המחקר שלנו מתמקד בהשפעות של לפטין איתות בגוף העורק (CB) על התגובה ארוי מאווררים (HVR). ביצעת ' אובדן של פונקציה ' ניסויים מדידת ההשפעה של לפטין על HVR לאחר האצת CB ו ' להרוויח של פונקציה ' ניסויים מדידה HVR לאחר יתר ביטוי של קולטן לפטין ב-CB.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
גישה ניסויית לבדיקת איתות לפטין בגוף העורק והשפעותיו על השליטה בנשימה
במאמר זה
סיכום
תקציר
הורמון מופק adipocyte הוא ממריץ נשימה חזקה, אשר עשוי לשחק תפקיד חשוב בהגנה על תפקוד הנשימה בהשמנה. הגופים הראשי (CB), איבר מפתח של רגישות ארוי היקפית, לבטא את התפקוד התפקודי ארוך של קולטן לפטין (LepRb) אבל את התפקיד של איתות לפטין בשליטה של נשימה לא הובהר במלואו. בדקנו את התגובה ארוי מאווררים (HVR) (1) ב C57BL/6J עכברים לפני ואחרי לפטין אינפוזיה בתוכנית הבסיסית ולאחר שימור CB; (2) ב- Leprb-שמנים לקויה db/db בעכבר בבסיס ואחרי leprb ביטוי יתר ב-CBs. ב C57BL/6J עכברים, לפטין גדל HVR ואפקטים של לפטין על HVR בוטלו על ידי CB denervation. ב- db/db , ביטוי leprb ב-CB מוגבר את hvr. לכן, אנו מסיקים כי לפטין פועל ב-CB כדי להגדיל את התגובות היפוקסיה.
מבוא
Adipocyte המיוצר הורמון לפטין פועל ההיפותלמוס לדכא את צריכת המזון ולהגדיל את קצב חילוף החומרים. מחקרים שבוצעו במעבדה שלנו1,2 ועל ידי חוקרים אחרים3,4 הראה כי לפטין מגביר את התגובה היפרקפיניק מאווררים (hvr) מניעת השמנה hypoventilation לפטין השמנה לקויה. עם זאת, רוב האנשים שמנים יש פלזמה גבוהה לפטין רמות ולהפגין עמידות השפעות מטבולית והנשימה של הורמון5,6,7,8. עמידות לפטין הוא רב עצרת, אבל חדירות מוגבלות של מחסום הדם-מוח (BBB) לפ....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
כל הפרוטוקולים הניסיוניים אושרו על ידי הוועדה לטיפול בבעלי חיים מוסדיים (MO18M211).
1. אינפוזיה לפטין
הערה: כדי לבחון את ההשפעה של לפטין על נשימה, התת-עורי לפטין C57BL/6J עכברים על ידי משאבת אוסמוטי להעלות במחזור רמות לפטין לאלה שנצפו עכברים שמנים.
-
הכנת משאבת אוסמוטי
- שוקלים את המשאבה הריקה כדי לבדוק את משקל נטו של הפתרון טעון.
- הוסף לפטין (5 מ"ג/mL) למשאבה אוסמוטי (1 μL/h במשך 3 ימים). ממלאים את המשאבה במזרק קטן (1 מ ל). לאחר מילוי, לסגור את המשאבה עם סיפק בוטה משופעת 27 מד מילוי צינור.
הערה: המזרק והשפופרת המצורפת צריכים להיות ל....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
אינפוזיה רציפה של לפטין גדל באופן משמעותי HVR ב רזה C57BL/6J עכברים מ 0.23 אל 0.31 mL/min/g/ΔFiO2 (P < 0.001, איור 2)11. CSND ביטלה את העלייה לפטין המושרה ב HVR (איור 2), בעוד לא השפעות מחליש של CSND על hvr נצפו בקבוצה ניתוח דמה לאחר לפטין אינפוזיה.
