מאמר שיטה

הקמת Assay קולוניזציה הריאה עבור מחזור הגידול ויזואליזציה תאים ברקמות הריאה

DOI:

10.3791/56761

⸱

16 ביוני 2018

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1The Institute of Basic Medical Sciences, College of Medicine, National Cheng Kung University, 2Department of Biochemistry and Molecular Biology, College of Medicine, National Cheng Kung University, 3Trauma Office, Children's National Health System

במאמר זה

סיכום

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

במודל חיה יש צורך לפענח את התפקיד של מחזורי תאים סרטניים (CTCs) בקידום קולוניזציה ריאות במהלך גרורות סרטן. . הנה, הקמנו, לבצע בהצלחה של ויוו assay לבדוק באופן ספציפי את הדרישה של הרכבה fibronectin פולימריים (polyFN) על CTCs ריאות קולוניזציה.

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

גרורות הוא הגורם העיקרי של מקרי המוות מסרטן. התפקיד של מחזורי תאים סרטניים (CTCs) בקידום גרורות סרטן, שבו הריאות קולוניזציה על-ידי CTCs אנושות תורם לתהליכים מוקדם ריאות גרורתי, נחקר נמרצות. ככזה, מודלים בעלי חיים הם הגישה היחידה כי לוכדת את תהליך מערכתי מלא של גרורות. בהתחשב בכך להתרחש בעיות קודמות עיצובים ניסיוני לבחינת התרומות של CTCs כדי extravasation כלי דם, הקמנו ויוו ריאות קולוניזציה assay שבו תא-מעקב ארוך-טווח-זריחה, carboxyfluorescein succinimidyl אסתר (CFSE), שימש לה תווית תאים סרטניים מושעה, זלוף ריאות בוצע כדי לנקות הלא ספציפית לכוד CTCs לפני הסרת הריאה, הדמיה קונאפוקלית ו כמת. Fibronectin פולימריים (polyFN) התאספו על משטחים CTC נמצאה לתווך ריאות קולוניזציה בהקמה הסופי של רקמות גידול גרורתי. . כאן, כדי לבדוק באופן ספציפי את הדרישה של הרכבות polyFN CTCs ריאות קולוניזציה, extravasation, ביצענו לטווח קצר ריאות מבחני קולוניזציה שבו הושעה לואיס ריאות קרצינומה של תאים (LLCs) stably לבטא FN-shRNA (shFN) או לטרוף-shRNA (shScr) ומתויגים מראש עם 20 μM של CFSE חוסנו לווריד לתוך עכברים C57BL/6. בהצלחה להדגים היכולות של shFN LLC תאים ליישב הריאות העכבר היו פחתה באופן משמעותי בהשוואה shScr LLC תאים. לכן, מתודולוגיה לטווח קצר זו עשוי להיות מיושם באופן נרחב להפגין באופן ספציפי את היכולת של CTCs בתוך מחזור הדם ליישב את הריאות.

מבוא

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

גרורות הוא הגורם העיקרי של סרטן מוות1,2. תאים סרטניים נגזר רקמות הראשי להזין את זרימת הדם ההשעיה ולשרוד שונים אתגרים hematogenous למשל, anoikis, התקפות מערכת החיסון, נזקים עקב מאמץ גזירה לחץ דם או אילוצים גיאומטריים, לפני שהם אפשרות ליישב איברים רחוקים, צעד. מפתח מכתיב את ההצלחה של גרורות3,4,5,6. לכן, נמרצת כרגע נעשו מאמצים איפיון תאים סרטניים במחזור (CTCs), מתאם מאפיינים אלו עם גידול ממאיר, גרורות, שיעורי ההישרדות של סרטן המטופלים7,8 , 9. מאז התהליך של גרורות סרטן במיוחד מתארת אירוע ויוו , מודלים בעלי חיים הם הגישה היחידה כי לוכדת את תהליך מערכתי מלא גרורות10,11,12 .

