הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

מהירה In Vivo ובחינת יכולות הדור של לימפוציטים T ציטוטוקסיות של אדג'וונט לפיתוח חיסון

7.8K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/57401

⸱

19 ביוני 2018

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Vaccinology and Applied Microbiology, Helmholtz Centre for Infection Research

במאמר זה

סיכום

אנו מציגים כאן יישום טכניקה סטנדרטית אימונולוגי (CFSE צבעונית OT-אני התפשטות) נועד לפקח במהירות בתיווך אדג'וונט ציטוטוקסיות לימפוציטים-T (CTL) דור ויוו. זו הערכה מהירה של CTL קיבולות שימושית עבור פיתוח חיסונים מניעתי נגד פתוגנים תאיים, כמו גם חיסונים נוגדי סרטן טיפולית.

תקציר

ההערכה של יחידת המשנה מודרני חיסונים מגלה כי הדור של נטרול נוגדנים היא חשובה אך אינה מספקת עבור אדג'וונט הבחירה. לכן, adjuvants עם יכולות חיסונית-מופחתים ההורמונאלית והן הסלולר מסוגלים לקדם ציטוטוקסיים התגובות לימפוציטים (CTL) T נחוצים בדחיפות. לפיכך, ניטור נאמן של מועמדים אדג'וונט זירוז קרוס-לקרקע ולשפר לאחר מכן CTL דור מייצג שלב חיוני בפיתוח החיסון. כאן אנו מציגים יישום שיטה המשתמשת SIINFEKL ספציפיים (OT-אני) ותאי T כדי לפקח על הצלב-המצגת של ה הדגם אנטיגן אובלבומין (פשוט) ויוו בנוכחות המועמדים אדג'וונט שונים. שיטה זו מייצגת בדיקה מהירה כדי לבחור adjuvants עם היכולות קרוס-לקרקע הטוב ביותר. ההתפשטות של CD8+ T תאים הסימן החשוב ביותר של צלב-לקרקע, זה גם נחשב לתאם אדג'וונט-induced קרוס-מצגת. תכונה זו ניתן להעריך באיברים חיסוניים שונים כמו הלימפה והטחול. היקף הדור CTL יכול גם להיות במעקב, ובכך לתת תובנות על טבע מקומי (ניקוז הלימפה בעיקר) או תגובה מערכתית (בלוטות הלימפה רחוק ו/או הטחול). טכניקה זו נוסף מאפשר שינויים מרובים עבור בדיקות סמים יכול לעכב מסלולים קרוס-מצגת מסוימת, מציעה גם את האפשרות שישמש זנים שונים של עכברים מהונדסים קונבנציונאלי. לסיכום, היישום אנחנו מציגים כאן יהיה שימושי עבור מעבדות חיסון תעשייה או אקדמיה לפתח או שינוי כימי adjuvants חיסון למחקר ופיתוח.

