הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

מטופל-נגזר הטרוגנית מודל Xenograft של סרטן הלבלב באמצעות הזחלים Zebrafish כפונדקאים עבור הערכת סמים השוואתי

8.1K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/59507

⸱

30 באפריל 2019

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Biochemistry and Molecular Biology, Key Laboratory of Metabolism and Molecular Medicine, Ministry of Education, School of Basic Medical Sciences, Fudan University, 2National Human Genetic Resources Sharing Service Platform (2005DKA21300), 3Fudan University Shanghai Cancer Center, 4Department of Pancreatic Surgery, Fudan University Shanghai Cancer Center, 5Department of Oncology, Shanghai Medical College, Fudan University, 6Pancreatic Cancer Institute, Fudan University

* These authors contributed equally

במאמר זה

סיכום

פרוטוקול זה מתאר הליכי אופטימיזציה במודל האנטי-וירוס מבוסס-פלואורסצנטית כפול שכותרתו הגידול מודל באמצעות זחל דג זברה כמארחים. מודל זה הטרוגנית מבע מחקה את הרכב הרקמה של מיקרוסביבה סרטן הלבלב ב vivo ומשמש ככלי מדויק יותר להערכת תגובות סמים בהתאמה אישית zpdx (zebrafish החולה נגזר מודלים מבע).

תקציר

החולה-נגזר הגידול מבע (pdx) ו-cell נגזר הגידול מבע (cdx) הם שיטות חשובות להערכת טרום קלינית, תרופות הדרכה ומחקרים סרטן בסיסיים. דורות של מודלים PDX בעכברים מארחים מסורתיים הם לגזול זמן ועובד רק עבור חלק קטן של דגימות. לאחרונה, דג זברה pdx (zpdx) התפתחה כמערכת מארח ייחודי, עם המאפיינים של בקנה מידה קטן ויעילות גבוהה. כאן, אנו מתארים מתודולוגיה אופטימיזציה ליצירת מודל כפול בעלי התווית של זריחה כפולה להערכת כימותרפיה השוואתית בדגמי zPDX. תאים סרטניים ופיברותקיעות היו מועשר מרקמת סרטן הלבלב שנקטפו או קפוא בתנאי תרבות שונים. שתי קבוצות התא היו מסומנים על ידי וירוס המבטא ירוק או אדום חלבונים פלורסנט, כמו גם BCL2L1גן אנטי אפופטוזיס. התאים המוזרקים היו מעורבים מראש ומוזרק לתוך 2 הזחל בדגים שהיו לאחר מכן ב E3 בינוני שונה ב 32 ° c. מודלים מבע טופלו על ידי תרופות כימותרפיה ו/או BCL2L1 מעכב, ואת היכולות של תאי הגידול הן והפיברוביטים נחקרו בו זמנית. לסיכום, פרוטוקול זה מאפשר לחוקרים להפיק במהירות כמות גדולה של מודלים zPDX עם מיקרוסביבה גידול הטרוגנית ומספק חלון התבוננות ארוכה יותר בכמויות מדויקות יותר בהערכת היעילות של מועמדים לסמים.

מבוא

האונקולוגיה בדיוק שואפת למצוא את האסטרטגיות הטיפוליות המועילה ביותר עבור המטופל היחיד1. כיום, מודלים רבים פרה-קליניים כגון בתרבות הראשית מחוץ לעולם, בתרבות הארגונית מחוץ לחוק2, והמטופל נגזר xenografts (pdx) בעכברים לפני או אחרי תרבות ארגונית מוצעים לאבחון ולמסך/להעריך את הפוטנציאל אפשרויות טיפוליות3. Pdx מודל שנוצר על ידי ההזרקה של התאים האנושיים הראשוניים לתוך עכברים החיסונית פרוצים, הוא אחד הכלים המבטיחים ביותר עבור הקרנת תרופות אישית באונקולוגיה קלינית3,4. שלא כמו קו התאים התרבותי בתחום החוץ, מודלים PDX בדרך כלל לשמר את היושרה ואת טרוגניות של סביבת הגידול vivo, טוב יותר לחקות את המאפיינים מגוון וייחודית של חולי גידולים שונים, ולכן, עשוי לנבא את תוצאה רפואית פוטנציאלית של חולים4. עם זאת, הדור של מודלים pdx בעכברים דורש באיכות גבוהה דגימות המטופל וחודשים של זמן לאסוף תאים מספיקים ומודלים עבור ניסויים קבוצה מרובת, ואת היצירות הסלולר/גנטי של השתל מבע להיסחף מאלה של המקורי ביופסיהשל המטופלת שיעור ההצלחה של הקמת עכברים מודל PDX הוא גם נמוך, מה שמקשה להיות מיושם באופן נרחב בפרקטיקה הקלינית. עבור המטופלים שנשאו במהירות סרטן התקדמה כמו סרטן הלבלב, הם לא יכולים לקבל מידע חשוב מניסויים PDX בזמן.

