הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

קביעת Biofilm ייזום על תאים נגועים בנגיף על ידי חיידקים ופטריות

9.3K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/54162

⸱

6 ביולי 2016

 ,  ,  , 
1Department of Microbiology and Immunology, Midwestern University

במאמר זה

סיכום

שיטה מתוארת כאן לקביעת אסוציאציה ותחרות בין-ממלכה (חיידקים ופטריות) על היצמדות לחד-שכבות של תאי HeLa נגועים בנגיף. ניתן להרחיב פרוטוקול זה למספר שילובים של פרוקריוטים, איקריוטים ווירוסים.

תקציר

המחקר של אינטראקציות polymicrobial ברחבי הממלכות טקסונומיות הכוללים פטריות, חיידקים ווירוסים לא נבדקו בעבר ביחס כיצד חברי ויראלי של Microbiome להשפיע אינטראקציות חיידק לאחר מכן עם תאים המארח הנגועים בנגיף אלה. השיתוף למגורים של וירוס עם חיידקים ופטריות קיימים בעיקר על המשטחים הריריים של חלל הפה בדרכי מין. תאים ריריים, במיוחד אלה עם זיהומים נגיפיים סמויים כרוניים או מתמשכים מתמשכים, עשויים להיות השפעה משמעותית על חברי Microbiome בעקבות שינויים במבנה נגיף מספר וסוג קולטנים לידי ביטוי. שינוי בארכיטקטורת קרום תא מארח יביא יכולת שינתה החברים הבאים של הפלורה הנורמלי פתוגנים אופורטוניסטים ליזום את הצעד הראשון ההיווצרות ביופילם, כלומר, הדבקות. מחקר זה מתאר שיטה כדי לכמת ובדיקה ויזואלית של האפקט של HSV על הייזום של biofilהיווצרות מ (דבק) של ס aureus ו- C. אלביקנס.

מבוא

Microbiome האדם כולל אורגניזמים מגוונים מממלכות טקסונומיות מרובות החולקות אזורים גיאוגרפיים בגוף. דבקות משטחי תא היא צעד חיוני ראשון היווצרות ביופילם, המהווה חלק של תהליך הקולוניזציה Microbiome. כלול Microbiome יכול להיות וירוסים שגורמים זיהומים כרוניים ומתמשכים. זיהום התא הכרוני על ידי וירוסים אלה יכול לגרום שינוי זמין קולטן משוער. 1,2 בנוסף, ערך בתא ידי פתוגנים התאיים גם יכול להשפיע נזילות הממברנה מארחת / הידרופוביות אשר בתורו עשוי לשנות מצורפת של חברי Microbiome אחרים, כוללים חיידקים ופטריות . על מנת להבין את האינטראקציה שהוא יכול להתרחש בין פתוגנים רבים אלה ושהשיתוף למקם באותה האזורים הגיאוגרפיים של המארח האנושי, עלינו להיות מסוגל ללמוד את האינטראקציה של פתוגנים המייצגים את הספקטרום של ממלכות טקסונומיות נוכחות פני השטח הריריים.

