מאמר שיטה

תיוג תא ומיקוד עם פאראמגנטי תחמוצת ברזל חלקיקים

DOI:

10.3791/53099

⸱

19 באוקטובר 2015

 ,  ,  ,  ,  , 
1Division of Cardiovascular Diseases, Mayo Clinic, 2Division of Engineering, Mayo Clinic, 3School of Medicine, Pharmacy and Health, Durham University, 4Regional Center for Applied Molecular Oncology, Masaryk Memorial Cancer Institute, 5Mayo Clinic College of Medicine, Mayo Clinic

במאמר זה

סיכום

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

אספקת תאים ממוקדת שימושית במגוון יישומים ביו-רפואיים. מטרת פרוטוקול זה היא להשתמש בננו-חלקיקי תחמוצת ברזל סופר-פרמגנטיים (SPION) כדי לתייג תאים ובכך לאפשר גישות מיקוד לתאים מגנטיים לרמה גבוהה של שליטה על העברת התאים ולוקליזציה.

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

משלוח ממוקד של תאים וסוכנים טיפוליים ירוויח מגוון רחב של יישומים ביו-רפואיים על ידי ריכוז האפקט הטיפולי באתר היעד תוך מזעור השפעות מזיקות לאתרים מחוץ ליעד. מיקוד תא מגנטי הוא טכניקת אספקה ​​יעילה, בטוחה, ופשוט. חלקיקי פאראמגנטי תחמוצת ברזל (SPION) מתכלים, ביולוגית, ויכולים להיות endocytosed לתאים להפוך אותם מגיב לשדות מגנטיים. התהליך כרוך ביצירת הסינתזה מגנטיט (Fe 3 O 4) ואחריו חלקיקי תחליב במהירות גבוהה כדי ליצור פולי (חומצה לקטית-שיתוף גליקולית) ציפוי (PLGA). SPIONs PLGA-מגנטיט הם כ -120 ננומטר בקוטר כולל ליבת מגנטיט הקוטר כ 10 ננומטר. כאשר הניח במדיום התרבות, SPIONs הם endocytosed באופן טבעי על ידי תאים ומאוחסן כצבירים קטנים בתוך endosomes cytoplasmic. חלקיקים אלה להקנות המוניים מגנטיים מספיק לתאיםכדי לאפשר מיקוד בשדות מגנטיים. מיון תא רב ויישומי מיקוד מופעלים על ידי עיבוד סוגי תאים שונים מגיבים לשדות מגנטיים. יש לי SPIONs מגוון רחב של יישומים ביו-רפואיים אחרים, כמו גם כוללים שימוש כחומר ניגוד הדמיה רפואית, מתן תרופות או גן ממוקד, מבחני אבחון, ודור של היפרתרמיה המקומית לטיפול גידול או הלחמת רקמות.

מבוא

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

אספקה ולכידה ממוקדת של תאים לאתרים ספציפיים בגוף רצויה למגוון יישומים ביו-רפואיים. העברת תאי גזע עצביים למוח על ידי אולטרסאונד ממוקד מונחה MRI הוצעה כאפשרות טיפול אפשרית למחלות ניווניות, פגיעה מוחית טראומטית ושבץ מוחי1. תאי גזע מזנכימליים נחקרים בשל יכולתם לספק תרופות אנטי-סרטניות לגידולים בשל תכונותיהם הטבעיות של הגידולהטרופי 2,3. תאי גזע לבביים הועברו ללב כטיפול אפשרי לאוטם שריר הלב4,5. סטנטים וסקולריים פותחו עם נוגדנים CD34 כדי ללכוד תאי אב במחזור6. בעוד שגישות מיקוד תאים אלה מבטיחות, מציגות חסרונות כולל חוסר ספציפיות תאים, שימור תאים לא עקבי ומסירת תאים מחוץ למטרה.