מבוא

לימפוציטים מסוג T ציטוטוקסיות (CTL) גרימת חיסונים הם המפתח התערבויות טיפוליות אשר פותחו כדי להילחם סוגים מסוימים של סרטן1. CTL חשובים גם עבור חיסונים מניעתי נגד פתוגנים תאיים2. יתר על כן, CTL הם אחד כמה המערכת החיסונית מנגנוני ההגנה באופן פונקציונלי פעיל בקרב אוכלוסיות סיכון כגון neonates3,4 למי גם תלוי CTL להילחם זיהומים בתחילת החיים5. בהקשר זה, חיסונים נגד הנשימה Syncytial וירוס (RSV) שפותחו עם אדג'וונט זה לא זכה CTL תגובות (אלום) הביא כישלון מוחלט של החיסון המוביל לסיבוכים רציניים על זיהומים אצל תינוקות6. אלה תופעות שליליות של החיסון יכול להיות הפוך על ידי CD8+ תא T בתגובה7. בעבר הראו כי ציטוקינים הראשי (מסוג האינטרפרונים) שהפיק קצת ממריץ של אינטרפרון גנים (סטינג) אגוניסטים חיוניים התגובות CTL שנוצרו על-ידי אלה adjuvants8, בין השאר על ידי מדידת התפשטות OT-אני T תאים לאחר חיסון ושימוש תוצאות אלו כפי מידת CTL גרימת יכולות שנצפתה מורחב לוחות זמנים חיסון9. מידת ההתפשטות של OT-אני CD8+ T תאי עכבר הנמען של C57BL/6 פראי סוג (WT) על ידי carboxyfluorescein succinimidyl אסתר (CFSE) לצבוע הדילול הוא שערוך חזקים של יכולות אדג'וונט של חיסון כדי ליצור קרוס-לקרקע של SIINFEKL, (פפטיד חיסונית-הדומיננטי של אובלבומין, ביצית). וריאציות של טכניקה זו נמצאים בשימוש נרחב עבור ההערכה של התפשטות OT-אני CD8+ ו CD4 OT-II+ T תאים. לדוגמה, שהשתמשו בה בהיעדרו של ציטוקינים שנבחר (KO עכברים) או כדי למדוד את יעילות החיסון לאחר אנטיגן האחזור ב WT בעלי חיים. אנחנו בדימיון פרוטוקול קצר (4 ימים הניסוי) שבו לאחר העברה פסיבית של שהוכתמו CFSE OT-אני CD8+ T תאים, של חיסונים (ש) תת עורית בהיקף של מנה אחת של 50 µg של ביצית ללא אנדוטוקסין בתוספת מבחן adjuvants מנוהל (איור 1). בצע את התוצאות 48 שעות לאחר החיסון מספק הוכחה אמינה של הקיבולת של אדג'וונט ליצירת רשימת אישורים אמינים תגובות. על ידי אסטרטגיה זו, זה אפשרי להעריך את עוצמת התגובה החיסונית המקומית הצומת לימפה המנקזים לאחר חיסון, כמו גם היקף התגובה על ידי מדידת הפעילות CTL הטחול (או מרוחק בלוטות הלימפה).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

כל העכברים השתמשו במחקר זה היו רקע C57BL/6. כל החיות הוחזקו בתנאים ללא הפתוגן. כל הניסויים בוצעו על פי נורמטיבית של החוק הגרמני להגנת בעלי חיים (TierSchG BGBl. אני S 1105; 25.05.1998), אושרו על ידי ועדת סקסוניה התחתונה על אתיקה לניסויים בבעלי חיים, משרדי המדינה (התחתון סקסוניה המדינה במשרד של הגנת הצרכן ובטיחות מזון), תחת מספר היתר 33.4-42502-04-13/1281 ו- 162280.

1. CFSE מכתים של OT-אני T תאים והעברת המאמצת

הערה: OT-אני עכברים הם חיות transgenically שנוצר המבטאים קולטן תא T (TCR) α קבוע, שרשראות β יחד לזהות את פפטיד חיסונית-הדומיננטי של ביצית, SIINFEKL10,11. כתוצאה מכך, עכברים אלה יש מספר גבוה במידה ניכרת של CD8 ספציפי SIINFEKL+ T תאים (97%)12 בהשוואה עכברים רגילים או חוסנו ביצית (≤ 1%)13.