CTCs הופכים גידול גרורתי לרקמות דרך הסלולר אירועים מרובים כולל הקולוניזציה של איברים רחוקים1,2. עם זאת,14,15 13,מבחני גרורות הנפוצות ביותר אינם מספקים דרך להתבונן CTC קולוניזציה של איברים רחוקים. לכן, עיצוב assay ויוו להמחשת קולוניזציה CTC דרוש בדחיפות. למרות מספר ויוו , שמחוץ קצר לטווח הריאה קולוניזציה מבחני עוצבו, בעיות, חסרונות נשארים. למשל, בעוד חלבון פלורסצנטיות ירוק (GFP)-מבחני overexpressing גידול תאים השתמשו באלה22,23, זה לוקח זמן stably transfect, לשכפל תאים סרטניים בעוצמה מספקת GFP פלורסנט תחת המיקרוסקופ. באופן דומה, למרות מכתים ארעית של תאים סרטניים עם חיצי מעקב התא לטווח ארוך CFSE ננקטה כדי להחליף את תאי הגידול לבטא-GFP, זה נשאר קשה לשפוט אם בתאי הגידול התווית על-ידי CFSE מחוברים או סתם מתנה בתוך להערכת מתוך16,נכרת איברים רחוקים17.

Fibronectin פולימריים (polyFN) התאספו על משטחים של CTCs נמצאה לתרום באופן ביקורתי הממסד הסופי של גידול גרורתי רקמות18,19,20,21,22 . כאן, נוכל לבצע לטווח קצר ריאות קולוניזציה מבחני שבו תנאי לואיס ריאות קרצינומה של תאים (LLCs) stably FN-shRNA (shFN) או לטרוף-shRNA (shScr) ומוענקת לו מראש CFSE חוסנו לווריד לתוך עכברים C57BL/6. לאחר 2-3 ימים, הריאות העכבר היו קודם perfused בתמיסת פוספט buffered (PBS) כדי להסיר לחלוטין את CTCs כעיגולים בצבע בתוך להערכת לפני נתון מיקרוסקופיה קונפוקלית, כימות של הריאות-להמדינות LLCs. אנחנו הראו בבירור המספרים של הריאות-להמדינות shFN LLCs ואת הגידול גושים הצטמצמו באופן משמעותי בהשוואה shScr LLCs, באופן משמעותי מאמתים את התפקיד של הרכבות polyFN CTCs בקידום קולוניזציה של צמיחה של CTCs ב הריאות. המחקר שלנו דורש עוד חקירה לתפקיד של polyFN של גרורות סרטן.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כל הניסויים על עכברים בוצעו בהתאם לקווים המנחים של המכון שלנו (המדריך לקבלת טיפול, שימוש של חיות מעבדה, המכללה לרפואה NCKU).

1. הכנת כלי נגינה, תרבות המדיה ומנות

  1. לפני שמתחילים את הפרוטוקולים ניסיוני, להשיג את התפרים כירורגי סטרילי, 1 מ"ל מזרקים עם מחט 26G/0.5 ס מ (על הזנב זריקה לווריד), 3 mL מזרקים עם המחט 24G/3 ס מ (עבור זלוף הריאה), של Dulbecco ששינה נשר מדיה (DMEM), טריפסין-EDTA פתרון (5 טריפסין g/L ו מ מ 0.53), סרום שור עוברית (FBS), PBS x 1 (137 מ מ NaCl, מ מ 2.7 אשלגן כלורי, 10 מ מ נה2PHO4ו2PO 1.8 מ מ ח'4) ומנות תרבות 6 ס מ.

2. הכנה ושחזור של תאים סרטניים ההשעיה

  1. הכן של Dulbecco סטרילי ששינה נשר מדיה (DMEM) המכיל 10% או 20% FBS טרי להוסיף 2 מ מגלוטמין, 1 x PBS ו- 0.05% טריפסין-EDTA.
  2. התרבות התאים DMEM בתוספת 10% FBS ב 37 מעלות צלזיוס ואגדל אותם עד 70-80% הנהרות בצלחת תרבות.
  3. הסר את המדיה התרבות (DMEM) הכלים, ואחריו שני שוטף עם 2 מ של PBS עקר 1 x.
  4. להוסיף 1 מ"ל של 0.05% טריפסין-EDTA לתוך הכלים לכסות ביסודיות את כל התאים. מיד להסיר μL 800 של פתרון ולהשאיר רק 200 μL ב הכלים. דגירה כל המנות של 37 ° C ל 30 s 1 דקות (בהתאם לסוג התא) וחכי עד רוב התאים המצב המושהה.
  5. להוסיף 1 מ"ל של טרי DMEM המכיל 10% FBS ישירות לתוך הכלים כדי לעצור את הפעילות האנזימטית מתרחשת של טריפסין, נמרצות pipette התליה תא למעלה ולמטה עם פיפטה 1000 µL להכין השעיה תא בודד.
  6. להעביר את התאים המנה צינור microcentrifuge 1.5 mL, ספין למטה התאים בטמפרטורת החדר ב g x 162 למשך 3 דקות.
  7. וארוקן את תגובת שיקוע וסובב resuspend תאי הגידול 1.5 mL DMEM המכיל 20% FBS ו מעל קצה-התאים ההשעיה ב 37 מעלות צלזיוס במשך שעתיים.
    הערה: אם המדיום לצהוב במהלך ההתאוששות, להחליף את המדיום הישן בינונית טרייה המכיל 20% FBS.

