מאמר שיטה

שיטה חדשנית עבור chemiluminescence יצירה וההתבוננות בסביבה ביולוגית

DOI:

10.3791/54694

⸱

9 במרץ 2017

 ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Radiology, Memorial Sloan Kettering Cancer Center, 2KAUST Catalysis Center, King Abdullah University of Science and Technology, 3Department of Chemistry, Hunter College, and PhD Program in Chemistry, Graduate Center of City University of New York, 4Department of Radiology, Weill Cornell Medical College

במאמר זה

סיכום

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

פרוטוקול זה מתאר טכניקת הדמיה תוך-ניתוחית חדשה המשתמשת בקומפלקס רותניום כמקור לפליטת אור כימילומינסצנטי, ובכך מייצרת יחסי אות לרעש גבוהים במהלך הדמיה in vivo. הדמיה תוך ניתוחית היא תחום מתרחב שיכול לחולל מהפכה באופן ביצוע הליכים כירורגיים.

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

לטכניקות הדמיה תוך ניתוחיות יש פוטנציאל להפוך התערבויות כירורגיות לבטוחות ויעילות יותר; מסיבות אלה, טכניקות כאלה עוברות במהירות לחדר הניתוח. כאן, אנו מציגים גישה חדשה המשתמשת בטכניקה שטרם נחקרה להדמיה תוך ניתוחית: הדמיה כימית. שיטה זו משתמשת בכתב כימילומינסנט מבוסס רותניום יחד עם מערכת ערפוליזציה שנבנתה בהתאמה אישית להפקת תמונות ex vivo או in vivo עם יחסי אות לרעש גבוהים. המדווח מבוסס רותניום מייצר אור בעקבות חשיפה לתמיסת חמצון מימית והפחתה מחדש בתוך הרקמה שמסביב. שיטה זו אפשרה לנו לזהות ריכוזי מדווחים נמוכים עד כדי 6.9 pmol/cm2. בעבודה זו, אנו מציגים מדריך חזותי למחקרי הוכחת ההיתכנות שלנו in vivo הכוללים הזרקות תת-עוריות ותוך ורידיות בעכברים. התוצאות מצביעות על כך שטכנולוגיה זו היא מועמדת מבטיחה למחקר פרה-קליני נוסף ועשויה להפוך בסופו של דבר לכלי שימושי בחדר הניתוח.

מבוא

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

בעשורים האחרונים, טכנולוגיות הדמיה חוללו מהפכה באופן שבו רופאים לאבחן ולנטר מחלות. טכנולוגיות הדמיה אלה, עם זאת, היו מוגבלים בעיקר למערכות הדמיה הגוף כולו, כגון טומוגרפיית פליטת פוזיטרונים (PET), טומוגרפיה ממוחשבת של פליטת פוטון יחיד (SPECT), טומוגרפיה ממוחשבת (CT), תהודה מגנטית (MRI). תשומת לב מיוחדת הוקדשה סרטן, ופריצות דרך הדמיה טכנולוגית שיפרו באופן ניכר את הדרך כי מחלה זו מאובחנת ומטופלת. למרות ההתפתחויות הללו, יש מקום אחד שבו טכנולוגיות הדמיה אלה פשוט לא מתאימים: בחדר הניתוח. בעוד שיטות הדמיה הגוף יכול לעזור בתכנון כירורגי, הם בדרך כלל חסרי החלטות מרחבית גבוהה מספיק כדי לעזור לרופאים לקבוע בזמן אמת אם כל רקמת הגידול הוסר או רקמת הגידול שיורית נשאר מוסתר בשולי כירורגית 1. שים לב שאף infiltrativeשולי גידול נשארים מאחור הוא אחת המטרות כירורגי החשובות ביותר, ומנתחים חייבים ללכת על חבל בין כריתת רקמה הקפדנית וזהירה. אם יותר מדי מוסר, תופעות לוואי בלתי רצויות עבור המטופל הם החריפו; אם מעט מדי מוסר, שיעורי הישנות גדלו 2, 3. לכן, חשוב להתוות שולי גידול מדויקים, ואנו מאמינים כי הדמיה תוך ניתוחית chemiluminescent יכולה לעזור לשפר את הדיוק של זיהוי של שולי גידול על ידי עוזר למנתחים לדמיין רקמות ממאירות שיכול אחרת להישאר מבלי שיבחין בו עם טכניקות הוקמו.

