הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

מדידות מרחבים של זלוף, לחצו נוזלי ביניים ו ליפוזומים צבירה בגידולים מוצקים

7.3K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/54226

⸱

18 באוגוסט 2016

 ,  ,  ,  , 
1Department of Medical Biophysics, University of Toronto, 2Leslie Dan Faculty of Pharmacy, University of Toronto, 3STTARR Innovation Centre, Princess Margaret Cancer Centre, 4Institute of Biomaterials and Biomedical Engineering, University of Toronto, 5Techna Institute, University Health Network, 6Radiation Medicine Program, Princess Margaret Cancer Centre

במאמר זה

סיכום

הצטברות תוך-גידולית הטרוגנית של ליפוזומים נקשרה למיקרו-סביבה לא תקינה של הגידול. כאן מוצגות שיטות למדידת מיקרו-סירקולציה של הגידול על ידי הדמיית זלוף ולחץ נוזל אינטרסטיציאלי מוגבר (IFP) באמצעות מערכת רובוטית מונחית תמונה. המדידות מושווים להצטברות תוך-גידולית של ליפוזומים, הנקבעת באמצעות הדמיית מיקרו-CT נפחית.

תקציר

הצטברות תוך tumoral הטרוגנית של ליפוזומים היא קובע קריטי של יעילותם. הן מייקרו הגידול כאוטי מוגבה IFP צמודות הפצת תוך tumoral הטרוגנית של מערכות אספקת סמים המבוסס על ננוטכנולוגיה כגון ליפוזומים. במחקר הנוכחי, הקשר בין מיקרו הגידול, IFP גבוהות, וצבירת חלקיקים נחקר באמצעות ניסויים vivo. דבר זה הושג על ידי הערכה של מיקרו הגידול באמצעות ניגודיות דינמי משופר טומוגרפיה ממוחשבת (DCE-CT) ומדידה של IFP הגידול באמצעות מערכת מיקום המחט רובוטית הרומן מונחי תמונה מחובר לסורק מיקרו-CT. הצטברות התוך tumoral של ליפוזומים נקבעה על ידי CT מבוסס תמונת הערכת ניסוח liposomal nanoparticle ביציבות לתמצת את iohexol חומר ניגוד (CT-ליפוזומים). הדמיית CT אפשרה שיתוף לוקליזציה של הפריסה המרחבית שלופרמטרים המודינמיים הגידול, IFP וצבירת CT-ליפוזום במודל העכבר xenograft תת עורית בודדים של סרטן השד. מדידות הובילו לגילוי כי זלוף שברי נפח פלזמה הם מתווכים חזקים של התפלגות התוך tumoral של ליפוזומים. יתר על כן, תוצאות המחקר מצביע בבירור IFP ממלא תפקיד עקיף בתיווך הפצת liposome באמצעות ויסות זרימת דם.

מבוא

מדידת הצטברות תוך tumoral של מערכות אספקת סמי ננו-חלקיקים עשויה לספק כלי חשוב כדי לקבוע אם ריכוז נאות של תרופה ציטוטוקסיות הושג בתוך הגידול. הפיתוח "שניתן להגדיר תמונה" מערכות liposomal מאפשר פולשני כמותית איתור vivo של רכב משלוח סמים באמצעות שיטות הדמיה כגון טומוגרפיית פליטת פוזיטרונים (PET) 1, אופטית קרינה 2, ו טומוגרפיה ממוחשבת (CT) 3, 4 ו דימות בתהודה מגנטית (MRI) 5. הדמיה נעשה שימוש כדי לקבוע את פרמקוקינטיקה biodistribution של מערכות שיגור ליפוזום וכדי לחשוף את היקף ההטרוגניות בין סובייקט התוך tumoral בצבירת nanoparticle 6,7. עם זאת, הדמיה של חלקיקים לבדה אינה לזהות את החסמים הביולוגיים שתרמו ההצטברות וההפצה המסכנות שלהם. ידע זה הוא בעל חשיבות עליונה אל rפיתוח ational של ניסוחים יעילים יותר, ואסטרטגיות לשיפור הצטברות תוך tumoral 8. הוכח כי אסטרטגיות טיפוליות ניתן ליישם לווסת מחסומים ביולוגיים ספציפיים וכתוצאה מכך התחבורה nanoparticle משופרת 9. בנוסף, ניסוחי nanoparticle פותחו כדי להתגבר על מחסום תחבורה ביולוגי ספציפי במיוחד 10. בשני התרחישים, מדידות של מחסומים ביולוגיים יכולות לשמש כדי להנחות את שימוש אסטרטגית משלוח סמי ננו-חלקיקים מתאימה.