3. קרינה פלואורסצנטית מכתים וניתוח של תאים סרטניים ההשעיה עם אסתר Succinimidyl Carboxyfluorescein (CFSE)

  1. לאחר שחזור תא ההשעיה, ספירת המספרים המתאימים תא קיימא עם Trypan Blue ב נויבאואר סופר תא titrating על ידי קרינה פלואורסצנטית מכתים מינונים, על הזנב הווריד הזרקה.
  2. ספין למטה התאים ב g 162 x בטמפרטורת החדר במשך 3 דקות ו- resuspend שתאי pelleted 1 מ"ל של עיקור PBS x 1, ואחריו צנטריפוגה בטמפרטורת החדר ב g x 162 למשך 3 דקות.
  3. Resuspend תאי pelleted µL 500 ל- PBS X 1 המכיל 10% FBS ו- 0, 5, 10, 20 או 40 µM CFSE עבור טיטור במינון, דגירה התליה תא ב 37 oC למשך 10 דקות בחושך.
  4. ספין למטה התאים ב g x 162 בטמפרטורת החדר במשך 3 דקות, resuspend את התאים pelleted עם 4 מיליליטר DMEM המכיל 1% FBS. חזור על שלב כביסה זה עוד שלוש פעמים. Resuspend התאים pelleted עם 4 מ של DMEM לבד בשביל הכביסה הסופי.
  5. נושא התאים התווית על-ידי CFSE תא לפעיל על-ידי קרינה פלואורסצנטית מיון (FACS) ניתוח כדי לכמת את עוצמת קרינה פלואורסצנטית של תא בודד, או זנב בהזרקה לווריד.
    הערה: לשמור את התאים על הקרח לפני שתבצע את הזריקות וריד FACS ניתוח או זנב.

4. ריאות קולוניזציה Assay

  1. להכין את התאים המסומנת 20 מיקרומטר CFSE (עיין 3.1 שלבים דרך 3.4).
    הערה: להחליט את המינון עבודה של CFSE עבור תוויות תאים סרטניים, בהתבסס על תוצאות טיטור מניתוח FACS (עיין שלב 3.3).
  2. חממו הזנב של שבוע 4-6-בן זכר C57BL/6 עכברים (עכברים 6) עם מנורה הליד למשך 5-10 דקות על בסיס עכבר-מאת להתרחב ורידים זנב העכבר.
  3. ביסודיות לערבב, תשאף תאים סרטניים התווית על-ידי CFSE עם מזרק 1 מ"ל (26Gx1/2), הימנעות בועות ההשעיה תא (עם צפיפות תא הסופי של 5 x 106 תאים למ"ל).
  4. בזהירות להזריק 1 x106 תאים סרטניים התווית על-ידי CFSE ב 200 µL של DMEM לווריד זנב העכבר, אשר צריך להיות תקוע ב- restrainer העכבר.
    הערה: במהלך הזריקה, אם המחט ממוקם ישירות לומן של הווריד של הזנב, תאים סרטניים בקלות תישלח למחזור ללא צורך ללחוץ חזק על המזרק. אם זה קשה לדחוף לתאי הגידול דרך, הם יש ככל הנראה הוזרק מחוץ הווריד הזנב, לחלל התת עורית.
  5. לחלק את העכברים שקיבלו לווריד לתאי הגידול התווית על-ידי CFSE לשתי קבוצות: קבוצה אחת יעבור זלוף הריאות ולאחריו מיקרוסקופיה קונפוקלית, ImageJ כמת וזמינותו קולוניזציה ריאות ו השני יישאר לבד במשך 4-5 שבועות ב הקולוניזציה ריאות לטווח ארוך וזמינותו.
  6. 20, 38 או 45 h ועם עונה 1 פרק 106 תאים סרטניים מוזרק לווריד במהלך טיטור קורס ותלוי במינון פעם, עזים ומתנגד נושאות עכברים עם 50-75 מ"ג/ק"ג zoletil 50, אשר הוא anesthetizer היטב מקובל ונכון23.
    הערה: השתמש משחה הוטרינר על העיניים של העכברים למניעת יובש תחת הרדמה.
  7. Longitudinally לחתוך את העור, רקמות תת עוריות מהבטן באזור החזה עם מספריים כירורגיים. פתח את חלל הצדר עם מספריים כירורגיים ומלקחיים לחשוף באופן מלא את הלב והריאות.
    הערה: להיות זהירים כדי למנוע ניתוק כלי הדם.
  8. לקשור את הווריד הנבוב מעולה (SVC) ואת הכלילי (IVC) עם התפרים כירורגי סטרילי כדי למנוע את זרם אחורי של פתרון זלוף במהלך ריאות זלוף.
  9. לחתוך קיר החדר השמאלי עם מספריים כירורגיים כדי לפתוח סדק (בערך 2-4 מ"מ) כדי לנקז את הפתרון זלוף מהריאות.
  10. להזריק 1 x PBS לתוך החדר הימני עם מזרק 3 מ ל ולהסיר את הפתרון סחוט עם שאיבה קבועה במהלך ריאות זלוף עד הריאות לפנות מן צבע אדמדם חיוורת לחלוטין.