ישנן טכנולוגיות הדמיה רבות נחקרות כעת עבור השירות האפשרי שלהם כמו מערכות הדמיה תוך ניתוחיות. אלה כוללים בדיקות β- ו פולט γ-קרינה 4, אופטית קרינה 5, ספקטרוסקופיית ראמאן 6 >, 7, ו Cherenkov הארה 8, 9. עד כה, עם זאת, כל אלה לא הפכו הוקם ככלים קליניים רגילים. דימות פלואורסצנטי אופטי עד כה הוכיחה להיות המבטיחים ביותר של טכניקות אלה היא אפוא בחנו ביותר. אמנם זה כבר הוכח להיות כלי רב ערך עבור יישומים רבים, זה לא בלי המגבלות. ואכן, החסרון העיקרי שלה היא קרינת הרקע שנוצרה על ידי רקמה ביולוגית מטבעו autofluorescent. אות הרקע autofluorescent זהו מוצר של עירור של הרקמה הסובבת, בנוסף fluorophore, על ידי מקור אור חיצוני הדרושים לייצור אות ניאון. מנקודת מבט מעשי, autofluorescence הללו עשויים להוביל יחסי אות לרעש נמוכים, אשר יכול להגביל את התועלת של טכנולוגיה זו בחדר הניתוח.

המנהליתרון של הדמית chemiluminescence על דימות פלואורסצנטי הוא שאף אור עירור הוא הכרחי. כתוצאה מכך, אין autofluorescence רקע. בשנת הדמית chemiluminescence, אנרגית עירור במקום מופקת כימית. תהליך זה לא מייצר אות רקע לא מכוונת ולכן יכול לגרום יחסי אות לרעש גבוהים. בסופו של דבר זה עלול לגרום זיהוי מדויק יותר ומדויק של שולים כירורגית. באופן מפתיע במקצת, את התועלת של גישה זו כטכניקת הדמיה תוך ניתוחית נותרה 10 נחקרה. ואכן, הדוגמה הקרובה ביותר בטכניקה זו הוא חמצון של לומינול ידי myeloperoxidase בעכברים 11, 12, 13. הדמית ביו Chemiluminescent לכן אזור נחקר למדי של מחקר שיכול להציע את היתרונות הבאים: (1) autofluorescence המינימאלית וכתוצאה מכך אות רקע נמוכה עם ההייאות לרעש gher יחסי; (2) באורכי גל מתכונן פליטות chemiluminescent החל גלוי קרוב אינפרא אדום; ו (3) מתחמי chemiluminescent functionalizable כי, בשילוב עם טכנולוגיות מקשרות וממוקדים ביומולקולות שכבר קיימות, לספק גישה לספריות שלמות של בדיקות הדמיה מולקולריות ממוקדות 14.

הוכחה של עיקרון זה מחקר ממחיש את התועלת הפוטנציאלית של הדמית chemiluminescent בסביבה ביו באמצעות סוכן הדמיה מבוסס רותניום. המאפיינים chemiluminescent של תרכובת זו נלמדים היטב, עם חקירות שראשיתה באמצע שנות ה -1960 15. עם ההפעלה כימית, הסוכן מפיק אור בסביבות 600 ננומטר 16, וזה גם מתאים למטרות הדמיה רפואיות. אנרגיית השפעול מסופק על ידי תגובה חיזור שמוביל מדינה-אשר נרגש יש תוחלת חיים של 650 ננו-שניות במים 17 -follחוב על ידי הדור של פוטונים על הרפיה של מדינה מתרגשת זה. באמצעות השימוש של nebulizer מרחוק ומעוצב, הצלחנו לזהות את המתחם הוא vivo לשעבר in vivo. תוצאות הניסויים הראשוניים הם מאוד מבטיח, דבר המצביע על חקירה נוספת של טכנולוגיה זו.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

הצהרת אתיקה: כל הניסויים בבעלי חי in vivo תארו בוצעו על פי פרוטוקול שאושר ותחת ההנחיות האתיות של מרכז הסרטן ממוריאל סלואן קטרינג (MSK) המוסדי הטיפול בבעלי חי ועדת שימוש (IACUC).