המטרה הכוללת של השיטה הנוכחית היא לאפשר מיקוד מכוון מגנטי של תאים למגוון יישומי העברת תאים ומיון תאים. מיקוד מגנטי מאפשר אספקה מבוקרת של תאים ספציפיים לאתר יעד ספציפי עם השפעות מינימליות מחוץ למטרה7. השדות המגנטיים יכולים להיווצר על ידי מכשירים מושתלים או חיצוניים כדי לכוון בבטחה את התנועה של תאים מסומנים מגנטית בתוך הגוף8. מאמצי מחקר רבים התמקדו בהכוונה מגנטית של תאי גזע לרקמות פגועות כגון לב9-14, רשתית15, ריאה16, עור17, חוט שדרה18,19, עצם20, כבד21 ושריר22,23 על מנת לשפר את תוצאות ההתחדשות.

מיקוד מגנטי של תאים נחקר בהרחבה גם כאמצעי לאנדותל מכשירים קרדיווסקולריים מושתלים. אנדותל אחיד ושלם מספק מחסום בין המכשיר ליסודות הדם במחזור כדי להפחית פקקת ודלקת. ניתן להעביר תאי אנדותל למכשיר לפני ההשתלה או דרך מערכת כלי הדם לאחר ההשתלה. בשני המקרים, שדות מגנטיים משמשים ללכידת תאים לפני השטח של המכשיר ושמירה על התאים כאשר הם נתונים ללחץ הגזירה שנוצר על ידי מחזור הדם. סטנטים מגנטיים לכלי דם24-27 ושתלים וסקולריים28 יוצרו ונבדקו למטרה זו.

מיקוד תאים מגנטיים דורש אסטרטגיה לתיוג תאים עם חלקיקי נשא מגנטיים. חלקיקים אלה יכולים להיות קשורים לפני השטח של התאים באמצעות נוגדנים או זוגות ליגנד/קולטנים או שהם יכולים להיות אנדוציטוזיים לתוך התאים. ננו-חלקיקי תחמוצת ברזל סופר-פרמגנטיים (SPION) מתכלים, תואמים ביולוגית ועוברים אנדוציטוז בקלות על ידי מגוון סוגי תאים29. חלקיקים אלה גורמים לתא להגיב לשדות מגנטיים ומתפרקים באופן טבעי עם הזמן. SPIONs מספקים אמצעי פשוט ובטוח לתיוג מגנטי של תאים בתרבית עבור מגוון יישומי מיקוד ומיון מגנטיים. ניתנת שיטה לסינתזה של SPIONs עם ליבת מגנטיט (Fe3O4) ומעטפת פולי (חומצה לקטית-קו-גליקולית) (PLGA). בנוסף, ניתנת שיטה לתיוג תאים בתרבית עם SPIONs.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. סינתזה של מגנטיט ג'ל