מייקרו גידול הגבוה IFP הם האמינו להיות שני גורמי מפתח של הצטברות תוך tumoral של חלקיקים, כגון ליפוזומים, בגידולים מוצקים 9,11. עם זאת, חסמים אחרים לתרום הצטברות ליפוזום עניה כוללים תאי מטריקס צפופה, כלי דם בלתי חדירים, ולחץ רקמה מוצק 12. חסמים אלה קשורים על זמני spatioבאופן, עם זרימת דם לא תקינה ובלחץ נוזל ביניים גבוה להיות שני גורמים חשובים נהיגת המסירה extravasation הראשונית של חלקיקים. כפי שנאמר קודם לכן, הקמת מערכת היחסים בין מייקרו הגידול, IFP הגבוהה, ואת הצטברות תוך tumoral של ליפוזומים הכרחי עבור פרשנות נכונה של נתוני הדמית liposome. בזאת שיטות כמותיות למדוד את הקשר בין מיקרו הגידול, IFP גבוהות, וצבירת ננו-חלקיקים בתוך גידולים מוצקים מוצגים. מטרה זו מושגת על ידי ביצוע מדידות-מקומי שיתוף של הפצה התוך tumoral של חומר ניגוד ליפוזום CT באמצעות הדמיית CT נפחית, מיקרו הגידול באמצעות ניגודיות דינמי משופר הדמיה טומוגרפיה ממוחשבת, ו IFP הגידול באמצעות מערכת מיקום המחט רובוטית מונחי תמונה, כינה 13 רובוט CT-IFP.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

כל בניסויים vivo בוצעו תחת פרוטוקול שאושר על ידי ועדת טיפול בבעלי חיים מוסדיים אוניברסיטת בריאות ברשת ושימוש.

1. במודל חיה

  1. תרבות בין 5 עד 7 x 10 6 מד"א- MB-231 תאים סרטניים בשד אדנוקרצינומה ב DMEM יחד עם 10% עוברית שור סרום (FBS) ו 100x דילול של סטרפטומיצין פניצילין.
  2. קציר תאים כאשר הם ומחוברים 80% באמצעות פתרון 0.05% טריפסין- EDTA. לאחר 3-5 דקות לנטרל טריפסין-EDTA עם נפח 3x של DMEM. קחו aliquot 15 μl של תאים לספור באמצעות hemocytometer. צנטריפוגה תאים לתוך גלולה במשך 5 דקות ב 200 XG, מחדש להשעות ב HBS בריכוז של 10 x 10 6 תאים לכל מיליליטר.
  3. תת עורית שתל (SC) גידולים על ידי הזרקת 1 עד 2 x 10 6 תאים הגפיים האחוריות של כל עכבר SCID נקבה בת 8 עד 12 בשבוע (n = 5). שימוש במחט 25 G תקן להזרקה.
  4. t צגumor מחוגה באמצעות צמיחה (נפח = 0.5 x אורך X רוחב 2) ולהתחיל את המדידות פעם הגידולים SC הגיעו נפח> 200 מ"מ 3 (כ 7 עד 9 ימים).

