הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

ניצול של אולטרסאונד מודרכת מכוון רקמות השרשה הסלולר להקמתה של גידול גרורתי רלוונטי מבחינה ביולוגית Xenografts

7.9K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/57558

⸱

25 במאי 2018

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Departments of Surgery, C.S Mott Children's and Women's Hospital, The University of Michigan Medical School, 2Departments of Pathology, C.S Mott Children's and Women's Hospital, The University of Michigan Medical School, 3Unit for Laboratory Animal Medicine, The University of Michigan Medical School, 4Departments of Radiology, C.S Mott Children's and Women's Hospital, The University of Michigan Medical School, 5Departments of Pediatrics, C.S Mott Children's and Women's Hospital, The University of Michigan Medical School

במאמר זה

סיכום

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לנצל מונחה אולטרה סאונד הזרקה של נוירובלסטומה (NB) ותאים של יואינג סרקומה (ES) (שהוקמה שורות תאים ותאים סרטניים נגזר החולה) באתרים הרלוונטיים ביולוגית ליצירת במודלים פרה אמין עבור סרטן מחקר.

תקציר

בדיקה פרה של טיפולים נגד סרטן מסתמכת על מודלים xenograft רלוונטי המחקים את נטיות מולדת של סרטן. היתרונות של דגמים סטנדרטיים האגף תת עורית כוללות הקלות פרוצדוראליות ואת היכולת התקדמות הגידול צג, התגובה ללא פולשני הדמיה. מודלים כאלה לעיתים קרובות אינם עקביים בניסויים קליניים translational, יש מוגבל המאפיינים הרלוונטיים ביולוגית עם נטייה נמוכה כדי לייצר גרורות, כפי שיש מחסור microenvironment מקורי. לשם השוואה, orthotopic דגמים xenograft באתרי גידול יליד הראו לחקות את microenvironment הגידול ואף לשכפל את מאפייני המחלה חשוב כגון התפשטות גרורתית מרוחקת. מודלים אלה דורשות לעתים קרובות ניתוחים מייגע עם תקופות זמן ושחזור הרדמה ממושכות. כדי לטפל בבעיה זו, סרטן חוקרים נעזרו לאחרונה הזרקת מונחה אולטרה סאונד טכניקות כדי ליצור מודלים xenograft סרטן לניסויים פרה, המאפשר הקמת מודלים מאתר מכוון רקמות מהיר ואמין. הדמיית אולטרה סאונד מספק גם שיטה לא פולשנית להערכת האורך של engraftment גידול וצמיחה. כאן, נתאר את שיטת להזרקה מונחה אולטרה סאונד של תאים סרטניים, ניצול בלוטת יותרת הכליה עבור NB ו- sub כליות כמוסה עבור ES. בגישה פולשנית זו גוברת על ניתוח פתוח מייגע ההשתלה של תאים סרטניים במיקומים רקמות ספציפיות עבור הצמיחה, גרורות, abates ותקופות התאוששות חולנית. אנו מתארים את הניצול של שורות תאים הוקמה והן שורות תאים נגזר החולה להזרקה orthotopic. ערכות מוכנות מראש מסחריים זמינים עבור גידול דיסוציאציה ותיוג לוציפראז של תאים. הזרקה של הבולם התא באמצעות תמונה-ההדרכה מספק פלטפורמה מינימלית פולשנית, לשחזור להקמת במודלים פרה. שיטה זו מנוצל ליצירת במודלים פרה אמין עבור סוגי סרטן אחרים כגון שלפוחית השתן, המשמשים שלה פוטנציאל לא ממומש עבור מודלים רבים של סרטן הכבד והלבלב.

