הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

תסכולת הזנה דרך הפה חיידקית עם יתושים שטופלו באנטיביוטיקה

6.6K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/61341

⸱

12 בספטמבר 2020

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Hunan Provincial Key Laboratory of Animal Intestinal Function and Regulation, College of Life Science, Hunan Normal University, 2State Key Laboratory of Developmental Biology of Freshwater Fish, Hunan Provincial Key Laboratory for Microbial Molecular Biology, College of Life Science, Hunan Normal University, 3Department of Infectious Diseases, the Second Xiangya Hospital, Central South University

במאמר זה

סיכום

מאמר זה מציג פרוטוקול כדי לחקור את ההשפעה של חיידקים בודדים מעיים יתוש, כולל בידוד וזיהוי של חיידקים midgut יתושים, דלדול אנטיביוטיקה של חיידקים מעיים יתוש, ולהחזן מחדש מין אחד חיידקים ספציפיים.

תקציר

היתוש midgut נמלים microbiome דינמי מאוד המשפיע על חילוף החומרים המארח, רבייה, כושר, ויכולת וקטורית. מחקרים נערכו כדי לחקור את ההשפעה של חיידקים במעיים ככלל; עם זאת, חיידקים שונים יכולים להפעיל השפעות ברורות כלפי המארח. מאמר זה מספק את המתודולוגיה כדי ללמוד את ההשפעה של כל מיקרוב ספציפי מעיים יתוש ואת המנגנון הפוטנציאלי.

פרוטוקול זה מכיל שני חלקים. החלק הראשון מציג כיצד לנתח את מידגוט היתוש, לבודד מושבות חיידקים cultivable, ולזהות מינים חיידקים. החלק השני מספק את ההליך כדי ליצור יתושים שטופלו באנטיביוטיקה ולהריח מחדש מין אחד ספציפי חיידקים.

מבוא

יתושים נחשבים וקטורים החשובים ביותר של מחלות פתוגנית אנושית, העברת מעל מאה פתוגנים כולל וירוס זיקה, וירוס דנגה, טפילי Plasmodium 1. כאשר יתושים לקחת ארוחת דם כדי לרכוש חומרים מזינים עבור oviposition, הם יכולים בטעות בלע פתוגנים ממארח נגוע דרך מערכת העיכול2. חשוב לציין, midgut יתוש, אשר ממלא תפקיד מרכזי הן בעיכול ארוחת דם וכניסה פתוגן, נמלים microbiome דינמי מאוד3.

מספר מחקרים אפיינו מיקרוביוטה יתושים שנצברה במעבדה ואספו בשדה בשיטה התלויה בתרבות אובחיידק רצף 4,5,6. מינים כמו פנטואה, סראטיה, קלבסילה, אליזבתקינגיה, ו Enterococcus מבודדים בדרך כללמיתושים במחקרים שונים 5,7,8,9. מעניין, microbiota מעיים יתוש תנודות באופן דינמי הן המגוון הקהילתי ואת כמות מינים חיידקים, מושפע שלב הפיתוח, מינים, מוצא גיאוגרפי, והתנהגותהאכלה 4. מחקרים מראים כי האכלת דם מגבירה באופן דרמטי את העומס החיידקי הכולל עם התרחבות מהירה של מינים מ Enterobacteriaceae וירידה במגוון הכולל 10,11. בנוסף, microbiota מעיים יתוש של שלב הזחל הוא בדרך כלל נמחק כאשר החרק עובר מטמורפוזה במהלך גורים ואקלוסיון; לכן, יתושים בוגרים חדשים צריכים לאכלס מחדש את המיקרוביוטהשלהם 4.