  1. לשטוף את כל כלי הזכוכית באמצעות חומצה הידרוכלורית מרוכזת ואחריו מים ללא יונים אחרי אתיל אלכוהול. לאפשר לו להתייבש O / N, רצוי בתנור ייבוש.
    זהירות! החומצה הידרוכלורית מזיקה - ללבוש ציוד מגן אישי ועבודה במנדף; אתיל האלכוהול מזיק - ללבוש ציוד מגן אישי.
  2. השתמש בבקבוק Dreschel לדה-גז 500 מיליליטר של H 2 O deionized בעדינות על ידי מבעבע גז 2 N במשך 30 דקות.
  3. הגדרת מנגנון סינתזת מגנטיט בתוך מנדף הכימי.
    1. הנח בקבוק מיליליטר שלושה-צוואר מסביב לתחתית 500 בתוך תנור isomantle ולאבטח את צוואר המרכז באמצעות מהדק ולעמוד.
    2. התקן מחיצת גומי לאחד מצווארי הבקבוק של הצד מסביב לתחתית וקבל ריפלוקס עם מחיצת גומי לצד הצוואר שנותר. ברציפות לרוץ מים קרים דרך הקבל ריפלוקס.
    3. ה נקרדואר המחץ של הבקבוק מסביב לתחתית גומי עם מחט המחוברת לקו גז N 2 ולנקב מחיצת הגומי של הקבל ריפלוקס עם מחט המחוברת לקו גז פועל לbubbler (כלומר, בקבוק עם מים) כדי לחזות יצוא גז.
    4. התקן ההנעה להב לצוואר הבקבוק של מרכז מסביב לתחתית באמצעות מתאם ההנעה. צרף הפיר של ההנעה הלהב לבוחש מעל רכוב על גבי דוכן.
  4. לטהר הבקבוק העגול התחתון עם N 2 גז ולהשאיר N 2 גז זורם בקצב נמוך אבל לזיהוי.
  5. הסר את הקבל ריפלוקס מהבקבוק העגול התחתון ולהוסיף 1.000 גרם של ברזל (III) כלוריד, tetrahydrate כלוריד .6125 גרם של ברזל (II), ו -50 מיליליטר של H-גז דה 2 O.
    זהירות! הברזל (III) כלוריד וברזל tetrahydrate כלוריד (II) מזיקים - ללבוש ציוד מגן אישי.
  6. החלף את הקבל ריפלוקס ומערבבים ב 1000 סל"ד בעוד חימום עד 50מעלות צלזיוס. ערבוב בתנאים אלה מייצר 10 חלקיקי מגנטיט קוטר ננומטר.
  7. ברגע שעל 50 מעלות צלזיוס, להוסיף 10 מיליליטר של 28% פתרון אמוניום הידרוקסיד ידי הזרקה באמצעות מחיצת הגומי בבקבוק העגול התחתון ועדיין ערבוב.
    זהירות! אמוניום הידרוקסיד מזיק - ללבוש ציוד מגן אישי.
    הערה: פתרון אמוניום הידרוקסיד משמש כדי לזרז מגנטיט והפתרון צריך להפוך שחור.
  8. הסר את מחיצת הגומי וקו גז N 2 מהבקבוק והחום מסביב לתחתית עד 90 ° C לרתיחה את גז האמוניה ועדיין ערבוב.
    הערה: זה לא חובה לשמור על הזרימה של N 2 לתוך הבקבוק העגול תחתון-ידי ניקוב מחיצת הגומי של הקבל ריפלוקס, לעומת זאת, החמצון של מגנטיט לmaghemite הוא זניח בשלב זה.
  9. ברגע שעל 90 מעלות צלזיוס, להוסיף 1 מיליליטר של חומצה אולאית לבקבוק העגול התחתון ועדיין ערבוב. החומצה אולאית משמשת למעייל מגנטיט nanoparticles ליצירת קריש מגנטיט.
    זהירות! חומצה אולאית היא מזיקה - ללבוש ציוד מגן אישי.
  10. החזר את מחיצת הגומי וקו גז N 2 על הבקבוק העגול התחתון ולהסיר את הקבל ריפלוקס.
  11. כבה את החום ומערבבים ב500 סל"ד 2 שעות.
  12. הסר את הבקבוק העגול תחתונה מתנור isomantle ולמזוג כל נוזל שנותר תוך שימוש במגנט חזק שעומד כנגד החלק התחתון של הבקבוק כדי לשמר את הג'ל מגנטיט.
    זהירות! להתמודד עם המגנט החזק בזהירות רבה כדי למנוע נזק או פציעה.
  13. לאפשר ג'ל מגנטיט לO אוויר יבש / N (אופציונאלי).

2. טיהור של מגנטיט ג'ל

  1. הוסף 40 מיליליטר של הקסאן לתוך הבקבוק העגול התחתון לפזר את הג'ל מגנטיט
    זהירות! הקסאן מזיק - ללבוש ציוד מגן אישי ועבודה במנדף.
  2. השתמש במשפך separatory עם 40 מיליליטר של H-גז דה 2 O להסיר H 2 O שייר הלוך ושובמ 'פתרון מגנטיט.
    1. לאט לאט שופך את פתרון מגנטיט על H 2 O בתוך המשפך separatory ועדינות מערבולת נוזל שני שלבים במשך 5 דקות.
    2. מסננים החוצה וזורקים את החלק המימי נמוך יותר.
    3. לאט לאט להוסיף 40 מיליליטר של H-גז דה 2 O למשפך separatory כך שהוא מתיישב מתחת לפתרון מגנטיט ועדינות מערבולת ולנקז כמו קודם.
    4. חזור על לשטוף בפעם שלישית.
  3. העבר את פתרון מגנטיט לארלנמייר, להוסיף כמה מריות שווה של נתרן גופרתי נטול מים, ומערבולת כדי להסיר כל H שייר נותר 2 O מפתרון מגנטיט.
  4. סנן את פתרון מגנטיט דרך נייר סינון מיקרומטר 1 במשפך מסנן כדי להסיר נתרן גופרתי וH 2 O. השייר
    הערה: סיוע אבק מומלץ.
  5. מעבירים את פתרון מגנטיט לבקבוק מתאדה 50 מ"ל ולהשתמש מאייד סיבובי להתאדות הקסאן ל2 שעות עם התנאים הבאים: מהירות סיבוב מתונה, ואקום מיושמים, מתאדות בקבוק באמבט מים C ° 50, ו- 24 ° C מים הזורם בקבל.
    הערה: לחלופין, לאחסן את הג'ל מגנטיט לפני ציפוי עם PLGA.