1. בניית תקן Nebulizing

  1. צרף עץ חלק (12.5 x 2.5 x 1.8 ס"מ 3) זקוף במרכז B חלק (12.7 x 10.7 x 1.8 ס"מ 3) באמצעות שני ברגים (4 x 25 מ"מ 2). צרף C חלק עץ (11 × 2.5 × 1.8 ס"מ 3) עד אמצע חלק (12.5 x 2.5 x 1.8 ס"מ 3) באמצעות בורג אחד, כך חלק ג (11 x 2.5 x 1.8 ס"מ 3) עדיין יכול להתרגש. ראה איור 1.
  2. מקדחה שני חורים דרך הקצה התחתון של הדק תרסיס בקבוק מרסס מיני פלסטיק 3 עוז (D) ולדחוף מוט נירוסטה (10 סנטימטרים של 1/16 "פלדה) (E) דרך ליצירת שתי לולאות, אחד משני הצד של ההדק.
  3. לעטוף את החלק התחתון של בקבוק ספריי עם סרט דביק (F) כדי למנוע קשרים כבל מלהחליק וליפול. צרף את בקבוק התרסיס ל- C עץ חלק (11 x 2.5 x 1.8 ס"מ 3) באמצעות שני קשרים כבל פלסטיק (28 ס"מ) (G).
  4. חותך את מנוע סרוו 011 (I) ולחבר אותו עם הכבלים הרופפים של שרת השליטה (H). לאחר מכן, לצרף את מנוע סרוו לחלק העליון של עץ חלק (12.5 x 2.5 x 1.8 ס"מ 3) באמצעות סרט דביק.
  5. צרף עיפרון (J) אל ידית מנוע סרוו באמצעות מהדק נייר (K). בחוזקה לחבר את החלקים החיצוניים ביותר של עיפרון לולאות מוט פלדה באמצעות חוטי טוויסט מכוסה פלסטיק (L) ולאבטח את הקצוות על העיפרון עם סרט דביק.
  6. חותכים את מחבר כבל מגנטי של יחידת הבקרה מנוע סרוו (M) ולחבר אותו לכבל הרמקול (N). לאחר מכן, תדביקו את יחידת בקרת מנוע סרוו עץ חלק ב '(12.7 x 10.7 x 1.8 ס"מ 3). חותך כבל W1 עם מחברים מגנטיים לשניים לצרף חלק אחד אל קצה החוט של ים הנחושתכבל peaker (1 מ '). חבר את המתג למתג i2 (המגנטי) וכוח p1 לכבל W1 הזמין וסוללת 9V.