t "> The Herpesviridae הם משפחה של חיידקים הנמצאים 100% של בני אדם כמו החברות הקבועות Microbiome 3,4. בנוסף הם יכולים גם להיות לשפוך הן בהתמדה בנוכחות והיעדר תסמינים. באופן ספציפי, הרפס סימפלקס וירוס-1 ו הרפס סימפלקס וירוס-2 (HSV-1 ו- HSV-2, בהתאמה) הן חברות קבועות Microbiome ב oronasopharynx ו בדרך המין. אצל אנשי חיסון מוסמך, הן HSV-1 ו- HSV-2 הגורם gingivostomatitis, כמו גם הרפס גניטלי 5-8. באתרים אלה, HSV גורמת זיהום לטנטי המאופיין 9 ויראלי אסימפטומטית מתמשך שפיכה. כניסה של HSV לתוצאות תאי שינויים בביטוי פני nectins, סולפט heparan, רפסודות שומנים ומגשר כניסה ההרפס / נימק גידול הקולטן לגורם (HVEM / TNFr) 10-25. אלה קולטנים מייצגים משותף פוטנציאלי עבור כמה חיידקים ופטריות, למשל S. aureus ו ג אלביקנס, אשר תוך פתוגנים אופורטוניסטיים,גם יכול להיות מאוחסן כחברי Microbiome הרירית של oronasopharynx 26,27. בתוך oronasopharynx ס aureus ו- C. אלביקנס לכבוש שני לאתרים ייחודיים של קולוניזציה. בשנת מארחים עם שיניים טבעיות, רירית הפה משותפת HSV-1 ו- C. אלביקנס, בעוד nares האף הקדמי תפוס על ידי S. aureus 28. עם זאת, למרות במבחנה הממצאים ס aureus דבקה תאי אפיתל פה, 29,30 ס aureus מבודד לעתים רחוקות מן הדגימות אוראליות כאשר רקמות בריאות קיימת 29,30. מעט מאוד ידוע לגבי נישות שיתוף-קולוניזציה בדרכי מין מעבר הממצאים הקליניים שס aureus קשורה דלקת נרתיק אירובי, מאופיין בדלקת איברי מין, פרשות ו dyspareunia, בעוד ג אלביקנס מייצרת רירית נגעים דומים לזה שנצפה בחלל פי 31-35. לכן, למרות אותם חברי microbi האוראלי באברי המיןשת ממלכות טקסונומיות צלבו מעט מאוד ידוע לגבי האינטראקציה שלהם כפי שהוא משפיע יכל ליזום היווצרות ביופילם דרך דבקות אל פני שטח התא המארח 5. פרוטוקול זה יושם באופן יעיל כדי לקבוע את ההשלכות התפקודיות של שיתוף-קולוניזציה / זיהום.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

1. זני HSV וטיפול

הערה: רקומביננטי הלא מתפשטת HSV-1 (קוס) gL86 ו HSV-2 (קוס) 333gJ - עם פעילות הכתב בטא galactosidase בשימוש נמסרו על ידי V. Twiari 36,37.

  1. השתמש וירוס מרב וחנות אחת ב -80 מעלות צלזיוס ב יחס של 1: 1 של המדיום של הנשר השונה של Dulbecco (DMEM) עם 20% בסרום שור עוברי (FBS) ו חלב רזה עד שימוש. לפני האחסון הרבה ויראלי, לקבוע ריכוז הנגיף על ידי o -nitrophenyl-β-D-galactopyranoside (ONPG) ו 5-bromo-4-כלורו-3-indolyl-β-D-galactopyranoside (X-גל) assay.
  2. לקבוע כדאי וירוס ריבוי של זיהום (משרד פנים) על ידי מכתים X-גל עבור כל מחזור assay הניסיון באמצעות assay כניסת כתב וירוס, כפי שתואר לעיל (איור 1) 14.
  3. לדלל וירוס (Opt-MEM) כדי הרצוי משרד הפנים. תקן monolayers (paraformaldehyde; 0.5 מ"ל / טוב) לפני מכתים. מניחים שולטים כדאיות וירוס בתוך microti נפרדצלחת ter במקביל צלחות assay polymicrobial.

2. טיפול Cell הלה 299

  1. לגדול ב 37 מעלות צלזיוס, 5% CO 2 ב DMEM עם 4.5 g / L גלוקוז, 10% בסרום שור העובר חום מומת (FBS), גנטמיצין (50 מיקרוגרם / מ"ל) ו L- גלוטמין. תאי המעבר בנקודת המפגש 80% עם פתרון טריפסין (חומצה ethylenediaminetetraacetic, 0.53 M EDTA; 0.05% טריפסין; 5 מ"ל / בקבוק).

3. ג טיפול אלביקנס

הערה: ג אלביקנס להשיג ממקור קליני מעבדתי מאוחסן ב -80 מעלות צלזיוס Remmel חלב רזה 2x בינוני.

  1. תרבות קפואה מנייה על Sabouraud דקסטרוז הבינוני (37 מעלות צלזיוס). לאחר 24 תת hr ב- C. אלביקנס על מדיום Fungisel (37 מעלות צלזיוס; 48 שעות) לשימוש.
  2. צור צינור נבט (GT) צורות (איסוף מושבות נציג; FBS 3 מ"ל; 3 שעות, 37 ° C; Abs 600, 0.3). לאחר דגירה, לשטוף GT (HBSS; 2x; 4,000 XG). להוסיף GT כדי לרחוץ חימם HBSS (37 &# 176; C; 0.32 Abs 600). צורות GT צריכות להיות 99% של תאים נצפו כפי שנקבע על ידי ספירת hemocytometer.
  3. הפוך אמצעי שמרים (YF) השעיות המניות על ידי הרמת מושבות Fungisel נציג (HBSS, 3 מ"ל; 0.32 Abs 600). ספירת צורות YF / ml מיקרוסקופית באמצעות hemocytometer. צורות YF צריכות להיות 99% של תאים נצפו כפי שנקבע על ידי ספירת hemocytometer.
  4. להפוך את עבודת מניות פטרייתי (250 μl של GT או מניות YF ב 25 מיליליטר HBSS; 37 מעלות צלזיוס; 10 5 CFU / ml)

