Restenosis לאחר הליכים Cardiovascular (ניתוח מעקף, אנגיופלסטיקה, או stenting) היא בעיה משמעותית להפחית את עמידות של נהלים אלה. טיפול אידיאלי יהיה לעכב תפוצת שריר חלקה (VSMC) תוך קידום התחדשות האנדותל. אנו מתארים מודל להערכה סימולטנית של התפשטות VSMC ותפקוד האנדותל in vivo.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
במאמר זה
סיכום
תקציר
שחזור עורקי, בין אם ניתוח אנגיופלסטי או ניתוח מעקף, כולל טראומה יאטרוגנית הגורמת לשיבוש אנדותל ותפוצת תאי שריר חלקה (VSMC). מודלים מורין משותף ללמוד כלי קטן כגון עורקי הראש ואת עורקי הירך. להלן אנו מתארים מערכת vivo שבו שתי התפשטות VSMC ו פונקציה מחסום האנדותל ניתן להעריך בו זמנית בכלי גדול. למדנו את התגובה העורקים infrarenal לפציעה C57BL / 6 עכברים. אבי העורקים נפגעו מהוריד הכליתי השמאלי עד לשתי ההתהוות של אבי העורקים על ידי 30 ריסקות טרנסמומיות של משך 5 שניות עם מוליך כותנה. שינויים מורפולוגיים הוערכו עם היסטולוגיה קונבנציונלית. עובי דופן העורקים נמדד מן המשטח לומינליטיה. שילוב EDU וכתמים נגד עם DAPI ואלפא אקטין שימש להדגים התפשטות VSMC. הפעלת ERK1 / 2, מנחה ידוע של היווצרות היפרפלזיה אינטימית, הרתיעהממוקש על ידי ניתוח כתם המערבי. ההשפעה של דלקת נקבע על ידי אימונוהיסטוכימיה עבור תאים B, T- תאים, ומקרופאגים . En פנים קטעים של האנדותל היו דמיינו עם מיקרוסקופ אלקטרונים סריקה (SEM). פונקציה אנדותל המכשול נקבע עם מכתים Evans כחול. פגיעה בחצי הדם גרמה לעיבוי קיר העורקים. פגיעה זו גרמה להתפשטות VSMC, הבולט ביותר ב 3 ימים לאחר הפציעה, ואת ההפעלה המוקדמת של ERK1 / 2 ו ירד p27 ביטוי kip1. פגיעה לא הביאה לגידול בתאי B, תאי T, או חדירת מקרופאגים בקיר הספינה. פציעה גרמה למחלות תא אנדותליות חלקיות ולאובדן מגע של תאים תאיים. פגיעה גרמה לאובדן משמעותי של תפקוד מחסום האנדותל, אשר חזר לקו הבסיס לאחר שבעה ימים. Murine transmural בוטה אב העורקים מודל הפציעה מספקת מערכת יעילה כדי ללמוד בו זמנית הן התפשטות VSMC ו מחסום אנדותל פונקציה בכלי גדול.
מבוא
רסטנוזה ניתוח מעקפים (ניתוח מעקפים, אנגיופלסטיקה או סטנט) הוא בעיה משמעותית בהפחתת עמידותם של תהליכים אלה. כל ההליכים רה-וסקולריזציה הם מנוגע על ידי restenosis. האסטרטגיות הנוכחיות למניעת רסטנוזיס (סטנטים משחררים תרופה ובלונים מצופים בסמים) מעכבים את תאי השריר החלקים של כלי הדם (VSMC) ואת התפשטות תאי האנדותל (EC). כתוצאה מכך, התערבויות אלה למנוע restenosis מתווך VSMC, אלא גם למנוע את התחדשות האנדותל. ללא אנדותל שלם, החולים נדרשים להיות על סוכנים נוגדי טסיות חזק כדי להקטין את הסיכון של פקקת באתרו בסיכון של דימום סיבוכים. טיפול אידיאלי יהיה לעכב התפשטות VSMC תוך קידום התחדשות האנדותל. לכן, יש צורך בו זמנית מחקר....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
הצהרת האתיקה: הפרוטוקולים לטיפול בבעלי חיים אושרו על ידי הוועדה המוסדית לטיפול בבעלי חיים ושימוש (IACUC) של אוניברסיטת מרילנד (פרוטוקול מס '0416009) ונערכו על פי תקני AAALAC-International.
1. הליך כירורגי
- טכניקת הרדמה
- לעקר את כל המכשירים המשמשים ניתוח הישרדות עם קיטור עיקור ב 121 מעלות צלזיוס למשך 30 דקות.