LepRb ביטוי ב-CB של leprb-מהשמנת יתר db/db עכברים המושרה עלייה משמעותית hvr מ 0.05 אל 0.06 mL/min/g/Δ.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
המוקד העיקרי של המחקר שלנו היה לבחון את תופעות הנשימה של איתות לפטין ב-CB. מספר פרוטוקולים פותחו כדי להעריך את התפקיד של לפטין בצורה מכניסטית. ראשון, התרומה הספציפית של CB ל HVR נותחו על ידי כימות זהיר של HVR במהלך 2 הדקות הראשונות של חשיפה ארוי. שנית, הרלוונטיות של ה-CB בלפטין-בתיווך השליטה בנשימה נבדקה על-ידי שתי גישות משלימות. בעכברים מסוג פראי רזה עם רמות לפטין נמוכה, HVR נמדדה בסיסית ולאחר אינפוזיה רציפה של לפטין; הניסוי חזר לאחר שימור הרדיו. ב- leprלקויה DB/db עכבר, hvr נמדד בת.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
למחברים אין תחומי עניין או גילויים סותרים.
תודות
R01HL138932, RO1HL133100, RO1HL128970, AHACDA34700025
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| מזרקי אינסולין 1 מ"ל | BD Biosciences | 309311 | |
| 1x PBS (pH 7.4) | Gibco | 10010-023 | 500 מ"ל |
| Ad-Laczד | "ר כריסטופר רודס (אוניברסיטת שיקגו) | 1 x 1010 pfu/mL | |
| Ad-LepRb-GFPVector | Biolabs | ADV-263380 | 2-5 x 1010 pfu/mL |
| עגלת הרדמה | אטלנטיק ביו-רפואי | ||
| בטדין | מוצרי פרדו בע"מ | 12496-0757-5 | |
| בופרנורפין (בופרנקס) | רקיט בנקיזר הלת'קר בע"מ | 12496-0757-5 | 0.3 מ"ג/מ"ל |
| C57Bl/6J | מעבדת ג'קסון | 000664 | עכברים זן |
| כותנה גזה ספוגי | פישרברנד | 22-362-178 | |
| db/db | מעבדת ג'קסון | 000697 | עכברים זן |
| אתנול | Pharmco-AAPER | 111000200 | |
| Isoflurane | Vetone | 502017 | |
| Lab תרשים | מדעי נתונים בינלאומי (DSI) | תוכנה | |
| מטריג'ל מטריקס | BD Biosciences | 356234 | |
| מיקרו מספריים קפיצים | מכשירים מדויקים בעולם (WPI) | 14124 | |
| Mouse Ox Plus | STARR Life Sciences Corp. | תוכנה | |
| עכבר Ox Plus חיישן צווארון | STARR Life Sciences Corp. | 015022-2 | קליפ צווארון בינוני מיוחד 7 אינץ' |
| תא פלתיסמוגרפיה של כל הגוף עכבר | מדעי הנתונים הבינלאומי (DSI) | PLY3211 | |
| חממת אוהיו Care Plus Ohmeda | HCHD000173 | ||
| מספריים הפעלה | מכשירי דיוק עולמיים (WPI) | 501753-G | |
| משאבה אוסמוטית | Alzet | 1003D | 1 μ L/h, 3 ימים |
| פנול | סיגמא-אולדריץ' | P4557 | |
| חלבון לפטין רקומביננטי לעכבר | R& D systems | 498-OB-05M | 5 מ"ג |
| מי מלח | RICCA Chemical | 7210-16 | 0.9% נתרן כלורי |
| תפר כירורגי סטרילי | DemeTech | DT-639-1 | משי, גודל 6-0 |
| מדחום | פתרונות כיול חדשניים (INNOCAL) | EW 20250-91 |
מקורות
- O'donnell, C. P., et al. Leptin prevents respiratory depression in obesity. American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 159, 1477-1484 (1999).
- Polotsky, V. Y., et al.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