4. ס טיפול aureus

  1. חנות S. aureus ATCC 25,923 (-80 ° C; Remmel לרחף 2x חלב). תרבות על אגר כבשים דם (5%; 37 מעלות צלזיוס; 24 שעות). פיק מושבות נציג ולהעביר מניטול מלחים בינוני בתוך 2 ימים עבור מניות (37 מעלות צלזיוס; 18 שעות).
  2. הפוך ס aureus ההשעיה המניות (3 מ"ל HBSS; 1.32 Abs 600; 10 8 CFU / ml)
    1. להפוך את עבודת S. מניית aureus (100 μlשל המניה ב 25 מ"ל HBSS; 10 5 CFU / ml).

5. קנדידה וס השעיות aureus

  1. הפוך מעורב ג אלביקנס וס ההשעיה aureus (250 YF μl או מלאי GT ו 100 μl S. aureus המניה ב -25 מ"ל HBSS).

6. polymicrobial Assay Biofilm

  1. Seed 96 צלחות גם עם 200 μl של 2 x 10 5 תאים הלה / מ"ל (רמת מפגש 85%). רוק צלחות (30 - 45 דקות, 37 ° C) לפני הדגירה (37 ° C; 5% CO 2 באינקובטור; 18 שעות). Monolayers Wash (1x; Opt-MEM) אז הזרע עם HSV (HSV-1 (קוס) gL86 או HSV-2 (קוס) 33 GJ - ב 100 μl Opt-MEM; משרד הפנים 50 ו -10). דגירה צלחות (3 שעות, 37 ° C; 5% CO 2). השתמש רק זן ויראלי אחד ליום.
  2. לשטוף monolayers נגוע (1x; בופר פוספט (PBS) עם Mg +2 ו Ca +2; 100 μl). החלף PBS עם HBSS חם עוזב 25 & #181; l בכל טוב.
    1. להוסיף YF, GT ו / או ס aureus השעיות עובדים (100 μl; יעד יחס התא = 5: 1; n = 16). כפי שניתן לראות בטבלה 1 דגירה צלחות (סטטי; 30 דקות; 37 מעלות צלזיוס; 5% CO 2).
  3. לאחר דגירה, לשאוב עמודה אחת בכל פעם מילוי מיד עם 300 μl PBS עם Mg +2 ו Ca +2. חזור על פעולה זו פעמים ואז להוסיף למאגר תמוגה assay הרדיו-immunoprecipitation (ריפה; מסנן מעקר: 200 μl של דילול 1:50).
  4. במהירות triturate את lysate תא הלה מכן למקם 50 μl על מלחי מניטול (MS) ו / או Fungisel (F) מדיה (איור 2). מורחים את lysate באמצעות מכופף מוט הזכוכית בזווית של 90 מעלות. דגירת הצלחות (18 שעות ב 37 מעלות צלזיוס). באופן ידני לספור את מספר מושבות בכל צלחת. בקרה מורכבת ס aureus ו / או C. דבקות אלביקנס לתאים הלה-נגוע HSV.