בשנים האחרונות, דג זברה דווחו להיות מארחים פוטנציאליים עבור לא רק cdx (תא נגזר הגידול xenograft) מודלים, אבל גם pdx מודלים5,6,7,8,9 , 10. כבעל חיים במודל בעלי חוליות, הנמלים בעלי דמיון מספיק עם יונקים בגנטיקה ופיזיולוגיה, עם שני יתרונות משמעותיים: שקיפות קטן בגודל11. זברפיש הוא גם מאוד פוריות, ומאות הזחלים המאוזיים יכולים להיות מתקבלים תוך כמה ימים מזוג אחד של מבוגרים12. מספר מחקרים המועסקים דג זברה כדי ליצור הן מודלים הטרנסגניים ו מבע מחלות סרטן13,14. בהשוואה לעכברים xenografts, דג זברה מאפשר מעקב ברזולוציה תא בודד. כמות מסוימת של רקמות האדם הוא מסוגל לייצר מאות דג זברה מודלים pdx (zpdxs), בעוד יכול להיות מספיק רק כדי ליצור כמה עכברים pdx מודלים15,16. חוץ מזה, הזחלים דג זברה ב 2-5 dpf כבר לפתח מערכות הדם המלא איברים מטבוליים כגון כבד וכליות, אבל לא את המערכת החיסונית17, בעוד שק החלמון הנותרים הוא בינונית 3d טבעי, אידיאלי עבור הקרנת סמים, סמים בדיקות התנגדות ותצפיות הגירה לגידול6,18,19,20,21.

עם ניסיון אולטימטיבי להשתמש zPDX כפלטפורמת הקרנה/בדיקה לשימוש קליני, כאן, אנו מתארים הצעה ממוטבת עבור מודל zPDX של סרטן הלבלב, אשר מאפשר את הערכת הסמים vivo המועמד תוך זמן קצר באמצעות פחות תאים בעלויות נמוכות. לעומת ההפניות הקודמות על zpdx6,9,10, הצגנו מספר אופטימיזציות כדי להפוך את המערכת יותר ריאלי ואמין עבור אבחון מותאם אישית קליני: 1) טרום מיון תא אחר קבוצות ברקמות הגידול הראשיות וייצוב תאים ראשוניים לשבוע אחד לפני ניסויים נוספים; 2) מתייג את התאים האנושיים ומשפר את הכדאיות התאית ב-מבע באמצעות שינוי גנטי מבוסס-וירוס; 3) מיטוב מצבם של תרבות הדגים בתוספי התזונה (גלוקוז ו גלוטמין) ובטמפרטורה; 4) מכמת את תגובות הסמים של סוגי תאים שונים באופן השוואתי. כמו כן עשינו שינויים בפתרון ההזרקה על ידי הוספת מספר חומרים משלימים. בסך הכל, שיפורים אלה מספקים את האפשרות לייצר במהירות יותר מטופל כמו מבע במארחים דג זברה שיכול לשמש ככלי אמין כדי להעריך את התגובה של תרופות המועמדים.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

כל ההליכים בעלי חיים אושרו ובעקבות ההנחיות של ועדת האתיקה בעלי חיים באוניברסיטת Fudan וכל הדגימות סרטן הלבלב התקבלו מאוניברסיטת Fudan שנגחאי מרכז הסרטן. אישור אתי התקבל מוועדת האתיקה של FUSCC, והסכמה מושכלת בכתב הושגה מכל מטופל.