קביעת רגישות 2. של השיטה

  1. בתוך צינור microcentrifuge 1.5 מ"ל, להכין פתרונות של [Ru (bpy) 3] Cl 2 במים אוסמוזה הפוכה (100 μL) בסכומים של 260 מיקרוגרם (347 nmol), 52 מיקרוגרם (69 nmol), 26 מיקרוגרם (34 nmol) , 5 מיקרוגרם (6.9 nmol), 3 מיקרוגרם (3.5 nmol), 520 ננוגרם (694 pmol), 260 ננוגרם (347 pmol), 52 ng (69 pmol), 26 ng (34 pmol), 5 ng (6.9 pmol), ו -3 ng (3.5 pmol).
  2. מערבבים 100 μL של כל [Ru (bpy) 3] Cl 2 פתרון עם 100 μL של בתמיסה מימית של חנקת cerium אמוניום ((NH 4) 2 Ce (NO 3) 6) במים (25 מ"מ) בשקופית מיקרוסקופ.
  3. הגדר את הרכישה אצל קורא פליטת האור על ידי אתחול תוכנת ההדמיה.
    1. כניסה לפרופיל המשתמש ולחפש את Acquiלוח הבקרה sition. לחץ על "אתחול" ולהמתין עד שהמכשיר מוכן.
    2. חפש "הדמיה מצב" ולוודא "פלורסנט" ו- "תצלום" נבדקים וכי "פלורסנט" אינה מסומנת.
    3. שינוי "זמן חשיפה" הגדרה "פלורסנט" כדי 20 שניות. הגדר את שאר ההגדרות עבור "פלורסנט" כדלקמן: "כלי קיבול": בינוני; "F / stop": 1; ו "מסנן פליטה": Open.
      הערה: זמני חשיפה אולי צריך להיות מותאם לפי מכשור הגדרת הניסוי נעשה שימוש, אם שונה מההגדרה של המוצגים.
    4. עבור "צילום" השתמש בהגדרות הבאות: "זמן חשיפה": Auto; "כלי קיבול": בינוני; ו "F / stop": 8. להתאים את "גובה נושא" על פי הדמיה target.Look עבור "תצוגה של שדה" התפריט הנפתח. ההגדרה הראשונית היא "ג" עבור ל"מצב סימון "B" (14 מרחק ס"מ בין גamera ושלב מדגם).
  4. הגדרת nebulizer ידי צבת שקופיות מיקרוסקופיות על גיליון נייר הבנייה שחור על הרצפה של חדר ההדמיה כדי להגן עליו מפני חמצון הסוכן. מערבבים 100 μLdroplet של [Ru (bpy) 3] Cl 2 -solution עם 100 μL של בתמיסה מימית של (NH 4) 2 Ce (NO 3) 6. שים את הכוונת הקופסה הירוקה.
    1. מניח את נושא ההדמיה על נייר הבנייה השחור, כך השטח של עניין נמצא במרכז כוונת תיבת האור הירוקה מוצג על הבמה המדגמת. הכן את nebulizer ידי ניתוק בקבוק ספריי פלסטיק מתמיכת העץ. מלאו פתרון של triethylamine (1: 3 במים / אתנול) לתוך מאגר הפלסטיק שלה לחבר אותה מחדש לתמיכת העץ.
    2. מניח את nebulizer בתוך קורא פליטת האור ולוודא כי כבל החשמל מנותק מן כבל nebulizer. ודא שמתג ההפעלהעל הוא, שהמתג נמצא במצב כבוי, ואת הנורית האדומה דולקת מניחים את nebulizer כזה שהזרימה ספריי הוא הצביע לעבר שטח של עניין בנושא הדמיה, תוך מזעור החסימה להציג מהמצלמה אל נושא הדמיה ידי ראש זרבובית תרסיס.
    3. מקום קטן, כלים שחורים של נייר הבנייה במשך כל נקודות חמות פוטנציאל (למשל, סימנים לבנים על שקופיות מיקרוסקופיות או מוזרקים) כדי להגן עליהם מפני תרסיס. מקום לפחות 40 סנטימטר של החוט מרחוק nebulizer בתוך חדר ההדמיה, כך שהיא לא תפריע עם נושא ההדמיה, nebulizer, או את בריח הדלת המגנטי. סגור את דלת מערכת הדמיה.
      הערה: crosshair ישתנה גודל מבוסס על "השדה של תצוגה" הגדרה "Living תמונה;" לוודא כי זה מוגדר "B".
  5. לרכוש תמונה על ידי ייזום רצף הדמיה. לחץ "לרכוש" את "לוח בקרת הרכישה". על sequ ההדמיה הראשוןence, לאפשר שמירה אוטומטית במקרה הצורך (מומלץ) ובחר בתיקיית הנתונים. התעלם בתיבת הדו-שיח 'תוויות הדמיה הערוכה "עד סוף את הרצף.
    הערה: תוכנות שליטה ומציג את הפעולות של המכשיר שלב-אחר-צעד בזמן אמת. לאחר הכנת המדידה והזזת הבמה מדגם אל המיקום הנכון, זה פותח את תריס המצלמה וסופרת את זמן המדידה. פתיחת התריס ניתן לשמוע גם על ידי צליל קליק שנוצר על ידי מכונה.
  6. כמו תריס נפתח, לרסס שלוש התפרצויות של פתרון של triethylamine (1: 3 במים / אתנול, 0.24 ± 0.04 מ"ל לכל פרץ ספריי) על ידי החלפת מתג למתג שלוש פעמים כדי ליצור chemiluminescence.
    הערה: השלב המדגם יעבור במהלך המדידה. השאירו מספיק (מינימום 40 ס"מ) כבל בתוך המכשיר כדי לאפשר זאת. ודא כי הפתרון להיות מרוסס על ידי nebulizer ניתן שאפו על ידי צינור עולה וכי אין בועות אוויר בצינור. יש כמה batterie חילוףים עבור nebulizer מוכן למקרה הצורך.