7. בדיקות הדמיה

  1. לשטוף כל coverslip זכוכית עגול (12 מ"מ; 50 מיליליטר אצטון בכוס 100 מיליליטר). יבש לעקר coverslips (Kimwipes; בצלחות פטרי זכוכית). מניח coverslips סטרילי היבש לתוך הבארות של צלחות גם 24 סטרילי עם מלקחיים מעוקרים להבת אלכוהול.
  2. הוספת תאי הלה (1 מיליליטר; נפח 5x המשמש 96 צלחות גם) על הבארות של 24 צלחות היטב המכילות את coverslips הזכוכית העגול סטרילי השטף. מוסיפים את וירוס, חיידקים ופטריות בהתאם לתבנית (טבלה 2) בשעה 5x נפח המשמש 96 צלחות היטב, ואז דגירה תהליך כמתואר בשלבים 6.2.1 ל -6.4 לעיל.
  3. לאחר שטיפה של דבר, לתקן את התאים במיקרוסקופ על ידי הצפת שקופיות עם מתנול, ולתת לו להתאדות. אחסן את הצלחות ב RT עד מכתים.
  4. עבור מיקרוסקופ שדה הבהיר (1,000x הגדלה מקורית סופית) למלא את הבארות המכילות coverslips קבוע מתנול עם מים ללא יונים. מיד לשאוב מים. כיסוי כל coverslip עם סגול קריסטל גרם. לשטוף coverslips ללא כתם שאינו כבול (מים ללא יונים). Coverslips יבש באתרם ואז לדבוק בהם עם סט קשה הרכבה בינונית לשקופית שכותרתו (איור 3).
  5. עבור מיקרוסקופ פלואורסצנטי (אובייקטיבי 100x; 1,000x מקורי הגדלה סופית) לשטוף coverslips ללא מתנול בעצם כמתואר בשלב 7.4. יבש coverslips בבארות.
    1. לאחר ייבוש, להסיר את מכסה מחליק ומניחים אותם בשקופיות שכותרתו. לאחר מכן להוסיף כמות מספקת של 1:20 דילול של isothiocyanate והעמסת (FITC) מצומדות וירוס הרפס סימפלקס סוג 1 + 2 נוגדן GD כדי לכסות את coverslip (1 - 5 μl).
    2. דגירת השקופיות בתא לחות על 37 מעלות צלזיוס למשך 30 דקות. לאחר דגירה, לשטוף את coverslips ב 4 שינויים של PBS.
    3. לאחר שטיפה של דבר, להחזיר את coverslip לשקופית שכותרתו. הכתם עם 4 ', 6-diamidino-2-phenylindole (DAPI; קאמרית לחות; 37 מעלות צלזיוס למשך 30 דקות). לאחר דגירה לשטוף את coverslips ב 4 צ'אןGES של PBS, ואז להדביק לשקופית שכותרתו עם הרכבה בינונית סט קשה.
    4. אפשר הרכבה בינונית לרפא למשך 24 שעות ב RT בחושך. בדוק את coverslips תחת המטרה שמן משני מיקרוסקופ שדה בהיר או מיקרוסקופ פלואורסצנטי עם מסנני הפסקת FITC ו DAPI. בדוק תמונות של 50 שדות לפחות (100 תאים לכל מינימום אורגניזם) עבור שיתוף לוקליזציה (איור 4).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

רמת החוסן של נתוני השגה מהמערכת המתוארות בדוח זה מוצגת af איור 2 38. באמצעות השימוש במערכת זו האפנון של אינטראקצית staphylococcal ופטריות עם תאים נגועים בנגיף והשפיע על כל הדבקות של אחרים יכול להיות תחום. סוגים של מחקרים אלה דורשים בדיקה מיקרוסקופית של האינטראקציה כפי שמוצגים איורים 3 ו -4 38 על מנת לקבוע אם אינטראקצית polymicrobial מתרחשת על אותם תאים. במחקר זה אינטראקציה תא ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

כרגע אין מידע נגיש יחסי הגומלין המורכבים שבין קבע לחברי חצי קבוע של Microbiome מארח החוצות תחומים טקסונומיות מרובות, כלומר, פרוקריוטים, האיקריוטים ויראלי. לכן פיתחנו רומן במערכת מודל במבחנה ללמוד ייזום ביופילם על ידי ש aureus ו- C. אלביקנס על HSV-1 או HSV-2 נגוע הלה 229 (הלה) תאים 38. מערכת מודל תא הלה מציגה יתרון ייחודי. זאת בשל חוסר ביטוי פיברונקטין שטח, המשמש קולטן עבור שני ס aureus ו- C. אלביקנס...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

למחברים אין מה לחשוף.