מיקרוביוטה מעיים לווסת פיזיולוגיה חרקים בהיבטים שונים, כולל ספיגת חומרים מזינים, חסינות, פיתוח, רבייה, ויכולתוקטורית 12. זחלי יתושים Axenic להיכשל לפתח מעבר instar הראשון בעוד חיידקים אוראלי אספקה מצילה את הפיתוח, המציין כי החיידק מעיים יתוש חיוני לפיתוחזחלים 13,14. חוץ מזה, דלדול של חיידקי מעיים מעכב את העיכול של ארוחת הדם וספיגת חומרים מזינים, משפיע על התבגרות ביציט, ומפחית oviposition15. בנוסף, יתושים עם מיקרופלורה במעיים לעורר תגובות חיסוניות גבוהות יותר בהשוואה יתושים שטופלו באנטיביוטיקה, עם ביטוי פפטיד מיקרוביאלי גבוה כל הזמן נגד פתוגנים אחריםלהדביק 16. אנטיביוטיקה ניתנת בדרך כלל דרך הפה כדי להסיר חיידקים מעיים פאן במחקרים אלה, ולאחר מכן נערכים ניסויים כדי להשוות את ההבדל בין יתושים axenic ויתושים עם חיידקים commensal. עם זאת, היתוש midgut נמלים קהילה מגוונת של חיידקים, וכל מין חיידקים יכול להפעיל השפעה ברורה כלפי הפיזיולוגיה המארחת.

מיקרוביוטה יתוש מווסת יכולת וקטורית עם השפעות שונות. קולוניזציה על ידי Proteus מבודד יתושים נגזר שדה של אזורים דנגה אנדמי מקנה ביטוי פפטיד מיקרוביאלית מפוקחת והתנגדות נגד זיהום וירוס דנגה16. הפטריה entomopathogenic Beauveria bassiana מפעילה את מסלול החיסון אגרה ו JAK-STAT נגד זיהום arbovirus17. לעומת זאת, הפטרייה Talaromyces מבודד Aedes aegypti midgut מקל על זיהום וירוס דנגה על ידי לווסת פעילות ניסיוןהמעיים 18. בנוסף, Serratia marcescens מקדם שידור arbovirus באמצעות חלבון הפרשה בשם SmEnhancin, אשר מעכל את שכבת הריר על אפיתל מעיים שליתושים 19.

הליך זה מספק שיטה שיטתית ואינטואיטיבית לניתוק של מידגוט היתושים, בידוד מושבות חיידקים הניתנות לפולחן, זיהוי מיני החיידקים והפעלה מחדש באמצעות האכלה אוראלית. הוא מספק תוצאות מייצגות של הזנת דם עם חיידק commensal, מנלינוספטיום Chryseobacterium, על התפתחות השחלות יתושים וoviposition.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

