הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

קוונפיקציה של מתרבים ותאים מתים ב Enteroids

8.2K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/60501

⸱

31 בינואר 2020

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Jiangsu Key Laboratory of Neuropsychiatric Diseases and Cambridge-Suda (CAM-SU) Genomic Resource Center, Medical College of Soochow University, Department of Oncology, The First Affiliated Hospital of Soochow University, 2Department of Pathology, University of Chicago, 3Department of Pathology, Brigham and Women's Hospital–Harvard Medical School

* These authors contributed equally

במאמר זה

סיכום

הפרוטוקול המוצג משתמש cy, לנסות לכמת את מספר התאים מתרבים ומתים בתוך העכבר התרבותי enteroids. שיטה זו שימושית להערכת ההשפעות של טיפול תרופתי בשגשוג והישרדות של אורגנואיד.

תקציר

אפיתל המעי משמש מחסום המונע תוכן הלומיאלי, כגון מיקרוביוטה פתוגניים ורעלים, מלהיכנס לשאר הגוף. תפקוד המכשול אפיתל דורש שלמות של תאים אפיתל המעי. בעוד התפשטות התא אפיתל שומרת על שכבה רציפה של תאים המהווה מחסום, נזק אפיתל מוביל לתפקוד המכשול. כתוצאה מכך, תוכן הלומיאל יכול לחצות את מחסום המעי דרך מסלול בלתי מוגבל. התפקוד של מחסום המעיים נקשר למחלות מעיים רבות, כגון מחלות מעי דלקתיות. מבודד עכבר מעיים קריפטים יכול להיות תרבותי ומתוחזק כמו קריפטה-villus מבנים כמו, אשר מכונים אורגנואידים מעיים או "enteroids". בידור הם אידיאליים ללמוד את התפשטות ומוות התאים של תאי אפיתל המעי בתוך מבחנה. בפרוטוקול זה, אנו מתארים שיטה פשוטה לכמת את מספר התאים המתרבים והמתים בידור תרבותי. 5-ethynyl-2'-deoxyuridine (EdU) ו propidium יודיד משמשים לתווית תאים מתרבים ומתים ב-enteroids, ושיעור של תאים מתרבים ומתים מנותח לאחר מכן על ידי מנתחים cy, לנסות. זהו כלי שימושי כדי לבדוק את ההשפעות של טיפול תרופתי על התפשטות תא אפיתל המעי הישרדות התא.

מבוא

פונקציה יסודית של תאים אפיתל המעי היא להגן על כניסת תוכן הלומיאל כגון חיידקים פתוגניים ורעלים1,2. כדי לבצע פונקציה כזו, תאי גזע המעיים ברציפות מתרבים ולהבדיל למגוון של תאים אפיתל, כולל בידור תאים הפרשה, אשר יוצרים מכשול על ידי יצירת קשרים הדוקים3. התחדשות מהירה של תאים אפיתל המעי דורש תיאום מחמיר של התפשטות התא, בידול התא, ואת המוות התאים4,5. הפצת תאים מופחתת או מוות מופרז של תאים מוביל נזק אפיתל ופגיעה בתפקוד המכשול1,6. תפקוד של מכשול המעיים שויך מחלות מעיים דלקתיות7,8.

שיטה לקריפטטים מעיים תרבותי פותחה בעבר. באמצעות טכניקה זו, עכבר מבודד קריפטים לגדול לתוך מעיים אורגנואידים (enteroids), אשר יש קריפטה-villus כמו מבנים ומכילים את כל השושלת האפיתל המעי תא9,10. 5-ethynyl-2'-deoxyuridine (EdU) הוא אנלוגי תימידין כי הוא מסוגל להחליף תימין (T) ב-DNA כי עובר שכפול במהלך הפצת תאים. התאים הניתנים להתרבות יכולים להיות מסומנים במהירות ובדייקנות על-ידי EdU מכתים. Propidium יודיד (PI) הוא אנלוגי של אתידיום ברומיד המשחרר את הזריחה האדומה בעת הכניסה לתוך ה-DNA התקוע כפול. PI מזהה באופן ספציפי תאים מתים, שכן הוא עובר רק דרך קרום התא ניזוק.