מבוא

מודלים xenograft בעלי חיים הם כלי חיוני עבור מחקרים פרה של טיפולים נגד סרטן. Xenografts מאתר סטנדרטי להסתמך על האגף תת עורית ההשתלה של תאים, מתן אתר נגיש ויעיל עבור ניטור הגידול. החיסרון של מודלים תת עורית הוא היעדרם של מאפייני וחיסונים גידול ספציפי, אשר עשוי להגביל את הפוטנציאל שלהן גרורות1. הגבלות יש להתגבר על ידי שימוש xenografts orthotopic ב איזה גידול התאים הם engrafted באתרים רקמה מקורית, מתן של microenvironment רלוונטי עם פוטנציאל גרורתי2. מודלים xenograft Orthotopic לשמור על תכונות ביולוגיות המקורי ולספק מודלים אמינים סמים פרה-גילוי-3,-4. התאים הסרטניים מנוצל להשתלה רקמות מכוון הם שורות תאים הוקמה או תאים החולה נגזר מן המטופל גידולים. Xenografts הוקמה מתוך שורות תאים סרטן עשוי להפגין סטייה גנטית גבוהה מן הגידול העיקרי לעומת xenografts נגזר החולה5. נתון זה, הקמת xenografts orthotopic נגזר החולה הפך תקן המועדפת לבדיקת הריפוי בגילוי סרטן סמים.

סרטן ילדים נוירובלסטומה (NB), מודלים xenograft orthotopic מסכם את הדברים הגידול העיקרי ביולוגיה, לפתח גרורות לאתרים טיפוסי של NB להפיץ6,7. NB מתפתח בבלוטת יותרת הכליה או לאורך השרשרת סימפטי הבין-חולייתיים. השיטות הנפוצות ביותר של orthotopic-השרשה מחייבים הליכים כירורגיים הטרנס-בטן פתוחה. שיטות כאלה לעיתים מייגע, יש תחלואה גבוהה בעלי חיים, ותקופות התאוששות מורכבים. אולטרסאונד ברזולוציה גבוהה יש לאחרונה נעזרו מכוון רקמות ההשתלה של תאים סרטניים בשלבי פיתוח של מספר מודלים מאתר סרטן מחקר8,9. הטכניקה היא אמין לשחזור, יעיל, בטוח להקמתה של גידול גרורתי הרלוונטיים xenografts10,11.

הקמת סרטן ילדים xenografts על ידי המטרה מונחה אולטרסאונד איברים ההשתלה לוקליזציה ואת המחט של שורות תאים ותאים סרטניים נגזר החולה הוא והפגינו11. הטכניקה היה מנוצל עבור NB ממוקד בלוטת יותרת הכליה מאתר. סרקומה ע ש יואינג (ES) היא בעיקר סרטן osseous, לעתים קרובות העצמות הארוכות כמו עצם הירך ו עצמות האגן12. הדו חות הראו כי כדי לקבוע אם הצמיחה של סרטן בעיקר osseous ריאלי ברקמת הכליה, במיקום הסיבה sub כליות נבחרה עבור orthotopic-השרשה13. יש כבר מנוצל כליות תת תא הסיבה ההשתלה של תאים סרטניים כמודל מבטיח ללמוד גרורות ספונטנית ES14.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

כל העבודה נעשתה על פי אוניברסיטת מישיגן הועד המוסדי (00052430 לזמזם) ותואם לשגרות אושרה על ידי הוועדה האוניברסיטה על שימוש, טיפול בבעלי חיים (UCUCA). יחידת עבור המעבדה של בעלי חיים רפואה (אולם) השגיח טיפול בבעלי חיים.

כל העבודה נעשתה באישור של אוניברסיטת מישיגן הועד המוסדי (לזמזם 00052430), תואמת לכל תקנות ועדת האתיקה מחקר אנושי. תאים אנושיים נחשבים להיות חומר העלול ותברואה, אז תעקוב אחרי כל באמצעי זהירות מיוחדים ושיטות אבטחה המתאימה הנדרשים על ידי המוסד שלך. NSG עכברים הם immunocompromised קשות להיות רגישים למחלה הנגרמת על ידי חיידקים הנמצאים בדרך כלל הסביבה.
השתמש תמיד קפדנית סטרילי טכניקה בעת הכנת חומרי השרשה וביצוע הזריקות.

