) (תחתון 2 איור4 פנלים).
    17. מאז הביטוי של transgene בדרך כלל נגרם, לשמור על תאי transduced לניסויים עתידיים ולפקח באופן רציף ביטוי גנים שלהם (שלב 2.1.10.).

3. גירוי ההפרשה ליפופרוטאין

  1. שימוש בצלחת תרבית הרקמה הרגילה
    1. הכן תערובת שומנים 100X על ידי ערבוב 50 מ"ג של חומצה אולאית, 40 מ"ג של לציטין, ו -48 מ"ג של נתרן taurocholate. תביא את הנפח עד 900 μl עם PBS (מספיק עבור 8 מנות). מערבולת תערובת השומנים במרץ.
    2. להוסיף 900 ​​μl של תערובת השומנים 100X ל89.1 מיליליטר של תקשורת צמיחה. לערבב, ולסנן את התקשורת המכיל שומנים. הריכוזים הסופיים (1X) של חומצה אולאית, לציטין, וtaurocholate נתרן הם 2.0 מ"מ, 1.36 מ"מ, ו1.0 מ"מ, בהתאמה.
    3. להוסיף 10 מיליליטר של התקשורת המכיל שומנים לתאים.
    4. דגירה התאים עם התקשורת המכיל שומנים במשך 4 שעות ב37° C חממה.
    5. לשטוף את התאים עם PBS פעמים שלוש.
    6. להוסיף 10 מיליליטר של תקשורת הצמיחה לתאים כדי לאסוף את הפרשת השומנים בדם.
    7. דגירה עבור שעה 2 באינקובטור 37 ° C.
    8. לאסוף את המדיה המכיל שומנים בדם.
  2. שימוש במערכת הקרום החדיר
    1. בצע את הפעולות 3.1.1-3.1.2 להכין את תערובת השומנים.
    2. להוסיף 10 מיליליטר של התקשורת המכיל שומנים לתא הפסגה ו -10 מיליליטר של תקשורת הצמיחה לתא basolateral.
    3. דגירה של 4 שעות בחממה 37 ° C. לאסוף את המדיה המכיל ליפופרוטאין בתא basolateral.

4. בידוד ליפופרוטאין (איור 3)

  1. הסר את פסולת התא מהתקשורת המכיל ליפופרוטאין על ידי צנטריפוגה (2,000 XG במשך 5 דקות).
  2. למזוג את התקשורת לתוך שפופרת 50 מיליליטר.
  3. להוסיף 5.95 גרם של נתרן כלורי לתקשורת.
  4. אם sample ינותח על ידי TEM, להוסיף לוח מעכבי פרוטאז קוקטייל 1 כדי לשמור על השלמות של ליפופרוטאין.
  5. תביא את הנפח עד 23 מיליליטר עם מים (1.2 גרם מיליליטר NaCl פתרון צפיפות /).
  6. ממיסים את המומסים לחלוטין.
  7. למזוג כל הפתרון לתוך צינור ultracentrifuge פוליקרבונט.
  8. בעדינות כיסוי פתרון צפיפות 1.2 גר '/ מיליליטר עם 0.5 מיליליטר מים (1.0 / מיליליטר צפיפות ז).
  9. לאזן את הצינור לפי משקל ולא לפי נפח.
  10. בעדינות לטעון צינורות בהרוטור T865.
  11. ספין הדגימות בultracentrifuge ב429460 XG במשך 24 שעות על 4 מעלות צלזיוס.
  12. מייד לבודד את הפתרון 0.5 מיליליטר העליון על ידי pipetting העדין. שמור את הצינור כעדיין אפשרית כ.

ניתוח 5. TEM

  1. הכן 5 מיליליטר של 2% חומצת phosphotungstic (w / v) ולהתאים את ה- pH 6.0.
  2. סנן 2% חומצת phosphotungstic עם מסנן מזרק (גודל נקבובית: 0.2 מיקרומטר).
  3. ירידה של 20 μl של מדגם ליפופרוטאין בצלחת סטרילית.
  4. ירידה של 20 μl של 2% חומצת phosphotungstic המסונן ליד המדגם על אותה הצלחת.
  5. בעדינות שחרר רשת EM עם הצד המשעמם נח על המדגם.
  6. לדגור על RT דקות 1.
  7. לטפוח בעדינות את הצד של רשת EM על נייר סינון כדי להסיר את המדגם מהרשת.
  8. בעדינות שחרר את רשת EM עם הצד המשעמם נח על 2% חומצת phosphotungstic.
  9. לדגור על RT דקות 1.
  10. לטפוח בעדינות את הצד של רשת EM על נייר סינון כדי להסיר את חומצת phosphotungstic מהרשת.
  11. באמצעות TEM, ללכוד את התמונות של ליפופרוטאין (איור 4).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