הכנת CT-ליפוזום 2. אפיון

  1. הכנת liposome
    1. ממיסים ומרכיבים שומניים (200 mmol / L) עבור ליפוזומים CT-, כולל 1,2-dipalmitoyl-SN-glycero-3-phosphocholine (DPPC), כולסטרול (CH), ו 1,2-distearoyl-SN-glycero-3 -phosphoethanolamine-N-פולי (אתילן גליקול) 2000 (DSPE-PEG2000) באתנול נטול מים ב 70 מעלות צלזיוס ביחס טוחנת של 55: 40: 5 DPPC: CH: DSPE-PEG2000.
    2. להתאדות אתנול על ידי שמירה על חום 70 מעלות צלזיוס, ולאחר מכן להוסיף את iohexol חומר ניגוד CT (300 מ"ג / מ"ל ​​של יוד) לפתרון כזה כי ריכוז השומנים הסופי הוא 100 מ"מ.
    3. לשמור על הפתרון על 70 מעלות צלזיוס למשך 4 שעות עם vortexing התכוף.
    4. כדי לקבל שלפוחית ​​unilamellar, extrude המדגם 5 times דרך שני מוערמים 200 ממברנות גודל הנקבוביות ננומטר בלחץ של 250 psi ו extrude שוב ב -5 מחזורים באמצעות שתי ממברנות גודל הנקבוביות מוערמים 80 ננומטר ב 400 psi באמצעות מכבש השומנים 10 מ"ל. פיפטה בנפח של 10 מ"ל של ליפוזומים לתוך מכבש בתחילת כל מחזור שחול ולאסוף לתוך בקבוקון צינור או זכוכית חרוטי סטרילית לאחר כל מחזור שחול.
    5. הסר את iohexol un-כמוס על ידי 16 שעות של דיאליזה באמצעות משקל מולקולרי 100 kDa מנותק שקית דיאליזה (MWC) כנגד עודף נפח 250 של פי 0.02 מ"מ תמיסת מלח HEPES שנאגר (HBS, pH 7.4). לדוגמה, מקום 1 מ"ל של תמיסת ליפוזום בתוך שקית דיאליזה עם 250 מ"ל של HBS מחוץ שקית בכוס.
    6. לרכז את-ליפוזומים CT באמצעות 750,000 מערכת זרימת משיק מסחרי MWC nomical פי הוראות היצרן. תתרכז לריכוז יוד הסופי של כ 55 מ"ג מ"ל -1.
  2. אפיון liposome
    1. התייעלות אנקפסולציה ידי פקיעת-ליפוזומים CT באמצעות עודף נפח של פי 10 של אתנול כדי לשחרר את ioxehol ואז לדלל באמצעות עודף נפח של פי 100 של מים ללא יונים (כלומר 10 μl של ליפוזומים מקרע באמצעות 100 μl של אתנול ומהלה עד נפח של 10 מיליליטר סופי).
    2. קביעת ריכוז iohexol באמצעות ספקטרומטר UV עם זיהוי באורך גל של 245 ננומטר. חשב את היעילות encapsulations ידי נטילת כמות היחס בין סוכן iohexol שוחרר לסכום של סוכן הוסיף במהלך ההכנה.
    3. מדוד את הפוטנציאל בקוטר זטא הידרודינמית באמצעות מערכת חלקיקים בגודל Analyzer פיזור אור דינאמי על פי הוראות היצרן. לדלל את הפתרון CT-ליפוזום ידי 200x (כלומר 5 μl של liposome ב 1 מ"ל של נפח סופי) במים deionized כדי להקל מדידות.

הדמית CT 3. הגידול מיקרו ו- CT-liposomeהפצה

הערה: בצע את הוראות היצרן לביצוע סריקת נפח אם גרסה או ציוד תוכנה שונה משמשת.