1. תרבית תאים

  1. לגדול ויצר אנושי NB שורות תאים (SH-SY5Y, SK-N-BE2 ו IMR32) אמצעי חיוני מינימלי, בתוספת 10% סרום שור עוברית, גלוטמין 2 מ מ, 100 יחידות/mL פניצילין, סטרפטומיצין μg/mL 100. תוספת IMR32 תאים נוספים עם 1 מ מ פירובט ו- 0.075% NaHCO3. לשמור על כל התאים ב- 37 מעלות צלזיוס, 5% CO2 ו- 70-80% הנהרות.
  2. לגדול האנושי ES שורות תאים (TC32, A673, CHLA-25 ו A4573) בינוני RPMI בתוספת 10% סרום שור בעובר ו 6 מ"מ-גלוטמין. לשמור על כל התאים ב 37 מעלות צלזיוס, 5% CO2 ב 70-80% הנהרות.
  3. לשלוח כל שורות תאים עבור אימות.
    הערה: תא האימות נעשה על מתקן חיצוני, עיין תודות.

2. הכנה של תאי הגידול העיקרי נגזר החולה

  1. עם החולה והסכמתו ובהסכמה, קציר שנמחקו רקמה אנושית הגידול NB של חולים שעברו כריתה כירורגית עבור בקרה מקומיות ותחבורה ציבורית המעבדה בפתרון אחסון רקמות לשימור.
    הערה: כל דוגמאות החולה בטל מזוהה, מטופלים לפי הנחיות הועד המוסדי.
  2. צור השעיה תא יחיד נגזר חולה סרטן (UMNBL001, UMNBL002) של רקמת הגידול באמצעות ערכת דיסוציאציה הגידול. להעביר לצלחת תרבות תא 100 מ מ המכיל 5 מ ל מאגר RPMI, 200 µL של האנזים H, µL 100 של האנזים R ו- 25 כ 0.5 g של גידול µL של אנזים A הערכה דיסוציאציה גידול אנושי.
  3. מינצ הגידול לחתיכות קטנות (2-4 מ מ כל אחד) באמצעות רקמות מלקחיים ומספריים. מערבבים קטעים אלה עם הפתרונות בשלב 2.2.
  4. Pipette את תערובת הגידול לתוך צינור dissociator וסגור את הצינור. היפוך הצינור וחבר בשרוול של dissociator הרקמה. להפעיל תוכנית h_tumor_01.
  5. דגירה התליה תא הגידול לקבלו מעל 37 ° C עבור h 1 על מתלה מסתובב עם trituration לסירוגין כל 15 דקות.
  6. התליה תא להעביר צינור חרוטי 50 מ"ל ולהוסיף 10 מ"ל של RPMI. Centrifuge התליה תא ב g 314 x במשך 5 דקות.
  7. הסר את תגובת שיקוע, להשעות את צניפה ב 5 מ של RPMI. פתרון זה עוברים מסננת תא 40 µm ולאסוף את הפתרון מאומצות לתוך צינור חרוטי מ"ל. רוחצים זו מסננת פעם אחת עם 5 מ של התקשורת RPMI את centrifuge את התערובת ב g 314 x עבור 5 דקות כדי לאסוף גלולה.
  8. מודדים את צפיפות התאים באמצעות hemacytometer15. להשעות את צניפה להשיג מלמעלה RPMI בריכוז סופי של 4 × 105 תאים/10 µL. לוקחים 5 µL של ההשעייה תא µL 5 של matrigel כדי להפוך µL 10 של התא פתרון עבור כל זריקה.
    הערה: כמות RPMI נעשה שימוש תלויה מדידת צפיפות התאים. לדוגמה, אם צפיפות תא נמדד בגדר שהושג 4 x 105 תאים, להשעות את צניפה ב 10 µL של RPMI.

