הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

פיתוח של

12.4K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/53974

⸱

10 ביוני 2016

 ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Clinical Laboratory, The University of Tokyo Hospital, 2Department of Respiratory Medicine, The University of Tokyo Hospital

במאמר זה

סיכום

כאן, אנו מתארים את הפיתוח והיישום של בדיקת התכווצות ג'ל להערכת תפקוד התכווצות בתאים מזנכימליים שעברו מעבר אפיתל-מזנכימלי.

תקציר

פיברוזיס מעורב לעתים קרובות בפתוגנזה של מחלות מתקדמות כרוניות שונות כגון מחלת ריאות אינטרסטיציאלית. סימן ההיכר הפתולוגי הוא היווצרות מוקדים פיברובלסטיים, הקשורים לחומרת המחלה. תאים מזנכימליים המורכבים מהמוקדים הפיברובלסטיים מוצעים להיגזר ממספר מקורות תאים, כולל פיברובלסטים תוך-ריאתיים ששוכנים במקור ופיברוציטים במחזור ממח העצם. לאחרונה, תאים מזנכימליים שעברו מעבר אפיתל-מזנכימלי (EMT) אמורים גם הם לתרום לפתוגנזה של פיברוזיס. בנוסף, ניתן לגרום ל-EMT על ידי שינוי גורם הגדילה β, וניתן לשפר את ה-EMT על ידי ציטוקינים פרו-דלקתיים כמו גורם נמק גידול α. בדיקת התכווצות הג'ל היא מודל אידיאלי במבחנה להערכת התכווצות, שהיא אחת הפונקציות האופייניות לפיברובלסטים ותורמת לתיקון פצעים ופיברוזיס. כאן מודגמת התפתחות של בדיקת התכווצות ג'ל להערכת יכולת ההתכווצות של תאים מזנכימליים שעברו EMT.

מבוא

פיברוזיס מעורב בפתוגנזה של מחלות פרוגרסיבי שונות כרוניות, כגון מחלת ריאות אינטרסטיציאלית, סיסטיק לב, שחמת כבד, אי ספיקת כליות סופנית, טרשת מערכתית, ומחלות אוטואימוניות מחלה 1. בין מחלות ריאה אינטרסטיציאלית פיברוזיס ריאתי אידיופתי (IPF) הוא מחלה מתקדמת כרונית ומראה פרוגנוזה גרועה. סימן היכר הפתולוגי של IPF הוא הפיתוח של מוקדי fibroblastic המורכבים פיברובלסטים מופעל myofibroblasts המשויכים הפרוגנוזה. מקורותיה של פיברובלסטים ריאתי כאלו מוצעות לנבוע מכמה תאים mesenchymal, כולל fibroblasts ריאות תושב במקור ומדחסים fibrocytes ממח העצם. לאחרונה, מעבר mesenchymal-אפיתל (EMT) הוצע להיות מזוהה עם ההיווצרות של תאי mesenchymal 2, ולתרום בפתוגנזה של פרעות fibrotic.

הוא חשב כי EMT משחק תפקידים חשובים בתהליך של התפתחות עוברת, ריפוי פצעים, והתקדמות של סרטן, כולל חדירת גידול וגרור 3. בעקבות התהליך של EMT, תאי אפיתל להשיג את היכולת של תאי mesenchymal ידי אובדן של סמנים אפיתל, כגון E-cadherin, ועל ידי ביטוי של סמני mesenchymal, כגון vimentin, יקטין שריר α-חלקה (SMA) 4,5. מחקרים קודמים הראו הראיות כי תהליך EMT כבר קשור להתפתחות של סיסטיק רקמות הכליה 6 וריאות 7. בנוסף, דלקת כרונית מקדמת fibrotic מחלת 8; יתר על כן, ציטוקינים דלקתיים כגון חבר superfamily גורם גידול נמק 14 (TNFSF14; LIGHT), tumor necrosis factor (TNF) -α, ו- interleukin-1β, הוכחו לשפר EMT 9-12.