  1. להרדים כל העכבר באמצעות 2% isoflurane מעורבב עם אוויר או חמצן רפואי ולאשר על ידי צובט את הבוהן והתבוננות שום תגובה. החל משחה על העיניים כדי למנוע יובש לאחר הרדמה. לשתק חית אפרקדן על ידי מקליטת כפות ללוח פלסטיק דק.
  2. מניחים קטטר מותאם אישית 27 G, מחובר 20 ס"מ על בצינור PE10, לתוך וריד הזנב לרוחב ומאובטח במקום עם כמה חתיכות של נייר.
  3. הכן מזרק 1 מ"ל כדי להכיל לפחות 200 μl של-ליפוזומים CT. הכן מזרק 1 מ"ל עם מי מלח להשתמש כדי לשטוף את הקטטר. לבסוף, להכין מזרק 1 מ"ל עם לפחות 150 μl של iohexol חינם מעורבב עם מי מלח (9: 1 יחס לפי נפח).
  4. מניחים את העכבר שרועה על המיטה סורק מיקרו-CT. השתמש מערכת מיקום לייזר למקם את tumor בערך באותה אוריינטציה עבור כל סריקה.
  5. יש להכניס את המזרק CT-ליפוזום ב משאבת מזרק ולצרף את הקטטר אל המזרק. הגדר את קצב המשאבה של 10 μl לכל שניות.
  6. לאתחל את המערכת על ידי ביצוע סריקה כיול בהיר-כהה באמצעות תוכנת קונסולת CT-סורק. בחר באפשרות הסריקה הבהירה-כהה עבור כל פרוטוקול הדמיה של עניין, בחר אור-חושך מן התפריט הנפתח ולחץ על כפתור הסריקה ליזום את הכיול.
  7. בצע מיקרו-CT אנטומי נפח של הגידול לפני כל הזרקה חומר ניגוד. תראה את מחוון תוכנת קונסולת CT סורק כדי להבטיח את שלומם CT-הסורק משתלב נוקה. ביום הסריקה בחר קונסולת סורק CT לבחור האנרגיה רנטגן של 80 קילו וולט, זרם צינור של 70 מילי-אמפר, ו לוכדת 1,000 תחזיות תמונה למעלה מ -16 שניות זמן. לחץ על לחצן הסריקה כדי להפעיל את הסריקה.
  8. השתמש משאבת מזרק כדי להזריק בולוס של CT-ליפוזומים בריכוז של 400 ק"ג יוד מ"ג-1. הגדר את המשאבה להזריק בהיקף של כ 150 μl (בהנחת עכבר 25 גרם). לחץ על הכפתור "התחל" על המשאבה להזריק. ידני לשטוף את הקטטר עם 50 μl של תמיסת מלח (פעמים בהיקף של קטטר) כדי להבטיח את כמות הסוכן כולו הוזרקה ואת קטטר ברור.
  9. חכה 10 דקות לאחר ההזרקה של CT-ליפוזומים ולאחר מכן לבצע סריקה אנטומית שנייה באותה השיטה והגדרות מתוארות 3.5.
  10. ביצוע סריקה DCE-CT ידי קביעת משאבת מזרק כדי להזריק נפח של 100 μl של iohexol חינם מעורבב עם מי מלח (9: 1 יחס לפי נפח) באמצעות הגדרת קצב הזרקה באותו המתוארים 3.3.
    1. על קונסולת CT-הסורק לבחור הסריקה הדינמית 5 דקות שמשתמשת הגדרת אנרגית רנטגן של 80 קילו וולט, אנרגית צינור של 90mA, ו לוכדת 416 תחזיות תמונה כל שניות במשך 30 השניות הראשונות ואחריו רכישה כל 10 שניות . לכידת 5 שניות של נתונים DCE-CT ולאחר מכן ללחוץ על כפתור התחל על Injectioמשאבת n.
    2. לאחר הסריקה DCE-CT לבצע סריקה מיקרו-CT אנטומי נפח.
  11. צלמו תמונות CT אנטומיים בין 48 ו -72 שעות לאחר ההזרקה של CT-ליפוזומים, תוך שימוש בהגדרות CT נפח זהה כמתואר בשלבים 3.5.
  12. משחזרים את נתוני CT ו DCE-CT אנטומי באמצעות תוכנת שחזור-GPU.
    1. טען את התמונה לתוך התוכנה לשחזור. בחר את האזור של עניין להיות משוחזר על ידי ציור את ההחזר על ההשקעה על התמונה באמצעות העכבר. הגדר את המיקום לשמור קובץ עבור צילמו משוחזר ובחר את סוג קובץ הפלט כמו '.mat'.
      הערה: התוכנה תקבע את גודל voxel משוחזר אוטומטית 0.153 x 0.153 x 0.153 מ"מ 3 עבור סריקות אנטומיים 0.153 x 0.153 x 0.462 מ"מ 3 עבור סריקות DCE-CT. לחץ על כפתור "להתחיל שיקום '.
  13. השתמש הזרקה-מראש ו -10 דקות סריקות לאחר הזרקה של liposome CT-מנת לחשב אתשבריר נפח הפלזמה כפי שתואר לעיל 3. יתר על כן, השתמש הזרקה מראש ו -5 דקות סריקות לאחר הזרקה של iohexol לחשב את החלק היחסי בנפח ביניים כפי שתואר לעיל 7.
  14. להשיג עקומות עוצמות זמן (טיקים) על ידי יבוא נתוני DCE-CT לתוך תוכנה המספקת את היכולת לזיהוי אזור של (ROI) והאינטרסים בתוך נפח הגידול. ואז לחשב את שיפור CT ממוצע ההחזר על ההשקעה כפונקציה של זמן. בניסוי זה תוכנה מותאמת אישית פותחה כדי לזהות החזר השקעה ולחשב את TIC.
  15. לקבל אומדנים כמותיים של זלוף חדירות כלי הדם על ידי התאמת טיקים נמדד באמצעות מודל קינטי נותב שני תאים. ניתן לבצע התאמה באמצעות תוכנת ניתוח DCE-CT ולהשתמש אומדני Apriori של שבר פלזמת נפח נפח שברי ביניים כפרמטרים קבועים במודל דו-תא נותב קינטית. השתמש בשיטות שדווחו בעבר כדי לקבל אומדני Apriori של plasmא 'ו-נפח שברי ביניים 14.