3. הדמיה Vivo לאחר הזרקת מערכתית תוך ורידי

  1. בתוך צינור microcentrifuge 1.5 מ"ל, להכין 100 μL של בופר פוספט (PBS) בתמיסה המכילה בין 8 ל 33 nmol של [Ru (bpy) 3] Cl 2. הכן תמיסה מימית של (NH 4) 2 Ce (NO 3) 6 במים (25 מ"מ) בעת ובעונה אחת.
  2. לווריד להזריק 100 μL של [Ru (bpy) 3] Cl 2 לווריד הזנב של עכברים בריאים (n = 5).
  3. להרדים את העכברים 10 דקות לאחר ההזרקה באמצעות מחנק CO 2.
    1. הסר את העור עם בחיתוך Y מהגוף, ולאחר מכן להסיר את קשת costal בצורת U-כדי לחשוף את הלב והריאות. Perfuse את העכברים על ידי חיתוך פורקן אטריום ימין והזרקת 20 מ"ל של PBS באמצעות מחט 24 מד לתוך החדר השמאלי 18. בזהירות לחתוך דרך הבטןהעור ולחשוף את הכליות והכבד. חותכים longitudinally דרך איברים ליצור חתך גלוי.
  4. הגדרת הרכישה כמתואר בשלבי 2.3-2.6, בשינויים הבאים.
    1. לאחר ביסודיות שטיפת המאגר פלסטיק nebulizer, למלא אותו עם תמיסה של (4 NH) 2 Ce (NO 3) 6 במים (25 מ"מ) במקום triethylamine.
      הערה: חשוב לשטוף את הפייה nebulizer ביסודיות לאחר כל שימוש, מאז גיבוש (NH 4) 2 Ce (NO 3) 6 עלול להרוס את זרבובית תרסיס לאחר מספר שימושים.
  5. השתמש בדגימות חיים או איבר שלם הדמיה.
    1. עבור הדמיה הבטן כולה, מקם את פגר עכבר עם הבטן פתוחה עם הפנים למצלמה וראש מצביע על החלק האחורי של המכשיר. מרכז את האיבר להיות צלם (למשל, כבד או כליה) מול כוונת תיבת האור הירוקה.
    2. Fאו בודדים הדמיה וכימות איבר, להסיר את העכבר מהמכשיר הדמיה בזיהוי מדויק. החל מחלל הגוף כבר נפתח, שיחתוך את האיברים הפנימיים (למשל, כליות, כבד, ריאות, שרירים, טחול, מוח ולב). חותך דרך עור הרגל האחורי שיחתוך רקמת שריר. בזהירות לפתוח את הגולגולת עם אזמל שיחתוך את המוח.
      1. אם האיבר של עניין הוא כבד, כליות או טחול, לחתוך את כל האיברים בחצי אורכים, במקום כל איבר על צלחת או חתיכת פטרי של נייר הבנייה שחור.
    3. בצע את ההליך מתואר צעדים 2.3-2.6 להקים הפליטה היחסית של נותב chemiluminescent עבור איברים יחידים.

4. Vivo הדמיה של בלוטות לימפה

  1. הכן 10 μL של פתרון PBS המכיל 80 nmol של [Ru (bpy) 3] Cl 2. הכן תמיסה מימית של (NH 4) 2 Ce (NO 3) 6 ב water (25 מ"מ) בעת ובעונה אחת.
  2. להזריק 10 μL של הפתרון subdermally לתוך הכף האחורית של עכברים בריאים (n = 5). כביקורת שלילית, להזריק את הכף הנגדית עם 10 μL של PBS הטהור. להקריב את העכברים באמצעות מחנק CO 2 15 דקות לאחר ההזרקה. הסר את העור על שתי רגליו האחוריות כדי לחשוף את תעלות הלימפה עד בלוטות הלימפה popliteal.
  3. הגדר את הרכישה כפי שמתואר בשלב 3.4.
  4. הסר את בלוטות הלימפה popliteal משני הרגליים האחוריות, לחתוך אותם לשניים, ולרסס אותם עם חמצון על צלחת פטרי, כפי שתואר קודם לכן (שלב 3.5.3), לצורך כימות.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מערכת nebulizer בסעיף פרוטוקול 1 ניתן לבנות מחומרים-זמינים בקלות ובעלות נמוכה. היא נועדה להיות הבלעה לריסוס מרחוק מופעל של סוכן ההפחתה / חמצון בתוך קורא bioluminescent (איור 1). העיצוב שלנו מאפשר הפעלה בטוחה של nebulizer בתוך הקורא פליטת אור ממרחק 14 ס"מ מהעדשה. אין אדים או טשטוש של העדשה נצפו במהלך המבצע. בחרנו סוכן chemiluminescent-הזמין המסחרי [Ru (bpy) 3] Cl 2 לפיתוח השיטה שלנו מבוסס על המחיר הנמוך שלה, יצ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