1. פירוק מידגוט ובידוד חיידקים הניתנים לפולחן

  1. הכן את היתוש לפירוק.
    1. לאסוף את היתושים 7-9 ימים לאחר הופעתו עם שונא. להניא את היתושים שנאספו על ידי כך שהם נושאים אותם לטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס במשך 3-5 דקות ולשמור על היתושים מנומסים בצלחת פטרי קרה כקרח עד לפירוק.
  2. לחטא את מכשירי המעבדה ואת משטח היתוש.
    1. לחטא את ספסל הניסוי, לנתח מיקרוסקופ, מפסים, ושקופית זכוכית על ידי ריסוס 75% אתנול כדי למנוע זיהום על ידי חיידקים מהסביבה.
    2. הכינו צלחת פטרי סטרילית המכילה 75% אתנול ושתי מנות פטרי המכילות תמיסת מלח סטרילית עם פוספט אחד (PBS אחד).
    3. משטח לחטא את היתוש על ידי טבילה וטלטלה אותם 75% אתנול במשך 3 דקות, ולשטוף פעמיים עם 1x חיץ PBS במקרה אתנול משפיע על פלורת המעיים החתוצה.
  3. תנתקו את היתוש.
    1. העבר את היתוש המחוקר על מגלשת הזכוכית עם טיפה של מאגר PBS סטרילי פי 1. לנתח מתחת למיקרוסקופ ה לנתח.
    2. תחת ההגדלה התחתונה של מיקרוסקופ לנתח, בזהירות להסיר את הרגליים, כנפיים, ואת ראש היתוש כדי למנוע בריחה. הסר את somite האחרון של היתוש על ידי חיתוך ישירות, במקום למשוך אותו, כדי למנוע את שבירה מערכת העיכול.
    3. מהדק את בית היתוש ואת קצה הבטן עם מלחציים. שלף בעדינות את מערכת העיכול של היתוש. מערכת העיכול הנרכשת מכילה בדרך כלל את היבול, התפוררות, האמצע, ההינדגוט והצינורות המופיגים.
    4. כוונן את מיקרוסקופ הניתוח להגדלה גבוהה יותר. הסר את היבול, התעמלות, ההינדגוט, ואת הצינורות Malpighian ממערכת העיכול החתוצה כדי לקבל midgut של היתוש.
    5. יש לדאוג בעת הסרת היבול, כאשר היבול מתנפח ודומה למידגוט לאחר שהיתוש לוקח ארוחת סוכר. הצינורות המופיגים, קבוצה של צינורות צואה ארוכים ודקים, ממוקמים בגבול שבין האמצע לבין ההינדגוט.
  4. לבודד חיידקי מעיים.
    1. להעביר את midgut הניתח לצינור סטרילי 1.5 מ"ל עם 200 μL של חיץ PBS 1x סטרילי.
    2. טוחנים את האמצע על ספסל סטרילי ביסודיות עם עלי סטרילי כדי לאפשר שחרור מלא של חיידקי מעיים למאגר.
    3. תדלל את ההומוגן לשלושה דילולים פי 10. להוסיף 50 μL של כל דילול לצלחת LB (מרק לוריה) אגר, ולאחר מכן להפיץ אותו על הצלחת. אם האמצע מכיל ריכוז גבוה של פלורת מעיים, זה חיוני לעשות דילול סדרתי יותר כדי לבחור מושבות בודדות.
    4. דגירה את הצלחת ב 37 ° C במשך 1-2 ימים עד מושבות בודדות גלויות.
  5. זיהוי מינים
    1. בחר מושבות בודדות ולחסן אותם בהתאמה לתוך בקבוקון חסוני 150 מ"ל המכיל 50 מ"ל של מרק LB בינוני.
    2. לנער את החיידקים ב 37 מעלות צלזיוס לילה.
    3. לחלץ את ה-DNA הכולל על ידי ערכת מיצוי DNA גנומי חיידקי. להגביר 16S rDNA על ידי תגובת שרשרת פולימראז (PCR).
      הערה: קיימים מקטעים מרובים ב- 16S rDNA הנסחסים. בהתבסס על אזורים אלה שנסחבו, פריימרים אוניברסליים לחיידקים יכולים להיות מתוכננים כדי להגביר את שברי rDNA 16S של כל החיידקים. פריימרים אלה הם ספציפיים חיידקים, ואת ההבדל באזור המשתנה של 16S rDNA יכול לשמש כדי להבחין חיידקים שונים. לכן, 16S rDNA נמצא בשימוש נרחב לזיהוי חיידקים.
    4. לשחזר ולטהר שברי DNA ממוצרי PCR על ידי אלקטרופורזה ג'ל agarose וערכת שחזור ג'ל מסחרי.
    5. לבצע רצף DNA על שברי DNA מטוהרים כדי להשיג רצפי גנים חיידקיים.
    6. השווה את רצף הגנים 16S rRNA עם רצף חיידקים זמין GenBank. בחר את מסד הנתונים חיידקים וארכיאה.
      הערה: זיהוי לרמת המינים הוגדר כ-99% 16S רצף rDNA דמיון לערך GenBank הקרוב ביותר. המבודד הוקצה הסוג המתאים כאשר דמיון רצף rDNA 16S שלה היה <99% ו -95%.