4. מדידות מרחבית של לחץ נוזלי גידול ביניים

  1. כדי למדוד IFP לחבר את המחט השדרה 25 G כדי מתמר הלחץ למערכת רכישת IFP דרך 50 ס"מ של צינורות פוליאתילן PE20. לרוקן את המערכת כולה עם פתרון הפרין סולפט / מלוח (1:10). לעקר את המחט עם 70% איזופרופיל לפני השימוש.
  2. הפעל את מערכת הרכישה ופתח את תוכנת רכישת IFP ולטעון את קבצי הגדרות לכייל את המערכת לרכוש מדידות IFP ב mmHg. לחץ על כפתור הרכישה לאסוף נתוני IFP ברציפות.
  3. בצע מדידות IFP בין 48 ו -72 שעות לאחר ההזרקה של CT-ליפוזומים (זו תואמת את הזמן המשוער של הצטברות השיא של ליפוזומים-CT בגידול), תוך שימוש בשיטות המתוארות 4.8. צרף את המחט IFP לרובוט CT-IFP.
  4. לבצע סריקות כיול כדי ליישר את המערכות לתאם עבוררובוט CT-IFP ואת סורק CT. מוסיפים את הקובץ המצורף סמן fiducial לרובוט CT-IFP ולבצע בדיקת CT נפח ארבע עם סמן fiducial בארבע עמדות שונות.
    1. הפעל את התוכנה בקר רובוט CT-IFP, לאתחל את הרובוט, להזיז את הרובוט לשלוש עמדות ידי הזנת x, y, עמדות מיקוד z ולחיצה על כפתור 'ללכת'.
    2. קח בדיקת CT בבית x הבאה, y, z קואורדינטות: (1) 0,0,0; (2) -10,0,0; (3) 0,7,0; ו (4) 0,0,10. בחר 90 ק, 10 מילים-אמפר, 16 סריקה שנייה באמצעות תוכנת CT-הסורק ולחץ על "התחל" כדי להפעיל את הסריקה. משחזרים את הסריקה כמתואר 3.10.
  5. הפעל את תוכנת יישור רובוט CT-IFP. לחץ על הכפתור "הוסף" נטען באזור 'נתוני רישום' ובחר ארבע סריקות הרישום המשוחזרות שהושגו 4.3, ולאחר מכן לחץ על 'פתוח'.
    הערה: המיקום פיקסל של הסמן fiducial יוזן באופן אוטומטי לתוך Softwaמִחָדָשׁ.
    1. לחצו על כפתור "Transform חישוב 'ולאחר מכן לחץ על הלחצן' החל Transform '. זה מחולל נתוני יישור אשר ישמשו כדי להמיר את רובוט CT-IFP מערכת קואורדינטות לסורק CT מערכת קואורדינטות. לאחר הכיול יושלם, לצרף את פלטפורמת בעלי החיים לרובוט CT-IFP.
  6. להרדים כל העכבר באמצעות 2% isoflurane מעורבב עם אוויר או חמצן רפואי ולאשר על ידי צובט את הבוהן והתבוננות שום תגובה. לשתק חיה על פלטפורמת רובוט CT-IFP ומקם את העכבר כזה שהגידול נגיש למערכת רובוט CT-IFP. לשתק את הגידול באמצעות קלטת כזאת שזה לא זז במהלך החדרת המחט IFP.
  7. בצעו סריקה מיקרו-CT אנטומיים לפני החדרת המחט IFP. משחזרים את נתוני CT באמצעות השלבים המתוארים 3.10.