  1. בידוד של CD8 למעקב+ T תאים מחלון OT-אני עכברים מביע אלל לימפוציטים-T ספציפי Thy1 (Thy1.1):
    1. המתת חסד בת 6-9 שבועות OT-אני עכברים באמצעות אינהלציה2 CO ואחריו נקע בצוואר הרחם14. לנתח את הטחול ובלוטות הלימפה העיקרי (המפשעתית, בבית השחי, צוואר הרחם זוגות בלבד) על ידי חיתוך העור עם מספריים כירורגיים, ניתוק את העור מהגוף בעזרת צבת כירורגי, מלקחיים ומניחים פטרי (60 x 15 מ מ) המכילים כל אחד 100 מיקרומטר נקבובית גביע רשת לשחרור תא וליטוש רקמות.
    2. לשמור על צלחות פטרי (כל אחד עם רשת שינוי אחת גביע) ב- 3-5 מ ל בינונית RPMI מלאה (RPMI 1640, 10% v/v FCS, 100 פניצילין U/mL, סטרפטומיצין µg 50/mL) שמרה על קרח.
    3. מועכים את האיברים בעזרת פומפה מזרק או מכשיר דומה סטרילי (חיתוך מוקדמת לא נדרש) לאסוף את התליה תא בודד שנוצר צינורות צנטריפוגה 15 מ"ל.
    4. Centrifuge התליה תא ב 300 גרם x 10 דקות ב 4 º C. למחוק את תגובת שיקוע. לשטוף את התאים ב- 10 מ"ל של PBS קר על ידי צנטריפוגה ואת lyse של אריתרוציטים מן הטחול על ידי השעיית מחדש בגדר ב 1 mL/טחול מאגר אמוניום כלוריד (מאגר ACK, זמינים מסחרית). דגירה התאים 1.5 דקות בקרח, לאחר מכן לשטוף את התאים עם 10 מ"ל של PBS קר על ידי צנטריפוגה (כפי).
    5. מחדש להשעות את צניפה בצינור אותו ב 1 מ"ל של PBS (pH 7.2) המכילה 5% עוברית שור נסיוב לבידוד מגנטי.
  2. כדי לבצע בידוד מגנטי, להמשיך הבחירה שלילי של CD8+ T תאים באמצעות ערכת בידוד מגנטי בהתאם להוראות היצרן או לפרסם פרוטוקולים15.
  3. כדי לבצע CFSE מכתים, קודם לספור את מספר CD8+ T תאים המתקבל OT-אני עכברים באמצעות מונה הניתן תא אוטומטיות (מונה חלקיקים). כתם 1-5 x 107 תאים/מ ל נפח של 1-5 מ עם 5 מיקרומטר CFSE ב- PBS במשך 7 דקות ב 37 מעלות צלזיוס, מוגן מפני אור בצינור 15-ml בז.
  4. להרוות את ההכתמה CFSE על-ידי הוספת נפח זהה (1:1) סרום שור עוברית לתאי ולאחר תקופת דגירה אותם של נוספים 7 דקות ב 37 מעלות צלזיוס מוגן מפני אור. לשטוף את התאים עם 10 מ"ל של PBS פעמיים.
  5. לספור את התאים באמצעות מונה הניתן תא אוטומטית. להגדיר את מספר תא ל 3-5 x 107 תאים למ"ל של PBS כדי להזריק 3-5 x 106 תאים/עכבר ב 100 µL דרך הווריד (עירוי) דרך הווריד של הזנב.
  6. כדי לבצע זריקות וריד הזנב, לשתק העכברים ב restrainers המתאים. לחמם את אזור הגב ואת הזנב של עכברים להיות מוזרק באמצעות מנורת אור אדום, בין 20-25 ס"מ מן העכברים למשך 1-3 דקות לאפשר התרחבות וריד הזנב.
    הערה: פעולה זו מסייעת להקל על הווריד זיהוי וניהול של התליה תא.
  7. להבטיח (עם היד ממוקם בין העכברים. ואת המנורה) שזה לא יותר מדי חם עבור העכברים והמשך כאשר העורקים הזנב נראה בבירור, הזרקת. להזריק את התאים לתוך הווריד של הזנב לרוחב או הגבי באמצעות על מזרק 1 מ"ל עם מחט בקוטר 2516.

2. חיסונים (ללא אנדו פשוט + /-אדג'וונט)

  1. הצב והעכברים מושתלים עם OT-תאי (שלב 1.7, איור 1) תא הרדמה ולפקח איזופלוריין חמצן על ידי מכונת הרדמה14.
  2. כאשר העכבר ישן לגמרי תחת הרדמה, להוציא את זה מהתא ולגלח את הפרווה של העכבר על האזור מעל העכוז השטחי (לרוחב הגב התחתון) באמצעות מכונת קיצוץ שיער חשמלי, על מנת לבצע זריקה נקי עם נוף יפה של האזור יישום.
  3. מזריקים µL 50 של החיסון, ספורטינג באזור מגולח באמצעות מחט 25-מד.