assay התכווצות ג'ל קולגן, assay התכווצות תא מבוסס קולגן, אשר פיברובלסטים מוטבעים מהסוג Iקולגן ג'ל תלת ממדית, הוא אידיאל במודל חוץ גופית לצורך הערכה של התכווצות. התכווצות היא אחת הפונקציה האופיינית של פיברובלסטים ותורמת תיקון פצע נורמלי סיסטיק 13. ב assay זה, הוא חשב כי את הקובץ המצורף של פיברובלסטים Type I קולגן באמצעות מנגנוני integrin תלוי אמור לייצר מתח מכאני בתנאים מסוימים, וכתוצאה מכך להוביל להתכווצות רקמות.

כאן, בפיתוח של assay התכווצות ג'ל מדווח להיות מותאם על מנת להעריך את רכישת פונקצית התכווצות בתאים שעברו EMT. דו"ח זה מדגים כי assay שונה זו מתאימה להערכת contractility בתאי mesenchymal שעברו EMT.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

תכשירי 1. והתרבות של תאי אפיתל הריאות

  1. תאי אפיתל ריאה אנושית A549 תרבות (שורת תאים חסיד) ב בינוני הנשר שונה של Dulbecco (DMEM) בתוספת 10% בסרום שור העובר (FBS), 100 IU / פניצילין מ"ל, 100 מיקרוגרם / מ"ל ​​סטרפטומיצין.
  2. סר וזורק תקשורת תרבית תאים מן מנת התרבות, ולשטוף פעם עם 5 - 10 מיליליטר של בופר פוספט (PBS). לאחר הכביסה, מיד לשאוב PBS.
  3. הוסף 2 מ"ל טריפסין / חומצה ethylenediaminetetraacetic (EDTA) (0.05%) ו לדגור על 37 מעלות צלזיוס, 5% CO 2 דקות 3.
  4. אוסף את התא המנותק צינורות צנטריפוגה המכילים בינוני תרבית תאים, צנטריפוגה הצינורות ב RT במשך 4 דקות ב g 150 ×.
  5. Resuspend התאים גלולה ב 2 מ"ל של מדיום תרבית תאים ולהסיר מדגם עבור ספירת תאים. ספירת התאים באמצעות hemocytometer עם כתם כחול Trypan לבדוק כדאיות התא.
  6. תאי A549 זרע על10 ס"מ קלקר צלחות בצפיפות של 0.5 - 1.0 × 10 6 תאים / תבשיל עם 10 מ"ל של מדיום עבור assay התכווצות ג'ל. זרעים התאים על 6 צלחות קלקר גם בצפיפות של 0.5 - 1.0 × 10 5 תאים / היטב עם 2 מ"ל של מדיום לאישור EMT. דגירת התאים ב 37 מעלות צלזיוס, 5% CO 2 למשך 24 שעות.

נוהל EMT 2.

  1. הוסף 10 μl של-β1 TGF (5 מיקרוגרם / מ"ל) ו -10 μl של-α TNF (10 מיקרוגרם / מ"ל) לצלחת עבור assay התכווצות ג'ל זורעים בשלב 1.6. הוסף 2 μl של-β1 TGF (5 מיקרוגרם / מ"ל) ו -2 μl של-α TNF (10 מיקרוגרם / מ"ל) לצלחת לאישור EMT זורעים בשלב 1.6. לדגור על 37 מעלות צלזיוס, 5% CO 2 למשך 48 שעות.