הנה, יש לנו הצגתי טכנולוגיה שמסוגלת המגדיר רקמות אופטיות באמצעות פליטת הפוטונים נוצרו על ידי עיתונאי chemiluminescent. בניגוד אחר, מבוסס יותר, טכנולוגיות 4, 5, 6, 7, 8, 9, מערכת הכתב chemiluminescent זו מעסיקה חללית הדמיה כי הוא לא רדיואקטיבי ומקל זיהוי ברמות רגישויות גבוהות מאוד. אולי...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

למחברים אין מה לחשוף.

תודות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

המחברים מודים לפרופ' יאן גרים ולמר טראוויס שאפר על הדיונים המועילים שלהם ולמר דיוויד גרגורי על עריכת כתב היד. השירותים הטכניים הניתנים על ידי מתקן הליבה להדמיית בעלי חיים של MSK, הנתמכים בחלקם על ידי מענק התמיכה של מרכז הסרטן של NIH P30CA008748-48, זוכים להכרת תודה. המחברים מודים ל-NIH (K25 EB016673 ו-R21 CA191679, T.R. ו-4R00CA178205-02, B.M.Z.), למרכז MSK להדמיה מולקולרית וננוטכנולוגיה (T.R.), לקרן Tow (BC), ולקרן הלאומית למדע (IGERT 0965983 במכללת האנטר לקולומביה הבריטית ו-T.M.S.) על תמיכתם הנדיבה. המחקר המדווח בפרסום זה נתמך במימון מאוניברסיטת המלך עבדאללה למדע וטכנולוגיה.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
עץ חלק א' (12.5 ופעמים; 2.5 ופעמים; 1.8 ס"מ)  131404 עץחתוך מגיליון דיקט ליבנה בגודל 3/4 אינץ' x 24 אינץ' x 30 אינץ'
חלק עץ ב' (12.7 ופעמים; 10.7 ופעמים; 1.8 ס"מ)131404 עץחתוך מגיליון דיקט ליבנה בגודל 3/4 אינץ' x 24 אינץ' x 30 אינץ'
עץ ג' (11 פעמים; 2.5 ופעמים; 1.8 ס"מ)131404עץ חתוך מ-3/4 אינץ' x 24 אינץ' x 30 אינץ' rdquo; יריעת דיקט ליבנה
ברגים (4 ופעמים; 25 מ"מ)Screwfix79939
Harmon Face Values 3 oz מיני מרססBed, Bath and Beyond
(10 ס"מ של פלדה בגודל 1/16 אינץ')Metals Depot Int. Inc.2192
עיפרון קלאסי HBPapermate58592
מהדק נייראופיס דיפו221720
כבל רמקולRCA Inc.
AH1650SN סוללת אלקליין אנרג'ייזר 9Vאנרג'ייזר אחזקות בע"מEN22
Hitech HS-82MG, מומנט פלט 3.4 ק"ג/ס"מ @ 6VHitech RCD ארה"ב בע"מ.32082S
שםהחברהמספר קטלוגיתגובות
28 ס"מ אזיקוני כבלים מפלסטיקג'נרל אלקטריק בע"מ50725
סרט דביק3M בע"מ3939
littleBits w1 חוטlittleBits בע"מw1 חוט
littleBits p1 כוחlittleBits Inc.p1 כוח
littleBits i2 מתג החלפהlittleBits Inc.i2 מתג
החלפה littleBits 011 סרווlittleBits Inc.011 סרוו
20 ס"מ חוט מכוסה פלסטיק קשרי טוויסטארבעה כוכבים פלסטיק71TIE8000
Tris(2,2′-bipyridyl)dichlororuthenium(II) hexahydrateSigma-Aldrich Inc.
אמוניום סריום (IV) חנקתיסיגמא-אולדריץ' בע"מ22249
איזופלואורןבקסטר בריאות1001936060
PBSסיגמא-אולדריץ'PBS1
אתנולסיגמא-אולדריץ'2854
טריאתילאמיןסיגמא-אולדריץ' בע"ממי מים
טוהרו באמצעות Milipore Mili-Q (R ≥ 18 MΩ)
עכברים עירומים נקבות מעבדותג'קסון1929גיל 5 - 6 שבועות
זן C57BL/6J   
עכברים זכרים NU/J at מעבדות ג'קסון2019גיל 6 – 8 שבועות
IVIS 200 קורא ביולומינסנציהקליפר Live Science
Live Image 4.2 תוכנהPerkin-Elmer128165
מיקרוסקופ שקופיותThermoScientific4951PLUS4
חלק מוט נירוסטה מנוע מיקרו סרוו 224758 T0886