תודות

פרויקט זה נתמך על ידי אוניברסיטת מידווסטרן, משרד המחקר והתוכניות הממומנות של אילינוי (ORSP) והמכללה לרפואת שיניים של אוניברסיטת מידווסטרן - אילינוי (CDMI).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
C.albicans
BBL Sabouraud DextroseBD211584
Fungisel AgarDot Scientific7205A
S.aureus
Mannitol מלח אגרטרוי ביולוגי7143B
אגר דם כבשיםTroy Biologicals221239
<תאי הלה חזקים>
1x DMEM (מדיום הנשר המותאם של Dubelcco, עם 4.5 גרם/ליטר גלוקוז ו-L-גלוטמין, ללא נתרן פירובטקורנינג10-017-CM
גנטמיצין 50 מ"ג/מ"לסיגמא139750 ומיקרו; ריכוז סופי של גרם/מ"ל בתמיסה השלמה DMEM
Trypsin EDTA (0.05% טריפסין, 0.53 M EDTA) 1xCorning25-052-CI
Fetal Bovine SerumAtlanta BiologicalsS1115010% ריכוז סופי במדיום המלא DMEM
Other וריאגנטים
ONPGThermo Scientific34055
Ultra-Pure X galInvitrogen15520-018
1x HBSS (תמיסת מלח מאוזנת של הנקס)קורנינג20-021-CV
1x PBSDot Scientific30042-500
RIPA LysisLife Technologies89901
Staining
MethanolFisher ScientificA433P-4
HSV 1& 2, ספציפי עבור gDViroStat196
DAPISIGMAD8417-5MG
גרם קריסטל סגולטרויה ביולוגי212527
<חזק>אספקה
צלחת פטרי 100 x 15נקודות מדעי229693 
צלחת פטרי 150 x 15Kord Valmark2902
צלחות 96 בארותEvergreen Scientific222-8030-01F
צלחות 24 בארותEvergreen Scientific222-8044-01F
צינורות תרבית 100 x 13Thomas Scientific9187L61
עיגולי החלקה לכיסוי, 12 מ"מדקלייזרCB00120RA1

