מסמך זה מתאר פרוטוקול dosimetry חדש עבור הקרנת תאים באמצעות ציוד רנטגן באנרגיה נמוכה. המדידות מבוצעות בתנאים המדמים תנאי הקרנת תאים אמיתיים ככל האפשר.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
מסמך זה מתאר פרוטוקול dosimetry חדש עבור הקרנת תאים באמצעות ציוד רנטגן באנרגיה נמוכה. המדידות מבוצעות בתנאים המדמים תנאי הקרנת תאים אמיתיים ככל האפשר.
החשיבות של פרוטוקולי דוזימטריה וסטנדרטים למחקרים רדיוביולוגיים מובנת מאליה. מספר פרוטוקולים הוצעו לקביעת מינון באמצעות מתקני רנטגן באנרגיה נמוכה, אך בהתאם לתצורות ההקרנה, הדגימות, החומרים או איכות הקרן, לפעמים קשה לדעת איזה פרוטוקול הוא המתאים ביותר להעסיק. אנו, אם כן, מציעים פרוטוקול דוזימטריה להקרנת תאים באמצעות מתקן רנטגן באנרגיה נמוכה. מטרת שיטה זו היא לבצע את הערכת המינון ברמה של monolayer התא כדי להפוך אותו קרוב ככל האפשר לתנאי הקרנה תא אמיתי. השלבים השונים של הפרוטוקול הם כדלקמן: קביעת פרמטרי ההקרנה (מתח גבוה, אינטנסיביות, מיכל תא וכו '), קביעת מדד איכות הקרן (זוג שכבת מתח-חצי ערך גבוהה), מדידת קצב מינון עם תא יינון מכויל בתנאי קרמה אוויר, כימות של הנחתה ופיזור של מדיום תרבות התא עם סרטים רדיוכרומיים EBT3, וקביעת קצב המינון ברמה התאית. מתודולוגיה זו חייבת להתבצע עבור כל תצורת הקרנת תא חדש כמו השינוי של פרמטר אחד בלבד יכול להשפיע מאוד על תצהיר המינון האמיתי ברמה של monolayer התא, במיוחד מעורבים קרני רנטגן אנרגיה נמוכה.
מטרת הרדיוביולוגיה היא ליצור קשרים בין המינון המועבר לבין ההשפעות הביולוגיות; דוזימטריה היא היבט מכריע בתכנון ניסויים רדיוביולוגיים. במשך למעלה מ -30 שנה, החשיבות של סטנדרטים דוזימטריים והרמוניזציה של פרקטיקות הודגשו1,2,3,4,5. כדי לקבוע התייחסות שיעור מנה, מספר פרוטוקולים קיימים6,7,8,9,10; עם זאת, כפי שמוצג על ידי Peixoto ו Andreo11 , יכולים להיות הבדלים של עד 7% בהתאם לכמות הדוזימטרית המשמשת לקביעת שיעור המינון. יתר על כן, גם אם קיימים פרוטוקולים, לפעמים קשה לדעת איזה פרוטוקול הוא המתאים ביותר ליישום מסוים, אם בכלל, כי קצב המינון של התאים תלוי בפרמטרים כגון מיכל התא, כמות המדיה תרבות התא או איכות הקרן, למשל. הפיזור ואת backscattering עבור סוג זה של הקרנה הוא גם פרמטר חשוב מאוד לקחת בחשבון. ואכן, עבור צילומי רנטגן באנרגיה נמוכה ובינונית, בפרוטוקול הייחוס AAPM TG-6110, המינון נספג במים נמדד על פני השטח של פנטום מים. אם ניקח בחשבון את תנאי הקרנת התאים הספציפיים מאוד, הנפח הקטן של תקשורת תרבות התא מוקף באוויר קרוב יותר לתנאי קרמה מאלה שהוגדרו למינון נספג עם פנטום שווה ערך למים גדול כמו בפרוטוקול TG-61. לכן, בחרנו להשתמש kerma במים ככמות דוזימטרית לעיון ולא את המינון נספג במים. לכן, אנו מציעים גישה חדשה כדי לספק קביעה טובה יותר של המינון בפועל מועבר לתאים.
יתר על כן, היבט מכריע נוסף למחקרים רדיוביולוגיים הוא דיווח מלא של השיטות והפרוטוקולים המשמשים להקרנה כדי להיות מסוגל לשחזר, לפרש ולהשוות תוצאות ניסיוניות. בשנת 2016, Pedersen et al.12 הדגיש את הדיווח הלקוי של דוזימטריה במחקרים רדיוביולוגיים פרה-קוליניים. מחקר גדול יותר שנערך לאחרונה על ידי Draeger et al.13 הדגיש כי למרות כמה פרמטרים dosimetry כגון המינון, אנרגיה, או סוג המקור מדווחים, חלק גדול של הפרמטרים הפיזיקה והדוסימטריה כי הם חיוניים כדי לשכפל כראוי את תנאי ההקרנה חסרים. סקירה רחבת היקף זו, של יותר מ-1,000 פרסומים המכסים את 20 השנים האחרונות, מראה על מחסור משמעותי בדיווח על תנאי הפיזיקה והדוסימטריה במחקרים רדיוביולוגיים. לפיכך, תיאור מלא של הפרוטוקול והשיטה המשמשת במחקרים רדיוביולוגיים הוא חובה על מנת לערוך ניסויים חזקים הניתנים לשחזור.
אם ניקח בחשבון היבטים שונים אלה, עבור הניסויים הרדיוביולוגיים שבוצעו ב- IRSN (המכון להגנה מפני קרינה ובטיחות גרעינית), יושם פרוטוקול מחמיר להקרנת תאים במתקן אורתובולגי. פרוטוקול דוזימטריה זה תוכנן על מנת לדמות את תנאי ההקרנה האמיתיים של התא ככל האפשר ובכך, כדי לקבוע את המינון בפועל מועבר לתאים. למטרה זו, כל פרמטרי ההקרנה מפורטים, ומדד איכות הקרן הוערך על ידי מדידת שכבת חצי הערך (HVL) שעבורה נעשו התאמות מסוימות מכיוון שלא ניתן לעקוב אחר ההמלצות הסטנדרטיות מפרוטוקול AAPM10. מדידת קצב המינון המוחלטת בוצעה לאחר מכן עם תא היוניזציה בתוך מיכל התא המשמש להקרין תאים, וההחלשה והפיזור של המדיה של תרבות התא כמתו גם עם סרטים רדיוכרומיים EBT3. כמו השינוי של פרמטר אחד בלבד של הפרוטוקול יכול להשפיע באופן משמעותי על הערכת המינון, דוזימטריה ייעודית מבוצעת עבור כל תצורת הקרנת תא. יתר על כן, יש לחשב את ערך HVL עבור כל שילוב של מסנן מתח. בעבודה הנוכחית, מתח של 220 kV, אינטנסיביות של 3 mA, וסינון אינהרנטי ונוסף של 0.8 מ"מ ו 0.15 מ"מ של בריליום ונחושת, בהתאמה, משמשים. תצורת הקרנת התאים שנבחרה נמצאת על בקבוק T25, שבו התאים הוקרנו עם 5 מ"ל של מדיה תרבות התא.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
1. פלטפורמת הקרנה וקביעת פרמטרי הקרנה
2. מדד איכות הקרן: קביעת שכבת חצי הערך
הערה: HVL מוגדר כעובי של מנחת (בדרך כלל נחושת או אלומיניום) כדי להפחית את עוצמת הקרן על ידי גורם של שניים לעומת הערך המקורי.