3. אישור של נוהל EMT ידי PCR ו המערבי סופג

  1. אשר שינוי במורפולוגיה (מאבן דמוי חלוק כדי ציר צורה) של תאים שטופלו באמצעות מיקרוסקופ לעומת שלב.
    הערה: נורםיש תאי A549 אל חלוק אבן דמוית ומראה בצורה משולש היא מאפיין של תאי אפיתל, אך לאחר גירוי עם-β1 TGF ו-α TNF, התאים להופיע ארוכים ציר בצורה דומה תאי mesenchymal 14,15.
  2. חישוב הביטוי של סמן אפיתל, כגון E-cadherin, וסמנים mesenchymal כגון N-cadherin, vimentin, אקטין שריר α-חלקה באמצעות PCR או המערבי סופג.
    1. חלץ RNA הכולל את התאים באמצעות ערכת חילוץ RNA 16 לסנתז cDNA באמצעות transcriptase הפוכה 17 על פי פרוטוקול של היצרן.
    2. למדוד ביטוי של רמות ה- mRNA באמצעות מערכת בזמן אמת PCR 18 וערכת PCR לצבוע cyanine monomeric פי הוראות היצרנים. פריימרים ספציפיים עבור GAPDH (glyceraldehyde dehydrogenase 3-פוספט), ACTA2 (אלפא-אקטין 2), CDH1 (cadherin-1; E-cadherin), ו VIM (vimentin) מוצגים בלוח 1 .
    3. Lyse את התאים באמצעות חיץ תמוגה (טבלה 2) תמיסה המכילה קוקטייל מעכב 1% פרוטאז. למדוד את כל ריכוזי חלבון מדגם באמצעות ערכת assay חלבון 19,20, ולהחיל אותן כמויות של חלבון ג'ל polyacrylamide.
      1. בצע-ג'ל אלקטרופורזה SDS והעביר חצי יבש של חלבוני קרום PVDF 21. דגירה הממברנה עם נוגדנים ראשוניים בחסימת המאגר עבור 1 - שעות 2. לאחר דגירה, לשטוף פעמים הממברנה עם חיץ לשטוף דגירת hr קרום 1 עם נוגדנים שניים.
        הערה: עיין חומרים / ציוד שולחן עבור נוגדנים דילולים שימוש במחקרים אלה. ראה טבלה 2 עבור רכיבי חסימת חיץ.
      2. לשטוף את הממברנה עם חיץ לשטוף פעמיים. צלם תמונות של הקרום עם ערכת זיהוי המערבית סופגת 22 באמצעות 11,23 מצלמת CCD קר.

4. Assay התכווצות ג'ל EMT הערכה

  1. לשאוב התקשורת מותנה מספינת תרבית תאים, ולשטוף היטב עם 5 - 10 מ"ל של PBS להסיר תאים מתים. לאחר הכביסה, מיד לשאוב PBS.
  2. הוסף 2 מ"ל של 0.05% טריפסין / EDTA ו לדגור על 37 מעלות צלזיוס, 5% CO 2 דקות 3.
  3. אוספים את התאים מנותקת צינורות צנטריפוגה המכיל DMEM בתוספת מעכב טריפסין (1 מ"ג / מ"ל), צנטריפוגה צינורות ב RT במשך 4 דקות ב 150 × גרם.
  4. מערבבים סוג 1 ג'ל קולגן עם מים מזוקקים, ו -4 × מרוכזים DMEM להתאים את הכרכים כדי להשיג ריכוז הקולגן של 1.75 מ"ג / מ"ל, 1 × ריכוז DMEM. הקפד לשמור המדיום ג'ל על הקרח במהלך שלב זה.
    הערה: כדי להפוך 6 מ"ל של מדיום ג'ל, ומערבבים היטב 3.5 מ"ל של ג'ל קולגן מסוג 1 (3 מ"ג / מ"ל), 1.5 מ"ל של 4 × מרוכזים DMEM, ו 1ml של מים מזוקקים.
  5. Resuspend התא גלולה ב 500 μl של PBS ולהסיר מדגם עבור ספירת תאים. לספורמספר התאים באמצעות hemocytometer עם כתם כחול trypan לבדוק כדאיות התא.
  6. הוסף בינוני ג'ל להתאים את הכרכים להשיג צפיפות התאים של 3.0 × 10 5 תאים / טוב (6.0 × 10 5 תאים / מ"ל) בעדינות אך במהירות לערבב אותו על ידי pipetting ללא gelation.
  7. לוותר 0.5 מיליליטר של התערובת לבאר כל צלחת 24 גם שאינם מטופלים במהירות ובזהירות לעשות בצורה גלילית מסודרת. היזהר שלא לאפשר כל בועות אוויר לזהם את הג'לים (איור 1 א).
    הערה: בינוני ג'ל המכיל את התאים הוא צמיג ויכול ג'ל טופס סהר צורה בקלות הבאר.
  8. דגירה את הצלחת במשך 15 דקות בתוך חממת תא ב 37 מעלות צלזיוס, 5% CO 2 ולחות 95% להגליד לחלוטין.
  9. ניתוק ג'לים מהצלחת בלי לשבור על ידי הזזת מרית מעוקרת באופן לצייר היקף בכיוון אחד. בעזרת מרית, להעביר את הג'לים בעדינות תרבות מנות 60 מ"מ רקמההמכיל 5 מ"ל של FBS% DMEM / 1 עם או בלי-β1 TGF (5 ng / ml) ו-α TNF (10 ng / ml).
  10. נער בעדינות את הכלים כדי להבטיח ג'לים צף על המדיום. מדגירים את תא חממה על 37 מעלות צלזיוס, 5% CO 2 ולחות 95%.