  8. טען את נתוני CT הכניסה מראש מחט לתוך תוכנת יישור רובוט CT-IFP. התאם לחלון ברמה כדי להמחיש את הגידול. לחץ על השפת הדואר של הגידול בתמונה כלשהי, ולאחר מכן לחץ על מיקום השפה השנייה.
    הערה: התוכנה תחשב שורה של תפקידים לאורך קו ליניארי בין שתי העמדות. הערת x, y ו- z קואורדינטות עבור סדרה של 5 עד 8 עמדות מחולקות באופן שווה מהרשימה.
  9. הכן את מערכת IFP ידי שטיפת המחט עם תמיסת מלח הפרין לפני הרכבתן.
  10. הזן את עמדות מחט שנקבעה מראש הראשונות לתוך x, y, z, לתוך תוכנת שליטת רובוט CT-IFP ולחץ-המעבר כפתור 'ללכת' כדי להעביר את הרובוט אל המיקום הרצוי. לחץ על הכפתור "הכנס המחט 'להכניס את המחט לתוך הרקמה.
    1. לאחר החדרת המחט להבטיח תקשורת נוזל טובה בין מחט IFP ואת הרקמה על ידי צובט ושחרור צינורות PE20, וציין כי עליות מדידת IFP ומחזירות מראש צובטות ערך על רכישת תוכנת IFP. דחה מדידות שאינן לחזור לנקודת ההתחלה.
  11. לרכושבדיקת CT אנטומי עם המחט מוכנס, ולאחר מכן לחץ על לחצן 'לחזור בו מחט' על תוכנות שליטה רובוט CT-IFP לחזור בו את המחט מן הרקמה. לדחות כל מדידות IFP שבו ערך IFP אינו חוזר לערך הכניסה מראש המחט לאחר הנסיגה של המחט. זה מסמל את המחט עשויה כבר סתומה במהלך המדידה. חזור על שלבים 4.8 כדי 4.10 עבור כל מיקום המחט.
  12. לקבוע את מיקום המחט בתוך נפח הגידול על ידי חישוב x, y ו- z עמדות ביחס יציאת המחט אל מרכז המסה של נפח הגידול כפי שזוהו בבדיקת CT נפח שלאחר החדרת המחט.
  13. חזור חיות לכלוב שלהם אחרי כל המדידות הושלמו. אין להשאיר חיות ללא השגחה, ולדאוג לשמור אותם עד התודעה כבר חזרו והם מסוגלים לשמור שכיבה sternal.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

הפרוטוקול הנ"ל אמור להניב CT-ליפוזומים עם ריכוז במארז של iohexol, אומר קוטר liposome, ואת הפוטנציאל זטא של 55 מ"ג מ"ל -1, 91.8 ± 0.3 ננומטר -45.5 ± 2.5 mV, בהתאמה. איור 1 א כולל הדמיה DCE-CT נציג תוצאות, מניב סדרה עתית של נתוני נפח המציגים את השינויים הזמניים בצבירת תוך tumoral של iohexol. בחירת ROI בתוך הגידול מניב TIC שניתן לכמת באמצעות שיטות מידול הקינטית נותב כדי לקבל אומדנים של זלוף, חדירות כלי הדם, ש...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