מקורות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Fong, Y., Giulianotti, P. C., Lewis, J., Koerkamp, B. G., Reiner, T. Imaging and Visualization in The Modern Operating Room: A Comprehensive Guide for Physicians. , Springer. (2015).
  2. Nguyen, Q. T., Tsien, R. Y. Fluorescence-guided surgery with live molecular navigation - a new cutting edge. Nat. Rev. Cancer. 13 (9), 653-662 (2013).
  3. Weissleder, R., Pittet, M. J. Imaging in the era of molecular oncology. Nature. 452, 580-589 (2008).
  4. Heller, S., Zanzonico, P. Nuclear probes and intraoperative gamma cameras. Semin. Nucl. Med. 41 (3), 166-181 (2011).
  5. van Dam, G. M., et al. Intraoperative tumor-specific fluorescence imaging in ovarian cancer by folate receptor-α targeting: first in-human results. Nat. Med. 17 (10), 1315-1319 (2011).
  6. Zavaleta, C. L., et al. A Raman-based endoscopic strategy for multiplexed molecular imaging. Proc. Natl. Acad. Sci. U S A. 110 (25), E2288-E2297 (2013).
  7. Harmsen, S., Bedics, M. A., Wall, M. A., Huang, R., Detty, M. R., Kircher, M. F. Rational design of a chalcogenopyrylium-based surface-enhanced resonance Raman scattering nanoprobe with attomolar sensitivity. Nat. Commun. 6, 1-9 (2015).
  8. Thorek, D. L., et al. Positron Lymphography: Multimodal, High-Resolution, Dynamic Mapping and Resection of Lymph Nodes After Intradermal Injection of 18F-FDG. Nucl. Med. 53 (9), 1438-1445 (2012).
  9. Thorek, D. L. J., Riedl, C. C., Grimm, J. Clinical Cerenkov Luminescence Imaging of 18F-FDG. Nucl. Med. 55 (1), 95-98 (2014).
  10. Gross, S., et al. Bioluminescence imaging of myeloperoxidase activity in vivo. Nat. Med. 15 (4), 455-461 (2009).
  11. Lee, J. -J., White, A. G., Rice, D. R., Smith, B. D. In vivo imaging using polymeric nanoparticles stained with near-infrared chemiluminescent and fluorescent squaraine catenane endoperoxide. Chem. Commun. 49 (29), 3016-3018 (2013).
  12. Lee, D., et al. In vivo imaging of hydrogen peroxide with chemiluminescent nanoparticles. Nat. Mater. 6 (10), 765-769 (2007).
  13. Baumes, J. M., et al. thermally activated, near-infrared chemiluminescent dyes and dye-stained microparticles for optical imaging. Nat. Chem. 2 (12), 1025-1030 (2010).
  14. Siraj, N., et al. Fluorescence, Phosphorescence, and Chemiluminescence. Anal. Chem. 88 (1), 170-202 (2016).
  15. Hercules, D. M., Lytle, F. E. Chemiluminescence from Reduction Reactions. Am. Chem. Soc. 88 (20), 4745-4746 (1966).
  16. Kerr, E. Annihilation electrogenerated chemiluminescence of mixed metal chelates in solution: modulating emission colour by manipulating the energetics. Chem. Sci. 6, 472-479 (2015).
  17. Montalti, M., Credi, A., Prodi, L., Gandolfi, M. T. Handbook of Photochemistry 3rd Ed. , CRC Press Taylor & Francis Group. Boca Raton, FL, USA. 379-404 (2006).
  18. Gage, G. J., Kipke, D. R., Shain, W. Whole Animal Perfusion Fixation for Rhodents. J. Vis. Exp. (65), e3564(2012).
  19. Büchel, G. E., et al. Near-infrared intraoperative chemiluminescent imaging. ChemMedChem. , (2016).
  20. Ntziachristos, V., Ripoll, J., Wang, L. V., Weissleder, R. Looking and Listening to Light: the Evolution of Whole-Body Photonic Imaging. Nat. Biotechnol. 23, 313-320 (2005).
  21. Koch, J. H., Gyarfas, E. C., Dwyer, F. P. Biological Activity of Complex Ions Mechanism of Inhibition of Acetylcholinesterase. Austral. J. Biol. Sci. 9 (3), 371-381 (1956).