3. ציפוי של מגנטיט חלקיקים עם PLGA Shell

  1. ממיסים 3.60 גרם של PLGA (75/25 תערובת) ב240 מיליליטר של אתיל אצטט ליצור 1.5% (מ '/ V) פתרון. זהירות: אתיל אצטט מזיק - ללבוש ציוד מגן אישי ועבודה במנדף.
  2. ממיסים 25.00 גרם של pluronic F-127 ב -500 מיליליטר של 2 O-גז דה H באמצעות stirrer מגנטי כדי ליצור 5.0% (מ '/ V) פתרון.
    הערה: pluronic F-127 הוא קופולימר בלוק amphiphilic שאינו יוני הפועל כחומרים פעילי שטח ביולוגית. זה עוזר לייצב את תחליב שמן ב-מים בשלב 3.3.2.
  3. באמצעות microspatula, לאסוף את הג'ל מגנטיט לשישה 0.040 aliquots גרם בתוך צלוחיות זכוכית משוקללת. PerfORM תהליך הציפוי והכביסה הבא עבור כל aliquot.
    הערה: aliquots נחוץ כדי להבטיח טיפול יעיל וdecantation המגנטי, אשר יהיה למקסם את טוהר והתשואה תוך מזעור השפלה להקפיא-ייבוש לפני בשלב 4.
    1. הוסף aliquot 0.040 גרם של ג'ל מגנטיט ו -40 מיליליטר של פתרון PLGA לכוס פלסטיק וsonicate בשואב קולי במשך 10 דקות.
    2. להוסיף 80 מיליליטר של פתרון pluronic לכוס הפלסטיק ומייד חלבתי עם מיקסר מעבדה בהגדרה הגבוהה ביותר במשך 7 דקות כדי ליצור ציפוי PLGA על חלקיקי מגנטיט כתחליב שמן ב-מים.
    3. מייד לדלל את פתרון SPION בL 1 של H 2 O deionized וsonicate עבור h 1 במנדף כימי להתאדות אתיל אצטט.
    4. מניחים מגנט חזק הבאה לפתרון SPION ומערבב בעדינות כדי לאסוף SPIONs חום במגנט.
      הערה: ייתכן שיהיה צורך לעורר לסירוגין במשך כמה שעותים לפני הפתרון הופך לבנבן מצביע על כך שרוב SPIONs כבר נאספו.
    5. למזוג תמיסה המימית תוך שמירה על SPIONs בכוס עם המגנט.
    6. שטוף את SPIONs שלוש פעמים כדלקמן.
      1. להשעות את SPIONs בL 1 של H 2 O. deionized
      2. Sonicate פתרון SPION במשך 20 דקות.
      3. מניחים מגנט חזק הבאה לפתרון SPION ומערבב בעדינות כדי לאסוף SPIONs חום במגנט. זה עשוי להיות נחוץ כדי לעורר לסירוגין במשך כמה שעות לפני הפתרון הופך ברור המצביע על כך שרוב SPIONs כבר נאספו.
      4. למזוג תמיסה המימית תוך שמירה על SPIONs בכוס עם המגנט.
  4. לאסוף את SPIONs מסונתז מכל אחד מששת aliquots ג'ל מגנטיט לתוך בקבוקון זכוכית אחד משוקלל כהשעיה מימית. לחלופין למזוג מים עודפים מגנטי לפי צורך.