מדידת 5. ג'ל גודל

  1. מדוד את גודל ג'ל קולגן לאחר 0, 24, 48, ו -72 שעות באמצעות מערכת ניתוח תמונה.
    1. הפעל את מערכת תיעוד ג'ל (איור 2 א), ולשים מנות לתוך ארון מגן אור. ואז מסירים את המכסה של הצלחות בארון הכלים.
    2. פתח את התוכנה לניתוח ג'ל קשורה. לחץ על "כפתור רכישת תמונה" בבר-התפריט כדי להציג את התמונה של הג'לים בקבינט. לאחר מכן, לחץ "לרכוש" בשורת התפריטים כדי לצלם את ג'לים (איור 2 ב).
    3. לחץ על "כפתור זיהוי" בשורת התפריטים (איור 2 ג) ולהתאים באזור המדידה (i עיגול צהובn איור 2C) על ידי גרירת העכבר. לאחר מכן, לחץ על "איתור אוטומטי כפתור" בשורת התפריטים (ראה כפתור באיור 2D). התוכנה מזהה אוטומטית את הג'לים מראים מפת חום (איור 2 ד).
    4. לחץ "אישור" כדי לחלץ את קווי המתאר של ג'ל על ידי עיבוד תמונה ולחשב אזורים המוקפים המתאר (האיור 2E). אחרי השטח חושב, באזור המחושב מוצג חלון מוקפץ נפרד.
      הערה: אם את הג'לים חופפים זה לזה במהלך ההדמיה, להעביר ג'לים בעדינות בעזרת קצה פיפטה סטרילית.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

במהלך EMT, תאי אפיתל לאבד סמנים אפיתל, כמו E-cadherin, ולהשיג ביטוי של סמנים mesenchymal, כגון vimentin ו α-שריר חלק אקטין 4,5. דגירה של תאי אפיתל ריאה האנושית A549 עם-β1 TGF ו- TNF-α גורמת EMT. הופעתו של תאי A549 נורמלים הם אבן חלוק כמו צורה וצורה משולשת היא מאפיין של תאי אפיתל (איור 3 א), אלא לאחר מגורה עם TGF-β1 ו- TNF-α, את המראה השתנה לצורתו ציר הארוכה דומה mesenchymal תאים (איור 3).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