2. טיפול אנטיביוטי וחיידק מחדש

  1. הכן את הפתרון האנטיביוטיקה.
    1. לשקול את הכמות הנדרשת של סוכרוז, פניצילין, סטרפטומיצין להכין 10% פתרון סוכרוז כולל 20 יחידות של פניצילין ו 20 μg של סטרפטומיצין לכל מ"ל.
  2. להאכיל יתושים עם תמיסת אנטיביוטיקה.
    1. להניע את היתושים ב-4°C למשך 3-5 דקות. מעבירים את היתושים לספל נייר. מכסים את החלק העליון בגזה ומדרים את הגזה בקלטת כדי למנוע מיתושים להימלט.
    2. טובלים כדורי צמר גפן סטריליים בתמיסה אנטיביוטית ומנינים אותם בזהירות על היתושים. לסחוט את כדורי הכותנה לפני השימוש כדי למנוע יתושים מטביעה בכדורי צמר גפן נוטף.
    3. מכסים את כדורי הכותנה בצלחת פטרי ב-10 ס"מ למניעת אידוי לחות. החליפו את כדורי הכותנה פעמיים ביום במשך שלושה ימים רצופים.
  3. אשר את היעילות של הטיפול באנטיביוטיקה.
    1. על פי השיטה הנ"ל, לנתח את midgut של יתושים שטופלו באנטיביוטיקה.
    2. להעביר את midguts החתוצו לצינור סטרילי 1.5 מ"ל עם 200 μL של חיץ PBS 1x סטרילי.
    3. טוחנים midguts בספסל סטרילי ביסודיות עם עלי סטרילי כדי לאפשר שחרור מלא של חיידקי מעיים למאגר.
    4. לחלץ את ה-DNA מיקרוביאלי בטן על ידי ערכת חילוץ DNA גנומי חיידקים.
    5. לבצע כמות חיידקים על ידי PCR כמותי בזמן אמת (qPCR) על ה-DNA הגנומי באמצעות פריימרים eubacteria אוניברסלי (16S rRNA F: TCCTACGGGGGAGACAGCAGT ו R: GGACTACCAGGACTCTAATCCTGTT).
  4. הכנת השעיה חיידקית
    1. למדוד את הפתרון החיידקי עם ספקטרופוטומטר. הוסף 1 OD (OD600) מתלים חיידקיים לתוך צינור 1 מ"ל. צנטריפוגה המתלים ב 5,000 x g עבור 5 דקות ב 4 ° C.
    2. בטל את supernatant ולהוסיף 1 מ"ל של חיץ PBS 1x סטרילי לצינור 1.5 מ"ל עבור משקעים השעיה.
    3. צנטריפוגה ב 5,000 x g עבור 5 דקות ב 4 ° C; זרוק את הסופרנטנט.
    4. חזור על שלבים 2.4.2 ו- 2.4.3.
    5. להוסיף 200 μL של חיץ PBS 1x סטרילי למשקעים חיידקיים.
    6. להוסיף 600 μL של 10% תמיסת סוכרוז, 200 μL של 10 מ"מ ATP (אשר פועל כמו phagostimulant), ו 200 μL של השעיה חיידקית לתוך צינור סטרילי 1.5 מ"ל. מערבבים על ידי מערבולות. לחלופין, להשעות חיידקים כדוריים בדם לא פעילות חום.
    7. הכנת דם לא מנוכה בחום
      1. לאסוף דם טרי עם צינור נוגד קרישה.
      2. קח 2-3 מ"ל של דם טרי. צנטריפוגה ב 1,000 x g עבור 10 דקות ב 4 מעלות צלזיוס להפריד פלזמה ותאי דם. שים לב כי הדם יאבד במהלך צנטריפוגציה ותהליך כביסה; יש צורך לחשב את השימוש מראש.
      3. לאסוף את הפלזמה לתוך צינור חדש 1.5 מ"ל וחום-inactivate ב 56 ° C עבור 1 שעה.
      4. להוסיף 500 μL של חיץ PBS 1x סטרילי לצינור 1.5 מ"ל להשעיית תאי דם. צנטריפוגה ב- 1,000 x g למשך 10 דקות ב- 4 °C ולאחר מכן להשליך את supernatant.
      5. חזור על שלב 2.4.7.4 פעמיים.
      6. תאי דם עם חום לא פעילות כדי להשיג דם לא פעילות חום.
      7. בצע את השלבים 2.4.1 כדי 2.4.4 כדי לקבל 1 גלולות חיידקי OD.
      8. תולה מחדש את החיידקים עם 1 מ"ל של דם לא מנוען בחום.
  5. להאכיל את היתוש עם מתלי חיידקים.
    1. הרעיב את היתושים במשך 24 שעות, מה שמאפשר לאנטיביוטיקה לעכל לפני האכלת חיידקים.
    2. להרכיב את מערכת הזנת קרום.
    3. לאטום את יחידת ההזנה המעוקרת עם פרפילם, לחילופין קרום קולגן.
    4. מניחים טבעת פלסטיק ומסדרים אותה עם פרפילם כדי להימנע מפריצה עקב חיכוך במהלך ההאכלה.
    5. מוסיפים לאט את הפתרון החיידקי המוכן ליחידת ההזנה. שים לב שניתן למלא רק באר אחת של יחידת המאכילים בעלת שתי הבארות בפתרון ולכסות את יחידת המאכיל רק מהצד השחרור של היאגנט.
    6. חבר את יחידת ההאכלה למערכת הזנה שחוממה מראש ל-37°C, המדמה את הטמפרטורה האנושית כדי למשוך יתושים. מניחים את מכשיר ההאכלה על נייר מלאה ביתושים וניזונים במשך 90 דקות.
    7. לאחר ההאכלה, להמרים את היתושים על ידי כך שהם נושאים אותם לטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס במשך 3-5 דקות ולשמור על היתושים מנושאים בצלחת פטרי קרה כקרח.
    8. בחר את היתושים הדחוסים במלואם למחקרים נוספים.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