4. הקפאה-drying של SPIONs

  1. להקפיא את פתרון SPION.
  2. להקפיא-ייבוש O / N פתרון SPION בlyophilizer.
  3. לשקול את SPIONs המיובש בהקפאה. ניתן לאחסן SPIONs המיובש בהקפאה ב -20 ° C עד משמש לתיוג תא.
    הערה: אחסון ב -20 ° C מפחית באופן דרמטי קינטיקה השפלה ומגביר את חיי מדף.

5. תיוג של תאים עם SPIONs

  1. להשעות aliquot של SPIONs בנאגר מלוח פוספט (PBS) בריכוז של 40 מ"ג / מיליליטר וsonicate במשך 30 דקות.
  2. מוסיף את פתרון SPION לבקבוק כמעט ומחוברות של תאים בריכוז של 5 / מיליליטר μl של מדיום תרבית תאים. ודא גם הפצה בעדינות על ידי הנדנדה הבקבוק.
  3. דגירה התאים במשך 16 שעות על 37 מעלות צלזיוס.
  4. לשאוב בעדינות בינוני תרבות ולשטוף תאים פעמיים עם PBS.
  5. איסוף תאים מגנטי שכותרתו ולהשתמש לניסויים.
  6. פתרון SPION שאינו בשימוש יכול להיות מאוחסן על 4 מעלות צלזיוס וצריך להיות לנואד בתוך כמה חודשים. Sonicate במשך 30 דקות לפני כל שימוש.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

חלקיקי מגנטיט הם כ 10 ננומטר בקוטר כתוצאה מערבוב תמיסה מימית של ברזל (III) tetrahydrate כלוריד וברזל כלוריד (II) על 50 מעלות צלזיוס ו1,000 סל"ד (איור 1). תוצאות אלו מראות סינתזה מוצלחת של ננו-חלקיקי מגנטיט. חשוב לוודא את הגודל והצורה של חלקיקי מגנטיט נלקחו ממדגם קטן של המנה כאשר מנסים סינתזה בפעם הראשונה. במיקרוסקופ אלקטרונים הילוכים (TEM) הוא השיטה המועדפת להדמית חלקיקים אלה. אצווה צריך להיות מושלך והסינתזה צריכה להיות ניסיתי שוב אם חלקיקי מגנטיט אינם כ 10 ננומטר...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כמו עם כל פרוטוקול סינתזת ננו-חלקיקים, טוהר הכימיקלים מגיב הוא קריטי להשגת SPIONs באיכות גבוהה שיש השפעות רעילות לתאים מינימליות. לכן חשוב לרכוש חומרים כימיים טהורים מאוד, כולל חומצה אולאית (≥99%), ברזל tetrahydrate (II) כלוריד (≥99.99%), ברזל (III) כלוריד (≥99.99%), אתיל אצטט (כיתה HPLC, ≥99.9% ), הקסאן (כיתה HPLC, ≥97.0%), אמוניום הידרוקסיד (≥99.99%), ונתרן גופרתי (≥99.0%). זה הוא בעל חשיבות מיוחדת לרכישה מאוד טהור ואיכותי PLGA, אשר יכול להיות יקר יחסית. בנוסף, כל כלי הזכוכית יש...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

המחברים מצהירים שאין להם אינטרסים פיננסיים מתחרים.