3. לוציפראז תיוג של תאים סרטניים

  1. להפוך 10 מ"ל של התמרה חושית מדיה עם 5 מ של נגיפי supernatant EF1a-Luc2-IRES-mCherry, 5 מ של תאי גזע מדיה. להוסיף 7.5 µL של 1 x polybrene.
  2. מערבבים 5 × 106 תאים סרטניים התמרה חושית מדיה וצלחת בצלחת 100 מ מ קובץ מצורף נמוך במיוחד. דגירה-37 מעלות צלזיוס ו-5% CO2 בן לילה.
    הערה: צלחות מצורף נמוכה משמשים, התאים לא דוגלים צלחת.
  3. לאחר 24 שעות, להביא את הצלחת 100 מ מ המכיל תאים מתחת תרביות רקמה המנוע ולהעביר את התערובת לתוך צינור חרוטי 15 מ"ל. Centrifuge התליה תא ב g 314 x עבור 5 דקות להביא בגדר התא. רוחצים בגדר תא פעם אחת עם 1 מ"ל של 1 x באגירה פוספט תמיסת מלח (PBS) את להשעות בגדר תא ב 1 מ"ל של HBSS המכיל 1% סרום שור עוברית (FBS).
    1. מיין תאים לוציפראז בהתבסס על אות ה-GFP-חיוביות על תא לפעיל על-ידי קרינה פלואורסצנטית מיון (FACS) ניתוח. צלחת התאים הממוינים על תרביות רקמה 100 מ מ מטופלים דיש ולתחזק ב 70-80% הנהרות, 37 ° C ו- 5% CO2 עד הנדרש.
  4. לאשר לוציפראז האות עם ערכת assay לוציפראז. דגירה תאים בן לילה על 37 ° C ו 5% CO2, ואוהבים צלחת צלחת 10 x 10 תאים4 ממוין לפי בעיר illuminometer 96 תואם. לאחר 24 שעות, להביא את הצלחת היטב 96 לטמפרטורת החדר ומוסיפים יציב-Glo ריאגנט מדיה בתרבית בבארות ביחס 1:1. מאפשרים לתאים lyse עבור 5 דקות ולקרוא הארה ב ספקטרופוטומטרים.
  5. להביא את המנה 100 מ מ תחת ברדס תרביות רקמה. למחוק את התקשורת supernatant. לשטוף את התאים פעם אחת עם 2 מ ל 1 x PBS.
  6. להוסיף 2 מ של 0.25% טריפסין וחוזרים המנה 100 מ מ החממה למשך 2-3 דקות. לאחר 2-3 דקות, לבדוק אם התאים ונדרש תחת מיקרוסקופ ולהוסיף 8 מ של RPMI לבטל את הפעלתה של טריפסין.
  7. לאסוף את התליה תא צינור חרוטי 15 מ"ל, צנטריפוגה ב g 314 x עבור 5 דקות כדי לקחת גלולה. למחוק את תגובת שיקוע. לשטוף בגדר תא עם 1 מ"ל של PBS 1 x, להשעות את צניפה ב 5 מ של RPMI וקבע את צפיפות התאים באמצעות hemacytometer15. צנטריפוגה yhe שנותרו פתרון תא g 314 x עבור 5 דקות כדי להשיג גלולה.
  8. להשעות את צניפה ב RPMI בריכוז של 4 x 105 תאים/10 µL. לוקחים 5 µL של התליה תא µL 5 של matrigel כדי להפוך µL 10 של התא פתרון עבור כל זריקה.

4. אולטרסאונד מודרכת בלוטת יותרת הכליה (NB) או Sub כליות השרשה כמוסה (ES)

הערה: כל הפרוצדורות האולטרסאונד מתבצעות באמצעות יישום ברזולוציה גבוהה ויוו מערכת הדמיה. ההליכים המתוארים, שימש המתמר, אשר יש תדר מרכז של 40 מגה-הרץ של הפס של 22-55 מגה-הרץ.