מקורות

  1. Palu, G., et al. Effects of herpes-simplex virus type-1 infection on the plasma-membrane and related functions of HeLa S3 cells. J Gen Virol. 75, 3337-3344 (1994).
  2. Vitiello, G., et al. Lipid composition modulates the interaction of peptides deriving from herpes simplex virus type I glycoproteins B and H with biomembranes. Biochim. Biophys. Acta-Biomembr. 1808, 2517-2526 (2011).
  3. Bradley, H., Markowitz, L. E., Gibson, T., McQuillan, G. M. Seroprevalence of Herpes Simplex Virus Types 1 and 2-United States, 1999-2010. J. Infect. Dis. 209, 325-333 (2014).
  4. Szpara, M. L., et al. Evolution and diversity in Human Herpes Simplex Virus genomes. J Virol. 88, 1209-1227 (2014).
  5. Arduino, P. G., Porter, S. R. Herpes Simplex Virus Type I infection: overview on relevant clinico-pathological features. J Oral Pathol Med. 37, 107-121 (2008).
  6. Looker, K. J., Garnett, G. P. A systematic review of the epidemiology and interaction of herpes simplex virus types 1 and 2. Sex. Transm. Infect. 81, 103-107 (2005).
  7. Taylor, T. J., Brockman, M. A., McNamee, E. E., Knipe, D. M. Herpes simplex virus. Front Biosci. 7, 752-764 (2002).
  8. Bernstein, D. I., et al. Epidemiology, clinical presentation, and antibody response to primary infection with Herpes Simplex Virus Type 1 and Type 2 in young women. Clinical infectious diseases : an official publication of the Infectious Diseases Society of America. 56, 344-351 (2013).
  9. Sacks, S. L., et al. HSV shedding. Antiviral Res. 63, 19-26 (2004).
  10. Brandhorst, T. T., et al. Structure and Function of a Fungal Adhesin that Binds Heparin and Mimics Thrombospondin-1 by Blocking T Cell Activation and Effector Function. PLoS Pathog. 9, (2013).
  11. Green, J. V., et al. Heparin-Binding Motifs and Biofilm Formation by Candida albicans. Journal of Infectious Diseases. 208, 1695-1704 (2013).
  12. Khalil, M. A., Sonbol, F. I. Investigation of biofilm formation on contact eye lenses caused by methicillin resistant Staphylococcus aureus. Niger. J. Clin. Pract. 17, 776-784 (2014).
  13. Shanks, R. M. Q., et al. Heparin stimulates Staphylococcus aureus biofilm formation. Infection and Immunity. 73, 4596-4606 (2005).
  14. Tiwari, V., et al. Role for 3-O-sulfated heparan sulfate as the receptor for herpes simplex virus type 1 entry into primary human corneal fibroblasts. J Virol. 80, 8970-8980 (2006).
  15. Delboy, M. G., Patterson, J. L., Hollander, A. M., Nicola, A. V. Nectin-2-mediated entry of a syncytial strain of herpes simplex virus via pH-independent fusion with the plasma membrane of Chinese hamster ovary cells. Virol J. 3, (2006).
  16. Di Giovine, P., et al. Structure of Herpes Simplex Virus Glycoprotein D Bound to the Human Receptor Nectin-1. PLoS Pathog. 7, (2011).
  17. Hauck, C. R. Cell adhesion receptors - signaling capacity and exploitation by bacterial pathogens. Medical Microbiology and Immunology. 191, 55-62 (2002).
  18. Kramko, N., et al. Early Staphylococcus aureus-induced changes in endothelial barrier function are strain-specific and unrelated to bacterial translocation. Int. J. Med. Microbiol. 303, 635-644 (2013).
  19. Roy, S., Nasser, S., Yee, M., Graves, D. T., Roy, S. A long-term siRNA strategy regulates fibronectin overexpression and improves vascular lesions in retinas of diabetic rats. Molecular vision. 17, 3166-3174 (2011).
  20. Sato, R., et al. Impaired cell adhesion, apoptosis, and signaling in WASP gene-disrupted Nalm-6 pre-B cells and recovery of cell adhesion using a transducible form of WASp. Int. J. Hematol. 95, 299-310 (2012).
  21. Shukla, S. Y., Singh, Y. K., Shukla, D. Role of Nectin-1, HVEM, and PILR-alpha in HSV-2 entry into human retinal pigment epithelial cells. Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 50, 2878-2887 (2009).
  22. Stump, J. D., Sticht, H. Mutations in herpes simplex virus gD protein affect receptor binding by different molecular mechanisms. J Molecu Model. 20, (2014).
  23. Zelano, J., Wallquist, W., Hailer, N. P., Cullheim, S. Expression of nectin-1, nectin-3, N-cadherin, and NCAM in spinal motoneurons after sciatic nerve transection. Experimental Neurology. 201, http://dx.doi.org/10.1016/j.expneurol.2006.04.026 461-469 (2006).
  24. Akhtar, J., et al. HVEM and nectin-1 are the major mediators of herpes simplex virus 1 (HSV-1) entry into human conjunctival epithelium. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 49, 4026-4035 (2008).
  25. Heo, S. K., et al. LIGHT enhances the bactericidal activity of human monocytes and neutrophils via HVEM. J. Leukoc. Biol. 79, 330-338 (2006).
  26. National Nosocomial Infections Surveillance (NNIS) System Report. Am J Infect Control. 32, 470-485 (2004).
  27. Wisplinghoff, H., et al. Nosocomial bloodstream infections in US hospitals: analysis of 24,179 cases from a prospective nationwide surveillance study. Clinical infectious diseases : an official publication of the Infectious Diseases Society of America. 39, 1093-1093 (2004).