5. קונאפוקלית הדמיה מיקרוסקופיים וניתוח של תאים סרטניים התנחלו ריאות

  1. להסיר את הריאות עכשיו-חיוור חלל הצדר, נפרדות האונות חמש על ידי חיתוך משם את הרצועות קנה הנשימה ואת רקמת חיבור עם מספריים, מלקחיים כירורגיים24.
  2. להכין בעל ריאות כמו אלונקה כפי שמוצג באיור 3B על ידי סלילה בתפר ניילון סביב שני מוטות מתכת כדי ליצור מרקם reticulate עם רווח בין שני מוטות את המיקום של אונות הריאה. להגדיר את הריאה. מחזיק מנה 6 ס מ.
    הערה: בעל ריאות ישמש כדי לייצב את אונות הריאה מתחת לעדשה המטרה של מיקרוסקופ קונפוקלי.
  3. Lodge ולתקן את אונות ריאה את המרקם reticulate של בעל ריאות. מכסה, להרטיב את אונות הריאה עם 1 x PBS.
  4. נושא המנה 6 ס מ תרבות מחסה האונות ריאות על בעל ריאות כדי מיקרוסקופיה קונפוקלית כדי ללכוד תמונות פלורסצנטיות הקלטה לתאי הגידול ריאות-להמדינות.
  5. עבור הדמיה, להשתמש עדשות אובייקטיבי (5 X, MPLN, נה: WD 0.1,: 20, אוויר).
  6. סובב את גלגל מסנן כדי NIBA (עירור/פליטה; 470-495 ננומטר/510-550 ננומטר) ולהשתמש 488 ננומטר לייזר כדי לעורר CFSE, בבירור להמחיש תמונות של קרינה פלואורסצנטית נקודות בהאונות ריאות.
  7. סובב את גלגל מסנן כדי R690 (עבור MaiTai HP DeepSee לייזר) לסרוק עם 2.0 µs/פיקסל סריקה מהירות ולמטב את HV רווח, היסט רמות.
  8. לכידת תמונות קרינה פלואורסצנטית (512 x 512 פיקסלים) באמצעות התוכנה מיקרוסקופ עם 10 µs/פיקסל סריקה מהירות.
  9. לכמת ולנתח מבחינה סטטיסטית תמונות מיקרוסקופיות באמצעות תוכנת ImageJ GraphPad כמו שתואר לעיל21.

6. ארוכות מבחני קולוניזציה ריאות

הערה: חזור על שלבים 4.1 דרך 4.5.

  1. להקריב את העכברים לאחר חיסון תאי הגידול במשך 4-5 שבועות ולתקן את הריאות שלהם עם הנוזלים של Bouin25 במשך 1-2 ימים.
  2. לכמת ולנתח מבחינה סטטיסטית הגושים הגידול מהריאות עכברים עם תוכנה21.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

לפני שתבצע ויוו ריאות קולוניזציה וזמינותו כמופיע ב איור 1A כדי לבדוק אם polyFN על תאים סרטניים מושעה שמתווכת קולוניזציה ריאות ו/או extravasation בקידום גרורות, אנחנו קודם, טיטרציה שונים ריכוזי CFSE, תרכובת פלורסנט תא חדיר, covalently conjugates תאיים amine המכילים מולקולות26,27 בתאי הגידול מושעה ונותרה בתאים במשך תקופה ארוכה של זמן. . מצאנו את הגידול הזה התאים הודבקו תוויות ביעילות עם CFSE בא...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