בפרוטוקול זה, אנו מתארים תחילה כיצד לבודד קריפטטים מן המעי הקטן מורטין ואז לתרבות אותם כמו בידור בתוך מבחנה. לאחר מכן נתאר כיצד לנתח את התאים המתרבים והמתים ב-enteroids על ידי EdU ו-PI התאגדות וזרימה cy, לנסות.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

פרוטוקול זה אושר על ידי הוועדה טיפול בעלי חיים והשתמש של קיימברידג '-Suda מרכז משאבים גנומית (CAM-SU) באוניברסיטת Soochow.

1. בידוד ותרבות אורגאיד מעיים

  1. בידוד של קריפטטים מעיים ותרבות בידור
    1. המתת חסד בעכבר בן 8 שבועות בסוג פראי עם שאיפת CO2 . השתמש מלקחיים רקמות ומספריים קשתית עדין כדי לנתח כ 8 ס מ של ileum.
    2. ריקון החוצה באמצעות מזרק עם gavage האכלה מחט עם כ 40 מ ל של מלוחים הקרח קר של Dulbecco של המלח (DPBS), ואז לחתוך לאורכו עם מספריים ולפתוח את ileum.
    3. חותכים את המעי העקום לחתיכות קטנות (0.5-1.0 ס מ). מניחים את החלקים ב 5 מ ל של DPBS קר קירור קרח ב 15 מ"ל שפופרת חרוט, ואז סלע עבור 5 דקות על הקרח.
    4. השתמש בבקר הצינורות כדי לבשל את DPBS ולהחליף אותו עם 10 מ ל של מאגר קר 1 (2mm EDTA ב DPBS). . רוק ל -30 דקות על הקרח
    5. השתמש בבקר הפיפטה כדי לבשל מאגר 1 ולהחליף עם 10 מ ל של מאגר קר 2 (54.9 מ"מ D-sorbitol, 43.4 mM סוכות ב DPBS). נענעי עבור 2-3 דקות ביד (~ 80 שייקים/דקות).
    6. קח את droplet 20 μL של מאגר 2 תוכן לאחר טלטול ולבדוק תחת מיקרוסקופ.
    7. מסנן מאגר 2 תוכן עם מסננת תא 70 יקרומטר מעוקר, ולאחר מכן לאסוף את המאגר המסונן עם צינור 50 mL חרוט.
    8. פיפטה 20 μl של פילטרט על השקופית כדי לספור את הקריפטטים. העבר נפח מספיק של מאגר 2 משלב 1.1.7 כדי להבטיח כי יש ~ 500 הקריפטטים/טוב.
    9. ספין למטה ב 150 x g עבור 10 דקות ב 4 ° c. , ברגע שמסתובב מסתובב. הוא מזהם את הסופרנטאנט בזהירות
    10. להשעות קריפטטים ב 50 μL של מטריצה מרתף ממברנה (g., מטריצות) לכל 500 קריפטטים, פיפטה למעלה ולמטה (להיות זהיר כדי למנוע בועות), ואז למקם 50 μL droplet של מטריצה קרום מרתף/קריפטה לערבב במרכז של אחד טוב בצלחת 24. מודדת במשך 30 דקות ב 37 מעלות צלזיוס לפולימלמטריקס מטריצות קרום מרתף.
    11. לאחר 30 דקות של פולימוניזציה, בקפידה להוסיף 600 μL של מדיה מיניגוט (מתקדם בינונית הנשר המתוקן של החברה [DMEM]/F12, 2 מ"מ L-alanine-L-גלוטמין, עט/דלקת [100 יחידות/mL], 10 מ"מ Hepes, תוספת N2 [1:100], B27 תוספת [1:50] עם פקטור גידול עוריות [EGF; 50 ng/mL], הראש [100 ng/mL], R-החתן [500 ng/mL], ו Y27632 [10 μM]) לכל באר, ואז להחזיר את הצלחת לחממה 37 ° c. שימו לב תחת מיקרוסקופ כל יום, והחליפו את התקשורת כל שניים-שלושה ימים.
  2. הבעת ההתיישנות
    הערה: בתרבויות ארוכות יש לפצל את המרכנואידים בקירוב בכל שבוע.
    1. , כדי לעבור את המרכנואידים. הניחו את צלחת תרבות הרקמה על הקרח ולהוסיף 1 מ ל של DPBS קר לכל טוב. השתמש בטיפ P1000 לפיפטה למעלה ולמטה עד שלא יישארו נתחי מטריצות מוצקים של קרום המרתף.
    2. מעבר למעלה ולמטה פעם אחת באמצעות מזרק אינסולין 1 מ ל (27 גר') ולתוך צינורית חרוט של 15 מ ל. ספין למטה עבור 5 דקות ב 150 x g ב 4 ° c.
    3. השתמש בפיפטה כדי להסיר את DPBS. השהה מחדש ב-50 μL של מטריצת קרום המרתף/ובכן.
    4. מניחים את הצלחת בחממה 37 ° c עבור 30 דקות כדי לאפשר מטריצת קרום מרתף פולימלזציה. כיסוי כל טוב עם 600 μL של מדיה ENR (מיניגוט מדיה, 50 ng/mL EGF, 100 ng/mL ראש, 500 ng/mL R-החתן), ואז להחזיר את הצלחת לחממה.