האמצעים של יתושים שטופלו באנטיביוטיקה וללא אנטיביוטיקה הוצאו לחילוץ DNA, qPCR בוצע עם פריימרים חיידקים אוניברסליים. איור 1 מראה את הביטוי של חיידקים 16S rRNA בקבוצת הבקרה וקבוצה טיפול אנטיביוטי. התוצאות מראות כי כ 98% של חיידקי המעי הוסרו, ואת עיקור המעיים של פניצילין וסטרפטומיצין היה מוצלח.

עם השיטות המתוארות, זנים חיידקים היו מבודדים וזוהו. ג. מינגוספטיקום הוא bacillus אירובי לא מותסס, אוקסיד אזיד אז חיובי גרם שלילי, השייך Chryseobacterium. איור

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

מחקרים על אינטראקציות בין חיידקי מארחים מצאו כי מיקרובים שונים במעיים משפיעים על הפיזיולוגיה המארחת שלהם באמצעות מנגנונים שונים. מאמר זה מציג את השיטה לחקור את התפקיד המתאים של חיידקים מעיים יתוש, כולל ניתוח midgut יתוש, culturing חיידקים מעיים cultivable, טיפול אנטיביוטי, ו reintroducing חיידקים של עניין.

לטיפול אנטיביוטי מוצלח, יש לשקול את הפרטים הבאים בביצוע הניסוי. בפרוטוקול זה, יתושים טופלו באמצעות כדורי כותנה לחים עם תמיסת 10% סוכרוז כולל 20 יחידות של פניצילין ו 20 μg של סטרפטומיצין לכל ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

למחברים אין ניגודי אינטרסים לחשוף.

תודות

עבודה זו נתמכה על ידי הקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (גרנט מס' 81902094, 81600497) ופרויקט תוכנית המדע והטכנולוגיה של מחוז הונאן (2019RS1036).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
אדנוזין 5&פריים;-טריפוספט מלח דיסודיום הידרטסיגמאA2383אדנוזין 5&פריים;-טריפוספט מלח דיסודיום הידרט שימש להכנת תמיסות סטנדרטיות אדנוזין טריפוספט (ATP)
Aedes aegyptiיתושים נקבות
צינור נוגד קרישהBD Vacutainer363095לאסוף
צינור צנטריפוגהטרי סנגון ביוטקF601620-00101.5 מ"ל, טבעי, בוגר,
כדורי
רקמות חד פעמיות טחינת עליסנגון ביוטקF619072-000170 מ"מ ארוך, חרוטי, כחול, אתנול סטרילי
מוחלטPainiלדלל אותו ל 75% אתנול
מלקחייםRWDF11029דיסקציה
האכלת ממברנת המוטק מערכתמרכיבי מערכת ההזנה, כולל  בקר טמפרטורה המוטק, מכלול בית מזין, מזין מתכת מורכב.
שייקרZQZY-78AN
לולאות חיסוןSangon BiotechF619312-000110 μ l,
אבקת אגר LBSangon BiotechA507003טריפטון 10.0 גרם, תמצית שמרים 5.0 גרם, NaCl 10.0 גרם, אגר 15.0 גרם.
LB Broth PowderSangon BiotechA507002טריפטון 10.0 גרם, תמצית שמרים 5.0 גרם, NaCl 10.0 גרם.
מיקרוסקופZeissStemi508
מקום יתושים
ParafilmSangon BiotechF1040024 אינץ' צלחת
פטריסנגון ביוטקF611203
פניצילין G הידרט מלח פרוקאיןסנגון ביוטקA606248אבקה לבנה. מסיס במים, מסיס במתנול, מסיס מעט במים, אתנול
Single Channal PipettorGilson
Streptomycin sulfateSangon BiotechA610494Streptomycin sulfate הוא אנטיביוטיקה גלוקוזאמין המפריעה לסינתזה של חלבונים פרוקריוטיים.
סוכרוזSangon BiotechA502792מסיס במים, אתנול ומתנול, מסיס מעט בגליצרול ופירידין.
ערכת DNA של חיידקי TIANampTIANGENDP302לחלץ DNA 
בד שירות-רשת יתושים מערבל מערבולת לבנה
Scintic IndustriesS1-0246
צינור EP 1.5 מ"לסנגון ביוטקF600620
10X PBS מאגרסנגון ביוטקE607016מוצר זה הוא פתרון פי 10. נא לדלל אותו 10 פעמים לפני השימוש. ערך ה- pH הוא 7.4.
דם כותנה סטריליים חממה צהובה, נייר