תודות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

המחברים מבקשים להכיר במימון מהקרן האירופית לפיתוח אזורי – FNUSA-ICRC (no. CZ.1.05/ 1.1.00/ 02.0123), מענק פיתוח מדענים של איגוד הלב האמריקאי (AHA #06-35185N), והמכונים הלאומיים לבריאות (NIH #T32HL007111).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
תמיסת אמוניום הידרוקסיד, 28% NH3 ב-H2O, ≥ 99.99% בסיס קורט מתכתסיגמא-אולדריץ'338818-100ML מגיב מזיק - ללבוש ציוד מגן אישי
בקבוק Dreschel, 500 מ"לAce Glass5516-16
אתיל אצטט, CHROMASOLVR Plus, עבור HPLC, 99.9% Sigma-Aldrich650528-1Lמגיב מזיק - ללבוש ציוד מגן אישי ולעבוד בקולט אדים
אתיליSigma-AldrichE7023מגיב מזיק - ללבוש ציוד מגן אישי
בקבוק אידוי, 50 מ"ל, 24/40 JointSigma-AldrichZ515558לשימוש עם מאייד רוטומאייד
נייר סינון, קוטר 3 ס"מ, דרגה 1פישר09-805Pלשימוש עם משפך מסנן זכוכית
כוסות זכוכית, 1 ליטרפישרFB-101-1000לשטיפת SPIONs
משפך מסנן זכוכית, מתאם צינור ואקום, מתאים 24/40, 30 מ"לפישרK954100-0344 
פקקי בקבוקון זכוכיתפישר03-391-46לשימוש עם בקבוקוני זכוכית
בקבוקוני זכוכית 2 מ"לפישר03-391-44לאיסוף ג'ל מגנטיט & SPIONs
Hexane, CHROMASOLVR, עבור HPLC, ≥ 97.0% (GC)סיגמא-אולדריץ'34859-1L מגיב מזיק - ללבוש ציוד מגן אישי ולעבוד במכסה אדים
חומצה הידרוכלוריתSigma-AldrichH1758מגיב מזיק - ללבוש ציוד מגן אישי ולעבוד בקולט אדים
ברזל (II) כלוריד טטרהידרט, ≥ 99.99% בסיס מתכות קורט Sigma-Aldrich380024-5Gמגיב מזיק - ללבוש ציוד מגן אישי
ברזל (III) כלוריד נטול מים, אבקה, ≥ 99.99% בסיס מתכות קורטSigma-Aldrich451649-1Gמגיב מזיק - ללבוש ציוד מגן אישי
מחמם איזומנטל, 500 מ"לVoight GlobalEM0500/CEX1
מערבל מעבדהSilversonL5M-A
LyophilizerLabconco7670520
MicrospatulasFisher21-401-25Aלהעברת מגנטיט מגנט ג'ל
NdFeB, 1 אינץ' x 1 אינץ' x 1במגנטים מדהימיםC1000H-Mמגנט חזק מאוד, טפל בזהירות
חומצה אולאית, ≥ 99% (GC)סיגמא-אולדריץ'O1008-5G אחסן במקפיא; מגיב מזיק - ללבוש ציוד מגן אישי
בוחש עיליIKA2572201
מהדק בוחש עיליIKA2664000לשימוש עם בוחש עילי
בוחש תקורה H-standIKA1412000לשימוש עם בוחש עילי
פוספט חוצץ מלחLife Technologies10010-023
כוסות פלסטיק, 250 מ"לניתן להשתמש גם בפישר02-591-28
PLGA PURASORB PDLG (תערובת 75/25)PuracPDLG 7502PDLG 7502A; אחסן במקפיא
אבקת Pluronic F-127, BioReagent, מתאימה לתרבית תאיםSigma-AldrichP2443-250G 
משוט להב הניתן להרחבה PTFE, קוטר 8 מ"מSciQuipSP4018
מתאם כלי PTFE, מתאים 24/40, משוט קוטר 8 מ"מMonmouthScientific PTFE מתאם כלי A480לשימוש עם משוט להב הניתן להרחבה PTFE
צ'ילר מחזוריקלארקסון696613לשימוש עם מעבה ריפלוקס רוטו,
מתאים 24/40, 250 מ"מAce Glass5997-133
מאייד רוטוקלארקסון216949
מחיצת גומי, מתאים 24/40Ace Glass9096-56
משפך הפרדה עם פקק, 250 מ"לפישר10-438E
נתרן גופרתי מגיב ACS, ≥ 99.0%, נטול מים,סיגמא-אולדריץ'גרגירי 239313-500G 
בקבוק תחתון עגול עם שלושה צווארים, זוויתי, 24/40 מפרקים, 500 מ"לAce Glass6948-16
מחבת מחוררת מנקה אולטרסאונדפישר15-335-20Aלשימוש עם שואב קולי
שואב קולי, 2.8 ליטרפישר15-335-20
בקר ואקוםקלארקסון216639לשימוש עם מאייד רוטו (אופציונלי)
ואקום משאבתקלארקסון219959לשימוש עם מאייד רוטו
אלכוהול

