בדו"ח זה אנו מציגים פרוטוקול המאפשר לחוקר ליצור מודל עכבר של אובאיטיס תוך עינית. מודל מבוסס זה, המכונה בדרך כלל אובאיטיס אוטואימונית ניסיונית (EAU), לוכד היבטים רבים של מחלות אנושיות. במאמר זה נתאר כיצד לגרום ולנטר את התקדמות המחלה באמצעות מספר קריאות.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
אובאיטיס אוטואימונית ניסיונית: מודל עכבר דלקתי תוך עיני
במאמר זה
סיכום
תקציר
אובאיטיס אוטואימונית ניסיונית (EAU) מונעת על ידי תאי מערכת החיסון המגיבים לאנטיגנים עצמיים. תכונות רבות של מודל מחלות דלקתיות תוך עיניות לא זיהומיות אלה משחזרות את הפנוטיפ הקליני של אובאיטיס אחורית המשפיעה על בני אדם. EAU שימש באופן אמין כדי לחקור את היעילות של טיפולים דלקתיים חדשניים, את אופן הפעולה שלהם ולחקור עוד יותר את המנגנונים העומדים בבסיס התקדמות המחלה של הפרעות תוך עיניות. כאן, אנו מספקים פרוטוקול מפורט על השראת EAU בעכבר C57BL/6J - אורגניזם המודל הנפוץ ביותר עם רגישות למחלה זו. הערכה קלינית של חומרת המחלה והתקדמותה תודגם באמצעות פונדוסקופיה, בדיקה היסטולוגית ואנגיוגרפיה פלואורסצאין. הליך האינדוקציה כולל הזרקה תת עורית של תחליב המכיל פפטיד (IRBP1-20) מחלבון העין אינטרפוטורצפטור רטינואיד (הידוע גם בשם חלבון קושר רטינול 3), אדג'ובנט שלם של פרוינד (CFA) ותוספת של Mycobacterium tuberculosis. הזרקה של תחליב צמיג זה על העורף ואחריה הזרקה intraperitoneal יחיד של Bordetella pertussis toxin . עם תחילת הסימפטומים (יום 12-14) ובהרדמה כללית, נלקחות תמונות פונדוסקופיות כדי להעריך את התקדמות המחלה באמצעות בדיקה קלינית. ניתן להשוות נתונים אלה ישירות לאלה בנקודות זמן מאוחרות יותר ובשיא המחלה (יום 20-22) עם ניתוח הבדלים. יחד עם זאת, פרוטוקול זה מאפשר לחוקר להעריך הבדלים פוטנציאליים בחדירות כלי הדם ובנזק באמצעות אנגיוגרפיה פלואורסצאין. EAU יכול להיות מושרה בזני עכברים אחרים - הן פראיים או מהונדסים גנטית - ובשילוב עם טיפולים חדשניים המציעים גמישות לחקר יעילות התרופה ו / או מנגנוני המחלה.
מבוא
פרוטוקול זה ידגים כיצד לגרום לאובאיטיס אוטואימונית ניסיונית (EAU) בעכבר C57BL/6J על ידי הזרקה תת-עורית יחידה של אנטיגן רשתית באדג'ובנט מתחלב. שיטות לניטור והערכה של התקדמות המחלה יפורטו באמצעות הדמיה פונדוסקופית ובדיקה היסטולוגית, עם פרמטרים למדידה המתוארים בהן. בנוסף, תידון אנגיוגרפיה פלואורסצאין, טכניקה לבחינת מבנה כלי הדם ברשתית וחדירות.
מודל EAU זה משחזר תכונות מרכזיות של אובאיטיס אחורית לא זיהומית בבני אדם ביחס למאפיינים קליניים-אופתולוגיים והמנגנונים התאיים והמולקולריים הבסיסיים המניעים מחלות. EAU מתווך על ידי תת-קבוצות Th1 ו / או Th17 של לימפוציטים CD4+T תגובתיים עצמיים, כפי שמוצג בניסויי העברה מאומצת ובעכברים מרוקנים IFNγ....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
כל הניסויים בוצעו בהתאם לחוק הבריטי לבעלי חיים (הליכים מדעיים) משנת 1986, ולהנחיות מוסדיות של הגוף לרווחת בעלי חיים וביקורת אתית (AWERB).
1. דיור עכברי C57BL/6J
- עכברי בית בסביבה ספציפית נטולת פתוגנים, במחזור אור-חושך של 12 שעות ומזון ומים זמינים עד לליביטום.