הפרוטוקול שפותח במחקר זה כולל שני שלבים. השלב הראשון מתבצע על מנת לגרום EMT, ואילו השלב השני הוא assay התכווצות ג'ל. מאז חשוב לאשר תאים עברו EMT, שלב 2 מספק השלמה מצוינת שינויי ביטוי מורפולוגיים גן. מחקרים קודמים הראו כי EMT של תאי A549 הושר על ידי TGF-β1 רק 24; עם זאת, כפי שכבר דווח בעבר 10, טיפול-α TNF משפרים EMT ורכישת סמני תא mesenchymal. הוא חשב כי מנגנוני EMT TGF-β בתיווך הוא הסמאד תלוי 25. TNFα משפר EMT-induced TGF-β1 שמוביל שיפור של התכ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

יש המחברים אין ניגודי אינטרסים לחשוף.

תודות

אנו מודים לד"ר טדאשי קויאמה על העזרה הטכנית. עבודה זו נתמכה בחלקה על ידי JSPS KAKENHI Grant Numbers 23249045, 15K09211, 15K19172; מענק לקבוצת המחקר לאי ספיקת נשימה ממשרד הבריאות, העבודה והרווחה, יפן; מענק למחקר על מחלות אלרגיות ואימונולוגיה, יפן.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
DMEMsigma aldrich11965-092עבור A549 בינוני
FBSGIBCO10437
גורם גדילה טרנספורמטיבי-ובטא; 1, אנושי, כימיקלים רקומביננטייםשל מעבדת וואקו209-16544
TNF-ואלפא אנושיים רקומביננטיים;מו"פ D systems210-TA/CF
E-Cadherin (24E10)טכנולוגיית איתות תאי31951:3,000 דילול
וימנטין (D21H3)טכנולוגיית איתות תאי57411:3,000 דילול
אנטי-&אלפא;-נוגדן טובוליןסיגמא אולדריץ'T90261:10,000 דילול
חד-שבטי אנטי-אקטין, &אלפא;-נוגדן שריר חלק& נ.ב.פ;סיגמא אולדריץ' A52281:10,000 דילול
נוגדן נגד N-cadherinBD Transduction Laboratories#6109201:1,000 דילול
IgG נגד עכברים, כבשים שלמות מקושרות HRP (נוגדן משני)GE HealthcareNA931-100UL1:20,000 דילול
Anti-Rabbit IgG, HRP מקושר לחמור בטן שלם (נוגדן משני)GE HealthcareNA934-100UL1:20,000
ריאגנט חסימתGE HealthcareRPN4182% ב-TBS-T
6 צלחת תרבית תאים מולטי-באר שקופה עם תחתית שטוחה TC, עם מכסהקורנינג#353046
צלחת תרבית תאים 100 מ"מTPP#93100
DMEM, טכנולוגיות חיי אבקה12100-046ל-4 פעמים; DMEM
סוג 1 קולגן ג'לניטה ג'לטיןCellmatrix סוג I-A
24 באר צלחת תרבית תאיםAGC TECHNO GLASS1820-024
מערכת תיעוד ג'ל ATTOAE-6911FXNGel imager
תוכנת ניתוח ג'לATTODensitograph, ver. 3.00תוכנת ניתוח המצורפת ל-AE-6911FXN
Trypsin-EDTA (0.05%), Penol RedLife Technologies25300054-24
Well Plates, לא מטופלIWAKI1820-024
Trypan Blue Solution, 0.4%Life Technologies15250-061
ערכת מיצוי RNAQiagen74106
טכנולוגיות חייםטרנסקריפטאז הפוך18080044
מערכת PCR בזמן אמתStratageneMx-3000P
SYBR ערכת PCR ירוקהQiagen204145
מעכב פרוטאז קוקטייל (100x)טכנולוגיות חיים78429
ממברנתPVDFערכת2392390
ביו-ראד5000006JA 
ג'ל פוליאקרילאמידATTO2331810
מגיב זיהוי כתמים מערביGE HealthcareRPN2232
מצלמת CCD קרהATTOEz-Capture מעכב
סיגמה אולדריךT9003-100MG
פוליאוקסיאתילן (20) סורביטן מונולאורטWako מעבדה כימיקלים163-11512
פוליאוקסיאתילן (9) אוקטיניל אתרWako כימיקלים מעבדתיים141-08321
ארנב mAb# ארנב mAb# דילול בדיקת חלבון ATTO טריפסין MG / ST