מקורות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Burgess, A., et al. Targeted delivery of neural stem cells to the brain using MRI-guided focused ultrasound to disrupt the blood-brain barrier. PLoS One. 6 (11), e27877(2011).
  2. Nguyen, K. T. Mesenchymal Stem Cells as Targeted Cell Vehicles to Deliver Drug-loaded Nanoparticles for Cancer Therapy. J Nanomed Nanotechol. 4 (1), e128(2013).
  3. Kean, T. J., Lin, P., Caplan, A. I., Dennis, J. E. MSCs: Delivery Routes and Engraftment, Cell-Targeting Strategies, and Immune Modulation. Stem Cells Int. , 732742(2013).
  4. Suzuki, K., et al. Targeted cell delivery into infarcted rat hearts by retrograde intracoronary infusion: distribution, dynamics, and influence on cardiac function. Circulation. 110 (11 Suppl 1), II225-II230 (2004).
  5. Garbern, J. C., Lee, R. T. Cardiac stem cell therapy and the promise of heart regeneration. Cell Stem Cell. 12 (6), 689-698 (2013).
  6. Duckers, H. J., et al. Accelerated vascular repair following percutaneous coronary intervention by capture of endothelial progenitor cells promotes regression of neointimal growth at long term follow-up: final results of the Healing II trial using an endothelial progenitor cell capturing stent (Genous R stent). EuroIntervention. 3 (3), 350-358 (2007).
  7. Pan, Y., Du, X., Zhao, F., Xu, B. Magnetic nanoparticles for the manipulation of proteins and cells. Chem Soc Rev. 41 (7), 2912-2942 (2012).
  8. Huang, Z. Y., et al. Deep magnetic capture of magnetically loaded cells for spatially targeted therapeutics. Biomaterials. 31 (8), 2130-2140 (2010).
  9. Shen, Y., et al. Comparison of Magnetic Intensities for Mesenchymal Stem Cell Targeting Therapy on Ischemic Myocardial Repair: High Magnetic Intensity Improves Cell Retention but Has No Additional Functional Benefit. Cell Transplant. , (2014).
  10. Cheng, K., et al. Magnetic antibody-linked nanomatchmakers for therapeutic cell targeting. Nat Commun. 5, 4880(2014).
  11. Vandergriff, A. C., et al. Magnetic targeting of cardiosphere-derived stem cells with ferumoxytol nanoparticles for treating rats with myocardial infarction. Biomaterials. 35 (30), 8528-8539 (2014).
  12. Huang, Z., et al. Magnetic targeting enhances retrograde cell retention in a rat model of myocardial infarction. Stem Cell Res Ther. 4 (6), 149(2013).
  13. Chaudeurge, A., et al. Can magnetic targeting of magnetically labeled circulating cells optimize intramyocardial cell retention. Cell Transplant. 21 (4), 679-691 (2012).
  14. Cheng, K., et al. Magnetic targeting enhances engraftment and functional benefit of iron-labeled cardiosphere-derived cells in myocardial infarction. Circ Res. 106 (10), 1570-1581 (2010).
  15. Yanai, A., et al. Focused magnetic stem cell targeting to the retina using superparamagnetic iron oxide nanoparticles. Cell Transplant. 21 (6), 1137-1148 (2012).
  16. Ordidge, K. L., et al. Coupled cellular therapy and magnetic targeting for airway regeneration. Biochem Soc Trans. 42 (3), 657-661 (2014).
  17. El Haj, A. J., et al. An in vitro model of mesenchymal stem cell targeting using magnetic particle labelling. J Tissue Eng Regen Med. , (2012).
  18. Vanecek, V., et al. Highly efficient magnetic targeting of mesenchymal stem cells in spinal cord injury. Int J Nanomedicine. 7, 3719-3730 (2012).
  19. Sasaki, H., et al. Therapeutic effects with magnetic targeting of bone marrow stromal cells in a rat spinal cord injury model. Spine (Phila Pa 1976). 36 (12), 933-938 (2011).