  22. Juris, A., Balzani, V., Barigelletti, F., Campagna, S., Belser, P., Zelewsky, A. V. Ru(II) polypyridine complexes: photophysics, photochemistry, electrochemistry, and chemiluminescence. Coord. Chem. Rev. 84, 85-277 (1988).
  23. Knoll, J. D., Turro, C. Control and utilization of ruthenium and rhodium metal complex excited states for photoactivated cancer therapy. Coord. Chem. Rev. 282, 110-126 (2015).
  24. Haley, T. J. Pharmacology and toxicology of the rare earth elements. J. Pharm. Sci. 54 (5), 663-670 (1965).
  25. Siekierski, S., Mioduski, T., Salomon, M. IUPAC Commission on Solubility Data. Solubility Data Series. Vol 13. Scandium, Yttrium, Lanthanum, and Lanthanide Nitrates. , Pergamon Press. (1983).
  26. Reiner, T., Jantke, D., Marziale, A. N., Raba, A., Eppinger, J. Metal-Conjugated Affinity Labels: A New Concept to Create Enantioselective Artificial Metalloenzymes. ChemistryOpen. 2, 50-54 (2013).
  27. Zanarini, S., et al. Synthesis and Electrochemiluminescence of a Ru(bpy)3-Labeled Coupling Adduct Produced on a Self-Assembled Monolayer. J. Phys. Chem. C. 112 (8), 2949-2957 (2008).
  28. Liu, R., Lv, Y., Hou, X., Yang, L., Mester, Z. Protein Quantitation Using Ru-NHS Ester Tagging and Isotope Dilution High-Pressure Liquid Chromatography-Inductively Coupled Plasma Mass Spectrometry Determination. Anal. Chem. 84 (6), 2769-2775 (2012).
  29. Jantke, D., et al. Synthetic strategies for efficient conjugation of organometallic complexes with pendant protein reactive markers. J. Organomet. Chem. 744, 82-91 (2013).
  30. Aoki, Y., et al. An experimental xenograft mouse model of diffuse pontine glioma designed for therapeutic testing. J Neurooncol. 108 (1), 29-35 (2012).
  31. Forster, R. J., Bertoncello, P., Keyes, T. E. Electrogenerated Chemiluminescence. Annual Rev. Anal. Chem. 2, 359-385 (2009).
  32. Connell, T. U., James, J. L., White, A. R., Donnelly, P. S. Protein Labelling with Versatile Phosphorescent Metal Complexes for Live Cell Luminescence Imaging. Chem. Eur. J. 21 (40), 14146-14155 (2015).
  33. Zhou, X., et al. Synthesis, labeling and bioanalytical applications of a tris(2,2′-bipyridyl)ruthenium(II)-based electrochemiluminescence probe. Nat. Protoc. 9 (5), 1146-1159 (2014).
  34. Bœuf, G., et al. Encapsulated Ruthenium(II) Complexes in Biocompatible Poly(d,l-lactide-co-glycolide) Nanoparticles for Application in Photodynamic Therapy. ChemPlusChem. 79 (1), 171-180 (2014).
  35. Loizidou, M., Seifalian, A. M. Nanotechnology and its applications in surgery. Brit. J. Surgery. 97 (4), 463-465 (2010).
  36. Barry, N. P. E., Sadler, P. J. Challenges for Metals in Medicine: How Nanotechnology May Help To Shape the Future. ACS Nano. 7, 5654-5659 (2013).
  37. Hasan, K., Bansal, A. K., Samuel, I. D. W., Roldán-Carmona, C., Bolink, H. J., Zysman-Colman, E. Tuning the Emission of Cationic Iridium (III) Complexes Towards the Red Through Methoxy Substitution of the Cyclometalating Ligand. Nat.Sci. Rep. 5, 1-15 (2015).
  38. Truong, J., et al. Chemiluminescence detection with water-soluble iridium(III) complexes containing a sulfonate-functionalised ancillary ligand. Analyst. 139 (22), 6028-6035 (2014).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

In VivoTris bipyridine ruthenium

מאמרים קשורים