3. בידוד של לימפוציטים, צביעת לניתוח Cytometry זרימה

  1. בידוד של לימפוציטים, splenocytes
    1. המתת חסד העכברים לחסן באמצעות אינהלציה2 CO ואחריו נקע בצוואר הרחם.
    2. לחלץ את ניקוז ומרוחק הלימפה והטחול ומניחים נפרד פטרי המכילות 100 מיקרומטר נקבובית רשת כוסות לשחרור תא וליטוש רקמות. בצע את שלבים 1.1.2 דרך 1.1.3.
    3. Decant את תגובת שיקוע לאחר צנטריפוגה, מחדש להשעות את כדורי תאים באותו אמצעי אחסון של שריד PBS (כ- 100 µL).
  2. צביעת לניתוח cytometry זרימה
    1. בשפופרת צנטרפוגה 15-mL להכין את תערובת הבסיס המכיל את הנוגדנים מכתימים בריכוזים מתואר טבלה 1, ובכך מניב 2 x מיקס מכתימים מרוכז. להכין כמות גדולה מספיק של מיקס מאסטר לי µL 100 לכל דגימה. לערבב את התאים ואת המיקס מאסטר 1:1, דגירה זה ב 4 מעלות צלזיוס למשך 30 דקות.
      הערה: אמצעי האחסון מכתימים הסופי עבור דגימה צריך להיות µL 200 (100 µL של התא µL צנפה +100 של מיקס מאסטר נוגדנים).
    2. לשטוף את התאים פעמיים על ידי צנטריפוגה כפי שמתואר 1.1.3, הוספת 10 מ"ל ל- PBS, פעמיים.
    3. מחדש להשעות את התאים ויטראז'ים ב 0.5-1 מ של PBS עבור הרכישה והעברת ההשעיה כדי זרימת cytometer צינורות. תמיד שומרים את הדגימות על קרח, מוגן מפני אור.

4. דנ

  1. תמיד לסנן מראש את דגימות תאים באמצעות 70-100 מיקרומטר מסננים.
  2. היכונו יחיד פקדים פיצוי מכתימים fluorophores מפורט בטבלה 1 (חרוזים או תאים).
    הערה: הפיצוי צריך להיות הופיעה cytometer או ניתוח תוכנה17,18,19 וחלים עליהם כל הדגימות.
  3. בצע את האסטרטגיה המגביל מתואר באיור2. בקצרה, שער אוכלוסיות פיזור קדימה גובה לעומת אזור פיזור קדמי (איור 2 א), ושוב לצד פיזור רחב לעומת פיזור מצידו (הסוכן המיוחד, איור 2B) כדי לא לכלול doublets.
  4. שער האוכלוסייה מ 2B איור על ידי התוויית BV 650 (auto-זריחה) לעומת FITC (CFSE) כדי להפלות CFSE נכון מוכתם תאים מתאי אוטומטי-פלורסנט גבוהה. כולל חרוזים או תאים צבעונית עם נוגדן מצומדת אל BV 650 לפקדי פיצוי. זו עלילה (איור 2C) של 650 BV לעומת FITC משמש לשער בשטחים הכבושים-אני CFSE צבעונית תאים.
  5. שער האוכלוסייה מאיור 2 C עבור Pe-Cy7 (Thy1.1 - CD90.1-) לעומת APC (CD8) כדי להבחין בין תאים שמקורם התורם לעומת עכברים הנמען.
    הערה: תאים שמקורם בתנ ך-אני תורם עכברים הם Thy1.1+ (CD90.1), ואילו (C57BL/6, הנמען) תאים WT נגזר עכברים הם Thy1.2+ (CD90.2) (איור דו-ממדי). יש כמה מעבדות OT-אני עכברים Thy1.2 רקע, WT (C57BL/6) ב- Thy1.1. במקרה זה אתה חייב להשתמש נוגדן נגד Thy1.2 OT-אני תא gating.
  6. מחדש שער CD8+ תאים Thy1.1+ אוכלוסייה על-ידי התוויית אותה על שער הכוללת BV 450 (CD4) לעומת APC (CD8) (2E איור).
  7. להציג את האוכלוסייה מגודרת ב איור 2E באמצעות תצוגה היסטוגרמה של CD8+ תאים מציג CFSE (FITC, ערוץ 530/15 - לייזר כחול-), שער האוכלוסייה proliferated על-ידי הכללת בעוצמות מ-102 עד רמת איפה השליטה המלאה שאוכלוסיות (עוצמות ~ 105, בהתאם היעילות של ההכתמה CFSE וההגדרה מתח על cytometer הזרימה) (איור 2F).
  8. לעשות שער נוסף (לא מוצג באיור 2) ההתוויה FITC לעומת L/D סמן (450/20 ערוצים, UV לייזר) על מנת להעריך תאים מתים במקביל הערכת התפשטות.
  9. רוכשים אירועים לפחות 5000 עבור הפקדים פיצוי ואירועים 10.000 (שער E, איור 2) מדגימות ב cytometer זרימה. הפעל את cytometer בעת זרימה נמוכה או בינונית (לא יעלה על המחירים זרימה של 20.000 אירועים/s).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