איור קאקו-2 תאים נורמלים 1 מציג 13 ימים לאחר מחוברות. המראה של מבנים בצורת כיפה וטיפי שומנים תאיות אופייני של קאקו-2 תאים מובחנים. כאשר קאקו-2 התאים אינם מפוזרים באופן שווה במהלך זריעה, הם גוש ולגדול באזורים מסוימים של המנה; ויהיו כמה אזורים בצלחת ללא כל תאים. מתערבל והצבת הצלחת על משטח משופע יש להימנע. כמו כן, חשוב לשים לב שהודעת מחוברות-קאקו-2 תאים רגישים יותר לניתוק כאשר תקשורת צמיחה חדשה תתווסף לתאים בערך מדי. לכן, יש להוסיף מדיה החדשה בעדינות...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

במאמר זה, שתי מערכות שיכולים לשמש כדי לשמור קאקו-2 תאים מתוארים, כלומר, צלחת תרבית רקמה הרגילה וקרום החדיר. היתרונות של שימוש במערכת הקרום החדיר כוללים הפרדה של הפסגה ותאי basolateral, ואת יכולת דגירה תערובת השומנים ולאסוף את ההפרשה ליפופרוטאין בו זמנית. עם זאת, מוסיף קרום החדיר הם יקרים, וקרום פוליקרבונט אינו מאפשר את חשיפת תא טובה. אחד היתרונות של מודל זה במבחנה הוא שמחקרי מניפולציה גנטיים יהיו חסכוניים יותר ופחות זמן רב. ליעילות טובה יותר, יש להשתמש במערכת ביטוי lentiv...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

למחבר אין מה לחשוף.

תודות

עבודה זו נתמכה על ידי פרס מענק הזרע מהמכללה לרוקחות של אוניברסיטת קליפורניה נורת'סטייט (ל-AMN). המחברים רוצים להודות למכללת הרוקחות של אוניברסיטת קליפורניה נורת'סטייט על כיסוי עלות הפרסום של מאמר זה, ולג'ורג' טלבוט על עזרתו בעריכת כתב היד הזה.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
DMEMVWR16750-112יש לחמם מראש את מצע הגידול בצלחת תרבית רקמה בודדת לפני הוספת תאים
FBSFisher3600511אנו לא מחממים את הסרום שלנו
TrypsinVWR45000-660עם PBS לפני טיפול בטריפסין 
מערכת ממברנה חדירהפישר7200173צלחת 10 ס"מ, גודל נקבוביות 3 מ"מ, קרום פוליקרבונט
צלחת 10 ס"מפישר08-772-Eצלחת תרבית רקמות
צלחת 15 ס"מפישר08-772-24צלחת תרבית רקמות
24 צלחת בארפישר12565163צלחת תרבית רקמות
מגיב טרנספקציה על בסיס ליפידיםפישרPRE2691ניתן להחליף עם מגיב טרנספקציה אחר
מדיה מופחתת בסרוםInvitrogen11058021לטרנספקציה
pLL3.7 eGFPAddgene11795https://www.addgene.org/11795/
Bottle-top filterפישר97611200.45 מ"מ נקבוביות
פוליברנהפישרNC984045410 מ"ג/מ"ל
חומצה אולאיתסיגמא01383-5Gלמנוע מחזור הקפאה-הפשרה
לציטין פישרIC10214625לציטין ביצים 
נתרן טאורוכולטפישרNC9620276המוצר הופסק; מספר קטלוגי חלופי: 50-121-7956
טבלית קוקטייל מעכב פרוטאז (ללא EDTA)פישר5892791001משמש בעיקר לדגימות הזקוקות לניתוח TEM
צינור אולטרה-צנטריפוגה פוליקרבונטפישרNC9696153שימוש חוזר בו מספר פעמים ימוטט את מכסה הצינור
לצינור אולטרה-צנטריפוגהפישרNC9796914נדרש כלי להסרת הצינור/מכסה ממזרק הרוטור
פישר50-949-261
מסנן מזרקפישר09-719Cגודל נקבוביות = 0.2 מ"מ; ניילון
חומצה פוספוטונגסטיתפישרAC208310250להכנת 2% חומצה פוספוטונגסטית, pH 6.0
פינצטהפישר50-238-62עדין במיוחד ו טיפים חזקים
Formvar / רשת פחמןפישר50-260-34Formvar / רשת מרובעת של סרט פחמן 400 נחושת
ניתן לשטוף תאים חד פעמי