  20. Oshima, S., et al. Enhancement of bone formation in an experimental bony defect using ferumoxide-labelled mesenchymal stromal cells and a magnetic targeting system. J Bone Joint Surg Br. 92 (11), 1606-1613 (2010).
  21. Luciani, A., et al. Magnetic targeting of iron-oxide-labeled fluorescent hepatoma cells to the liver. Eur Radiol. 19 (5), 1087-1096 (2009).
  22. Oshima, S., Kamei, N., Nakasa, T., Yasunaga, Y., Ochi, M. Enhancement of muscle repair using human mesenchymal stem cells with a magnetic targeting system in a subchronic muscle injury model. J Orthop Sci. 19 (3), 478-488 (2014).
  23. Ohkawa, S., et al. Magnetic targeting of human peripheral blood CD133+ cells for skeletal muscle regeneration. Tissue Eng Part C Methods. 19 (8), 631-641 (2013).
  24. Tefft, B. J., et al. Magnetizable Duplex Steel Stents Enable Endothelial Cell Capture. Ieee T Magn. 49 (1), 463-466 (2013).
  25. Uthamaraj, S., et al. Design and validation of a novel ferromagnetic bare metal stent capable of capturing and retaining endothelial cells. ABME. 42 (12), 2416-2424 (2014).
  26. Polyak, B., et al. High field gradient targeting of magnetic nanoparticle-loaded endothelial cells to the surfaces of steel stents. Proc Natl Acad Sci U.S.A. 105 (2), 698-703 (2008).
  27. Pislaru, S. V., et al. Magnetically targeted endothelial cell localization in stented vessels. J Am Coll Cardiol. 48 (9), 1839-1845 (2006).
  28. Pislaru, S. V., et al. Magnetic forces enable rapid endothelialization of synthetic vascular grafts. Circulation. 114 (1 Suppl), 314-318 (2006).
  29. Wang, Y. X., Xuan, S., Port, M., Idee, J. M. Recent advances in superparamagnetic iron oxide nanoparticles for cellular imaging and targeted therapy research. Curr Pharm Des. 19 (37), 6575-6593 (2013).
  30. Yellen, B. B., et al. Targeted drug delivery to magnetic implants for therapeutic applications. J Magn Magn Mater. 293 (1), 647-654 (2005).
  31. Granot, D., et al. Clinically viable magnetic poly(lactide-co-glycolide) particles for MRI-based cell tracking. Magn Reson Med. , (2013).
  32. Levy, M., et al. Long term in vivo biotransformation of iron oxide nanoparticles. Biomaterials. 32 (16), 3988-3999 (2011).
  33. Mirshafiee, V., Mahmoudi, M., Lou, K., Cheng, J., Kraft, M. L. Protein corona significantly reduces active targeting yield. Chem Commun (Camb). 49 (25), 2557-2559 (2013).
  34. Salvati, A., et al. Transferrin-functionalized nanoparticles lose their targeting capabilities when a biomolecule corona adsorbs on the surface. Nat Nanotechnol. 8 (2), 137-143 (2013).
  35. Landazuri, N., et al. Magnetic targeting of human mesenchymal stem cells with internalized superparamagnetic iron oxide nanoparticles. Small. 9 (23), 4017-4026 (2013).
  36. Sun, J. H., et al. In vitro labeling of endothelial progenitor cells isolated from peripheral blood with superparamagnetic iron oxide nanoparticles. Mol Med Rep. 6 (2), 282-286 (2012).
  37. Zhang, B., et al. Detection of viability of transplanted beta cells labeled with a novel contrast agent - polyvinylpyrrolidone-coated superparamagnetic iron oxide nanoparticles by magnetic resonance imaging. Contrast Media Mol Imaging. 7 (1), 35-44 (2012).
  38. Song, M., et al. Labeling efficacy of superparamagnetic iron oxide nanoparticles to human neural stem cells: comparison of ferumoxides, monocrystalline iron oxide, cross-linked iron oxide (CLIO)-NH2 and tat-CLIO. Korean J Radiol. 8 (5), 365-371 (2007).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

PLGATEMSEM

מאמרים קשורים