יחד עם זמן לטווח הריאה קולוניזציה מבחני, לטווח הקצר מתודולוגיה אנחנו מועסק כאן כדי להעריך ויוו ריאות קולוניזציה מאת CTCs באיברים מרוחקים בבירור חשפה ו הבדיל את תפקיד ספציפי polyFN התאספו על CTCs להמדינות הריאות, אשר לאחר מכן הוביל extravasation ואת התהליכים גרורתי18,19,20,21. למרות תיוג תאים עם גשש תא לטווח ארוך CFSE מאפשרת לנו לאתר את CTCs מוזרק לווריד עד שלושה ימים לפני זלוף ריאות ול...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

המחברים אין לחשוף.

תודות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

המחברים רוצים להודות מינג-מין ד ר צ'אנג וצ'אנג יה-חסין גב' לתמיכה טכנית שלהם. עבודה זו נתמכה על ידי משרד המדע והטכנולוגיה של טייוואן (לרוב-103-2325-B-006-009, רוב-104-2325-B-006-001, רוב-105-2325-B-006-001, MOST-106-2320-B-006-068-MY3) משרד הבריאות ואת הרווחה (MOHW106-TDU-B-211-144004). אנחנו גם תודה על התמיכה של המעבדה לחקר הליבה של המכללה לרפואה, האוניברסיטה הלאומית צ'נג קונג, מיקרוסקופ קונפוקלי שלהם פוטון מרובה.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
Material
בקר סרום אלבומין ( BSA)Cyrusbioscience (טאיפיי, טייוואן)101-9048-46-8
Bouin's FluidMCC (תאגיד כימיקלים רפואיים)/POISON456-A-1GL
CFSE Proliferation Dyeebiosciences65-0850-85שם מלא: Carboxyfluorescein succinimidyl ester
Dulbecco's Modified Eagle Media (DMEM) (Gibco)ThermoFisher Scientific12100-061
חומצה אתילנדיאמינטטראצטית (EDTA)Cyrusbioscience (טאיפיי, טייוואן)101-6381-92-6לתמיסת טריפסין-EDTA מוכנה (ריכוז סופי: 0.53 מ"מ) 
סרום בקר עוברי (FBS)(Gibco) ThermoFisher Scientific10437-028
קרצינומה של ריאות לואיס (LLC)ATCC, מנסס, וירג'יניה, ארה"בCRL-1642
L-גלוטמין, USP (Gibco)ThermoFisher Scientific21051-024
אשלגן כלורי (KCl)Cyrusbioscience (טאיפיי, טייוואן)101-7447-40-7עבור PBS מוכן 1X (ריכוז סופי: 2.7 מ"מ)
אשלגן פוספט מונו-בסיסי (KH2PO4)Cyrusbioscience (טאיפיי, טייוואן)101-7778-77-0עבור 1X PBS מוכן (ריכוז סופי: 1.8 מ"מ)
נתרן כלוריד (NaCl)Cyrusbioscience (טאיפיי, טייוואן)101-7647-14-5עבור 1X PBS מוכן (ריכוז סופי: 137 מ"מ)
נתרן פוספט דו-בסיסי (Na2HPO4)Cyrusbioscience (טאיפיי, טייוואן)101-10039-32-4עבור 1X PBS מוכן (ריכוז סופי: 10 מ"מ)Trypan
BlueSigma AldrichT6146תערובת של 0.5 גרם עם 100 מ"ל 1X PBS
TrypsinSigma AldrichT4799לתמיסת טריפסין-EDTA מוכנה (ריכוז סופי: 5 גרם/ליטר)
Zoletil 50Virbacלדילול עם 1X PBS 
שםהחברהCatalog NumberComments
Equipment
Compact שולחן צנטריפוגה 2420KUBOTA Co.צלחת תרבות 2420
(6 ס"מ)Wuxi NEST Biotechnology Co.
מזרק חד פעמי (עם מחט)Perfect Medical Industry Co.24 גרם/3 ס"מ;3 מ"ל & 26 גרם/0.5 ס"מ;1 מ"ל
מיקסר מקצהלקצה C.T.I YOUNG CHENNTS-20לשחזור תאים תלויים 
FACSCalibur (FACS)BD biosciences
מלקחייםדימדה10.102.14
פורמה חום ישיר CO2 חממתThermo Fisher Scientific Inc.HEPA CLASS 100
רסנון עכבר (ריסון גלילי 15-30 גרם)סטולטינג51338
מיקרוסקופ קונפוקלי מולטיפוטון BX61WI
נויבאוארMarienfeld-Superior640010
מספריים כירורגייםDimeda08.370.11
תפרים כירורגיים UNIK SURGICAL PROTURES MFG. CO.מס' 0034משי קלוע שחור; לא נספג (25 יארד; U.S.P. 4/0)
צינור מיקרוצנטריפוגה 1.5 מ"לWuxi NEST Biotechnology Co.
צינור גריינר 15 מ"ל גריינרביו-וואן188271
705001 תא ספירת נויבאואר FV1000MPE 615001