2. הזרימה Cy, ניתוח של תאים EdU-חיוביים ב-Enteroids

הערה: איור 1 מציג את זרימת העבודה עבור ניתוח cy, המנסה של תאים של EdU-חיוביים ב-enteroids.

  1. דגירה של בידור עם EdU
    1. לגדול enteroids משלב 1.2.4 עבור 5 – 7 ימים. מעבר בידור לתוך צלחת חדשה 24 טוב ביחס מפצל של 1:2. הוסף 600 μL של מדיום ENR לכל באר. מיכל הדגירה 4-5 ימים בחממה 37 ° c.
    2. הגדר את קבוצת הביקורת (בידור לא מטופל) ואת הקבוצה הניסיונית (בידור שטופלו עם 5 ng/mL באינטרלוקין 22 [IL-22]). הכינו לפחות שלוש משכפל עבור כל קבוצה.
    3. הוסף את EdU למדיום ENR כדי להכין את מדיום EdU עם ריכוז של 50 μM. הוסף 600 μL של EdU מדיום לכל טוב ומארג עבור 2 h בחממה 37 ° c. הגדר באר אחת של בידור ללא הטיפול ב-EdU כפקד שלילי לחיסור הרקע.
  2. קציר של בידור מתוך מטריצת קרום המרתף
    1. השתמש בבקר פיפטה לאספירין בינונית EdU ולשטוף 1x עם DPBS. הוסף 1 מ ל של DPBS.
    2. השתמש בP1000 הקצה ובפיפטה למעלה ולמטה עד שאין נתחי מטריצות מוצקים של קרום המרתף יישארו. העבר לצינור 15 מ"ל ו ספין למטה ב 300 x g עבור 5 דקות. לבטל את הסופרנטאנט.
    3. הוסף 500 μL של אנזימי תא-דיסוציאציה (טבלת חומרים) ו-דגירה עבור 15 דקות ב 37 ° c. השתמש בP200 הקצה ובפיפטה למעלה ולמטה כדי לשבור את הenteroids תאים בודדים.
    4. הוסף 3 מ ל של מדיום DMEM בינונית המכילה 10% סרום של שור עוברי (FBS) ו פיפטה שוב ושוב עם טיפ P1000.
    5. ספין למטה ב 300 x g עבור 5 דקות ומכה את המדיום supernatant. השהה מחדש את התאים באמצעות 1 מ ל של DPBS.
  3. קיבעון וחדירות של תאים
    1. העבר את ההשעיה התא לצינור 1.5 mL, ספין למטה ב 300 x g עבור 5 דקות, ולהיפטר supernatant.
    2. להשעות את התאים עם 1 מ ל של 4% פאראפורמלדהיד (בתחתית), לתקן עבור 15 דקות בטמפרטורת החדר (RT), ו ספין למטה ב 300 x g עבור 5 דקות. מרוב הסופרנטאנט עם טיפ פיפטה, לשטוף 1X עם dpbs, ו ספין למטה כדי להסיר את הסופרנטאנט.
    3. השהה מחדש תאים עם 1 מ ל של 0.5% nonionic. דגירה עבור 10 דקות ב RT.
    4. ספין למטה ב 300 x g עבור 5 דקות ומכה את הסופרנטאנט. שטוף 1x עם DPBS ו ספין למטה כדי להסיר את הסופרנטאנט.
  4. זיהוי של EdU
    1. הכנת פתרונות מניות עבור כל רכיב מראש: 1) פתרון עבודה של מאגר התגובות אלקסה Fluor, 2) פתרון עבודה של 1 x EdU התגובה במאגר, ו 3) מניות 10x פתרון של התוסף מאגר של EdU.
    2. הכינו את תוסף המאגר של 1x EdU על-ידי דילול הפתרון ה1:10 של 10x במים מאוהים. . הכינו את התמיסה הזו רעננה
    3. הכינו קוקטייל תגובה לפי שולחן 1.
      הערה: הוסף את המרכיבים בסדר המפורט בטבלה. השתמש בקוקטייל התגובה בתוך 15 דקות של הכנה.
    4. הוסף 100 μL של קוקטיילים התגובה לכל שפופרת 1.5 mL. להשעות מחדש את התאים, להגן מפני אור, הדגירה עבור 30 דקות ב RT.
    5. צנטריפוגה ב 300 x g עבור 5 דקות ומכה את פתרון התגובה עם טיפ פיפטה בעדינות.
    6. הוסף 0.5% nonionic חומרים פעילי שטח החדירה לצינור כל לשטוף 1 x ב RT. צנטריפוגה ב 300 x g עבור 5 דקות, מטפי את supernatant עם טיפ בעדינות, ולהשעות מחדש את התאים 1 מ ל של dpbs.
  5. ניתוח תאים על ידי הציטוקימטריה
    1. סנן את התאים שהושעו מחדש עם מסננת מ40 יקרומטר, ולאחר מכן אסוף את התאים המסוננים באמצעות צינורית חרוט של 15 מ"ל. בצע זיהוי של FACS במחשב בהקדם האפשרי.
      הערה: אם התנאים מוגבלים, יש לאחסן את הדגימות המוכתמת בתא בחשיכה ב-4 ° c ובדיקת זרימה תוך 3 ימים.
    2. בחר את הערוץ המתאים (בהתאם לסוג של אלקסה fluor אזיד ב-EdU kit; כאן, ערוץ אדום) ומתח (כאן, ~ 150 – 350 V) עבור הניתוח cy, מנסה להזרים.
    3. אסטרטגיית מדון
      1. ציירו מזימה מדומה של FSC-A (ציר x) לעומת מדינת מדינת-מדינת-מדינת-מדינת-מדינת-התחתית (ציר y) והפיצו את רוב התאים לטווח הגלוי של מפת הנקודות על-ידי התאמת המתח. בחר את אוכלוסיית התא (R1) והוצא את הריסות התאים בפינה השמאלית התחתונה.
      2. מאוכלוסיית התאים R1, צור FSC-A (ציר x) vs. מגרש צבע מדומה FSC-H (ציר y) והגדר את השער כדי לבחור תאים בודדים (R2) כדי לכלול את האפשרות של קיבוץ תאים.
      3. מאוכלוסיית התאים R2, צור את עוצמת הקרינה הפלואורסצנטית (ציר x) לעומת מספר תא (ציר y), והשתמש בפקד השלילי כדי להגדיר את השער. האזור של אות הפלורסנט הוא אזור תא חיובי (R3). השוואת היחס של תאים EdU-חיוביים (R3) בין קבוצות הניסוי והבקרה.