מקורות

  1. Drover, V. A., et al. CD36 deficiency impairs intestinal lipid secretion and clearance of chylomicrons from the blood. J Clin Invest. 115 (5), 1290-1297 (2005).
  2. Nauli, A. M., et al. CD36 is important for chylomicron formation and secretion and may mediate cholesterol uptake in the proximal intestine. Gastroenterology. 131 (4), 1197-1207 (2006).
  3. Nauli, A. M., Zheng, S., Yang, Q., Li, R., Jandacek, R., Tso, P. Intestinal alkaline phosphatase release is not associated with chylomicron formation. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 284 (4), G583-G587 (2003).
  4. Lo, C. -M., et al. Why does the gut choose apolipoprotein B48 but not B100 for chylomicron formation. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 294 (1), G344-G352 (2008).
  5. Jandacek, R. J., Heubi, J. E., Tso, P. A novel, noninvasive method for the measurement of intestinal fat absorption. Gastroenterology. 127 (1), 139-144 (2004).
  6. Nauli, A. M., Nauli, S. M. Intestinal transport as a potential determinant of drug bioavailability. Curr Clin Pharmacol. 8 (3), 247-255 (2013).
  7. Tso, P., Nauli, A., Lo, C. M. Enterocyte fatty acid uptake and intestinal fatty acid-binding protein. Biochem Soc Trans. 32 (Pt 1), 75-78 (2004).
  8. Nauli, A. M., Sun, Y., Whittimore, J. D., Atyia, S., Krishnaswamy, G., Nauli, S. M. Chylomicrons produced by Caco-2 cells contained ApoB-48 with diameter of 80-200 nm. Physiol Rep. 2 (6), (2014).
  9. Rubinson, D. A., et al. A lentivirus-based system to functionally silence genes in primary mammalian cells, stem cells and transgenic mice by RNA interference. Nat Genet. 33 (3), 401-406 (2003).
  10. Li, M., Husic, N., Lin, Y., Snider, B. J. Production of lentiviral vectors for transducing cells from the central nervous system. J Vis Exp. (63), e4031(2012).
  11. Pottekat, A., et al. Insulin biosynthetic interaction network component, TMEM24, facilitates insulin reserve pool release. Cell Rep. 4 (5), 921-930 (2013).
  12. Van Greevenbroek, M. M., van Meer, G., Erkelens, D. W. Effects of saturated, mono-, and polyunsaturated fatty acids on the secretion of apo B containing lipoproteins by Caco-2 cells. Atherosclerosis. 21 (1), 139-150 (1996).
  13. Levy, E., Yotov, W., Seidman, E. G., Garofalo, C., Delvin, E., Ménard, D. Caco-2 cells and human fetal colon: a comparative analysis of their lipid transport. Biochim Biophys Acta. 1439 (3), 353-362 (1999).
  14. Luchoomun, J., Hussain, M. M. Assembly and secretion of chylomicrons by differentiated Caco-2 cells. Nascent triglycerides and preformed phospholipids are preferentially used for lipoprotein assembly. J Biol Chem. 274 (28), 19565-19572 (1999).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

מערכת ממברנה חדירהאולטרה-צנטריפוגציה במדרג צפיפות של נתרן כלורימיקרוסקופיית אלקטרונים חודרתהפרשת ליפופרוטאיניםניתוח קילומיקרוניםמערכת ביטוי של לנטיוויראוסבידוד ליפופרוטאינים מהמעיהכנת תערובת ליפידים
באמצעות קאקו-2 תאים לחקר ליפידים תחבורה במעי
צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.