1. הכנת ציוד להזרקות

  1. . מכין את לוחית ההזרקה
    1. הכנת פתרון 50 mL של 1% העלה התפרקה בפתרון E3 (0.6 g/L אקווריום מלח במים מזוקקים כפולים + 0.01 mg/L מתילן blue). מרתיחים את הפתרון עד הצמח מתמוסס.
    2. יוצקים 50 מ ל של הפתרון agarose לתוך צלחת 10 ס מ פטרי ולאחר מכן למקם את כתבנית העובר על פני המים דג זברה על פני השטח. להסיר את העובש כאשר הפתרון צמח הופך מתחזק.
    3. הוסיפו 20 מ ל של הפתרון E3 לצלחת ההזרקה ושמרו אותו ב -4 ° c לאחסון לטווח ארוך.
  2. . מכין את מחטי ההזרקה
    1. למשוך 10 ס מ זכוכית נימי עם ממד פנימי של 0.9 מ"מ לתוך שתי מחטים על פולר מחט.
    2. מלקחיים להשתמש כדי לחתוך את הקצה של המחט כדי ליצור פתח מתחת למיקרוסקופ.

2. הכנת עוברים להשתלה

  1. מניחים 1 עד 2 זוגות של מבוגרים בתוך מיכל ההזדווגות ב 7-9 ולאסוף את הביצים מופרות בסביבות 8 בבוקר למחרת.
  2. העבירו את הביציות המוופרות ממיכל ההזדווגות לצלחת פטרי המכילה 40 mL של פתרון חדש E3 ו-דגירה ב 28.5 ° c.
  3. לאחר 8 h של דגירה ב-E3 פתרון, להוסיף 0.03% 1-פניקסיל-2-thiourea (PTU) לתוך E3 פתרון לעכב פיגמנטציה. דגירה העוברים בפתרון E3 עם 0.03% PTU ב 28.5 ° צ' עד 48 hpf. ניתן להשמיט שלב זה אם נעשה שימוש ב-מוטציה של קספר.

3. בידוד ותרבות של תאים אנושיים הראשי מפני כירורגי סרטן הלבלב דגימה או רקמות קפואות

  1. להשיג דגימות של רקמת סרטן הלבלב האנושי בגודל סביב 1 ס מ3 במהלך ניתוח בבטן, ומיד להעביר את הרקמה לתוך מדיה הצמיחה (DMEM זיכרון עם 10% סרום העוברי (fbs), 10 Μm Y-27632, 100 μg/ml primocin, 10 μg/ml ריקבון דיהידרוטסטוסטרון, 10 מילימטר ניקטיאמיד ו 1% פניצילין סטרפטומיצין).
  2. להעביר את דגימת סרטן הלבלב לתוך צלחת פטרי ולהסיר את רקמת נמק שמסביב, רקמת השומן ורקמת החיבור.
  3. לשטוף את רקמת הסרטן עבור 5-6 פעמים עם מאגר פוספט (PBS) וחותכים את הרקמה 1 מ"מ3 חתיכות באמצעות אזמלים.
  4. העברת רקמות מגורדות לתוך 5 מ ל של HBSS בצינור 50 mL ולהוסיף קולגן סוג IV, hyaluronidase ו DNase I בריכוזים הסופי של 200 יחידות/mL, 100 mg/L ו 20 מ"ג/L, בהתאמה. מערבבים את התערובת למעלה ולמטה כדי לערבב היטב.
  5. מודקון את התערובת ב 37 ° c בחממה 5% פחמן דו חמצני עבור 15-20 דקות. פיפטה את התערובת למעלה ולמטה כמה פעמים כל 5 דקות.
  6. הוסף 7 מ ל של DMEM לצינור ולצנטריפוגה ב 110 x g עבור 5 דקות ב 4 ° צ' כאשר העיכול יושלם.
  7. Decant הסופר ולהשעות מחדש את תערובת הגידול ב-DMEM.
  8. צלחת התערובת לתוך צלחת פטרי בגודל 6 ס"מ ב 3 מ ל של מדיית גדילה מלאה (dmem עם 10% FBS, 20 μg/mL אינסולין, 100 ng/mL bFGF, 10 ng/mL EGF, 10 μM Y-27632, 100 μg/mL מprimocin, 10 μg/מ"ל ריקבון דיהידרוטסטוסטרון, 10 מילימטר ניטינאמיד , 1% פניצילין סטרפטומיצין). הפרד בין התאים לשתי קבוצות.
  9. בקבוצה אני, להוסיף 100x מעכב של סרטן הלבלב פיברותקיעות לתוך המדיום לאחר 48 h כדי להסיר את הפיברוכדורים מגודלים, לעזוב את התאים הסרטניים כמו הסוגים העיקריים של תאים;. בקבוצה II, הפיברופיצוצים יהיה לעבור את התאים הסרטניים בתוך שבוע.
  10. תרבות הן קבוצות תאים עבור שבוע 1-2 בהתאם לצפיפות התא/purities ולשנות את המדיה כל שלושה ימים. סוגי התא הצפויים בשתי הקבוצות I & II יכולים לכבוש מעל 98% בפרופורציה בניסוי מוצלח שף.