מקורות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Massague, J., Obenauf, A. C. Metastatic colonization by circulating tumour cells. Nature. 529 (7586), 298-306 (2016).
  2. Lambert, A. W., Pattabiraman, D. R., Weinberg, R. A. Emerging Biological Principles of Metastasis. Cell. 168 (4), 670-691 (2017).
  3. Mohme, M., Riethdorf, S., Pantel, K. Circulating and disseminated tumour cells - mechanisms of immune surveillance and escape. Nat Rev Clin Oncol. 14 (3), 155-167 (2017).
  4. Steinert, G., et al. Immune escape and survival mechanisms in circulating tumor cells of colorectal cancer. Cancer Res. 74 (6), 1694-1704 (2014).
  5. Mahauad-Fernandez, W. D., Okeoma, C. M. Cysteine-linked dimerization of BST-2 confers anoikis resistance to breast cancer cells by negating proapoptotic activities to promote tumor cell survival and growth. Cell Death Dis. 8 (3), e2687(2017).
  6. Maheswaran, S., Haber, D. A. Circulating tumor cells: a window into cancer biology and metastasis. Curr Opin Genet Dev. 20 (1), 96-99 (2010).
  7. Yu, M., et al. RNA sequencing of pancreatic circulating tumour cells implicates WNT signalling in metastasis. Nature. 487 (7408), 510-513 (2012).
  8. Adams, D. L., et al. Mitosis in circulating tumor cells stratifies highly aggressive breast carcinomas. Breast Cancer Res. 18 (1), 44(2016).
  9. Baccelli, I., et al. Identification of a population of blood circulating tumor cells from breast cancer patients that initiates metastasis in a xenograft assay. Nat Biotechnol. 31 (6), 539-544 (2013).
  10. Malladi, S., et al. Metastatic Latency and Immune Evasion through Autocrine Inhibition of WNT. Cell. 165 (1), 45-60 (2016).
  11. Spiegel, A., et al. Neutrophils Suppress Intraluminal NK Cell-Mediated Tumor Cell Clearance and Enhance Extravasation of Disseminated Carcinoma Cells. Cancer Discov. 6 (6), 630-649 (2016).
  12. Pattabiraman, D. R., et al. Activation of PKA leads to mesenchymal-to-epithelial transition and loss of tumor-initiating ability. Science. 351 (6277), aad3680(2016).
  13. van der Weyden, L., et al. Genome-wide in vivo screen identifies novel host regulators of metastatic colonization. Nature. 541 (7636), 233-236 (2017).
  14. Obenauf, A. C., et al. Therapy-induced tumour secretomes promote resistance and tumour progression. Nature. 520 (7547), 368-372 (2015).
  15. Genovese, G., et al. Synthetic vulnerabilities of mesenchymal subpopulations in pancreatic cancer. Nature. 542 (7641), 362-366 (2017).
  16. von Horsten, S., et al. Stereological quantification of carboxyfluorescein-labeled rat lung metastasis: a new method for the assessment of natural killer cell activity and tumor adhesion in vivo and in situ. J Immunol Methods. 239 (1-2), 25-34 (2000).
  17. Reymond, N., et al. Cdc42 promotes transendothelial migration of cancer cells through beta1 integrin. J Cell Biol. 199 (4), 653-668 (2012).
  18. Cheng, H. C., Abdel-Ghany, M., Elble, R. C., Pauli, B. U. Lung endothelial dipeptidyl peptidase IV promotes adhesion and metastasis of rat breast cancer cells via tumor cell surface-associated fibronectin. J Biol Chem. 273 (37), 24207-24215 (1998).
  19. Huang, L., et al. Protein kinase Cepsilon mediates polymeric fibronectin assembly on the surface of blood-borne rat breast cancer cells to promote pulmonary metastasis. J Biol Chem. 283 (12), 7616-7627 (2008).
  20. Chang, Y. H., et al. Secretomic analysis identifies alpha-1 antitrypsin (A1AT) as a required protein in cancer cell migration, invasion, and pericellular fibronectin assembly for facilitating lung colonization of lung adenocarcinoma cells. Mol Cell Proteomics. 11 (11), 1320-1339 (2012).