מקורות

  1. Tolle, M. A. Mosquito-borne diseases. Current Problems in Pediatric and Adolescent Health Care. 39 (4), 97-140 (2009).
  2. Wu, P., Yu, X., Wang, P., Cheng, G. Arbovirus lifecycle in mosquito: acquisition, propagation and transmission. Expert Reviews in Molecular Medicine. 21, 1(2019).
  3. Jayakrishnan, L., Sudhikumar, A. V., Aneesh, E. M. Role of gut inhabitants on vectorial capacity of mosquitoes. Journal of Vector Borne Diseases. 55 (2), 69(2018).
  4. Jupatanakul, N., Sim, S., Dimopoulos, G. The insect microbiome modulates vector competence for arboviruses. Viruses. 6 (11), 4294-4313 (2014).
  5. Moro, C. V., Tran, F. H., Raharimalala, F. N., Ravelonandro, P., Mavingui, P. Diversity of culturable bacteria including Pantoea in wild mosquito Aedes albopictus. BMC Microbiology. 13 (1), 70(2013).
  6. Chouaia, B., et al. Molecular evidence for multiple infections as revealed by typing of Asaia bacterial symbionts of four mosquito species. Applied and Environmental Microbiology. 76 (22), 7444-7450 (2010).
  7. Terenius, O., et al. Midgut bacterial dynamics in Aedes aegypti. FEMS Microbiology Ecology. 80 (3), 556-565 (2012).
  8. Bando, H., et al. Intra-specific diversity of Serratia marcescens in Anopheles mosquito midgut defines Plasmodium transmission capacity. Scientific Reports. 3, 1641(2013).
  9. Telang, A., Skinner, J., Nemitz, R. Z., McClure, A. M. Metagenome and culture-based methods reveal candidate bacterial mutualists in the Southern house mosquito (Diptera: Culicidae). Journal of Medical Entomology. 55 (5), 1170-1181 (2018).
  10. Wang, Y., Gilbreath, T. M., Kukutla, P., Yan, G., Xu, J. Dynamic gut microbiome across life history of the malaria mosquito Anopheles gambiae in Kenya. PloS One. 6 (9), (2011).
  11. Xiao, X., et al. A Mesh-Duox pathway regulates homeostasis in the insect gut. Nature Microbiology. 2 (5), 17020(2017).
  12. Guégan, M., et al. Short-term impacts of anthropogenic stressors on Aedes albopictus mosquito vector microbiota. FEMS Microbiology Ecology. 94 (12), 188(2018).
  13. Valzania, L., Coon, K. L., Vogel, K. J., Brown, M. R., Strand, M. R. Hypoxia-induced transcription factor signaling is essential for larval growth of the mosquito Aedes aegypti. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 115 (3), 457-465 (2018).
  14. Coon, K. L., Vogel, K. J., Brown, M. R., Strand, M. R. Mosquitoes rely on their gut microbiota for development. Molecular Ecology. 23 (11), 2727-2739 (2014).
  15. de O Gaio, A., et al. Contribution of midgut bacteria to blood digestion and egg production in Aedes aegypti (diptera: culicidae)(L). Parasites & Vectors. 4 (1), 105(2011).
  16. Ramirez, J. L., et al. Reciprocal tripartite interactions between the Aedes aegypti midgut microbiota, innate immune system and dengue virus influences vector competence. PLoS Neglected Tropical Diseases. 6 (3), 1561(2012).
  17. Dong, Y., Morton, J. C., Ramirez, J. L., Souza-Neto, J. A., Dimopoulos, G. The entomopathogenic fungus Beauveria bassiana activate toll and JAK-STAT pathway-controlled effector genes and anti-dengue activity in Aedes aegypti. Insect Biochemistry and Molecular Biology. 42 (2), 126-132 (2012).