4. מתייג את התאים עם וירוס ביטוי אנטי ואפופטוזיס BCL2L1 (BCL-XL) ו חלבונים פלורסנט שונים בנפרד

  1. הפקת וירוס
    1. צלחת 3 x 106 Hek 293t תאים עם מדיום dmem מלאה (dmem שסופקו עם 10% fbs) ב 10 ס מ מנות ותרבות הלילה ב 37 ° c בחממה 5% פחמן דו חמצני. החליפו את המדיום עם 6 מ ל של מדיה נטולת סרום לפני החצייה.
    2. הכנת פתרון: 8 μg של BCL2L1המכיל וקטורים מכילים ויראליות (Pcdh-EF1α-MKATE2-E2A-BCL2L1-wpre או Pcdh-EF1α-egfp-E2A-BCL2L1-wpre), 2.4 Μg של pvsvg, 4 Μg pmdl (מחסום/פול), 1.6 ΜG של Dמ1 הקודם ו-סרום חינם בנפח כולל של 500 μl. בעדינות pipet התערובת מספר פעמים, ולמקם אותו בטמפרטורת החדר עבור 5 דקות.
    3. הכנת פתרון B: 40 μL של פיי (פוליאתילן) ב 460 μL סרום-ללא זיכרון. מניחים אותו בטמפרטורת החדר עבור 5 דקות.
    4. לאט להוסיף פתרון B לתוך פתרון A ולהשאיר את הצינור בטמפרטורת החדר עבור 30 דקות.
    5. הוסף את התערובת הסופית לתוך הצלחת תרבות התאים HEK 293T הכין בשלב 4.1.1 ו דגירה ב 37 ° c בחממה 5% פחמן דו חמצני. לאחר 12 שעות, הוסיפו עוד 5 מ ל של המדיום המלא של DMEM. לאחר 48 h, לקצור את המדיום המכיל את הנגיף.
    6. לסנן את supernatant באמצעות מסנן סטרילי 0.45 יקרומטר, להוסיף את supernatant לתוך עמודת ריכוז, צנטריפוגה ב 6,000 x g עבור 25-30 דקות ב 4 ° c. את הנגיף הליווירוס של 100 μL לכל צינור נעשים ומאוחסנים ב-80 ° c.
  2. זיהום של התאים העיקריים
    1. זרע את התאים (קבוצה אני & II) להידבק בצלחת 12-היטב עם 30-40% צפיפות ותרבות התאים לילה ב 37 ° c בחממה 5% פחמן דו חמצני.
    2. החלף את המדיום עם 500 μL של מדיום ללא סרום המכיל 8 μg/mL של polybrene עבור 4 h. לאחר מכן, להוסיף 100 μL נוסף של הווירוס לתוך המדיום (eGFP-E2A-BCL2L1 עבור קבוצה I או mKate2-E2A-BCL2L1 עבור קבוצה II). לאחר 12 h, להחליף את המדיום עם 1 מ ל של בינוני שלם.
    3. בדוק את סמני הקרינה הפלואורסצנטית אחרי 48 h.
    4. לקצור את התאים הנגועים ולערבב אותם ביחס 1:1 עם ריכוז סופי של 106/Ml.
    5. צנטריפוגה את התאים ב 110 x g עבור 5 דקות ו-להשעות מחדש את התערובת התא 50 μl של פתרון הזרקה (1640 בינונית עם 10% fbs, 0.05% חומצה היאלורונית נתרן מלח, 0.05% מתילתאית).