  1. לנצל 6-8-בת שבוע חיסונית לקויה NSG עכברים עבור כל שגרות הזרקה.
  2. להרגיע את matrigel ואת בלוק מזרקים המילטון מצויד עם מחט 27G (1.25"), קטטרים 22 גרם (בקוטר חיצוני 0.9 מ מ, 25 מ מ אורך) לילה ב 4 º C.
  3. המקום הפתרון תא מוכן בשלב 3 על קרח.
  4. עזים ומתנגד העכברים בתא אינדוקציה שימוש איזופלוריין 2% ב- O2 וכשאשר 2 ל'/min.
    הערה: הרדמה נאותה נקבע עם חוסר תנועה פעיל ותחזוקה של נשימה ספונטנית.
  5. ברגע מרדימים, depilate האגף של בעלי החיים באמצעות קרם להסרת שיער (כגון Nair) שייבר ומאחור.
  6. העברת החיה פלטפורמת הדמיה עם צד הבטן למטה, איפה האף של החיה ימוקם nosecone, מאובטחת תוך שאיפה איזופלוריין.
  7. הצב משחה אופטי בעיניים של בעל החיים כדי למנוע התייבשות. קלטת את העכבר במקום כדי למנוע כל תנועה בהיסח הדעת.
  8. לזהות את הכבד מאתר, הנבוב, הטחול, הכליות, הסמוך בלוטת יותרת הכליה השמאלית בעזרת ויזואליזציה אולטרסאונד.
  9. השתמש בכפפות סטריליות, מסכה, כובע הגנה אישית ותחזוקה של תנאים סטריליים. בהנחיית אולטרסאונד, בעדינות נחדיר קטטר 22 גרם דרך העור, חזרה השריר ישירות לתוך בלוטת יותרת הכליה השמאלית כדי לספק ערוץ להזרקה הסלולר. הסר את המחט ולהשאיר את הקתטר במקומו.
  10. עומס מזרק המילטון צוננת מצויד עם מחט small-bore עם 10 µL של פתרון תא ולאחר מכן להנחות את המזרק stereotactically דרך הקטטר ממוקם לתוך המרכז של בלוטת יותרת הכליה.
  11. להזריק את התאים לתוך רקמת הכליה יישוב. להשאיר את המחט במקום למשך 1-2 דקות לאפשר את matrigel להגדיר. הסר את המחט, ואחריו הסרת הקטטר.
  12. הצב והעכברים בחזרה לכלוב שלהם ולהבטיח כי העכבר להכרתו מספיק כדי לשמור על recumbency בחזה ובצלעות.
    הערה: בשל אופיו פולשנית של טכניקה זו, כאב פוסט פרוצדורלי הוא מינימלי, אבל עדיין בפיקוח על בסיס יומי עם עכברים בריאות בדיקות. "צריכה להיות מלווה עם משפט:"אם לא צפוי סימני כאב או מצוקה מזוהים במהלך הקורס של ניסוי, התייעץ עם היחידה שלך תמיכה מוסדית וטרינרית לקבלת מידע בנוגע שיכוך כאבים או טיפול רפואי אחר.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

באמצעות ההליכים שהוצגו, מונחה אולטרה סאונד ההשתלה של תאים NB לתוך בלוטת יותרת הכליה נעשה הליך ייעודי חדר מאובזר בשולחן מחומם כירורגי. מגיני זרוע ורגל הונחו לניטור פעילות הלב מאתר (איור 1 א'). בעל החיים נשאר anesthetized תחת איזופלוריין באמצעות אינהלציה האף חרוט. באמצעות החללית אולטרסאונד ברזולוציה גבוהה, הכליה השמאלית מזוהה עם בלוטת יותרת הכליה רק הגולגולת אל הכליה (איור 1B). המחט היה מתקדם ואז לתוך בלוטת יותרת הכליה תחת פריט חזו...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

מונחה אולטרה סאונד ההשתלה של תאים NB ו- ES היא שיטה יעילה ובטוחה להקים אמין xenografts מאתר ללימודי פרה בביולוגיה סרטן. קריטי להצלחת מונחה אולטרה סאונד ממוקדות רקמות השרשה הוא הנוכחות ואת הזמינות של צוות מיומן עם מומחיות אנטומית לאתר. את האיבר של עניין, הזרקת סטיאוטטי של תאים סרטניים.

הדיסוציאציה של רקמת גידול הוכיח צעד מכריע בפיתוח המודל שתואר החולה נגזר xenograft. רקמת הגידול מקורית כולל microenvironment הסלולר משתית שמסביב זה עשוי להשפיע על ספיגת הגידול או engraftment. תא סופרת, לאחר תהליך ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

המחברים יש אין גילויים.