3. הזרמת Cy, ניתוח של תאי PI-חיוביים במרכנואידים

הערה: איור 2 מציג את זרימת העבודה עבור הניתוח cy, מנסה הזרימה של תאים PI-חיוביים ב-enteroids.

  1. דגירה של תאים enteroid עם PI
    1. לגדול enteroids משלב 1.2.4 עבור 5 – 7 ימים. מעבר בידור לתוך צלחת חדשה 24 טוב ביחס מפצל של 1:2. הוסף 600 μL של מדיום ENR לכל באר. מיכל הדגירה 4-5 ימים בחממה 37 ° c.
    2. הגדר את קבוצת הפקדים (לא מטופלת) והקבוצה הניסיונית (IL-22 שטופלו), תוך שימוש בשלוש משכפל עבור כל קבוצה לפחות.
    3. הוסף PI למדיום ENR כדי להכין מדיום PI עם ריכוז של 3 μM.
    4. הוסף 600 μL של מדיום PI לכל טוב ומארג עבור 30 דקות בחממה 37 ° c. להגדיר היטב אחד של בידור ללא טיפול PI כפקד שלילי לחיסור הרקע.
  2. קציר בידור מתוך מטריקס קרום המרתף בעקבות צעדים 2.2.1-2.2.5.
  3. ניתוח תאים על ידי הציטוקימטריה
    1. סנן את התאים שהושעו מחדש עם מסננת מ40 יקרומטר ואסוף את התאים המסוננים באמצעות צינורית חרוט של 15 מ ל.
    2. בצע זיהוי של FACS במחשב בהקדם האפשרי.
      הערה: אם התנאים מוגבלים, יש לאחסן את הדגימות המוכתמת בתא בחשיכה ב-4 ° c ובדיקת זרימה תוך 3 ימים.
    3. בחר את הערוץ המתאים (כאן, ערוץ אדום) ומתח (כאן, ~ 150 – 350 V) לצורך הזרמת הניתוח cy,.
    4. השתמש באותה אסטרטגית העליה כמתואר בסעיף 2.5.3.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