השיטות למדידות מבוסס תמונה המוצגת כאן לאפשר קביעת הפריסה המרחבית של מאפייני מייקרו גידול, IFP, וצבירת CT-liposome. ניסיונות קודמים להתייחס נכסים אלה הסתמכו על ביצוע מדידות בתפזורת על פני בעלי חיים רבים נושאות גידול ולכן הם חסרים את הרגישות להבהיר מנגנוני אחראי ההטרוגניות הצטברות תוך tumoral כי נצפו נפוצה למערכות אספקת סמים בגודל ננו 15. DCE-CT מספק כלי למדידת וריאציות התוך tumoral בנכסים של מיקרו הגידול, CT נפח מספק תיאור מדויק של קינטיקה בתצהיר CT-liposome, ומערכת רובו...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

למחברים אין מה לחשוף

תודות

המחברים רוצים להודות לד"ר ג'אווד מחמוד על הסיוע בתרבית תאי MDA-MB-231 והשתלת הקסנוגרפטים MDA-MB-231, Linyu Fan על הכנת ה-CT-ליפוזומים. שון סטייפלטון אסיר תודה על המימון מתוכנית המלגות לתואר שני במדעי הטבע וההנדסה והיוזמה האסטרטגית של קרן טרי פוקס למצוינות במחקר קרינה למאה ה-21 (EIRR21) ב-CIHR. מחקר זה נתמך על ידי מענקים מתוכנית הגבולות החדשים של טרי פוקס (020005) והמכונים הקנדיים לחקר הבריאות (102569).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
MDA-MB-231 תאי גידול אדנוקרצינומה שד גרורתיים ATCCHTB-26
מדיום הנשר השונה של דולבקו (DMEM) Life Technologies11965-092
סרום בקר עוברי (FBS)Sigma-AldrichF1051
HyClone פניצילין-סטרפטומיצין 100x SolutionGE Healthcare Life SciencesSV30010
טריפסין-EDTA (0.05%), פנול אדוםThermoFisher Scientific25300-054
1,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-phosphocholine (DPPC)Avanti Lipids Inc., ארה"ב850355P
כולסטרול (CH)Avanti Lipids Inc., ארה"ב700000P
1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine-N-poly (אתילן גליקול) 2000 (DSPE-PEG2000)Avanti Lipids Inc., ארה"ב880128P
Omnipaque (Iohexol) 300 מ"ג יוד/מ"ל GE Healthcare, CA
80 ננומטר גודל נקבוביות ממברנות פוליקרבונט Track-EtchWhatman Inc., ארה"ב
200 ננומטר גודל נקבוביות ממברנות פוליקרבונט Track-EtchWhatman Inc., ארה"ב
10 מ 'Lipex Extruder Nothern Lipids Inc, CA
שקית דיאליזה חיתוך משקל מולקולרי (MWCO) של 8kDa Spectrum Labs, ארה"ב 
750,000 עמודת זרימה משיקה מחסנית אולטרה-סינון MidGee, GE Healthcare, משאבה
nbsp;Watson Marlow Inc., ארה"ב
ספקטרומטר UVHelios γ, Spectronic Unicam,  מנתח גודל חלקיקים ארה"ב
90Plus ברוקהייבן, הולטסוויל, ארה"ב
eXplore מערכת מיקרו-CT Locus Ultra GE Healthcare, קליפורניהעברה מניפולציה באמצעות תוכנת CT-Console
שחזור מבוסס GPU של AxRecon  Acceleware Corp. CA
27 G צנתר SURFLO סט עירוי מכונףTerumo Medical Products, ארה"בSV*27EL
PE20 צינורות פוליאתיליןBecton Dickinson, ארה"ב427406
קצה עט 25 גרם ופעמים; 3.5′ ופריים; מחט עמוד השדרה וויטאקר בקטון דיקינסון, ארה"ב405140מחט IFP
P23XL  מתמר לחץ מכשירי הרווארד, CAP23XL
PowerLab 4/35, מגבר גשר, עם LabChart Pro 7.0ADInstruments Pty Ltd., ארה"בPL3504, FE221IFP מערכת רכישה ותוכנת רכישה
CT-Sabre מערכת התערבות קטנה של בעלי חיים (CT-IFP רובוטParallax Innovations, CAמניפולציה באמצעות תוכנת בקרת רובוט CT-IFP
יישור רובוט מותאםאישית תוכנת Matlab
ניתוח DCE-CTתוכנת Matlab מותאמת אישית Matlab
2013bMathworks, ארה"ב
פריסטלטית CA&) תוכנת תוכנת