תודות

עבודה זו קיבלה תמיכה את רוברט ווד ג'ונסון קרן/עמוס סגל פיתוח תוכנית, טאובמן מכון המחקר הרפואי, ואת סעיף של כירורגיה ילדים, אוניברסיטת מישיגן. המחברים רוצים להודות קימבר והלקסיקוגרפיה-ברן וד ר מרקוס Jarboe עבור הסיוע בהליכים הזרקת אולטרסאונד ולמערכת הדמיה. אנו מודים פול טראמבלי לסיוע שלו עם איור גרפיקה. אנו מודים גם את מחלקת רדיולוגיה ב אוניברסיטת מישיגן לשימוש של המרכז הדמיה מולקולרית והליבה הגידול הדמיה, אשר נתמכים חלקית על ידי מקיף סרטן מרכז NIH, להעניק P30 CA046592. האוניברסיטה של מישיגן פיזיולוגיה Phenotyping ליבה נתמך בחלקו על ידי מענק למימון NIH (OD016502) ואל מרכז לב וכלי דם פרנקל. תא קו אימות נעשתה במתקני Bioresearch RADIL IDEXX, קולומביה אנו מודים סטול תמי, ד ר Rajen Mody, התוכנית אונקולוגיה מוט גידול מוצק. חולים ומשפחות שלנו בתודה הודה שלהם השראה, אומץ, ותמיכה שוטפת של המחקר שלנו.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
עכברים
NOD-SCIDצ'ארלס ריבר394
NSGמעבדת ג'קסון5557
<קו תאים חזק>strong 
<חזק>NB
IMR-32ATCCCCL-127קו תאי נוירובלסטומה אנושי מבוסס
SH-SY5YATCCCRL-2266קו תאי נוירובלסטומה אנושי מבוסס
SK-N-Be2ATCCCRL-2271קו תאי נוירובלסטומה אנושי מבוסס
< חזק>ES
TC32 ביסס את קו תאי הסרקומה של יואינג האנושי
A673COGcell.ORGביסס את קו תאי הסרקומה של יואינג האנושי
CHLA-25COGcell.ORGביסס את קו תאי הסרקומה של יואינג האנושי
A4573COGcell.ORGביסס את קו תאי הסרקומה של יואינג האנושי
<חזק>תקשורת
RPMILife Technologies11875-093
MatrigelBD BioSciences354234
<חזק>דיסוציאציה
כלי דיסקציהKentScientificINSMOUSEKIT
ערכת דיסוציאציה של גידולים אנושיים MACS Miltenyi Biotec130-095-929
gentleMACS dissociatorMACS Miltenyi Biotec130-093-235
gentleMACS C tubesMACS Miltenyi Biotec130-096-334
מסננת תאיםקורנינג431751
<חזק>לוציפראז תיוג
Lenti-GFP1 וירוסאוניברסיטה של מישיגן, Vector CoreLuciferase
Virus Steady Glo-Luciferase Assay KitPromegaE2510
Bioluminescence Imaging
Ivis Spectrum ImagingSystem PerkinElmer124262
D-LuciferinPromegaE160X
<חזק>מאדים
איזופלורן בשאיפה Piramal Critical Care Inc66794-0017-25
<חזק>הזרקה מונחית אולטרסאונד
Vevo 2100 הדמיה ברזולוציה גבוההVevo2100
מזרקי המילטון (מחט 27 מד)המילטון80000
22 מד אנגיוקטטרBD Biosciences381423
משחה אופטיתתרופות גדולות301909
כנסיית נאיר& סוכןלהסרת שיער
Aquasonic 100 ג'ל העברת אולטרסאונדפרקרג'ל אולטרסאונד
<חזק>היסטולוגיה
CD99DAKOM3601נוגדן ראשוני
טירוזין הידרוקסילאזסיגמא-אולדריץ'T2928נוגדן ראשוני
נוגדן HRP-פולימר משניBiocareBRR4056KG
<חזק>שונות
10 מ"ל פיפטותפישר סיינטיפיק13-676-10J
5 מ"ל פיפטותפישר סיינטיפיק13-676-10H
1.5 מ"ל צינורות מיקרוצנטריפוגהפישר סיינטיפיק05-408-129
P1000פיפטה אפנדורף
P200 פיפטהאפנדורף3120000054
P1000 קצות פיפטהפישר סיינטיפיק21-375E
P200 קצות פיפטהפישר סיינטיפיק21-375D
עזר פיפטה ניידדראמונד4-000-101
חיה דיגיטלית משקל שקילה KentScientificSCL-1015
קליפרספישר סיינטיפיק06-664-16
6 צלחות חיבור נמוכות 6 בארקורנינג07-200-601
10 ס"מ כלים מטופלים בתרבית רקמותפישר סיינטיפיקFB012924
פוליברןסיגמא-אולדריץ'TR-1003-G
COGcell.ORG דווייט Co 3120000062