קריפטטים מעיים קטנים היו מבודדים ומתורבתים כמו בידור בתוך מטריצת קרום המרתף. בידור החל ליצור ניצנים 2 ימים לאחר בידוד. ביום 6, enteroids היו ניצנים רבים עם המון פסולת (תאים מתים) ב לומן. המונונואידים היו מוכנים להיות בשלב זה (איור 3).

מחקרים רבים הראו כי ציטוקינים דלקתיים חיוניים לתחזוקת הומאוסטזיס אפיתל המעי. ביטוי חריג של ציטוקינים דלקתיים קשורה היטב עם התרחשות של מחלות המעי דלקתיות11. למשל, המחקר הקודם שלנו הראה כי IL-22 מקדם התפשטות של ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

פרוטוקול זה מפרט את הצעדים הנחוצים לתרבות של בידור באמצעות מבחנה וכימות של תאים של EdU ו-PI-חיוביים ב-enteroids על ידי הזרמת cy, try. יש מספר יתרונות של אסטרטגיה זו. ראשית, התוויות של EdU משמשות לזיהוי תאים מתרבים ב-enteroids. בהשוואה לשיטת BrdU המסורתית, שיטת התיוג של EdU היא מהירה יותר, רגישה יותר ומדויקת יותר. EdU דומה מאוד תימין (T), אשר מחליף תימין ב סינתזה DNA במהלך חלוקת התא. לעומת הנוגדן brdu, EdU קל יותר לפזר לתא, וזיהוי של EdU אינו דורש דנטורציה DNA ו אנטיגן נוגדן תגובה. שנית, הניתוח cy, מנסה הזרימה יכול במהירו...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

. למחברים אין מה לגלות

תודות

עבודה זו נתמכת על ידי הקרן הלאומית למדע הטבע של סין (31971062, 31900326, ו 31601022), הקרן המדע הטבעי של מחוז ג'יאנגסו (BK20190043, BK20180838), קרן מחקר של המעבדה מפתח המדינה של ביוטכנולוגיה התרופות, אוניברסיטת נאנג'ינג (KF-GN-202004). הקרן המדע הטבעי של ג'יאנגסו מוסדות ההשכלה הגבוהה של סין (19KJB320003), תוכנית פרנסה וטכנולוגיה של סאזהאו City (SYS2019030), ואת תוכנית חדשנות מחקר עבור בוגרי המכללה של מחוז ג'יאנגסו (KYCX19-1981) . עבודה זו נתמכת גם על ידי טאנג המלומד של אוניברסיטת Soochow.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
צינור צנטריפוגה 15 מ"לקורנינג430791
22 גרם מחט גבאג'VWR20068-608
צלחת 24 בארותNunc142475
40 מ"מ מסננת תאים סטרילייםBD352340
צינור צנטריפוגה 50 מ"לקורנינג430829
מסננת תאים סטרילית 70 מ"מBD352350
מתקדם DMEM/F-12GIBCO12634010
Attune NxT אקוסטי מיקוד ציטומטרInvitrogenA24863
B-27 תוסףGIBCO17504044
מאגר 12 מ"מ EDTA במאגר DPBS
254.9 מ"מ D-סורביטול, 43.4 מ"מ סוכרוז בעכברי
DPBS C57/B6מכון המחקר הביו-רפואי של אוניברסיטת
אנזימי דיסוציאציה תאית (TrypLE)Life טכנולוגיות12605-010
צנטריפוגהEppendorf5424
צנטריפוגהEppendorf5424R
צנטריפוגהEppendorf5810R
Click-iT Plus EdU Alexa Fluor 594 Imaging KitLife טכנולוגיותC10639
חממת CO2PanasonicMCO-18AC
DPBSGIBCO
D-סורביטולBBISB0491
EDTABBIEB0185
ENR מדיהMinigut, 50 ננוגרם/מ"ל EGF, 100 ננוגרם/מ"ל נוגין, 500 ננוגרם/מ"ל R-spondin
סרום בקר עוברי (FBS)Gibco10270-106
מספריים איריס עדיןTansoole2037454
מיקרוסקופ פלואורסצנטיאולימפוסFV1000
תוסף GlutaMAXGIBCO35050-061
עיזים סרוםחיים טכנולוגיות16210-064
HDMEMHycloneSH30243.01B
HEPESSigmaH4034
MatrigelCorning356231
Minigut MediaAdvanced DMEM/F12, 2 מ"מ גלוטמקס, Penn/Strep (100 יחידות/מ"ל), 10 מ"מ Hepes, תוסף N2 (1:100), תוסף B27 (1:50)
תוסף N2& DAR009
פעילי שטח לא יוניים (Triton X)BBITB0198-500ML
מספריים הפעלה (12.5 ס"מ)Tansoole2025785
Paraformaldehyde (PFA)sigma158127-500g
Penn/StrepInvitrogen15140-148
מיקרוסקופ ניגודיות פאזהNikonTS1000
Propidium iodideSigmaP4170-25MG
רקומביננטי EGFPeproTech315-09
עכבר רקומביננטי NogginPeproTech250-38
עכבר רקומביננטי R-Spondin 1R& D3474-RS-050
עכברים רקומביננטיים IL-22PeproTech210-22-10
סוכרוזBBI SB0498
מלקחיים לרקמותטנסול2026704
Y-27632 2HC1SelleckS1049
נאנג'ינג 14190144 R