3. הערכת שדה ההקרנה (ללא הערכת מינון)
4. מדידת קצב המינון עם תא יינון

5. מדידה של הנחתת מדיה של תרבות התא ופיזור
הערה: טפל בסרטי EBT3 עם כפפות לאורך כל ההליך.
6. קריאת סרטים רדיוכרומיים EBT3
7. קביעת שיעור המינון ברמה של המונולייר התא

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
בעבודה זו השתמשנו בפלטפורמה המוקדשת להקרין בעלי חיים קטנים19; עם זאת, ניתן להשתמש בפלטפורמה זו כדי להקרין סוגים אחרים של דגימות כגון תאים. מקור ההקרנה הוא צינור רנטגן Varian (NDI-225-22) בעל סינון אינהרנטי של 0.8 מ"מ של בריליום, גודל ספורט מוקד גדול של 3 מ"מ, טווח מתח גבוה של כ 30 עד 225 kV ועוצמה מקסימלית של 30 mA.
הפרמטרים המשמשים למחקר זה מדווחים בטבלה 1. בחרנו להציג דוגמה לשימוש בפרוטוקול זה להקרנת תאים בבקבוק T25 עם 5 מ"ל של מדיה של תרבות התא.
...הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
עבודה זו מציגה את הפרוטוקול המשמש ומיושם עבור הקרנת תאים באמצעות מתקן רנטגן באנרגיה נמוכה. כיום, ניסויים רדיוביולוגיים רבים מבוצעים עם סוג זה של הקרנה כפי שהם קלים לשימוש, חסכוני עם מעט מאוד אילוצי radioprotection, לעומת מקור קובלט למשל. למרות הגדרות אלה יש יתרונות רבים, כפי שהם משתמשים במקור אנרגיה רנטגן נמוך, שינוי של פרמטר הקרנה אחד בלבד יכול להשפיע באופן משמעותי על הדוזימטריה. מספר מחקרים כבר הדגישו את החשיבות של סטנדרטים דוזימטריים ופרוטוקולים למחקרי רדיוביולוגיה2,
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
למחברים אין מה לחשוף.
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| 31010 תא יינון | PTW | יינון קרינה, גלאים כולל קוד נוהג, קטלוג 2019/2020, עמוד 14 | https://www.ptwdosimetry.com/fileadmin/user_upload/DETECTORS_Cat_en_16522900_12/blaetterkatalog/index.html?startpage=1#page_14 |
| סרטים רדיוכרומיים EBT3 | בקשת הצעת מחיר | של | Meditest |
| אלקטרומטר UNIDOSEwebline | קטלוג מקוון PTW, בקשת הצעת מחיר | https://www.ptwdosimetry.com/en/products/unidos-webline/?type=3451&downloadfile=1593& cHash= 6096ddc2949f8bafe5d556e931e6c865 | |
| חומר HVL (מסנן, דיאפרגמה) | PTW | , עמוד 70, רדיד עובי בקשת הצעת מחיר | : 0.02, 0.05, 0.1, 0.2, 0.5, 1, 2, 5 ו-10 מ"מ של נחושת, https://www.ptwdosimetry.com/fileadmin/user_upload/Online_Catalog/Radiation_Medicine_Cat_en_ 58721100_11/blaetterkatalog/index.html#page_70 |
| סורק לסרטים רדיוכרומיים | בקשת הצעת מחיר | Epson Epson V700, seiko Epson corporation, Suwa, יפן | |
| מדידות טמפרטורה ולחץ, Lufft OPUS20 | lufft | בקשת | הצעת מחירhttps://www.lufft.com/products/in-room-measurements-291/opus-20-thip-1983/ |
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.