פרוטוקול זה מתאר שיטה לבידוד של גלגל העין של העכבר עם עפעף, משטח עינית, מקטעים קדמי ואחורי במצב לא תקין יחסית.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
בידוד של גלגל שלם כדי להשיג רקמת פני השטח העינית אינטגרלי לבדיקה היסטולוגית ואימונוהיסטוכימיה
במאמר זה
סיכום
תקציר
משטח עינית (OS) מורכב גיליון אפיתל עם שלושה חלקים מחוברים: palpebral לחמית, בולבר לחמית האפיתל הקרנית. הפרעה של מערכת ההפעלה תוביל לדלקת, דלקת הלחמית או שניהם (keratoconjunctivitis הלחמית). ב מודלים בעלי חיים ניסיוניים עם שינויים גנטיים מסוימים או פעולות מלאכותיות, זה שימושי כדי לבחון את כל חלקי מערכת האפיתל של OS להערכת השינויים הפתולוגית היחסיים של כל חלק במקביל. עם זאת, ניתוח של רקמות מערכת ההפעלה כמכלול ללא עיוות או נזק כבר מאתגרת, בעיקר בשל רכות והתיקמות של מערכת ההפעלה המוצמדת פיזית להפריד העפעפיים עדיין והעין. בנוסף, שקע העין העמוק שנוצר על ידי עצמות הגולגולת/מסלולית קשה מאוכלס לגמרי על ידי גלגל העין עוזב מקום מוגבל לניתוח הפעלה. כתוצאה מכך, הניתוח הישיר של גלגל העין עם רקמות מערכת ההפעלה המשויכת מהצד הפנים לעתים קרובות להוביל לנזקי רקמות, במיוחד palpebral ו בולבר לחמית. בפרוטוקול זה, תיארנו שיטה להסיר את הגולגולת ואת עצמות מסלולית ברציפות מראש עכבר מנוכר, עוזב את העפעפיים, משטח העינית, עדשה הרשתית לגמרי בחתיכה אחת. השלמות של גיליון מערכת ההפעלה השתמר היטב, וניתן היה לבחון אותו על ידי היסטולוגיה או חיסוני בסעיף אחד.
מבוא
המשטח העינית מורכב גיליון רציף של האפיתל הקרקע כולל palpebral לחמית, בולבר לחמית ו קרנית1. מבנים רבים הבלוטות משויכים האפיתל המשטח העינית ויחד לייצר שכבה של הסרט דמעה הגנה על משטח קרנית מפני ייבוש והסביבה פלישות2. הפרעה של מערכת ההפעלה תוביל לדלקת, דלקת הלחמית או שניהם (keratoconjunctivitis הלחמית). שני הגורמים הגנטיים והגירויים הסביבתיים או האינטראקציות שלהם תורמים לשינויים פתולוגיים של מערכת ההפעלה3,4. בהתאם, מגוון של מודלים מהונדסים גנטית, פיזית או כימית המושרה שימשו לחקר תהליכי מחלות של מערכת ההפעלה האנושית.
המבנה והתפקוד של מערכת ....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
כל ההליכים הכרוכים בשימוש בעכברים אושרו על-ידי הוועדה לטיפול בבעלי חיים והשימוש במרכז הבריאות של דז'ונגשאן, ודבקה בהצהרת ARVO לשימוש בבעלי חיים בחקר אופטלמולוגי וחזון.
1. חיתוך עין עם משטח עינית ועפעפיים שלמים
- . לנתח את הראש
- המתת חסד יום לידה 10 (P10) ו P28 עכברים (לראות את הטבלה של חומרים עבור זנים העכבר) על ידי פריקה צוואר הרחם, לחתוך את הראש מהצוואר על ידי זוג של מספריים חדים.
- ראש bisect עם זוג מספריים ישרים לאורך קו האמצע משונן להתחיל את העצם הפנימי rostrally אל האף (איור 1a, B).