על מנת לבדוק את הטיפולים באמצעות שילוב שונה של adjuvants (ADJ1 ו- ADJ2), אנחנו שהערכת את קיבולת דור CTL על ידי מדידת התפשטות הועבר adoptively OT-אני CD8+ T תאים על-ידי cytometry זרימה (איור 2). בשביל זה, אנחנו קודם לכן מוכתם תאים מבודדים ניקוז הלימפה והטחול (טבלה 1). על ידי מדידת ההתפשטות של CD8+ T תאי הלימפה והטחול, הצלחנו לאמת גבוהה יותר CTL דור קיבולת של ADJ2 ניקוז הלימפה (איור 3) בהשוואה...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

חיסונים מודרניים הם אידיאלי composedof אנטיגן מטוהרים adjuvants, עם תוספת אפשרית של מערכת המסירה כמו ליפוזומים, חלקיקים דמויי וירוס, חלקיקים או וקטורים בשידור חי. היבט מרכזי בעת עיצוב חיסון היא לבחור את אדג'וונט הנכון בהתאם לצרכים קליניים. חלק הטווח עשוי להיות כרוך העדפה ההורמונאלית לעומת התגובה החיסונית סלולריים (או שניהם), בחירתו של מקומי לעומת לתגובה החיסונית מערכתית (או שניהם), ואת הסוג של זיכרון החיסון צריך להקרין באוכלוסיית היעד. היבט מכריע אחד אדג'וונט ההערכה היא לקבוע במהירות את יכולתה ליצור רשימת האישורים האמיני...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

המחברים אין לחשוף.

תודות

אנחנו חבים שלנו סגל: U. Bröder, ה Shkarlet, שעזר לנו במהלך הליכי ניסיוני. עבודה זו מומן בחלקו על ידי האיחוד האירופי (UniVax, חוזה מס 601738 ו- TRANSVAC2, חוזה מס 730964), ומענקים מענק האגודה הלמהולץ (חי-ד ר רודי). מקורות המימון לא להשפיע על המחקר, עיצוב, דור של כתב היד או להגיש את זה לפרסום.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
BD LSR Fortessa Cell AnalyzerBDהזמנה מיוחדתציטומטר זרימה
CFSEבדיקות מולקולריותC34554התפשטות צבע
MojoSort עכבר CD8 T ערכת בידוד תאיBiolegend480007חרוזי בידוד מגנטי ונוגדנים לבחירה שלילית של תאי CD8 T שלא נגעו
ערכת כתמי תאים מתים כחולים חיים / מתים הניתנת לתיקון, לעירור UVבדיקות מולקולריותL23105סמן תאים מתים
CD90.1 (Thy-1.1) נוגדן חד שבטי (HIS51), PE-Cyanine7eBioscience25-0900-82נוגדן
APC נגד עכבר CD8a נוגדןBioLegend100712נוגדן
BV421 נוגדן נגד עכבר CD4BD740007נוגדן
Z2 קולטר מנתח ספירת חלקיקים וגודלבקמן קולטר9914591DAמונה תאים. Z2 מונה חלקיקים/תאים אוטומטי
EndoGrade Ovalbumin (10 מ"ג)Hyglos (גרמניה)321000Ovalbumin ללא אנדוטוקסין נבדק.
מסננת תאים 100&מיקרו; m ניילוןקורנינג352360מסננת תאים (100 ומיקרו; כוסות רשת נקבוביות).
בקבוקונים לדוגמאבקמן קולטר899366014בקבוקונים לדוגמה עבור מונה אוטומטי Z2
C57BL/6 עכברים (CD90.2)הרלן (רוסדורף, גרמניה)החברה היא כעת Envigo
OT-I (רקע C57BL/6, CD90.1)הרלן (רוסדורף, גרמניה)הכלאה במתקן בעלי החיים שלנו. החברה ממנה התבקשו כעת צינורות Envigo
FACSפישר (קורנינג)14-959-5צינורות פוליסטירן עגולים פלקון
פלקון 15 מ"ל צינורותפישר (קורנינג)05-527-90צינורות צנטריפוגה חרוטית פלקון 15 מ"ל
PBS (500 מ"ל)פישר (גיבקו)20-012-027ג'יבקו PBS (מי מלח פוספטים), pH 7.2
מנורה אדומה (מנורת חימום)דירק רוסמן GmbH (גרמניה)405096מנורת חימום פנימית (100 וואט)
IsoFlo (Isoflurane)Abbott Laboratories (ארה"ב)5260.04-05.חומר הרדמה איזופלורן (בקבוק 250 מ"ל).
מכונת הרדמה <חזקה>שולחנית/מכונת הרדמה ניידת עם בולם CO2הרדמה V3000PK Isoflurane שלParkland Scientific
RPMI 1640 בינוניGibco (מופץ על ידי ThermoFischer)11-875-093מדיום בסיס עם גלוטמין (500 מ"ל)
תמיסת אנטיביוטיקה Pen-Strept (Gibco)Gibco (מופץ על ידי ThermoFischer)15-140-148Gibco פניצילין-סטרפטומיצין (10,000 U/mL)
סרום בובין עוברי (Gibco)Gibco (מופץ על ידי ThermoFischer)10082147סרום בקר עוברי, מאושר, מושבת בחום, ממקור בארה"ב
מאגר ליזינג ACK (100 מ"ל)Gibco (מופץ על ידי ThermoFischer)A1049201מאגר ליזיס דם מלא אמוניום כלוריד (ACK), מתאים לליזה אריטרוציטים בתרחיפי טחול גם
צלחות פטרי מפלסטיקNunc (מופץ על ידי ThermoFischer)150340צלחת פטרי מפלסטיק 60 x 15 מ"מ,
מסנן גוש תאיםCellTrics (Sysmex)04-004-2317CellTrics® 50 μ M, סטרילי
בהם.מכונת . לא מטופל