5. הזרקת מתלה תאים מעורבים לתוך דגי הזברה

  1. הוסף פתרון של 10x tricaine לתוך E3 מים כדי לכפיש את הזחלים דג זברה ולהעביר את הזחלים (משלב 2.3) לצלחת הזריקה מילא על ידי e3 שונה (e3 עם 1 g/L גלוקוז ו 5 מ מול/l ל-גלוטמין).
  2. מילוי 25 μL של השעיית תא מעורב לתוך מחט נימי מיקרו ולהכניס את המחט לתוך מניפולטור מיקרו הזרקה.
  3. . הגדר לחץ וזמן להזרקה הכנס 50-80 תאים (~ 8 nL) לתוך שק החלמון של 48 hpf zebrafish.

6. תרבות של דגי מדבר בדג (zPDX מודל)

  1. העבר את הזחלים הפוסט-מושתלים של הרימות לתוך 40 mL של פתרון ערבול (E3 פתרון עם 1 g/L גלוקוז ו 5 ממול/L ל-גלוטמין) ב 32 ° c.

7. מינהל התרופות בנושא דגי האקווריום והערכת תאים סרטניים

  1. קביעת הריכוז האופטימלי של גיציבטין/navitoclax.
    1. מקום 10 מסוג wildzefish עוברים ב 48 hpf לתוך כל טוב של הצלחת 12-היטב.
    2. הוסף ריכוזים שונים של gemcitabine או navitoclax בכל היטב הדגירה ב 32 ° c עבור יומיים.
    3. לאחר יומיים, לחשב את מינון הסובלנות המקסימלית (mtd) של gemcitabine ו navitoclax שבו הזחלים דג זברה לא הראו מומים משמעותיים התנהגות חריגה, ואת ריכוזי העבודה מוגדרים מתחת mtd.
  2. טיפול של מודלים zPDX עם gemcitabine/navitoclax.
    1. מניחים 10 הזחלים המושתלים. בכל באר של 12 מיטב הצלחות
    2. לחלק את הזחלים לארבע קבוצות, לטפל בקבוצת הביקורת ב E3 המכיל 0.1% DMSO, ולטפל בקבוצות אחרות עם 5 μg/mL gemcitabine ו/או 50 μM navitoclax, ו דגירה ב 32 ° c עבור יומיים.
  3. הערכה של כישורי התא והרכב הסלולר בדגמי zPDX.
    1. שלאחר הטיפול ומניחים אותם. ב -3% מתילצלולוזה
    2. התמונה הזחלים מהנוף לרוחב באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטית או מיקרוסקופ קונפוקלית וקד.
    3. מכמת את עוצמת אותות הזריחה האדומה והירוקה באמצעות התוכנה ImageJ ו-גראפד.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

חלוקה לרמות של השגרה מיוצגת באיור 1. בקיצור, התאים העיקריים רקמת סרטן שופרה לתוך המדיום המלא לאחר העיכול עם או בלי תוספת של סרטן הלבלב מעכבי פיברוהפיצוץ. תאים סרטניים ופיברותקיעות היו מועשר כמו שתי אוכלוסיות נפרדות כי שולט שולט ללא מעכבי, ואת הצמיחה תאים סרטניים שעבר לאחר הוספת מעכבי (איור 2). שני וקטורי אריזה מסוגים שנבנו, אשר הביעו חלבונים בצבע ירוק או אדום ו BCL2L1 כמוצג באיור 3. תיוג פלורסנט מבוס...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