  18. Anglero-Rodriguez, Y. I., et al. An Aedes aegypti-associated fungus increases susceptibility to dengue virus by modulating gut trypsin activity. Elife. 6, 28844(2017).
  19. Wu, P., et al. A gut commensal bacterium promotes mosquito permissiveness to arboviruses. Cell Host & Microbe. 25 (1), 101-112 (2019).
  20. Möhlmann, T. W., et al. Impact of gut bacteria on the infection and transmission of pathogenic arboviruses by biting midges and mosquitoes. Microbial Ecology. , (2020).
  21. Llorca, M., Gros, M., Rodríguez-Mozaz, S., Barceló, D. Sample preservation for the analysis of antibiotics in water. Journal of Chromatography. A. 1369, 43-51 (2014).
  22. Berendsen, B., Elbers, I., Stolker, A. Determination of the stability of antibiotics in matrix and reference solutions using a straightforward procedure applying mass spectrometric detection. Food Additives & Contaminants: Part A, Chemistry, Analysis, Control, Exposure & Risk Assessment. 28 (12), 1657-1666 (2011).
  23. Hill, C. L., Sharma, A., Shouche, Y., Severson, D. W. Dynamics of midgut microflora and dengue virus impact on life history traits in Aedes aegypti. Acta Tropica. 140, 151-157 (2014).
  24. Eng, M. W., et al. Multifaceted functional implications of an endogenously expressed tRNA fragment in the vector mosquito Aedes aegypti. PLoS Neglected Tropical Diseases. 12 (1), 0006186(2018).
  25. Kajla, M. K., Barrett-Wilt, G. A., Paskewitz, S. M. Bacteria: A novel source for potent mosquito feeding-deterrents. Science Advances. 5 (1), 6141(2019).
  26. Gonçalves, G. G. A., et al. Use of MALDI-TOF MS to identify the culturable midgut microbiota of laboratory and wild mosquitoes. Acta Tropica. 200, 105174(2019).
  27. Kuss, S. K., et al. Intestinal microbiota promote enteric virus replication and systemic pathogenesis. Science. 334 (6053), New York, N.Y. 249-252 (2011).
  28. Rani, A., Sharma, A., Rajagopal, R., Adak, T., Bhatnagar, R. K. Bacterial diversity analysis of larvae and adult midgut microflora using culture-dependent and culture-independent methods in lab-reared and field-collected Anopheles stephensi-an Asian malarial vector. BMC Microbiology. 9 (1), (2009).
  29. Apte-Deshpande, A., Paingankar, M., Gokhale, M. D., Deobagkar, D. N. Serratia odorifera a midgut inhabitant of Aedes aegypti mosquito enhances its susceptibility to dengue-2 virus. PLoS One. 7 (7), 40401(2012).
  30. Behura, S. K. Mosquito microbiota and metagenomics, and its relevance to disease transmission. Nature. 436, 257-260 (2013).
  31. Dickson, L. B., et al. Diverse laboratory colonies of Aedes aegypti harbor the same adult midgut bacterial microbiome. Parasites & Vectors. 11 (1), 1-8 (2018).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

דיסקציה של מעי יתושבידוד מושבות חיידקיםטיפול אנטיביוטירצף 16S rRNAניתוח מיקרוביום המעיהחזרה של חיידקיםבדיקת יחידות יוצרות מושבות (CFU)טכניקה סטריליתפיזיולוגיה של יתושים
תסכולת הזנה דרך הפה חיידקית עם יתושים שטופלו באנטיביוטיקה
צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.