יתר לחץ דם כרוני עינית הנגרמת על-ידי החלת בתפר circumlimbal אצל חולדות ועכברים, שמוביל התדרדרות תפקודית ומבניים של תאי גנגליון עקבית עם גלאוקומה.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
יתר לחץ דם כרוני עינית הנגרמת על-ידי החלת בתפר circumlimbal אצל חולדות ועכברים, שמוביל התדרדרות תפקודית ומבניים של תאי גנגליון עקבית עם גלאוקומה.
התפר circumlimbal היא טכניקה להשראת גלאוקומה ניסויים בחולדות מאת כרוני העלאת לחץ תוך-עיני (IOP), מהווה גורם סיכון ידוע גלאוקומה. פרוטוקול זה מדגים מדריך צעד אחר צעד על טכניקה זו אוונס ארוך חולדות ועכברים C57BL/6. בהרדמה כללית, suture "הארנק-string" מוחל על הלחמית, סביב קו המשווה, מאחורי של לימבוס של העין. העין עמית משמש פקד ללא טיפול. על-פני משך המחקר, אשר היה תקופה של 8 שבועות עבור חולדות 12 שבועות עבור עכברים, IOP נשארו גבוהות, כפי שהיא נמדדת בקביעות ריבאונד tonometry חיות בהכרה ללא הרדמה מקומי. בשני המינים, העיניים sutured הראו תכונות electroretinogram בקנה אחד עם מועדף בתפקוד ברשתית הפנימי. טומוגרפיה אופטית קוהרנטית הראה דליל סלקטיבי של שכבת סיבי עצב ברשתית. היסטולוגיה של הרשתית חולדה בתוך שטח חתך נמצאו מופחת צפיפות התאים בשכבת תאי גנגליון, אך אין שינוי ברבדים אחרים התאית. כתמים retinae עכבר שטוח רכוב עם גנגליון תא מסוים סמן (RBPMS) אישר אובדן תאי גנגליון. התפר circumlimbal היא פשוטה, מינימלית פולשנית וחסכונית לזירוז עינית יתר לחץ דם מוביל לפגיעה תא גנגליון אצל חולדות ועכברים.
מודלים בעלי חיים מספקים שפלטפורמה חשוב לחקירה מעבדה הסלולר תהליכים כבסיס גלאוקומה פתוגנזה, כמו גם להעריך ולאתר פוטנציאליים התערבויות טיפוליות. מספר מודלים inducible פותחו כדי לייצר ממושכת לחץ תוך-עיני (IOP) גובה, גורם הסיכון החשוב ביותר גלאוקומה. שיטות שהוחלו להעלות את רמת IOP כוללות: הזרקת מלוחים hypertonic ב episcleral הוורידים1, photocoagulation לייזר של trabecular meshwork2 או של ורידים limbal3, ו intracameral הזרקה של חומרים כגון תאי דם רפאים אדום4, גרגרי5,6 ו- viscoelastic סוכנים7. בכל אחת מהגישות יש יתרונות ומגבלות שלה.
מודל לגלוקומה צריך לחקות תהליך המחלה, עם סיבוך מינימליות כגון טראומה, דלקת ומדיה לאטימות. סיבוכים אלה הקשורים לעתים קרובות עם ההליכים המשמש לזירוז IOP העלאת, יכולים לבלבל פרשנות של תוצאות. לדוגמה, paracentesis החדר הקדמי, גם כאשר חומרים זרים לא הציג, הוכח לגרום טראומה ודלקת אינה מייצגת טיפוסית השינוי glaucomatous8,9. מעבר לחשיבות של הימנעות דלקת, שמירה על בהירות אופטית מקלה ויוו הדמיה electrophysiology לעקוב אחר התקדמות המחלה. לא ברור באיזו מידה סיבוכים אלה עלולים להשפיע על המחלה חקירות, ואולי כדאי להימנע חודר לעין במהלך אינדוקציה דגם. הגישה תפר circumlimbal מונע חדירה של כדור הארץ ומקל ויוו הערכה האורך של רשתית מבנה ותפקוד. חשוב מכך, מודל זה שונה מקודמותיה מבחינת יכולתה כדי לחזור IOP ערכים של תוכנית בסיסית על ידי הסרה של התפר בעת הצורך. IOP נרמול עשוי להיות שימושי עבור הלומדים הסלולר והתא ה"מפה מולקולרית של גנגליון הפיכים ובלתי הפיכה פציעה10,11,12,13,14.