  28. Colacite, J., et al. Pathogenic potential of Staphylococcus aureus strains isolated from various origins. Ann. Microbiol. 61, 639-647 (2011).
  29. Colombo, A. V., et al. Quantitative detection of Staphylococcus aureus, Enterococcus faecalis and Pseudomonas aeruginosa in human oral epithelial cells from subjects with periodontitis and periodontal health. J. Med. Microbiol. 62, 1592-1600 (2013).
  30. Merghni, A., Ben Nejma, M., Hentati, H., Mahjoub, A., Mastouri, M. Adhesive properties and extracellular enzymatic activity of Staphylococcus aureus strains isolated from oral cavity. Microb Pathogen. 73, 7-12 (2014).
  31. Donders, G. G. G., et al. Definition of a type of abnormal vaginal flora that is distinct from bacterial vaginosis: aerobic vaginitis. Bjog. 109, 34-43 (2002).
  32. Li, J. R., McCormick, J., Bocking, A., Reid, G. Importance of vaginal microbes in reproductive health. Repro Sci. 19, 235-242 (2012).
  33. Jarvis, W. R. The epidemiology of colonization. Infect Cont Hosp Epidemiol. 17, 47-52 (1996).
  34. Okonofua, F. E., Akonai, K. A., Dighitoghi, M. D. Lower genital-tract infections in infertile nigerian women compared with controls. Genitourin Med. 71, 163-168 (1995).
  35. Nenoff, P., et al. Mycology - an update Part 2: Dermatomycoses: Clinical picture and diagnostics. J Der Deutschen Dermatol Gesellschaft. 12, 749-779 (2014).
  36. Hubbard, S., et al. Contortrostatin, a homodimeric disintegrin isolated from snake venom inhibits herpes simplex virus entry and cell fusion. Antivir. Ther. 17, 1319-1326 (2012).
  37. Shukla, S. Y., Singh, Y. K., Shukla, D. Role of Nectin-1, HVEM, and PILR-α in HSV-2 entry into human retinal pigment epithelial cells. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 50, 2878-2887 (2009).
  38. Plotkin, B. J., Sigar, I. M., Tiwari, V., Halkyard, S. Herpes simplex virus (HSV) modulation of Staphylococcus aureus. and Candida albicans.initiation of HeLa 299 cell-associated biofilm. Curr Microbiol. , (2016).
  39. Alva-Murillo, N., Lopez-Meza, J. E., Ochoa-Zarzosa, A. Nonprofessional phagocytic cell receptors involved in Staphylococcus aureus internalization. Biomed Res Internat. , (2014).
  40. Calderone, R. A., Scheld, W. M. Role of fibronectin in the pathogenesis of candidal infections. Reviews of infectious diseases. 9, Suppl 4 400-403 (1987).
  41. Fowler, T., et al. Cellular invasion by Staphylococcus aureus involves a fibronectin bridge between the bacterial fibronectin-binding MSCRAMMs and host cell beta1 integrins. European journal of cell biology. 79, 672-679 (2000).
  42. Mao, L., Franke, J. Symbiosis, dysbiosis, and rebiosis-The value of metaproteomics in human microbiome monitoring. Proteomics. 15, 1142-1151 (2015).
  43. Christopher, R. A., Kowalczyk, A. P., McKeown-Longo, P. J. Localization of fibronectin matrix assembly sites on fibroblasts and endothelial cells. J Cell Sci. 110, (Pt 5) 569-581 (1997).
  44. Heino, J., Kapyla, J. Cellular receptors of extracellular matrix molecules. Current Pharm Des. 15, 1309-1317 (2009).
  45. Hynes, R. O., et al. A large glycoprotein lost from the surfaces of transformed cells. Annals of the New York Academy of Sciences. 312, 317-342 (1978).
  46. Mao, Y., Schwarzbauer, J. E. Fibronectin fibrillogenesis, a cell-mediated matrix assembly process. Matrix biology : journal of the International Society for Matrix Biology. 24, http://dx.doi.org/10.1016/j.matbio.2005.06.008 389-399 (2005).
  47. Schwarzbauer, J. E., DeSimone, D. W. Fibronectins, their fibrillogenesis, and in vivo functions. Cold Spring Harbor perspectives in biology. 3, (2011).
  48. Abdelmegeed, E., Shaaban, M. I. Cydooxygenase inhibitors reduce biofilm formation and yeast-hypha conversion of fluconazole resistant Candida albicans. J. Microbiol. 51, 598-604 (2013).
  49. Gow, N. A. Germ tube growth of Candida albicans. Current topics in medical mycology. 8, 43-55 (1997).
  50. Liu, Y. P., Filler, S. G. Candida albicans Als3, a multifunctional adhesin and invasin. Eukaryot. Cell. 10, 168-173 (2011).
  51. Lu, Y., Su, C., Liu, H. Candida albicans hyphal initiation and elongation. Trends Microbiol. 22, 707-714 (2014).
  52. Kabir, M. A., Hussain, M. A., Ahmad, Z. Candida albicans: A model organism for studying fungal pathogens. ISRN microbiology. 2012, 538694(2012).
  53. Ovchinnikova, E. S., Krom, B. P., Busscher, H. J., van der Mei, H. C. Evaluation of adhesion forces of Staphylococcus aureus along the length of Candida albicans hyphae. BMC Microbiol. 12, (2012).
  54. Peters, B. M., et al. Staphylococcus aureus adherence to Candida albicans hyphae is mediated by the hyphal adhesin Als3p. Microbiology-Sgm. 158, 2975-2986 (2012).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

היצמדות חיידקיתהיצמדות פטרייתיתזיהום HSVStaphylococcus aureusCandida albicansתאי HeLaבדיקה פולימיקרובייאליתצביעת קריסטל ויולט
קביעת Biofilm ייזום על תאים נגועים בנגיף על ידי חיידקים ופטריות
צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.