מקורות

  1. Wynn, T. A. Cellular and molecular mechanisms of fibrosis. The Journal of pathology. 214, 199-214 (2008).
  2. Hardie, W. D., Glasser, S. W., Hagood, J. S. Emerging concepts in the pathogenesis of lung fibrosis. The American journal of pathology. 175, 3-16 (2009).
  3. Kovacic, J. C., Mercader, N., Torres, M., Boehm, M., Fuster, V. Epithelial-to-mesenchymal and endothelial-to-mesenchymal transition: from cardiovascular development to disease. Circulation. 125, 1795-1808 (2012).
  4. Thiery, J. P., Acloque, H., Huang, R. Y., Nieto, M. A. Epithelial-mesenchymal transitions in development and disease. Cell. 139, 871-890 (2009).
  5. Kalluri, R., Weinberg, R. A. The basics of epithelial-mesenchymal transition. The Journal of clinical investigation. 119, 1420-1428 (2009).
  6. Forino, M., et al. TGFbeta1 induces epithelial-mesenchymal transition, but not myofibroblast transdifferentiation of human kidney tubular epithelial cells in primary culture. International journal of experimental pathology. 87, 197-208 (2006).
  7. Yang, S., et al. Participation of miR-200 in pulmonary fibrosis. The American journal of pathology. 180, 484-493 (2012).
  8. Reynolds, H. Y. Lung inflammation and fibrosis: an alveolar macrophage-centered perspective from the 1970s to 1980s. American journal of respiratory and critical care medicine. 171, 98-102 (2005).
  9. Camara, J., Jarai, G. Epithelial-mesenchymal transition in primary human bronchial epithelial cells is Smad-dependent and enhanced by fibronectin and TNF-alpha. Fibrogenesis & tissue repair. 3, 2(2010).
  10. Kamitani, S., et al. Simultaneous stimulation with TGF-beta1 and TNF-alpha induces epithelial mesenchymal transition in bronchial epithelial cells. International archives of allergy and immunology. 155, 119-128 (2011).
  11. Mikami, Y., et al. Lymphotoxin beta receptor signaling induces IL-8 production in human bronchial epithelial cells. PloS one. 9, e114791(2014).
  12. Yamauchi, Y., et al. Tumor necrosis factor-alpha enhances both epithelial-mesenchymal transition and cell contraction induced in A549 human alveolar epithelial cells by transforming growth factor-beta1. Experimental lung research. 36, 12-24 (2010).
  13. Grinnell, F. Fibroblasts, myofibroblasts, and wound contraction. The Journal of cell biology. 124, 401-404 (1994).
  14. Ramos, C., et al. FGF-1 reverts epithelial-mesenchymal transition induced by TGF-{beta}1 through MAPK/ERK kinase pathway . American journal of physiology. Lung cellular and molecular physiology. 299, L222-L231 (2010).
  15. Ren, Z. X., Yu, H. B., Li, J. S., Shen, J. L., Du, W. S. Suitable parameter choice on quantitative morphology of A549 cell in epithelial-mesenchymal transition. Bioscience reports. 35, (2015).
  16. Brinkmann, V., Kinzel, B., Kristofic, C. TCR-independent activation of human CD4+ 45RO- T cells by anti-CD28 plus IL-2: Induction of clonal expansion and priming for a Th2 phenotype. Journal of immunology. 156, 4100-4106 (1996).
  17. Krug, M. S., Berger, S. L. First-strand cDNA synthesis primed with oligo(dT). Methods in enzymology. 152, 316-325 (1987).
  18. Morozumi, M., et al. Simultaneous detection of pathogens in clinical samples from patients with community-acquired pneumonia by real-time PCR with pathogen-specific molecular beacon probes. Journal of clinical microbiology. 44, 1440-1446 (2006).