הן PDX ו-CDX מודלים הם פלטפורמות חיוניות בתחום של ביולוגיה של הגידול22, ואת הצעד הקריטי של השתלת בין זנים מוצלחת היא לשפר את ההישרדות של xenograft.  לאחרונה, מחקרים מסוימים הראו כי ביטוי חולף של BCL2L1 (BCL-XL) או BCL2 עשוי לשפר באופן משמעותי את הכדאיות של תאים גזע האדם מתחלקים במחשבים מארחים מבלי להשפיע על זהויות התאים וגורלם23 , בת 24 , 25. בכתב היד שלנו, אנו לתייג את התאים עם...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

לא נחשפו קונפליקטים פוטנציאליים של עניין.

תודות

עבודה זו נתמכת על ידי הקרן הלאומית למדע הטבע של סין 81402582, הקרן המדע הטבעי של שנגחאי 12DZ2295100, 14YF1400600 ו 18ZR1404500

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
DMEMGIBCOC11995500BT
FBSHyclonesv30087.03
Y-27632CliniscienceY0503מעכב רו קינאז
Primocininvivogenant-PM-1אנטיביוטיקה לתרביות תאים ראשוניות
Putrescine dihydrochlorideSigmaP5780
NicotinamideSigmaN3376
פניצילין סטרפטומיציןGIBCO15140122.00
מאגר פוספט (PBS)GIBCOC10010500CP
HBSSGIBCO14170112.00
קולגנאז מסוג IVGIBCO17104019.00
HyaluronidaseSigmaH3884
Dnase ISigmaD5025
אינסוליןSigmaI9278
b-FGFGIBCOPHG0264
EGFGIBCOPHG0314
מעכב פיברובלסטים לסרטן הלבלבCHI ScientificFibrOUT
0.45 μ m מסנן סטריליMilliporeSLHV033RB
עמודת ריכוזMilliporeMillipore UFC910008לרכז את הנגיף
PolybreneSigmaH9268
חומצה היאלורונית נתרן מלחSigmaH7630
L-גלוטמיןGIBCO21051024.00
GemcitabineGemzan
מתיל צלולוזSigmaM0262
Navitoclax (ABT-263)SelleckS1001מעכב Bcl-xL
<חזק>ציוד
מיקרו-מזרקNARISHIGE
סטריאומיקרוסקופOLYMPUSMVX10
מיקרוסקופ קונפוקליLEICASP80.00