מקורות

  1. Odenwald, M. A., Turner, J. R. The intestinal epithelial barrier: a therapeutic target. Nature reviews. Gastroenterology & Hepatology. 14 (1), 9-21 (2017).
  2. Buckley, A., Turner, J. R. Cell Biology of Tight Junction Barrier Regulation and Mucosal Disease. Cold Spring Harbor Perspectives in Biology. 10 (1), (2018).
  3. Gehart, H., Clevers, H. Tales from the crypt: new insights into intestinal stem cells. Nature reviews. Gastroenterology & Hepatology. 16 (1), 19-34 (2019).
  4. Vancamelbeke, M., Vermeire, S. The intestinal barrier: a fundamental role in health and disease. Expert Review of Gastroenterology & Hepatology. 11 (9), 821-834 (2017).
  5. Garcia-Carbonell, R., Yao, S. J., Das, S., Guma, M. Dysregulation of Intestinal Epithelial Cell RIPK Pathways Promotes Chronic Inflammation in the IBD Gut. Frontiers in Immunology. 10, 1094(2019).
  6. Li, B. R., et al. In Vitro and In Vivo Approaches to Determine Intestinal Epithelial Cell Permeability. Journal of Visualized Experiments. (140), e57032(2018).
  7. Turner, J. R. Intestinal mucosal barrier function in health and disease. Nature Reviews Immunology. 9 (11), 799-809 (2009).
  8. Graham, W. V., et al. Intracellular MLCK1 diversion reverses barrier loss to restore mucosal homeostasis. Nature Medicine. 25 (4), 690-700 (2019).
  9. Sato, T., et al. Single Lgr5 stem cells build crypt-villus structures in vitro without a mesenchymal niche. Nature. 459 (7244), 262-265 (2009).
  10. Sato, T., Clevers, H. Growing self-organizing mini-guts from a single intestinal stem cell: mechanism and applications. Science. 340 (6137), 1190-1194 (2013).
  11. Friedrich, M., Pohin, M., Powrie, F. Cytokine Networks in the Pathophysiology of Inflammatory Bowel Disease. Immunity. 50 (4), 992-1006 (2019).
  12. Zha, J. M., et al. Interleukin 22 Expands Transit-Amplifying Cells While Depleting Lgr5 Stem Cells via Inhibition of Wnt and Notch Signaling. Cellular and Molecular Gastroenterology and Hepatology. 7 (2), 255-274 (2019).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

EdUproliferIL 22
קוונפיקציה של מתרבים ותאים מתים ב Enteroids
צור קשר
המלצה לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

2026 © זכויות יוצרים MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.