- להשרות ....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
סעיפים אביזר רוחבי מוטבע OCT היו מחולקים, ומוכתמים hematoxylin ו eosin לאחר מכן מוכתמות עם כתם Verhoeff- ואן Gieson (VVG) לזהות את lamina אלסטית פנימיים וחיצוניים 7 . פציעה מוחצת גרמה לעיבוי קיר אבי העורקים בהשוואה לאורטאס של בעלי חיים שטופלו בהליך דמה (laparotomy וגירוי מעיים קטן בלבד). עובי דופן, כפי שהוערך על ידי המרחק מ adventitia לומן, היה הגדול ביותר שלושה ימים לאחר הפציעה (42.2 ± 1.7 מיקרומטר לעומת 22.1 ± 1.1 מיקרומטר.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
יש לנו מאופיין את ההשפעות של מודל פגיעה אבץ Murine שמביא hyperplasia המדיאלי תפקוד לקוי של האנדותל. ניתוק EC חלקי לאורך האינטימה של אבי העורקים מלווה באובדן מגע של תאים סלולריים ושיפור של בליטות התא. במקביל, תפקוד מחסום האנדותל היה לקוי באופן משמעותי, אשר גירוי נתיבי איתות המיטוגניים רגישים, מה שמוביל לשגשוג של VSMCs ועיבוי של קיר כלי השיט. נקודות החוזק של מודל זה הן כי קל יותר מבחינה טכנית ללמוד ולבצע מאשר מודלים אחרים של אבי העורקים של המחלה ומאפשר הערכה סימולטנית הן של התגובה ל.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
עבודה זו מומנה על ידי המחלקה לענייני וותיקים לענייני פיתוח קריירה פרס (1IK2BX001553-01) (TSM) ואת התרופות וסקולרי EJ Wylie מלגות (TSM).
תודות
אנו מודים Hsia Ru-ching דוקטורט, מן אלקטרונית מיקרוסקופית הליבה מתקן של אוניברסיטת מרילנד בית הספר לרפואה, על התמיכה הטכנית שלה בעיבוד סריקה דגימות מיקרוסקופיה אלקטרונית.
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| חומר סיכה לעיניים | Dechra | 17033-211-38 | חומרים פרמצבטיים |
| Isoflurane | VetOne | 502017 | חומרים פרמצבטיים |
| קרפרופן | Zoetis | 26357 | חומרים פרמצבטיים |
| וופורייזר מדויק | Summit Medical | 10675 | אספקה כירורגית |
| נבלות פחם | ביקפורד בע"מ | 80120 | ציוד כירורגי |
| כרית איזותרמית | מכשיר הרווארד | 50-7053-R | ציוד כירורגי |
| מוליך כותנה סטרילי | פישר סיינטיפיק | 23-400-124 | ציוד כירורגי |
| 4-0 תפר מונופילמנט נספג | Ethicon, Inc | J310 | אספקה כירורגית |
| 5-0 תפר מונופילמנט שאינו נספג | Ethicon, Inc | 1666 | אספקה כירורגית |
| 21 מד x 1 אינץ' מחט | BD Biosciences | 305165 | אספקה כירורגית |
| 25 מד x 1 אינץ' מחט | BD Biosciences | 305125 | אספקה כירורגית |
| מעקר יבש | Cellpoint | 7770 | ציוד כירורגי |
| מספריים עדינים | כלי מדע עדינים | 14058-09 | מכשירים כירורגיים |
| מלקחיים אדסון | כלי מדע עדינים | 11006-12 | מכשירים כירורגיים |
| Dumont #5 מלקחיים עדינים | כלי מדע עדינים | 11254-20 | מכשירים כירורגיים |
| Vannas מספריים קפיצים 3 מ"מ קצה חיתוך | כלי מדע עדינים | 15000-00 | מכשירים כירורגיים |
| נהג מחט | כלי מדע עדינים | 91201-13 | מכשירים כירורגיים |
| ידית אזמל #4 | כלי מדע עדינים | 10004-13 | מכשירים כירורגיים |
| להבי אזמל #10 | כלי מדע עדינים | 10010-00 | מכשירים כירורגיים |
| PBS | Lonza | 17-516F | ריאגנטים לעיבוד רקמות |
| Evans Blue | Sigma-Aldrich | E2129 | ריאגנטים לעיבוד רקמות |
| Paraformaldehyde | Sigma-Aldrich | P6148 | ריאגנטים לעיבוד רקמות |
| דוגמנות שעווה | Bego | 40001 | ריאגנטים לעיבוד רקמות |
| תרכובת OCT | Tissue-Tek Sakura | 4583 | ריאגנטים עבור עיבוד רקמות |
| תמיסת המטוקסילין של מאייר | סיגמא-אולדריץ' | MHS16 | ריאגנטים לניתוח אימונוהיסטולוגי |
| תמיסת Eosin Y אלכוהולית | Sigma-Aldrich | HT110316 | ריאגנטים לניתוח אימונוהיסטולוגי |
| ערכת כתמי אלסטין | Sigma-Aldrich | HT25A | ריאגנטים לניתוח אימונוהיסטולוגי |
| Click-it Edu Alexa-488 ערכת הדמיה | Invitrogen | C10337 | ריאגנטים לניתוח אימונוהיסטולוגי |
| Anti-Erk1/2 נוגדנים | טכנולוגיית איתות תאים | 4695 | ריאגנטים לאימונוהיסטולוגי ניתוח |
| אנטי-פוספו-Erk1/2 נוגדנים | טכנולוגיית איתות תאים | 4370 | ריאגנטים לניתוח אימונוהיסטולוגי |
| אנטי-p27kip1 | נוגדנים טכנולוגיית איתות תאים | 3698 | ריאגנטים לניתוח אימונו-היסטולוגי |
| חומצה טריכלורואצטית | סיגמא-אולדריץ' | T9159 | ריאגנטים לניתוח אימונוהיסטולוגי |
מקורות
- Carmeliet, P. Mechanisms of angiogenesis and arteriogenesis. Nat Med. 6 (4), 389-395 (2000).
- Carmeliet, P., Moons, L., Collen, D. Mouse models of angiogenesis, arterial stenosis, atherosclerosis and hemostasis. Cardiovasc Res. 39 (1), 8-33 (1998).
- Baker....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