מקורות

  1. Krishna, S., Anderson, K. S. T-Cell Epitope Discovery for Therapeutic Cancer Vaccines. Methods Mol Biol. 1403, 779-796 (2016).
  2. Pinchuk, I., et al. A CD8+ T cell heptaepitope minigene vaccine induces protective immunity against Chlamydia pneumoniae. Journal of immunology. 174, 5729-5739 (2005).
  3. Zhang, J., Silvestri, N., Whitton, J. L., Hassett, D. E. Neonates mount robust and protective adult-like CD8(+)-T-cell responses to DNA vaccines. Journal of virology. 76, 11911-11919 (2002).
  4. Marchant, A., et al. Mature CD8(+) T lymphocyte response to viral infection during fetal life. J Clin Invest. 111, 1747-1755 (2003).
  5. Simmons, C. P., et al. Mucosal delivery of a respiratory syncytial virus CTL peptide with enterotoxin-based adjuvants elicits protective, immunopathogenic, and immunoregulatory antiviral CD8+ T cell responses. Journal of immunology. 166, 1106-1113 (2001).
  6. Fulginiti, V. A., et al. Respiratory Virus Immunizationa Field Trial Of Two Inactivated Respiratory Virus Vaccines; An Aqueous Trivalent Paratnfluenza Virus Vaccine And An Alum-Precipitated Respiratory Syncytial Virus Vaccine1. American journal of epidemiology. 89, 435-448 (1969).
  7. Olson, M. R., Varga, S. M. CD8 T cells inhibit respiratory syncytial virus (RSV) vaccine-enhanced disease. Journal of immunology. 179, 5415-5424 (2007).
  8. Lirussi, D., et al. Type I IFN and not TNF, is Essential for Cyclic Di-nucleotide-elicited CTL by a Cytosolic Cross-presentation Pathway. EBioMedicine. 22, 100-111 (2017).
  9. Ebensen, T., et al. Bis-(3',5')-cyclic dimeric adenosine monophosphate: strong Th1/Th2/Th17 promoting mucosal adjuvant. Vaccine. 29, 5210-5220 (2011).
  10. Hogquist, K. A., et al. T cell receptor antagonist peptides induce positive selection. Cell. 76, 17-27 (1994).
  11. Clarke, S. R., et al. Characterization of the ovalbumin-specific TCR transgenic line OT-I: MHC elements for positive and negative selection. Immunology and cell biology. 78, 110-117 (2000).
  12. Topham, D. J., Castrucci, M. R., Wingo, F. S., Belz, G. T., Doherty, P. C. The role of antigen in the localization of naive, acutely activated, and memory CD8(+) T cells to the lung during influenza pneumonia. Journal of immunology. 167, 6983-6990 (2001).
  13. Le Bon, A., et al. Cross-priming of CD8+ T cells stimulated by virus-induced type I interferon. Nature immunology. 4, 1009-1015 (2003).
  14. Otto, K. The Laboratory Mouse. Bullock, G. , Academic Press. 555-569 (2004).
  15. Lim, J. F., Berger, H., Su, I. H. Isolation and Activation of Murine Lymphocytes. Journal of visualized experiments: JoVE. , (2016).
  16. Shimizu, S. The Laboratory Mouse. Bullock, G. , Academic Press. 527-542 (2004).
  17. Breton, G., Lee, J., Liu, K., Nussenzweig, M. C. Defining human dendritic cell progenitors by multiparametric flow cytometry. Nature protocols. 10, 1407-1422 (2015).