  19. Smith, P. K., et al. Measurement of protein using bicinchoninic acid. Analytical biochemistry. 150, 76-85 (1985).
  20. Wiechelman, K. J., Braun, R. D., Fitzpatrick, J. D. Investigation of the bicinchoninic acid protein assay: identification of the groups responsible for color formation. Analytical biochemistry. 175, 231-237 (1988).
  21. Ursitti, J. A., Mozdzanowski, J., Speicher, D. W., et al. Electroblotting from polyacrylamide gels. Current protocols in protein science. Chapter 10, Unit 10.7(2001).
  22. Kricka, L. J., Voyta, J. C., Bronstein, I. Chemiluminescent methods for detecting and quantitating enzyme activity. Methods in enzymology. 305, 370-390 (2000).
  23. Noguchi, S., et al. An integrative analysis of the tumorigenic role of TAZ in human non-small cell lung cancer. Clinical cancer research : an official journal of the American Association for Cancer Research. 20, 4660-4672 (2014).
  24. Kasai, H., Allen, J. T., Mason, R. M., Kamimura, T., Zhang, Z. TGF-beta1 induces human alveolar epithelial to mesenchymal cell transition (EMT). Respiratory research. 6, 56(2005).
  25. Chen, X., et al. Integrin-mediated type II TGF-beta receptor tyrosine dephosphorylation controls SMAD-dependent profibrotic signaling. The Journal of clinical investigation. 124, 3295-3310 (2014).
  26. Saito, A., et al. An integrated expression profiling reveals target genes of TGF-beta and TNF-alpha possibly mediated by microRNAs in lung cancer cells. PloS one. 8, e56587(2013).
  27. Dvashi, Z., et al. Protein phosphatase magnesium dependent 1A governs the wound healing-inflammation-angiogenesis cross talk on injury. The American journal of pathology. 184, 2936-2950 (2014).
  28. Hallgren, O., et al. Enhanced ROCK1 dependent contractility in fibroblast from chronic obstructive pulmonary disease patients. Journal of translational medicine. 10, 171(2012).
  29. Kobayashi, T., et al. Matrix metalloproteinase-9 activates TGF-beta and stimulates fibroblast contraction of collagen gels. American journal of physiology. Lung cellular and molecular physiology. 306, L1006-L1015 (2014).
  30. Horie, M., et al. Histamine induces human lung fibroblast-mediated collagen gel contraction via histamine H1 receptor. Experimental lung research. 40, 222-236 (2014).
  31. Kohyama, T., et al. PGD(2) modulates fibroblast-mediated native collagen gel contraction. American journal of respiratory cell and molecular biology. 27, 375-381 (2002).
  32. Muir, A. B., et al. Esophageal epithelial cells acquire functional characteristics of activated myofibroblasts after undergoing an epithelial to mesenchymal transition. Experimental cell research. 330, 102-110 (2015).
  33. Zhong, Q., et al. Role of endoplasmic reticulum stress in epithelial-mesenchymal transition of alveolar epithelial cells: effects of misfolded surfactant protein. American journal of respiratory cell and molecular biology. 45, 498-509 (2011).
  34. Liu, X. Inflammatory cytokines augments TGF-beta1-induced epithelial-mesenchymal transition in A549 cells by up-regulating TbetaR-I. Cell motility and the cytoskeleton. 65, 935-944 (2008).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

TGF Beta 1TNF AlphaA549Western Blot
פיתוח של
צור קשר
המלצה לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

2026 © זכויות יוצרים MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.