- בצע את כל הניסויים על נשים בוגרות C57BL/6J (נקבות נבחרות באופן מועדף מכיוון שיש שכיחות של נשים לגברים 1.4 עד 1 בחולי אובאיטיס). חולקו באופן אקראי נקבות עכברי C57BL/6J בגילאי 6-8 שבועות לפי משקל וגיל. אכנו את העכברים בכלובים מאווררים בנפרד (IVC) בקבוצות של 5-6 עכברים בכל כלוב.
2. חיסון עכברי C57BL/6
- IRBP1-20 - ....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
בפרוטוקול זה, אנו מתארים שיטה שלב אחר שלב לגרימת מודל של אובאיטיס אוטואימונית ניסיונית (EAU) על ידי חיסון עכברים בפפטיד רשתית uveitogenic הנגזר מ- IRBP. הערכת המחלה באמצעות גישות בשימוש נרחב ונגישות מכוסה, אם כי אלה אינן בלעדיות וניתן להוסיף אותן, או להחליף אותן חלקית, על ידי טכניקות הדמיה אחרות. הסימנים הראשונים של EAU בעכברי C57BL/6J יכולים להיות מזוהים שבועיים לאחר החיסון ושיא המחלה הגיע תוך שלושה שבועות, כפי שמודגם באיור 1. שינויים פונדוסקופיים מסווגים במהלך התקדמות המחלה כשינויים דלקתיי.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
מודלים ניסיוניים של בעלי חיים הם כלים הכרחיים לחקר פתוגנזה של מחלות ולבדיקה פרה-קלינית של פרדיגמות טיפוליות חדשות. בפרוטוקול הנוכחי, דנו במתודולוגיה להשראת, ניטור וניקוד EAU, מודל ניסיוני של אובאיטיס דלקתית תוך עינית. מודל EAU זה כולל שכיחות מחלה של יותר מ -95% כאשר כל ההליכים מבוצעים על פי הפרוטוקול המתואר כאן, ומביא להתפתחות של EAU כרוני, מונופאזי. כדי להגיע לרמת היארעות זו, אנו מדגישים את חשיבות הכנת האנטיגן והזרקת התחליב, שניהם מפורטים לעיל. המאפיינים העיקריים של EAU בבעלי חיים הם דלקת רשתית ו / או כורואידית, דלקת כל.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
למחברים אין ניגודי עניינים להצהיר עליהם בעבודה זו.
תודות
JG זכתה במימון UCL Impact Studentship ו-Rosetrees Trust לתמיכה ב-CB. VC קיבלה מענק שיתוף פעולה מחקרי מחברת Akari Therapeutics Inc. ברצוננו להודות למכון UCL לרפואת עיניים, ליחידת השירות הביולוגי ובמיוחד לגב' אליסון או'הרה ולצוותה על תמיכתם הטכנית.
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| אנטי-סדאן | ZOETIS, ארה"ב | על התעוררות | |
| Complete Freund' s אדג'ובנט; CFA | Sigma, בריטניה | F5881 | לחיסונים |
| Domitor | Orion Pharma, פינלנד | להרדמה | |
| Flourescein | Sigma, בריטניה | F2456 | לאנגיוגרפיה |
| IRBP1-20 | Chamberidge peptide, פפטיד בריטניה | ; אנטיגן | |
| קטמין | אוריון פארמה, פינלנד | להרדמה | |
| Micron III | Phoenix Research, ארה"ב | עבור פונדוסקופיה | |
| סרום | עכבר סיגמא, בריטניה | M5905 | לחיסון |
| Mycobacterium terberculosis | Sigma, בריטניה | 344289 | לחיסונים |
| רעלן שעלת | סיגמא, בריטניה | P2980 | לחיסון |
| פנילפרין הידרוכלוריד 2.5% | באוש & לומב בריטניה | PHEN25 | להרחבה |
| טרופיקמיד 1% | SANDOZ | להרחבה | |
| בית מרקחת Viscotears WELDRICKS, בריטניה | 2082642 | לשימון עיניים |
מקורות
- Lyu, C., et al. TMP778, a selective inhibitor of RORgammat, suppresses experimental autoimmune uveitis development, but affects both Th17 and Th1 cell populations. The European Journal of Immunology. 48, 1810-1816 (2018).
- Klaska, I. P., Forrester, J. V.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