מאמר זה מתמקד בטכניקה עבור אינדוקציה דגם. אפיון לפגיעה ברשתית המושרה על ידי מודל זה אצל חולדות ועכברים ניתן למצוא בפירוט רב יותר במקום אחר15,16,17,18,19.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
כל ההליכים ניסיוני נערכו על פי קוד האוסטרלי של התרגול על טיפוח ועל השימוש של בעלי חיים למטרות מדעיות, שקבע את הבריאות הלאומיים ואת המועצה למחקר רפואי באוסטרליה. אתיקה אישור היה המתקבלים ועדת האתיקה הווארד חיה מכון Florey (אישור מספר 13-044-אום ו 13-068-אום על חולדות ועכברים, בהתאמה).
1. מדידת לחץ תוך-עיני בחולדות בהכרה
2. מדידת לחץ תוך-עיני בעכברים בהכרה
3. אינדוקציה של העלאת לחץ תוך-עיני ומורדמת חולדות ועכברים
4. ניטור IOP
5. assaying רשתית מבנה ותפקוד
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
התוצאות הבאות חולדות ועכברים של18 16 דווחו בעבר, מסוכמות כאן. התפר circumlimbal המיוצר דפוס דומה של העלאת IOP אצל חולדות ועכברים (איור 2). יתד IOP קצרה, עד 58.1 מ מ כספית ± 2.7 בחולדות, 38.7 מ מ כספית ± 2.2 בעכברים, נמצאה מיד לאחר הניתוח תפר. בחולדות, IOP בעוצמה מופחתת בהדרגה לאורך זמן להיות 44 ± 6 מ מ כספית, 32 ± 2 מ מ כספית, ב- 3 ו- 24 שעות, בהתאמה15. אחרי זה ספייק IOP הראשונית IOP נשאר...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
התפר circumlimbal הוא מודל חדש של יתר לחץ דם כרוני עינית. בנוסף המחקרים שממנו התוצאות נציג הן מתוצרת16,18, מודל זה בעל חיים יש כבר מנוצל במספר האחרונות מחקרים15,23,24,25 ,26. מההשוואה בין דוחות קודמים אלה עולה כי השיטה מייצרת תוצאות הדיר, כולל את סדר הגודל של העלאת IOP, כמו גם את הדקר IOP קצרה במהלך א...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
המחברים אין לחשוף.
עבודה זו ממומן על ידי הלאומי לבריאות ואת מועצת המחקר הרפואי של אוסטרליה פרויקט גרנט (1046203), מחקר אוסטרלי המועצה העתיד לאגודה (FT130100338).
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| תמיסת מלח רגילה | בקסטר אינטרנשיונל בע"מ | AHB1323 | לשמור על הידרציה בקרנית במהלך הניתוח |
| כלורהקסדין 0.5% | מעבדות אוריון | 27411, 80085 | חיטוי של מכשיר כירורגי |
| איזופלורן 99.9% | אבוט אוסטרלאסיה Pty Ltd | CAS 26675-46-7 | שם הקניין: איזופלו(TM) אנאסתטיקה באינהלציה. חומר הרדמה אינהלציה בדרגה פרמצבטית מעורבב עם גז חמצן להליך תפירה |
| סיכה לעיניים | מעבדות אלקון | 1618611 | שם הקניין: חומר סיכה גנטי, עיני לשמירה על לחות העין השנייה |
| מחזיק מחט (מיקרו-כירורגיה) | World Precision Instruments | 555419NT | להחזקת מחט במהלך ניתוח עיניים |
| Proxymetacaine 0.5% | מעבדות אלקון | CAS 5875-06-9 | לשיכוך כאבים עיניים |
| מקומיים (מיקרו-כירורגיה) | מכשירי דיוק עולמיים | 501232 | לחיתוך גדם תפר מוגזם במהלך קשירה |
| וילון כירורגי | אספקה רפואית חיונית | GM29-612EE | הבטח סביבה סטרילית במהלך הניתוח |
| מחט תפר לחולדות (מיקרו-כירורגיה) | מחטים רפואיות של נינבו | 151109 | 8-0 תפר ניילון מחובר עם מחט עגולה, קצה חיתוך 3/8, מחט כפולה, אורך תפר 30 ס"מ |
| מחט תפר לעכברים (מיקרוכירורגיה) | מחטים רפואיות של נינבו | 160905 | 10-0 תפר ניילון מחובר עם מחט עגולה, קצה חיתוך 3/8, מחט כפולה, אורך תפר 30 ס"מ |
| פינצטה (מיקרו-כירורגיה) | מכשירי דיוק עולמיים | 500342 | מניפולציה של רקמות במהלך ניתוח |
| טונומטר | ריבאונדTONOLAB, iCare, הלסינקי, פינלנד | TV02 | לניטור לחץ תוך עיני |
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.