  21. Wang, Y. J., et al. Pterostilbene prevents AKT-ERK axis-mediated polymerization of surface fibronectin on suspended lung cancer cells independently of apoptosis and suppresses metastasis. J Hematol Oncol. 10 (1), 72(2017).
  22. Cheng, H. C., Abdel-Ghany, M., Pauli, B. U. A novel consensus motif in fibronectin mediates dipeptidyl peptidase IV adhesion and metastasis. J Biol Chem. 278 (27), 24600-24607 (2003).
  23. Hsu, Y. Y., et al. Thrombomodulin is an ezrin-interacting protein that controls epithelial morphology and promotes collective cell migration. FASEB J. 26 (8), 3440-3452 (2012).
  24. Arlt, M. J., Born, W., Fuchs, B. Improved visualization of lung metastases at single cell resolution in mice by combined in-situ perfusion of lung tissue and X-Gal staining of lacZ-tagged tumor cells. J Vis Exp. (66), e4162(2012).
  25. Shi, Y., Parhar, R. S., Zou, M., Al-Mohanna, F. A., Paterson, M. C. Gene therapy of melanoma pulmonary metastasis by intramuscular injection of plasmid DNA encoding tissue inhibitor of metalloproteinases-1. Cancer Gene Ther. 9 (2), 126-132 (2002).
  26. Parish, C. R. Fluorescent dyes for lymphocyte migration and proliferation studies. Immunol Cell Biol. 77 (6), 499-508 (1999).
  27. Quah, B. J., Warren, H. S., Parish, C. R. Monitoring lymphocyte proliferation in vitro and in vivo with the intracellular fluorescent dye carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester. Nat Protoc. 2 (9), 2049-2056 (2007).
  28. Migone, F. F., et al. In vivo imaging reveals an essential role of vasoconstriction in rupture of the ovarian follicle at ovulation. Proc Natl Acad Sci U S A. 113 (8), 2294-2299 (2016).
  29. Itkin, T., et al. Distinct bone marrow blood vessels differentially regulate haematopoiesis. Nature. 532 (7599), 323-328 (2016).
  30. Jiang, M., Qin, C., Han, M. Primary breast cancer induces pulmonary vascular hyperpermeability and promotes metastasis via the VEGF-PKC pathway. Mol Carcinog. 55 (6), 1087-1095 (2016).
  31. Aceto, N., et al. Circulating tumor cell clusters are oligoclonal precursors of breast cancer metastasis. Cell. 158 (5), 1110-1122 (2014).
  32. Zheng, Y., et al. Expression of beta-globin by cancer cells promotes cell survival during blood-borne dissemination. Nat Commun. 8, 14344(2017).
  33. Chen, X., et al. Retinoic acid facilitates inactivated transmissible gastroenteritis virus induction of CD8(+) T-cell migration to the porcine gut. Sci Rep. 6, 24152(2016).
  34. Saranchova, I., et al. Discovery of a Metastatic Immune Escape Mechanism Initiated by the Loss of Expression of the Tumour Biomarker Interleukin-33. Sci Rep. 6, 30555(2016).
  35. Ahmed, M., et al. An Osteopontin/CD44 Axis in RhoGDI2-Mediated Metastasis Suppression. Cancer Cell. 30 (3), 432-443 (2016).
  36. Hoffman, R. M. In vivo imaging of metastatic cancer with fluorescent proteins. Cell Death Differ. 9 (8), 786-789 (2002).
  37. Mendoza, A., et al. Modeling metastasis biology and therapy in real time in the mouse lung. J Clin Invest. 120 (8), 2979-2988 (2010).
  38. Meacham, C. E., Morrison, S. J. Tumour heterogeneity and cancer cell plasticity. Nature. 501 (7467), 328-337 (2013).
  39. Wagenblast, E., et al. A model of breast cancer heterogeneity reveals vascular mimicry as a driver of metastasis. Nature. 520 (7547), 358-362 (2015).
  40. Nguyen, D. X., Bos, P. D., Massague, J. Metastasis: from dissemination to organ-specific colonization. Nat Rev Cancer. 9 (4), 274-284 (2009).
  41. Ragelle, H., et al. Chitosan nanoparticles for siRNA delivery: optimizing formulation to increase stability and efficiency. J Control Release. 176, 54-63 (2014).