  18. Kaminski, D. A., Wei, C., Rosenberg, A. F., Lee, F. E. -H., Sanz, I. Multiparameter Flow Cytometry and Bioanalytics for B Cell Profiling in Systemic Lupus Erythematosus. Methods in molecular biology. 900, Clifton, N.J. 109-134 (2012).
  19. Bayer, J., Grunwald, D., Lambert, C., Mayol, J. F., Maynadie, M. Thematic workshop on fluorescence compensation settings in multicolor flow cytometry. Cytometry. Part B, Clinical cytometry. 72, 8-13 (2007).
  20. Newrzela, S., et al. T-cell receptor diversity prevents T-cell lymphoma development. Leukemia. 26, 2499-2507 (2012).
  21. Iwasaki, N., et al. Allergen endotoxins induce T-cell-dependent and non-IgE-mediated nasal hypersensitivity in mice. J Allergy Clin Immunol. 139, 258-268 (2017).
  22. Tsuchiya, K., Siddiqui, S., Risse, P. A., Hirota, N., Martin, J. G. The presence of LPS in OVA inhalations affects airway inflammation and AHR but not remodeling in a rodent model of asthma. American journal of physiology. Lung cellular and molecular physiology. , L54-L63 (2012).
  23. Burgdorf, S., Scholz, C., Kautz, A., Tampe, R., Kurts, C. Spatial and mechanistic separation of cross-presentation and endogenous antigen presentation. Nature. 9, 558-566 (2008).
  24. Last'ovicka, J., Budinsky, V., Spisek, R., Bartunkova, J. Assessment of lymphocyte proliferation: CFSE kills dividing cells and modulates expression of activation markers. Cellular immunology. , 79-85 (2009).
  25. Oelke, M., et al. Functional characterization of CD8(+) antigen-specific cytotoxic T lymphocytes after enrichment based on cytokine secretion: comparison with the MHC-tetramer technology. Scand J Immunol. 52, 544-549 (2000).
  26. Wang, W., Golding, B. The cytotoxic T lymphocyte response against a protein antigen does not decrease the antibody response to that antigen although antigen-pulsed B cells can be targets. Immunology letters. 100, 195-201 (2005).
  27. O'Sullivan, D., et al. Memory CD8(+) T cells use cell-intrinsic lipolysis to support the metabolic programming necessary for development. Immunity. 41, 75-88 (2014).
  28. Xu, H. C., et al. Type I interferon protects antiviral CD8+ T cells from NK cell cytotoxicity. Immunity. 40, 949-960 (2014).
  29. Volk, A., et al. Comparison of three humanized mouse models for adoptive T cell transfer. The journal of gene medicine. 14, 540-548 (2012).
  30. Safinia, N., et al. Humanized Mice as Preclinical Models in Transplantation. Methods Mol Biol. 1371, 177-196 (2016).
  31. Grover, A., et al. Humanized NOG mice as a model for tuberculosis vaccine-induced immunity: a comparative analysis with the mouse and guinea pig models of tuberculosis. Immunology. 152, 150-162 (2017).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

גלה מאמרים נוספים

הערכת עזרים חיסונייםתאי T מסוג OT1התרבות CFSEניתוח ציטומטריה זרימהבידוד קשרי לימפההכנת תאי טחולהעברה אדופטיבית של תאי Tאנטיגן אובלבומיןניטור הצגה צולבת
מהירה In Vivo ובחינת יכולות הדור של לימפוציטים T ציטוטוקסיות של אדג'וונט לפיתוח חיסון
צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.