הערה: עצם הגולגולת מתקשה עם הזדקנות העכבר, להיזהר לשמור את המספ....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
עצמות הגולגולת הגדולות הנצפים מזוויות שונות היו מאוירים באיור 1א-E, עם צבעים המציין עצמות שונות. השתמשנו בחיה בת ארבעה שבועות להדגמה של תהליכי הניתוח. בעקבות צעדים לחיתוך 1.1.1-1.1.3 וקיבעון קצר (שלב 1.1.4), גלגל העין עם עצמות הפנים המשויכים מומחש 1E. קיצוץ נוסף כדי להסיר הקדמי (האף והלסת הקדמית) והאחורי (למשל, הקודקודית) כמו גם העצמות המוכבקות לחסום רקמה עם עצמות הלסת הקדמית בעיקר מקסימום על גבי.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
תזכורת קריטית אחת להכנת העין שלמה היא כי כל עצמות מסלולית יש להסיר לחלוטין, במיוחד juga ועצמות lacrimal, אשר קטנים ממוקם ליד החלק התחתון של שקע העין. כל עצמות שמאל-מעל עלול לסבך את היסטולוגיה שלאחר מכן. במקרה פיסת עצם זעיר לא הוסר לחלוטין מניתוח בטעות, ניתן לבחור מתוך לחסום פרפין הטבעה באמצעות זוג מלקחיים. החור שנותר מאחור צריך להתמלא. בפרפין לאחר ניתוח זה
יש לתרגל זהירות נוספת בעת טיפול בעדשה. פיסות העדשה השבורה מפוזרות בדרך כלל דרך החלק השלם. הדבר ישפיע במידה ניכרת על בחינת המיקרוסקופיה ועל .......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
. למחברים אין מה לגלות
תודות
המחברים מודים לפרופסור רונג ג'ו על קריאה קריטית של כתב היד, וכל חברי המעבדה לסיוע טכני. עבודה זו נתמכת על ידי מענקים מן הארגון הלאומי למדעי הטבע של סין (NSFC: 31571077; בייג, סין), פרויקט החדשנות של מדעי העיר גואנגזו וטכנולוגיות (201707020009; גואנגג'ואו, מחוז גואנגדונג, סין), "100 אנשים תוכנית" מאוניברסיטת סון יאט-סן (8300-18821104; גואנגג'ואו, מחוז גואנגדונג, סין), ומימון מחקר מתוך המעבדה מפתח המדינה של רפואת עיניים במרכז דז'ונגשאן אופטלמולוגי (303060202400339; גואנגג'ואו, פרובינציית גואנג-דונג, סין).
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| 1 ופעמים; תמיסת מלח חוצצת פוספט (PBS) | Transgen Biotech | FG701-01 | |
| צינור צנטריפוגה 50 מ"ל | |||
| שונות | |||
| Alexa Fluor 488 Phalloidin | Invitrogen/Life Technologies | A12379 | ריכוז מומלץ 1:500 - 1,000 |
| Alexa Fluor 568 Phalloidin | Invitrogen/Life Technologies | A12380 | ריכוז מומלץ 1:500 - 1,000 |
| נוגדן Anti-K12 | Abcam | ab124975 | ריכוז מומלץ 1:1,000 |
| נוגדן Anti-K14 | Abcam | ab7800 | ריכוז מומלץ 1:800 |
| חומצת לימון | |||
| מכשירי | דיוק עולמיים14127 | ||
| ניתוח מיקרוסקופ. | Olmpus | SZ61 | |
| אלכוהול אתילי | |||
| Zeiss | AxioImager.Z2 | ||
| Fluoromount-G מדיה הרכבה | SouthernBiotech | 0100-01 | |
| מספריים מיקרו חיתוך-להב ישר | World Precision Instruments | 503242 | |
| תנורי מיקרוגל | Galanz | זני עכבר P70D20TL-D4 | |
| C57/BL6 ו-Sv129 מעורב | |||
| מס' 4 מלקחיים ישרים | World Precision Instruments | 501978-6 | |
| סרום עיזים רגיל | |||
| (PFA) | שונים | הכן תמיסה של 4% ב-1 ופעמים; PBS ומסנן עם 0.45μ m מסנן קרום | |
| צלחת תרבית רקמות | שונים | ||
| טריסודיום ציטראט | שונים | ||
| טריטון X-100 | סיגמא-אולדריץ' | SLBW6818 |
מקורות
- Swamynathan, S. K. Ocular surface development and gene expression. Journal of Ophthalmology. 2013, (2013).
- Arita, R., Fukuoka, S., Morishige, N. Functional Morphology of the Lipid Layer of the Tear Film. Cornea. 36 Suppl 1, S60-S66 (2017).
- Guo, D., et al.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