מקורות

  1. Seo, J. W., Zhang, H., Kukis, D. L., Meares, C. F., Ferrara, K. W. A novel method to label preformed liposomes with 64Cu for positron emission tomography (PET) imaging. Bioconjugate chemistry. 19 (12), 2577-2584 (2008).
  2. Huang, H., Dunne, M., Lo, J., Jaffray, D., Allen, C. Comparison of Computed Tomography- and Optical Image-Based Assessment of Liposome Distribution. Molecular Imaging. 12 (3), 148-160 (2013).
  3. Stapleton, S., et al. A mathematical model of the enhanced permeability and retention effect for liposome transport in solid tumors. PloS one. 8 (12), e81157(2013).
  4. Zheng, J., et al. A multimodal nano agent for image-guided cancer surgery. Biomaterials. 67, 160-168 (2015).
  5. Zheng, J., Liu, J., Dunne, M., Jaffray, D. A., Allen, C. In vivo performance of a liposomal vascular contrast agent for CT and MR-based image guidance applications. Pharmaceutical research. 24 (6), 1193-1201 (2007).
  6. Harrington, K. J., et al. Effective targeting of solid tumors in patients with locally advanced cancers by radiolabeled pegylated liposomes. Clinical Cancer Research. 7 (2), 243-254 (2001).
  7. Stapleton, S., Allen, C., Pintilie, M., Jaffray, D. A. Tumor perfusion imaging predicts the intra-tumoral accumulation of liposomes. J Control Release. 172 (1), 351-357 (2013).
  8. Lammers, T., Kiessling, F., Hennink, W. E., Storm, G. Nanotheranostics and image-guided drug delivery: current concepts and future directions. Mol. Pharm. 7, 1899-1912 (2010).
  9. Stapleton, S., Milosevic, M. F. Cancer Targeted Drug Delivery. , Springer. 241-272 (2013).
  10. Blanco, E., Shen, H., Ferrari, M. Principles of nanoparticle design for overcoming biological barriers to drug delivery. Nature biotechnology. 33 (9), 941-951 (2015).
  11. Heldin, C. H., Rubin, K., Pietras, K., Ostman, A. High interstitial fluid pressure - an obstacle in cancer therapy. Nat Rev Cancer. 4 (10), 806-813 (2004).
  12. Chauhan, V. P., Stylianopoulos, T., Boucher, Y., Jain, R. K. Delivery of molecular and nanoscale medicine to tumors: transport barriers and strategies. Annual review of chemical and biomolecular engineering. 2, 281-298 (2011).
  13. Bax, J. S., et al. 3D image-guided robotic needle positioning system for small animal interventions. Medical physics. 40 (1), 011909(2013).
  14. Stapleton, S., Milosevic, M., Tannock, I. F., Allen, C., Jaffray, D. A. The intra-tumoral relationship between microcirculation, interstitial fluid pressure and liposome accumulation. Journal of Controlled Release. 211, 163-170 (2015).
  15. Stapleton, S., Allen, C., Pintilie, M., Jaffray, D. A. Tumor perfusion imaging predicts the intra-tumoral accumulation of liposomes. J Control Release. 172 (1), 351-357 (2013).
  16. Brix, G., Zwick, S., Kiessling, F., Griebel, J. Pharmacokinetic analysis of tissue microcirculation using nested models: multimodel inference and parameter identifiability. Medical physics. 36 (7), 2923-2933 (2009).
  17. Brix, G., Griebel, J., Kiessling, F., Wenz, F. Tracer kinetic modelling of tumour angiogenesis based on dynamic contrast-enhanced CT and MRI measurements. European journal of nuclear medicine and molecular imaging. 37 (1), 30-51 (2010).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

DCE CTCTIFP
מדידות מרחבים של זלוף, לחצו נוזלי ביניים ו ליפוזומים צבירה בגידולים מוצקים
צור קשר
המלצה לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

2026 © זכויות יוצרים MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.