מקורות

  1. Sanmamed, M. F., Chester, C., Melero, I., Kohrt, H. Defining the optimal murine models to investigate immune checkpoint blockers and their combination with other immunotherapies. Ann Oncol. 27 (7), 1190-1198 (2016).
  2. Fidler, I. J., Hart, I. R. Biological diversity in metastatic neoplasms: origins and implications. Science. 217 (4564), 998-1003 (1982).
  3. Bibby, M. C. Orthotopic models of cancer for preclinical drug evaluation. Eur J Cancer. 40 (6), 852-857 (2004).
  4. Killion, J. J., Radinsky, R., Fidler, I. J. Orthotopic Models are Necessary to Predict Therapy of Transplantable Tumors in Mice. Cancer Metastasis Rev. 17 (3), 279-284 (1998).
  5. Daniel, V. C., et al. A primary xenograft model of small-cell lung cancer reveals irreversible changes in gene expression imposed by culture in vitro. Cancer Res. 69 (8), 3364-3373 (2009).
  6. Khanna, C., Jaboin, J. J., Drakos, E., Tsokos, M., Thiele, C. J. Biologically relevant orthotopic neuroblastoma xenograft models: Primary adrenal tumor growth and spontaneous distant metastasis. In Vivo. 16 (2), 77-85 (2002).
  7. Stewart, E., et al. Development and characterization of a human orthotopic neuroblastoma xenograft. Dev Biol. 407, 344-355 (2015).
  8. Jäger, W., et al. Minimally Invasive Establishment of Murine Orthotopic Bladder Xenografts. J. Vis. Exp. (84), e51123(2014).
  9. Teitz, T., et al. Preclinical Models for Neuroblastoma: Establishing a Baseline for Treatment. PLoS ONE. 6 (4), e19133(2011).
  10. Braekeveldt, N., et al. Neuroblastoma patient-derived orthotopic xenografts retain metastatic patterns and geno- and phenotypes of patient tumours. International Journal of Cancer. 136 (5), 252-261 (2015).
  11. Van Noord, R. A., et al. Tissue-directed Implantation Using Ultrasound Visualization for Development of Biologically Relevant Metastatic Tumor Xenografts. In Vivo. 31 (5), 779-791 (2017).
  12. Vormoor, B., et al. Development of a Preclinical Orthotopic Xenograft Model of Ewing Sarcoma and Other Human Malignant Bone Disease Using Advanced In Vivo Imaging. PLoS ONE. 9 (1), e85128(2014).
  13. Hakky, T. S., Gonzalvo, A. A., Lockhart, J. L., Rodriguez, A. R. Primary Ewing sarcoma of the kidney: a symptomatic presentation and review of the literature. Ther Adv Urol. 5 (3), 153-159 (2013).
  14. Cheng, H., Clarkson, P. W., Gao, D., Pacheco, M., Wang, Y., Nielsen, T. O. Therapeutic Antibodies Targeting CSF1 Impede Macrophage Recruitment in a Xenograft Model of Tenosynovial Giant Cell Tumor. Sarcoma. 2010, 174528(2010).
  15. JoVE Science Education Database. Using a Hemacytometer to Count Cells. Basic Methods in Cellular and Molecular Biology. , JoVE. Cambridge, MA. (2018).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

NSG
ניצול של אולטרסאונד מודרכת מכוון רקמות השרשה הסלולר להקמתה של גידול גרורתי רלוונטי מבחינה ביולוגית Xenografts
צור קשר
המלצה לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

2026 © זכויות יוצרים MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.