  42. Chu, V. T., et al. Increasing the efficiency of homology-directed repair for CRISPR-Cas9-induced precise gene editing in mammalian cells. Nat Biotechnol. 33 (5), 543-548 (2015).
  43. Wirtz, D., Konstantopoulos, K., Searson, P. C. The physics of cancer: the role of physical interactions and mechanical forces in metastasis. Nat Rev Cancer. 11 (7), 512-522 (2011).
  44. Joyce, J. A., Pollard, J. W. Microenvironmental regulation of metastasis. Nat Rev Cancer. 9 (4), 239-252 (2009).
  45. Sanchez-Laorden, B., et al. BRAF inhibitors induce metastasis in RAS mutant or inhibitor-resistant melanoma cells by reactivating MEK and ERK signaling. Sci Signal. 7 (318), ra30(2014).
  46. Torchiaro, E., et al. Peritoneal and hematogenous metastases of ovarian cancer cells are both controlled by the p90RSK through a self-reinforcing cell autonomous mechanism. Oncotarget. 7 (1), 712-728 (2016).
  47. Wan, J., et al. Establishment of monoclonal HCC cell lines with organ site-specific tropisms. BMC Cancer. 15, 678(2015).
  48. Ye, Y., Liu, S., Wu, C., Sun, Z. TGFbeta modulates inflammatory cytokines and growth factors to create premetastatic microenvironment and stimulate lung metastasis. J Mol Histol. 46 (4-5), 365-375 (2015).
  49. Morales, M., et al. RARRES3 suppresses breast cancer lung metastasis by regulating adhesion and differentiation. EMBO Mol Med. 6 (7), 865-881 (2014).
  50. Stone, J. P., et al. Mechanical removal of dendritic cell-generating non-classical monocytes via ex vivo lung perfusion. J Heart Lung Transplant. 33 (8), 864-869 (2014).
  51. Vettorazzi, S., et al. Glucocorticoids limit acute lung inflammation in concert with inflammatory stimuli by induction of SphK1. Nat Commun. 6, 7796(2015).
  52. Urade, Y., Yoshida, R., Kitamura, H., Hayaishi, O. Induction of indoleamine 2,3-dioxygenase in alveolar interstitial cells of mouse lung by bacterial lipopolysaccharide. J Biol Chem. 258 (10), 6621-6627 (1983).
  53. Hong, G., et al. Through-skull fluorescence imaging of the brain in a new near-infrared window. Nat Photonics. 8 (9), 723-730 (2014).
  54. Liu, Q., Guo, B., Rao, Z., Zhang, B., Gong, J. R. Strong two-photon-induced fluorescence from photostable, biocompatible nitrogen-doped graphene quantum dots for cellular and deep-tissue imaging. Nano Lett. 13 (6), 2436-2441 (2013).
  55. Peti-Peterdi, J., Burford, J. L., Hackl, M. J. The first decade of using multiphoton microscopy for high-power kidney imaging. Am J Physiol Renal Physiol. 302 (2), F227-F233 (2012).
  56. Duda, D. G., et al. Malignant cells facilitate lung metastasis by bringing their own soil. Proc Natl Acad Sci U S A. 107 (50), 21677-21682 (2010).
  57. Gupta, G. P., et al. Mediators of vascular remodelling co-opted for sequential steps in lung metastasis. Nature. 446 (7137), 765-770 (2007).
  58. Kosaka, N., et al. Neutral sphingomyelinase 2 (nSMase2)-dependent exosomal transfer of angiogenic microRNAs regulate cancer cell metastasis. J Biol Chem. 288 (15), 10849-10859 (2013).
  59. Hoshino, A., et al. Tumour exosome integrins determine organotropic metastasis. Nature. 527 (7578), 329-335 (2015).
  60. Jaskelioff, M., et al. Telomerase deficiency and telomere dysfunction inhibit mammary tumors induced by polyomavirus middle T oncogene. Oncogene. 28 (48), 4225-4236 (2009).
  61. Si, L. L., Lv, L., Zhou, W. H., Hu, W. D. Establishment and identification of human primary lung cancer cell culture in vitro. Int J Clin Exp Pathol. 8 (6), 6540-6546 (2015).
  62. Weng, D., et al. Metastasis is an early event in mouse mammary carcinomas and is associated with cells bearing stem cell markers. Breast Cancer Res. 14 (1), R18(2012).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

CFSEC57BL 6

מאמרים קשורים