מקורות

  1. Collins, D. C., Sundar, R., Lim, J. S. J., Yap, T. A. Towards Precision Medicine in the Clinic: From Biomarker Discovery to Novel Therapeutics. Trends in Pharmacological Sciences. 38 (1), 25-40 (2017).
  2. Huang, L., et al. Ductal pancreatic cancer modeling and drug screening using human pluripotent stem cell- and patient-derived tumor organoids. Nature Medicine. 21 (11), 1364-1371 (2015).
  3. Pauli, C., et al. Personalized In Vitro and In Vivo Cancer Models to Guide Precision Medicine. Cancer Discovery. 7 (5), 462-477 (2017).
  4. Hidalgo, M., et al. Patient-derived xenograft models: an emerging platform for translational cancer research. Cancer Discovery. 4 (9), 998-1013 (2014).
  5. Jung, J., Seol, H. S., Chang, S. The Generation and Application of Patient-Derived Xenograft Model for Cancer Research. Cancer Research and Treatment. 50 (1), 1-10 (2018).
  6. Fior, R., et al. Single-cell functional and chemosensitive profiling of combinatorial colorectal therapy in zebrafish xenografts. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 114 (39), E8234-E8243 (2017).
  7. Chen, L., et al. A zebrafish xenograft model for studying human cancer stem cells in distant metastasis and therapy response. Methods in Cell Biology. 138, 471-496 (2017).
  8. Gaudenzi, G., et al. Patient-derived xenograft in zebrafish embryos: a new platform for translational research in neuroendocrine tumors. Endocrine. 57 (2), 214-219 (2017).
  9. Lee, J. Y., Mazumder, A., Diederich, M. Preclinical Assessment of the Bioactivity of the Anticancer Coumarin OT48 by Spheroids, Colony Formation Assays, and Zebrafish Xenografts. Journal of Visualized Experiment. (136), (2018).
  10. Zhang, M., et al. Adipocyte-Derived Lipids Mediate Melanoma Progression via FATP Proteins. Cancer Discovery. 8 (8), 1006-1025 (2018).
  11. Howe, K., et al. The zebrafish reference genome sequence and its relationship to the human genome. Nature. 496 (7446), 498-503 (2013).
  12. Lieschke, G. J., Currie, P. D. Animal models of human disease: zebrafish swim into view. Nature Reviews: Genetics. 8 (5), 353-367 (2007).
  13. Guo, M., et al. U0126 inhibits pancreatic cancer progression via the KRAS signaling pathway in a zebrafish xenotransplantation model. Oncology Reports. 34 (2), 699-706 (2015).
  14. Yao, Y., et al. Canonical Wnt Signaling Remodels Lipid Metabolism in Zebrafish Hepatocytes following Ras Oncogenic Insult. Cancer Research. 78 (19), 5548-5560 (2018).
  15. Veinotte, C. J., Dellaire, G., Berman, J. N. Hooking the big one: the potential of zebrafish xenotransplantation to reform cancer drug screening in the genomic era. Disease Models & Mechanisms. 7 (7), 745-754 (2014).
  16. Zon, L. I., Peterson, R. The new age of chemical screening in zebrafish. Zebrafish. 7 (1), 1(2010).
  17. Lam, S. H., Chua, H. L., Gong, Z., Lam, T. J., Sin, Y. M. Development and maturation of the immune system in zebrafish, Danio rerio: a gene expression profiling, in situ hybridization and immunological study. Developmental & Comparative Immunology. 28 (1), 9-28 (2004).
  18. Mercatali, L., et al. Development of a Patient-Derived Xenograft (PDX) of Breast Cancer Bone Metastasis in a Zebrafish Model. International Journal of Molecular Sciences. 17 (8), (2016).
  19. Wu, J. Q., et al. Patient-derived xenograft in zebrafish embryos: a new platform for translational research in gastric cancer. Journal of Experimental and Clinical Cancer Research. 36 (1), 160(2017).
  20. Tulotta, C., et al. Imaging Cancer Angiogenesis and Metastasis in a Zebrafish Embryo Model. Advances in Experimental Medicine and Biology. 916, 239-263 (2016).
  21. Yao, Y., et al. Screening in larval zebrafish reveals tissue-specific distributions of fifteen fluorescent compounds. Disease Model& Mechanisms. , 028811(2017).
  22. Tentler, J. J., et al. Patient-derived tumour xenografts as models for oncology drug development. Nature Reviews: Clinical Oncology. 9 (6), 338-350 (2012).
  23. Charo, J., et al. Bcl-2 overexpression enhances tumor-specific T-cell survival. Cancer Research. 65 (5), 2001-2008 (2005).
  24. Wang, X., et al. Human embryonic stem cells contribute to embryonic and extraembryonic lineages in mouse embryos upon inhibition of apoptosis. Cell Research. 28 (1), 126-129 (2018).
  25. Boise, L. H., et al. bcl-x, a bcl-2-related gene that functions as a dominant regulator of apoptotic cell death. Cell. 74 (4), 597-608 (1993).
  26. Moore, J. C., et al. Single-cell imaging of normal and malignant cell engraftment into optically clear prkdc-null SCID zebrafish. Journal of Experimental Medicine. 213 (12), 2575-2589 (2016).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

מודל קסנוגרפט בדגי נחלירPDX לסרטן הלבלבסימון תאים פלואורסצנטיטרנספקציה של לנטיווירוסהזרקה לזחלי דגי נחלירהערכת תרופות כימותרפיהניתוח מיקרו-סביבה של גידוליםכימות פלואורסצנציהמדידת חיוניות תאיםרפואה מותאמת אישית לסרטן
מטופל-נגזר הטרוגנית מודל Xenograft של סרטן הלבלב באמצעות הזחלים Zebrafish כפונדקאים עבור הערכת סמים השוואתי
צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.